神经营养素3促进人牙囊细胞成骨分化

目的 研究神经营养素3（NT-3）对人牙囊细胞（hDFCs）成骨分化的影响。方法 体外分离并培养hDFCs,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,CCK-8法检测不同质量浓度NT-3对hDFCs增殖活性的影响,同时检测NT-3对hDFCs的碱性磷酸酶（ALP）活性,以及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨钙素（OCN）mRNA相对表达量的影响,并用茜素红染色法检测矿化情况。结果 波形丝蛋白和角蛋白染色结果表明hDFCs为间充质细胞来源。NT-3对hDFCs增殖活性无明显影响;当NT-3质量浓度为25、50、100 ng·mL^-1时能明显增强ALP活性,提高BMP-2、OCN mRNA的相对表达量,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）,NT-3质量浓度为100 ng·mL^-1时BMP-2、OCN mRNA的相对表达量达到最高。当NT-3质量浓度为50、100 ng·mL^-1时矿化结节数量最多。结论 适宜质量浓度的NT-3能促进hDFCs的成骨分化。     

P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用

目的：探讨P2X7受体（P2X7 receptor,P2X7r）在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用。方法：选取就诊于贵州中医药大学第一附属医院的健康青年患者因正畸需要而拔除的前磨牙为实验材料,分离、培养人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）。取第4代hPDLSCs,分为A、B、C、D 4组,A组用常规培养液培养,B组用成骨诱导液培养,C组用成骨诱导液+100 nmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）溶液培养,D组用成骨诱导液+100 nmol/L P2X7受体特异性拮抗剂KN-62培养。7 d后,采用茜素红染色观察各组hPDLSCs成骨效果,采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）检测各组hPDLSCs成骨相关因子骨钙素（osteocalcin,OCN）、RUNX2 mRNA的表达量,采用RT-PCR检测各组hPDLSCs中P2X7r mRNA表达。采用SPSS 22.0软件包对结果进行统计学分析。结果：茜素红染色结果显示,B组和C组hPDLSCs细胞形态发生显著变化,逐渐由不规则形变为方形,出现灰白色钙化小结节。结节多呈板层状圆形或椭圆形团块,C组灰白色钙化小结节显著多于B组,而A组和D组钙结节量均很少。B、C组hPDLSCs中OCN、RUNX2、P2X7r mRNA表达量显著高于A组（P<0.05）,C组hPDLSCs中OCN、RUNX2、P2X7r mRNA表达量显著高于B组（P<0.05）,D组hPDLSCs中OCN、RUNX2、P2X7r mRNA表达量显著低于B、C组（P<0.05）,D组hPDLSCs中OCN、RUNX2、P2X7r mRNA表达量与A组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。结论： P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中发挥正调节作用。P2X7受体被ATP激活后,可促进人牙周膜干细胞成骨分化,这为临床上治疗牙周炎提供了新的方向。     

人牙周膜干细胞成骨分化过程中P2X7受体mRNA的表达特点及作用研究

目的：探讨P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用。方法：将原代培养获得的人牙周膜干细胞分为对照组、三磷酸腺苷组、成骨诱导液组和三磷酸腺苷+成骨诱导液组,比较4组的成骨分化相关基因RUNX2、OCN基因表达和P2X7受体mRNA表达的差异,采用SPSS 16.0软件包进行统计学分析。结果：成骨后1周和2周,三磷酸腺苷+成骨诱导液组的RUNX2和OCN mRNA表达显著高于成骨诱导液组（P<0.05）。三磷酸腺苷+成骨诱导液组成骨后1周的RUNX2和OCN mRNA表达显著高于成骨后2周（P<0.05）。成骨后1周和2周,三磷酸腺苷组和三磷酸腺苷+成骨诱导液组的P2X7受体mRNA表达均显著高于对照组和成骨诱导液组（P<0.05）;成骨后2周,三磷酸腺苷组的P2X7受体mRNA表达显著高于三磷酸腺苷+成骨诱导液组（P<0.05）;三磷酸腺苷组成骨后1周的P2X7受体mRNA表达显著高于成骨后2周（P<0.05）。结论：P2X7 受体明显提高牙周膜干细胞的成骨效果,三磷酸腺苷可激活P2X7 受体的表达。     

骨髓间充质干细胞分化能力及Notch通路活性的增龄性变化

目的： 在体外实验中初步探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨、成脂分化能力及细胞活性的增龄性变化,以及在增龄过程中Notch信号通路活性的改变。方法： BMSCs取自年轻、成年及老年C57BL/6小鼠全骨髓,以流式细胞术鉴定细胞表面抗原,成骨、成脂诱导评价各组细胞的分化能力,细胞增殖、迁移实验检测各组细胞活性,实时荧光定量PCR（qPCR）检测Notch相关基因的表达。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 茜素红和油红O染色结果表明,BMSCs的成骨分化能力随着年龄增长而下降（P<0.05）,成脂分化能力随着年龄增长而提高（P<0.05）。细胞活性实验表明,细胞增殖能力和迁移能力未随着年龄增长而下降（P>0.05）。qPCR结果表明,老龄组BMSCs的Notch信号通路表达水平显著高于年轻组（P<0.05）。结论： 随着个体年龄增长,BMSCs呈现出成骨分化能力下降而成脂分化能力提高的现象,Notch信号通路活性呈现出增龄性升高,为恢复老龄BMSCs受损成骨分化能力提供了新的思路。     

不同培养条件对CD133+原代口腔鳞癌细胞干性维持的影响

目的: 通过将CD133^+/-细胞从原代口腔鳞癌细胞中分离纯化,探索不同培养条件对CD133⁺原代口腔鳞癌细胞的干性维持及生物学特性的影响。方法: 应用CCK-8法检测CD133^+/-细胞亚群体外增殖能力以及对顺铂抵抗耐受能力,利用Transwell法检测顺铂对CD133^+/-细胞亚群侵袭能力的影响。以无血清培养法（含或不含白血病抑制因子LIF）和含血清培养法分别培养CD133⁺细胞亚群,流式细胞仪分析CD133⁺细胞的比例变化。在动物实验模型中验证CD133⁺和CD133^-细胞致瘤能力的差异,最后将移植瘤取出,行H-E染色和免疫组织化学染色。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与CD133^-细胞亚群相比,CD133⁺细胞具备较强的体外增殖能力（P<0.05）和顺铂化疗耐受能力（P<0.001）。顺铂对CD133^-细胞亚群侵袭能力的影响更强（P<0.01）。无血清培养法更能维持CD133的比例（P<0.05）,无血清培养基是否添加LIF对CD133的比例维持无显著差异（P>0.05）。在裸鼠体内成瘤实验中,CD133⁺细胞亚群以较少的数量级表现出较强的致瘤能力（P<0.05）。结论: 无血清培养法可较好地维持原代口腔鳞癌细胞干细胞特性,添加LIF对原代口腔鳞癌细胞的干性维持无显著影响。     

低氧对人牙囊细胞生物学特性的影响

目的 研究低氧对人牙囊细胞（hDFCs）生物学特性的影响。方法 利用组织块酶消化法从年轻恒牙中分离培养hDFCs;采用免疫荧光技术检测细胞表面标志物,多向诱导实验检测细胞多向分化潜能;模拟体外低氧微环境,将细胞分为常氧组（20%O₂）和低氧组（2%O₂）,分别对两组细胞行Transwell小室试验检测低氧对细胞迁移的影响,采用CCK-8法检测低氧对细胞增殖的影响。通过实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot分别从基因和蛋白水平检测hDFCs多能性相关标志物于不同氧体积分数下的表达;分别对两组细胞进行成骨诱导,qRT-PCR检测成骨相关基因,茜素红染色评估矿化结节的形成。结果 hDFCs具有较强的干细胞特征,具有成骨、成脂及成神经多向分化能力,符合间充质干细胞基本标准,能够满足牙组织工程构建对种子细胞的需求。低氧有利于hDFCs多能性的保持,同时促进了hDFCs的迁移和增殖。hDFCs于低氧中进行诱导时,其成骨分化能力得到增强。结论 低氧微环境对维持hDFCs多能性,促进hDFCs增殖、迁移和分化有重要作用。     

钙离子对人成骨细胞迁移与成骨分化的影响

目的 研究不同浓度Ca ²⁺对人成骨细胞迁移与成骨分化的影响,探讨促进迁移与成骨合适的Ca ²⁺浓度及相关机制。 方法 设置Ca ²⁺浓度,Transwell检测成骨细胞迁移;CCK-8法评估成骨细胞增殖;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞成骨分化相关基因的表达;茜素红染色检测成骨分化生成的矿化结节。钙敏感受体（CaSR）拮抗剂拮抗后,观察Ca ²⁺对人成骨细胞迁移与成骨分化的影响。 结果 在迁移实验中,2、4、6 mmol·L ^-1的Ca ²⁺在3个时间点（8、16、24 h）都能明显地促进人成骨细胞的迁移,10 mmol·L ^-1的Ca ²⁺在8 h时明显抑制迁移。2~10 mmol·L ^-1 Ca ²⁺能促进人成骨细胞的增殖、成骨分化与矿化,8、10 mmol·L ^-1的Ca ²⁺诱导的矿化作用更明显。CaSR拮抗降低Ca ²⁺诱导的人成骨细胞迁移与成骨分化作用。 结论 低浓度Ca ²⁺有利于人成骨细胞迁移,高浓度Ca ²⁺有利于人成骨细胞分化,4、6 mmol·L ^-1的Ca ²⁺能较明显地同时诱导人成骨细胞迁移与成骨分化,Ca ²⁺-CaSR通路参与相应的信号传导。     

高度浓缩生长因子对MC3T3-E1成骨细胞生物学性能的影响

目的：观察高度浓缩生长因子（concentrated growth factor,CGF）对成骨细胞生物学性能的影响。方法：将MC3T3-E1细胞在CGF环境下进行培养,并设立空白对照组。扫描电镜观察成骨细胞在CGF表面的附着;培养1、4、7 d后,检测细胞增殖情况以及碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色观察矿化结节和成骨相关基因Runx2的表达。CGF浸出液培养细胞24 h后,以鬼笔环肽染色观察细胞骨架的形态变化。采用 SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果：CCK-8比色显示,培养1、4、7 d,在相同时间点,实验组与对照组相比,CGF细胞增殖活性显著增强（P< 0.05）。ALP活性检测显示,培养1 d后,实验组与对照组无显著差异（P>0.05）;培养4、7 d后,实验组与对照组相比,ALP活性具有显著差异（P<0.05)。茜素红染色显示,CGF组钙化结节数量增多且面积较大。鬼笔环肽染色和DAPI染色可见,CGF组中细胞数量增多,细胞铺展面增大,肌动蛋白形态更为清晰。CGF可促进Runx2 mRNA表达（P<0.05）。结论：CGF可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化以及Runx2的表达。     

康复新液联合大蒜素胶囊治疗儿童复发性口腔溃疡的疗效及对免疫调节的影响

目的: 探讨康复新液联合大蒜素胶囊治疗儿童复发性口腔溃疡（ROU）的疗效及对免疫调节的影响。方法: 采用临床随机对照研究方法,选择2015年3月—2017年3月符合2012版ROU诊断标准的患儿204例,随机分为2组,A组接受大蒜素胶囊口服1 粒/次,3 次/d, 联合使用康复新液10 mL含漱3次/d;B组仅予以康复新液10 mL含漱5 min,3次/d,均治疗2周,对比治疗疗效,治疗前、后溃疡面疼痛程度（VAS评分）、溃疡愈合时间,并比较治疗前、后T细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺水平。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果: A组溃疡愈合时间（3.5±0.6）d、疼痛持续时间（3.1±0.3）d,均显著短于B组（P<0.05）;2组治疗有效率相比（96.08%∶88.24%）,差异具有统计学意义（χ²=6.264,P<0.05）;2组治疗后疼痛程度均明显减轻,A组与B组[（1.1±0.4）∶（3.2±0.6）]之间差异具有统计学意义（P<0.05）;2组治疗后CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺均出现上升,CD8⁺显著下降,与治疗前相比均具有统计学差异（P<0.05）;A组治疗后CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平显著高于B组（P<0.05）,CD8⁺显著低于B组（P<0.05）。结论: 康复新液联合大蒜素胶囊可提高ROU疗效,促进患儿口腔局部受损黏膜的修复,增加患儿免疫功能。     

小檗碱通过JNK信号通路调控大鼠脂肪干细胞成骨向分化

目的:探讨小檗碱(C20H18NO4)对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的成骨分化作用及其相关机制.方法:以5、10、20 μmol/L浓度小檗碱培养液处理ADSCs,未处理组为对照组,通过MTT法检测细胞增殖活性,应用碱性磷酸酶(ALP)染色及半定量、钙结节染色分析小檗碱对ADSCs成骨分化的影响,采用Western印迹...     

镁离子对人牙周韧带细胞体外成骨能力的影响

目的:探究不同浓度Mg²⁺对hPDLCs成骨向分化的影响,为后续牙周组织再生实验选择合适的Mg²⁺注入浓度提供依据。方法:取P3-P5代hPDLCs于Mg²⁺浓度分别为0、10、15、25、35、50 mmol/L条件中常规培养,用CCK-8法检测hPDLCs增殖情况。成骨诱导后比较各组ALP活性差异及茜素红矿化结节着色情况,进行RT-qPCR检测成骨相关基因Runx2、ALP、Col1、OPN及Bglap的表达差异。采用SPSS16.0软件,运用单因素方差分析进行统计学分析。结果:10、15、25 mmol/L Mg²⁺浓度可促进细胞增殖并提高ALP活性,35、50 mmol/L Mg²⁺浓度抑制细胞增殖及ALP活性。结论:适宜浓度镁离子(0~25 mmol/L)可促进hPDLCs早期成骨分化并抑制矿化。     

釉质基质蛋白通过miR-32对乳牙牙髓干细胞成骨与成脂分化的影响

目的:探讨釉质基质蛋白(EMPs)对乳牙牙髓干细胞(SHED)成骨和成脂作用的影响,并探讨其分子机制.方法:采用流式细胞术检测SHED表面抗原CD73、CD146、CD34和CD45的表达.通过OB成骨诱导液诱导SHED,采用茜素红染色检测其成骨分化能力.将SHED分为4组,NC组为无效序列shRNA干扰SHED,EM...     

纤维蛋白凝胶对上颌扩弓成骨矿化的影响

目的:研究原位注射纤维蛋白凝胶对SD大鼠上颌扩弓成骨矿化的影响.方法:体外实验中,将大鼠骨髓间充质细胞(rBMSCs)在不同凝血酶浓度制备的纤维蛋白凝胶环境下进行共培养,通过CCK-8、ALP染色和活性定量以及茜素红染色,检测梯度浓度凝血酶制备的纤维蛋白凝胶降解产物对rBMSCs细胞增殖和成骨分化的影响.将rBMSCs...     

细胞外基质PDMS硬度对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

目的:研究细胞外基质聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)硬度对牙髓干细胞(DPSCs)增殖和成骨分化的影响及其机制.方法:收集南京医科大学附属常州市第二人民医院因正畸而拔除的前磨牙作为实验材料,分离、培养DPSCs,制作PDMS基质.根据不同硬度,将PDMS基质分为A组(基料/固化剂=1...