RNA干扰FGFR3基因表达诱导骨肉瘤细胞凋亡及下调Wnt信号通路的 研究

目的:探讨RNA干扰人成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）基因表达对骨肉瘤细胞凋亡及Wnt信号通路的影响。方法:以LipofectamineTM 2000为载体，参照其转染说明将设计合成的2个针对FGFR3的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染人骨肉瘤MG63细胞，同时设置空白对照组，转染48 h，Western blotting检测FGFR3、β-catenin、Survivin和Bax蛋白的表达；流式细胞术检测细胞凋亡率；二氯二氢荧光素二乙酸酯（H2DCFHDA）探针检测活性氧（ROS）含量。结果:2个FGFR3 siRNA转染MG63细胞后FGFR3蛋白表达均明显受到抑制，与空白对照组及NC组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。MG63细胞转染FGFR3 siRNA后细胞凋亡率明显升高，ROS含量明显升高，β-catenin和Survivin蛋白的表达明显降低，Bax蛋白的表达明显升高，与NC组比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:RNA干扰FGFR3基因表达可诱导骨肉瘤细胞凋亡，机制可能与细胞内ROS含量升高及Wnt信号通路下调有关。     

Wnt/β-catenin信号转导通路与脑胶质瘤

Wnt/β-catenin信号转导通路是一种在进化中高度保守的信号通路,它参与了胚胎生长、发育、能量代谢和干细胞维持等多种生物学过程的调控.Wnt/β-catenin通路的异常激活与肿瘤的发生密切相关.探讨Wnt/β-catenin信号转导通路与脑胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡和肿瘤新生血管形成的关系将为脑胶质瘤的治疗提供新的靶点与干预措施.     

Wnt信号通路与骨肉瘤

Wnt信号通路在骨骼发育中扮演重要角色,并通过多种途径影响骨肉瘤(OS)细胞株的增殖、凋亡和浸润转移.近年来,wnt信号通路在OS细胞株、OS模型和作为OS诊断和预后判定标志物作用的实验证据表明,Wnt信号通路在OS发生、进展和浸润转移中发挥关键作用,而且靶向Wnt通路治疗OS的策略及安令性评价也正在进行.探讨Wnt信...     

桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路影响胶质瘤U251细胞增殖的实验研究

目的 探讨桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞U87,采用不同浓度桑根皮素(1、5、25、50、100μmol/L)作用于U87细胞,分别采用MTT法、细胞集落形成法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡活性.采用Western blotting法和细胞免...     

Wnt信号通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中作用机制

目的 探讨Wnt通路在姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用机制.方法 将MCF-7细胞培养液随机分为5组,分别加入15、30、60、120μmol/L的姜黄素,对照组不加,培养12,24,48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖能力.分A、B两组(剂量组、时间组)采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术(FCM)观测细胞凋亡及细胞周期分布;Western Blotting法检测A、B两组的Wnt通路相关蛋白,并进行相应的相关性分析探讨Wnt通路与乳腺癌MCF-7细胞凋亡的关系.结果 CCK-8结果显示,随培养时间延长,姜黄素各浓度组MCF-7细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05);在同一时间点,随着姜黄素浓度升高,细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05).FCM染色结果显示,随着姜黄素浓度增加、作用时间延长MCF-7细胞凋亡指数逐渐上升(均P<0.05),且G1/S期细胞增加越多(P<0.05).Western Blotting实验结果显示MCF-7细胞中Wnt1、β-catenin的表达下调程度呈现剂量时间依赖性(P<0.05).相关性分析显示细胞抑制率、G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率均与Wnt通路相关蛋白Wnt1、β-catenin的表达呈现较明显的相关性(P<0.05).结论 姜黄素的抗癌活性与抗增殖能力具有明显的剂量时间依赖性,且Wnt通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞抑制、凋亡过程中发挥了重要作用.     

Wnt信号通路与乳腺癌

Wnt信号通路在某些肿瘤的发生中具有重要的作用，全文主要论述Wnt信号通路与乳腺癌之间的关系及目前针对Wnt信号通路所开展的乳腺癌相关研究。     

miR-148b-3p通过调控Wnt信号通路对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-148b-3p对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞株, 采用Lipofectamine 2000转染试剂将miR-148b-3p模拟物或阴性对照转染至U251细胞, 分别记为miR-148b-3p组和阴性对照组, 同时设置空白对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染效果, Transwell实验检测各组U251细胞的侵袭能力, 划痕实验检测各组U251细胞的迁移能力, 酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的水平, Western blot法检测细胞中Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果 qRT-PCR显示, miR-148b-3p组U251细胞中miR-148b-3p的表达水平为2.45±0.25, 高于阴性对照组(0.97±0.10)和空白对照组(1.00±0.11), 差异均有统计学意义(均P<0.05)。Transwell实验显示, miR-148b-3p组侵袭细胞数为(50.62±5.36)个, 与阴性对照组[(108.84±10.14)个]和空白对照组[(113....     

Wnt信号通路影响肺癌干细胞机制的研究进展

检索2001年至2011年Medline、PubMed及CNKI 期刊全文数据库检索系统与Wnt信号通路及肺癌干细胞相关的中、英文文献发现,Wnt信号主要通过Wnt经典信号传导途径、Wnt Ca2+途径、Wnt 细胞平面极化途径在细胞中起作用。作为Wnt信号通路中最关键的通道传递分子,Wnt／β catenin信号通路在维持肺癌干细胞的增殖和克隆形成方面发挥着重要作用,通过对关键蛋白的影响抑制肺癌干细胞增殖,为肺癌的治疗提供了新路径。     

miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展和转移

目的 :研究在卵巢癌发展转移进程中miRNA-15a的作用, 并探讨其作用机制。 方法 :收集锦州医科大学附属第一医院2012年5月至2015年6月32例卵巢癌患者的手术切除标本, 采用RT-PCR检测miRNA-15a表达。将培养的卵巢癌SKOV-3细胞分为转染miRNA-15a模拟物的实验组和转染无义miRNA的对照组, 采用CCK8、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡的变化, 采用Western blot法检测相关蛋白表达。通过生物信息学方法预测miRNA-15a靶基因, 采用双荧光素酶报告基因实验结合Western blot法验证miRNA-15a对靶基因的调控。检测Wnt3a与miRNA-15a模拟物共转染SKOV-3细胞后对细胞增殖和侵袭的影响。 结果 :与癌旁组织中的miRNA-15a相对表达量0.692±0.228相比, 显著低于卵巢癌组织中的0.911±0.209, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组细胞增殖能力相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组细胞增殖能力, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组189.667±14.742相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组的细胞侵袭能力96.667±13.614, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a过表达实验组的细胞凋亡率27.400%±0.854%显著高于对照组细胞凋亡率6.933%±0.379%, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a模拟物下调Wnt3a和β-catenin的表达, 抑制细胞周期蛋白(Cyclin D1)和血管内皮生长因子(vascu-lar endothelial growth factor, VEGF)的表达, 促进E-钙离子依赖的细胞黏附素(E-calcium-dependent adhesion, E-cad)的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miRNA-15a靶向抑制Wnt3a表达。上调Wnt3a能显著降低miRNA-15a对卵巢癌细胞增殖、侵袭和对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。结论:miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路的激活以抑制卵巢癌的发展和转移。      

miR-640通过抑制SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤对替莫唑胺的耐药

摘 要：［目的］评价miR-640介导Wnt/β-catenin通路对脑胶质瘤耐药细胞增殖、侵袭及替莫唑胺(temazolamide,TMZ)敏感性的影响。［方法］ 利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定脑胶质瘤细胞内miR-640的表达。U87/TMZ细胞分为NC inhibitor组、 miR-640 inhibitor组和miR-640 inhibitor+si-SLIT1组。用不同浓度（15、30、60、120、240 、480和960 μmol/L）TMZ处理细胞,检测细胞对TMZ的耐药性;运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、Transwell实验检测U87/TMZ细胞增殖活力和侵袭力;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-640与SLIT1的靶向关系。采用Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ miR-640在脑胶质瘤细胞中高表达,转染后miR-640 inhibitor组的miR-640表达水平、侵袭细胞数目（57±23 vs 153±31）、IC50值（131.61±8.97 vs 293.33±11.28）、增殖率（18.48±4.23 vs 43.84±8.94）均比NC inhibitor组低（P<0.05）。miR-640靶向调控SLIT1的表达,miR-640 inhibitor+si-SLIT1组β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白表达水平均高于miR-640 inhibitor组（P<0.05）。［结论］miR-640通过SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤增殖、侵袭及对替莫唑胺的耐药性。     

Wnt信号调控胶质瘤或胶质瘤干细胞增殖及迁移作用的研究进展

近年研究发现Wnt信号通路与神经胶质瘤及其肿瘤干细胞的细胞增殖及细胞迁移相关,Wnt信号蛋白及其关键家族成员的表达水平与胶质瘤恶性程度密切有关,提示Wnt信号及相关通路的靶干预可能成为恶性胶质瘤治疗的新途径.     

Wnt信号通路与肿瘤的研究进展

Wnt信号通路不仅与肿瘤侵袭转移的相关事件如癌细胞的迁移黏附、细胞外基质的降解及肿瘤的血管生成密切相关,而且在调节肿瘤干细胞的自我更新、增殖与分化中发挥重要作用,并且针对Wnt信号通路不同基因靶点的高特异性基因药物开发及其肿瘤靶向治疗方面也取得一定进展。     

Wnt/β-catenin signaling pathway and glioma

Wnt/β-catenin signaling pathway is highly conserved in evolution, which involves in the regulation of a variety of biological processes such as embryonic growth, development, energy metabolism and stem cells maintenance. Aberrant activation of Wnt/β-catenin signaling pathway has a closely relationship with tumorigenesis. Investigating the role of Wnt/β-catenin signaling in glioma cell proliferation, invasion, apoptosis and tumor angiogenesis will provide novel therapeutic targets and intervening measures for glioma treatment.     

STAT3信号通路抑制剂AG490协同TCF21促进卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路抑制剂AG490对过表达转录因子21(TCF21)的卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:卵巢癌细胞ES-2转染TCF21过表达载体,Western blot检测转染后细胞中TCF21表达情况。ES-2细胞分为对照组(未转染且正常培养)、过表达组(转染TCF21过表达载体)、抑制剂组(未转染的细胞经过STAT3信号通路抑制剂处理)、联合组(STAT3信号通路抑制剂处理过表达TCF21的细胞)。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、剪切后的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果:转染TCF21过表达载体的ES-2细胞中TCF21表达水平升高明显高于对照组(P<0.05)。过表达组和抑制剂组细胞增殖率和p-STAT3/STAT3水平明显低于对照组且明显高于联合组(P<0.05)。过表达组和抑制剂组细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组且明显低于联合组(P<0.05)。结论:STAT3信号通路抑制剂能够协同TCF21促进卵巢癌细胞凋亡并抑制卵巢癌细胞增殖。     

川芎嗪通过调控Wnt信号通路抑制肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨川芎嗪通过调控Wnt信号通路影响人肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究。方法:将培养的人肺癌细胞A549随机分为四组:对照组、川芎嗪组、抑制剂组、川芎嗪+抑制剂组,噻唑蓝（MTT）法检测各组A549细胞增殖能力,流式细胞术检测各组A549细胞生长周期,Transwell实验检测各组A549细胞侵袭能力,划痕实验检测各组A549细胞迁移能力,蛋白免疫印迹（Western blot）检测各组A549细胞中β-连环蛋白（β-catenin）、c-myc、增殖细胞核抗原（PCNA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白水平。结果:与对照组相比,川芎嗪组和抑制剂组均能够抑制A549细胞增殖,阻滞细胞周期至G1期,阻碍细胞侵袭和迁移,下调细胞中β-catenin、c-myc、PCNA和MMP-9蛋白水平,差异具有统计学意义（P＜0.05）。与川芎嗪组和抑制剂组相比,川芎嗪+抑制剂组A549细胞增殖能力显著降低,细胞周期阻滞于G1期,细胞侵袭和迁移能力受到抑制,细胞中β-catenin、c-myc、PCNA和MMP-9蛋白水平显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:川芎嗪能够抑制人肺癌细胞A549细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与抑制Wnt信号通路的激活有关。     

人脑胶质瘤组织中Oct4、Wnt2的表达及其临床意义

目的: 探讨Oct4和Wnt2在人脑胶质瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法: 选取临床及病理资料完整的长江大学附属第一医院2006-2009年手术切除并经病理证实为胶质瘤的石蜡标本56例,采用免疫组织化学方法检测56例胶质瘤组织（其中15例为术后复发）和10例脑外伤行内减压术切除的脑组织标本Oct4、Wnt2的表达。结果: 正常脑组织中Oct4表达均为阴性,Wnt2表达仅1例呈弱阳性;56例胶质瘤组织中Oct4阳性34例（60.7%）,Wnt2阳性40例（714%）。Oct4、Wnt2在低度恶性胶质瘤组中和高度恶性胶质瘤中的阳性率分别为46.2%和73.3%（P<0.05）及577%和83.3%（P<0.05）,Oct4在复发肿瘤和初诊肿瘤中的阳性率分别为86.7%和51.2%（P<0.05）。人脑胶质瘤组织中 Oct4和Wnt2表达呈正相关（r=0.537,P<0.01）。结论: Oct4、Wnt2的表达与人脑胶质瘤的恶性程度相关,Oct4的表达与胶质瘤的复发相关;Oct4可能是通过Wnt通路而参与了胶质瘤的发生、发展。     

Wnt信号通路抑制因子SOX17在肿瘤中的研究

 SOX17作为SOX转录因子超家族的一员,在进化过程中高度保守,对胚胎内胚层的形成具有重要作用。研究发现,SOX17基因启动子高甲基化可导致其表达沉默或减少,从而异常激活经典Wnt信号通路,在肿瘤的形成和进展中具有至关重要的作用。