沉默环状RNA hsa_circ_0000591表达对肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0000591在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织以及肝癌细胞系中的表达,及其对肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 收集2014—2018年广西医科大学附属肿瘤医院手术切除的84例HCC组织及其相应癌旁正常组织标本,采用qRT-PCR检测hsa_...     

环状RNA hsa_circ_0050900在乳腺癌中的表达及其对细胞生物学行为影响的机制研究

背景与目的：环状RNA（circular RNA,circRNA）作为特殊的非编码RNA,一般在体内低表达,且不易被RNA酶降解,结构与表达稳定。随着测序技术的进步,目前发现多种肿瘤的发生、发展与circRNA有关。但未见乳腺癌的发生、发展与hsa_circ_0050900的异常表达相关的报道。探究乳腺癌组织中hsa_circ_0050900的表达以及其影响乳腺癌细胞生物学行为的机制。方法：选取在重庆医科大学附属第一医院经手术切除的4例女性乳腺癌组织及对应的癌旁组织,采用RNA测序（RNA sequencing,RNA-seq）进行测序分析,并运用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）验证乳腺癌中hsa_circ_0050900的表达,其中包括30例乳腺癌组织及其癌旁组织（在重庆医科大学附属第一医院经手术切除）,正常人乳腺上皮细胞系即对照组细胞MCF-10A以及两种乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3。通过RTFQ-PCR验证乳腺癌细胞中hsa_circ_0050900被敲低后的表达水平;分别运用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）实验和EdU实验、细胞划痕实验、transwell实验验证细胞的增殖、迁移功能;细胞凋亡的检测采用TUNEL一步法;Hoechst 33342实验通过对细胞核染色确定细胞的状态以检测细胞凋亡;细胞周期蛋白D2（cyclin D2,CCND2）和周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase 4,CDK4）的表达采用蛋白质印迹法（Western blot）检测。结果：根据测序结果,挑选出在乳腺癌和细胞中明显高表达的circRNA hsa_circ_0050900;构建的si-circ质粒可显著降低hsa_circ_0050900在乳腺癌细胞中的表达,转染si-circ的细胞增殖能力降低,并促进细胞凋亡,且降低细胞周期相关蛋白CCND2、CDK4的表达。结论：circRNA hsa_circ_0050900在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织,敲低hsa_circ_0050900对细胞增殖、迁移能力、细胞凋亡及细胞周期有调控作用。     

HMGB2沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响

目的 探讨HMGB2沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响。方法 采用将靶向HMGB2的寡核苷酸克隆至pLKO.1 puro载体质粒构建靶向沉默HMGB2表达的慢病毒shRNA。将MDA-MB-231细胞分为对照组、空转染组及HMGB2干扰组,其中空转染组及HMGB2干扰组分别转染包含随机序列shRNA和靶向HMGB2 shRNA的病毒液,对照组仅行常规培养而不行任何转染。采用Western blotting检测各组转染48 h后的HMGB2蛋白水平以评价转染效率,采用MTT法计算各组细胞的存活率,流式细胞术检测转染48 h后的细胞凋亡率,Transwell法检测转染48 h后的细胞侵袭和转移水平。结果 HMGB2干扰组的HMGB2蛋白水平低于对照组和空转染组,差异有统计学意义（P＜0.05）,提示构建的载体沉默HMGB2的效果显著。与对照组和空转染组比较,HMGB2干扰组的细胞存活率降低,且随着转染时间的延长而呈降低趋势,差异均有统计学意义（P＜0.05）;HMGB2干扰组细胞的早期、晚期及总凋亡率均高于其余两组,且侵袭细胞数目和迁移细胞数目均低于其余两组,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 shRNA靶向沉默MDA-MB-231细胞中HMGB2表达效果显著,可抑制细胞增殖及侵袭迁移并诱导细胞凋亡,为乳腺癌靶向治疗提供一定参考。     

环状RNA hsa_circ_0005320在三阴性乳腺癌中的表达及其对细胞增殖的影响

背景与目的：环状RNA（circular RNA,circRNA）作为新近发现的具有重要调节潜能的非编码RNA,与多种肿瘤的发生、发展密切相关,但在三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）中罕见报道。探讨hsa_circ_0005320在TNBC中的表达变化及其对细胞增殖的影响。方法：通过RNA测序（RNA sequencing,RNA-Seq）分析4对于重庆医科大学附属第一医院行手术切除的TNBC组织和癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）验证20对TNBC组织和癌旁组织以及正常人乳腺上皮细胞MCF-10A和TNBC细胞MDA-MB-231、BT-549中hsa_circ_0005320的表达,并通过荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）实验进一步检测其在TNBC中的表达。采用RTFQ-PCR检测沉默hsa_circ_0005320后TNBC细胞中hsa_circ_0005320的表达;采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）和EdU实验检测细胞增殖;采用流式细胞术、Hoechst 33342、Tunel实验检测细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测LIF-STAT3通路相关蛋白的表达情况。结果：hsa_circ_0005320在TNBC组织和细胞中显著高表达;在TNBC细胞中沉默hsa_circ_0005320后其表达量显著降低,细胞增殖能力下降,促进细胞凋亡,导致细胞周期阻滞在G₁期,且LIF、P-STAT3蛋白表达水平明显下降。结论：hsa_circ_0005320在TNBC中高表达,沉默hsa_circ_0005320可显著抑制TNBC细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

环状RNA hsa_circ_0058514在三阴性乳腺癌中的表达及作用研究

背景与目的：环状RNA（circular RNA，circRNA）是一类具有重要调节潜能的非编码RNA，参与多种肿瘤的发生、发展，但对于三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）尚未见报道。该研究旨在探讨环状RNA hsa_circ_0058514在TNBC发生、发展中的作用。方法：采用RNA测序（RNA sequencing，RNA-seq）对4对TNBC组织和癌旁组织进行分析，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR） 对20对TNBC组织和癌旁组织以及正常人乳腺上皮细胞MCF-10A和TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549中hsa_circ_0058514的表达进行验证。将干扰质粒pLL3.7-sh-circ转染TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549后，采用RTFQ-PCR检测细胞中hsa_circ_0058514的表达；采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）和EdU实验检测细胞增殖；采用划痕和Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭；采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期；采用蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白E1（cyclin E1，CCNE1）和细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase 2，CDK2）蛋白的表达。结果：环状RNA hsa_circ_0058514在TNBC组织和细胞中显著高表达（P<0.001，P<0.01）；转染pLL3.7-sh-circ后，TNBC细胞中hsa_circ_0058514的表达量显著低于对照组（P<0.001）。下调hsa_circ_0058514后，TNBC细胞增殖、迁移及侵袭能力下降，并促进细胞凋亡，导致细胞周期阻滞。Western blot结果显示，转染pLL3.7-sh-circ后，CCNE1和CDK2蛋白的表达下调（P<0.05）。结论：环状RNA hsa_circ_0058514在TNBC组织和细胞中均高表达，其在TNBC发生、发展中可能起到癌基因的作用，并有望成为TNBC治疗的新靶点。     

沉默LncRNA WT1-AS对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA WT1-AS对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和迁移的影响.方法 qRT-PCR检测WT1-AS在三阴性乳腺癌细胞中的表达及基因沉默的效率;Transwell实验检测WT1-AS对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测WT1-AS对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响;W...     

miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的： 探讨miRNA-210（miR-210）在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响。 方法： 收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用LipofectamineTM 2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。 结果： miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞（P<0.01）。miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为（88.29±2.98）%,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱（P<0.05）,被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多\[（64.23±3.12）% vs （55.53±0.96）%,P<0.01\],凋亡细胞比例也显著增加\[（31.90±3.05）% vs （15.98±0.63）%,P<0.01\],细胞的迁移\[（291.00±43.12） vs （1137.38±83.49）个,P<001\]、侵袭\[（131.63±32.01） vs （647.88±31.20）个,P<0.01\]均受到明显抑制。 结论： miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。     

KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法 CCK8、划痕和Transwell侵袭实验分别检测鸦胆子素D和siKCNQ1OT1对MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力的影响;qRT-PCR检测鸦胆子素D、siKCNQ1OT1对MDA-MB-231细胞中KCNQ1OT1表达的影响;Western blot法检测EMT相关蛋白及CDC42、p-MKK7、MKK7蛋白的表达情况。结果 鸦胆子素D和si KCNQ1OT1处理的MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力受到显著抑制,且二者联用时抑制作用更强（均P <0.0 5）;鸦胆子素D处理后KCNQ1OT1在MDA-MB-231细胞中的表达下调（均P<0.05）;鸦胆子素D联合si KCNQ1OT1处理组MDAMB-231细胞中CDC42、p-MKK7、N-c a d h e r i n和Vimentin的表达显著下调,E-cadherin的表达上调（均P<0.05）。结论 鸦胆子素D联合si KCNQ1OT1抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增...     

RNA干扰CXCR4表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附和迁移

目的：构建CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4, CXCR4）RNA干扰真核表达载体,研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、黏附及迁移能力的抑制作用。方法：构建针对CXCR4的带发夹结构的小RNA干扰序列,并连接到pGCsi-U6-Neo-GFP载体中,转染293T细胞,筛选出干扰效率最高的表达载体。脂质体法转染MDA-MB-231细胞。利用CCK8法、细胞-基质黏附实验和划痕修复实验检测shRNA干扰CXCR4表达对MDA-MB-231细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。结果：成功构建CXCR4-shRNA重组质粒,并转染293T细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测发现CXCR4沉默效率最高可达81.3%。CXCR4-shRNA转染能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05)以及细胞与细胞外基质的黏附(P<005)。CXCR4-shRNA转染组MDA-MB-231细胞的迁移距离明显低于对照质粒组和空白对照组(P<0.01)。结论：CXCR4-shRNA干扰载体能特异性抑制CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附及迁移。     

沉默circRNA hsa_circ_0103809表达抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的:通过研究环状RNA(circRNA) hsa_circ_0103809对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响,来明确 hsa_circ_0103809在胶质瘤进展中所起到的作用。方法:采用qRT-PCR检测hsa_circ_0103809在胶质瘤细胞系U251和正常脑胶质细胞系HEB中表达水平的差异。U251细胞经小干涉RNA（siRNA）介导下调hsa_circ_0103809的表达水平后,采用qRT-PCR检测沉默效率。将U251细胞分为两组,即siRNA-circ沉默实验组和siRNA-NC阴性对照组,实验组转染hsa_circ_0103809的siRNA,对照组转染siRNA对照序列,后续分别使用CCK-8实验、EdU实验和Transwell实验检测hsa_circ_0103809的表达下调对U251细胞增殖和侵袭的影响。结果:hsa_circ_0103809在胶质瘤U251细胞中的表达水平明显高于正常脑胶质HEB细胞（P＜0.01）。在U251细胞中转染siRNA-hsa_circ_0103809后其表达水平明显降低（P＜0.01）。CCK-8实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞在24 h和48 h的光密度（OD）值和对照组无明显差异,但实验组在72 h的OD值明显低于对照组（P＜0.01）。EdU实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞的增殖能力较对照组明显降低（P＜0.01）。Transwell实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞的侵袭能力较对照组明显降低（P＜0.001）。结论:hsa_circ_0103809在胶质瘤U251细胞中高表达,沉默hsa_circ_0103809表达可显著抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

Upregulated hsa_circ_0000129 expression promotes proliferation and migration of breast cancer cells

Circular RNAs (circRNAs) are considered potential biomarkers in the pathogenesis and detection of several types of cancer. The present study aimed to investigate the role of hsa_circ_0000129 in the pathogenesis and molecular mechanism underlying breast cancer. A total of 68 pairs of breast cancer and corresponding paracancerous tissue samples, three different breast cancer cell lines (MCF-7, MDA-MB-231 and MDA-MB-468) and a normal human breast cell line (MCF-10A) were used to investigate the expression of hsa_circ_0000129. The effect of hsa_circ_0000129 on cell proliferation, migration and colony formation was assessed in MCF-7 and MDA-MB-468 cells, along with the expression of enhancer of zeste homolog 2 (EZH2). The results demonstrated that hsa_circ_0000129 expression was significantly higher in breast cancer tissues compared with normal tissues. In addition, high hsa_circ_0000129 expression was significantly associated with lymph node metastasis and a higher tumor-node-metastasis stage. Comparisons between the breast cancer cell lines (MCF-7, MDA-MB-231 and MDA-MB-468) and MCF-10A cells indicated similar results. MCF-7 cells overexpressed with hsa_circ_0000129 significantly increased cell proliferation, migration and colony formation compared with the negative control group, the effects of which were reversed following hsa_circ_0000129 knockdown in MDA-MB-468 cells. Furthermore, EZH2 expression was positively associated with hsa_circ_0000129 expression. Taken together, the results of the present study suggest that hsa_circ_0000129 may represent a promising prognostic biomarker for breast cancer. In addition, the role of hsa_circ_0000129 in breast cancer cell lines indicates a mechanism for tumorigenesis, as well as a potent target for the treatment of malignant progression.     

塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭的影响,阐明TPD7抑制细胞迁移和侵袭可能的作用机制。方法:采用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法检测MCF-7和ZR-75-30细胞的迁移和侵袭。采用Western blot法检测MMP9、β-catenin及c-Myc的蛋白表达。RT-PCR法检测β-catenin及c-Myc的mRNA表达。结果:TPD7对MCF-7细胞和ZR-75-30细胞迁移和侵袭均有显著抑制作用,且下调MMP9、β-catenin、c-Myc的蛋白表达和mRNA表达,呈剂量依赖性。结论:TPD7抑制乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭,可能是通过Wnt信号通路抑制上皮-间质转化。     

小白菊内酯对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制.方法:应用0、2.5、5、10、20μmol/L的PTL处理甲状腺癌TPC-1细胞24 h,CCK-8法检测不同浓度的PTL对TPC-1细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell实验观察PTL对TPC...     

siＲNA 介导的eIF3b基因沉默抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和迁移

目的:探讨siＲNA介导的eIF3b基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法:设计eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:I组(空白对照组)、II组(转染非特异性对照组)和III组（转染eIF3b-siRNA组）。应用qＲT-PCＲ和Western blotting免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mＲNA和蛋白表达水平;运用Matrigel 胶模型细胞迁移和侵袭实验检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:与I组（1.09±0.19）、II组（1.05±0.17）相比,III组eIF3b 蛋白表达水平（0.45±0.06）明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),I组和II组eIF3b蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。III组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于I组(1.12±0.16)和II组(1.08±0.18),差异有统计学意义（P＜0.05）,I组和II组eIF3b mRNA表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。细胞迁移实验中,III组细胞明显少于I组和II组(P＜0.05);细胞侵袭实验中,III组穿过人工基底膜的细胞明显少于I组和II组(P＜0.05)。结论:下调eIF3b表达可明显抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移。     

长链非编码RNA ARHGAP5-AS1抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：检测长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）ARHGAP5-AS1在乳腺癌组织及细胞中的表达,分析其表达与患者临床病理参数及预后的相关性,并初步探讨其对乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响。方法：通过对TCGA数据库中乳腺癌相关数据集的生物信息学分析,筛选出在乳腺癌中低表达且与患者不良预后相关的lncRNA ARHGAP5-AS1,采用qPCR 方法在江南大学附属医院肿瘤科从 2010 年 4 月至 2016 年 10 月收集的乳腺癌组织中验证其表达。采用 χ2检验分析ARHGAP5-AS1表达与乳腺癌患者临床病理参数之间的关系,Kaplan-Meier生存分析构建生存曲线,比较高、低表达组的总生存期和无复发生存期。CCK-8 实验、划痕实验和 Transwell 实验分别检测 ARHGAP5-AS1 敲低对乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549的增殖、迁移和侵袭的影响。结果：TCGA 数据库分析结果显示,ARHGAP5-AS1 在乳腺癌组织中的表达水平显著低于正常乳腺组织（P<0.01）,其低表达与较大肿瘤直径（T3）、远处转移（M1）、ER 和 PR 阴性以及较短的总生存期显著相关（均P<0.05）。乳腺癌组织中ARHGAP5-AS1表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,其低表达与较大的肿瘤直径和淋巴结转移相关（均 P<0.05）。同样,ARHGAP5-AS1 在 6 株人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、BT-549、MDA-MB-468、MCF-7、HCC1937、Hs578T）中的表达水平也显著低于正常乳腺上皮细胞系（MCF-10A）（均P<0.05）。细胞功能实验显示,ARHGAP5-AS1敲低促进MDA-MB-231和BT-549细胞的增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）。结论：ARHGAP5-AS1异常低表达可能通过促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭影响乳腺癌的发生发展。     

LINC01314在甲状腺癌组织和细胞中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响北大核心

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC01314在甲状腺癌(thyroid cancer,TC)组织和细胞中的表达及其对TC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:在GEPIA数据库对TC组织中LINC01314的表达进行分析。应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测各60例TC组织与邻近正常组织以及人正常甲状腺上皮Nthy-ori 3-1细胞与TC细胞系(TPC-1、CAL-62、8305C、HTh-7)中LINC01314表达水平,并分析其表达水平与TC患者临床特征的相关性。体外培养对数生长期的CAL-62和8305C细胞,采用shRNA质粒(sh-LINC01314#1和sh-LINC01314#2)转染下调CAL-62和8305C细胞中LINC01314表达,CCK-8法和细胞克隆形成实验检测sh-LINC01314#1/2对细胞增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞Ki-67、Cyclin D1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、MMP-2蛋白表达。裸鼠移植瘤实验、免疫组织化学染色探究敲低LINC01314对TC细胞裸鼠体内生长的影响。结果:LINC01314在TC组织和细胞中呈高表达,且高水平的LINC01314与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LINC01314#1和sh-LINC01314#2干扰后,CAL-62和8305C细胞中LINC01314水平均显著降低(P<0.05),其中sh-LINC01314#1的干扰效果优于sh-LINC01314#2(P<0.05);敲低LINC01314表达可抑制CAL-62和8305C细胞的增殖、迁移和侵袭,降低Ki-67、Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白水平(P<0.05)。裸鼠体内研究证实,敲低LINC01314会阻碍TC细胞的异种移植肿瘤生长。结论:LINC01314在TC组织和细胞中呈高表达,其表达水平与TC患者肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移显著相关;敲低LINC01314可抑制TC细胞的增殖、迁移和侵袭及裸鼠移植瘤形成能力。     

三阴性乳腺癌细胞源性外泌体活化的巨噬细胞促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化作用以及经外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法:提取TNBC细胞BT-549和MDA-MB-231外泌体,透射电镜、纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）、蛋白质印记(Western blot)鉴定外泌体;流式细胞术检测经外泌体处理后巨噬细胞分子标志物CD206、CD80的表达;实时荧光定量PCR检测单核细胞THP-1、巨噬细胞M0及外泌体处理后巨噬细胞中CD163、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的mRNA水平;Transwell实验分析外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭的影响,Western blot方法检测MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin的蛋白水平。结果:透射电镜下BT-549和MDA-MB-231细胞的外泌体具有膜结构囊状小泡并表达外泌体的分子标记物CD81、CD63;BT-549细胞来源的外泌体直径分布为80~150 nm,MDA-MB-231细胞来源的外泌体直径分布为100~200 nm;经BT-549和MDA-MB-231细胞源性外泌体处理的巨噬细胞与M0相比,CD206均有稳定表达（P＜0.05),而CD80表达未见明显差异;外泌体处理后巨噬细胞的CD163、TGF-β mRNA表达水平均增加（P＜0.01),iNOS mRNA表达水平降低（P＜0.05),TNF-α mRNA表达水平未见明显变化;外泌体处理后的巨噬细胞使得TNBC细胞的迁移、侵袭穿膜数目增加(P＜0.01),N-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白表达增加（P＜0.05),E-cadherin 蛋白表达降低（P＜0.05)。结论:TNBC细胞分泌的外泌体可以诱导巨噬细胞向M2极化,进而促进TNBC细胞间质转化,增强TNBC细胞的迁移和侵袭能力。