艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病的作用及其机制研究

目的　研究艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病（HIE）的作用及其机制。方法　55只出生7 d的ICR小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、模型组（HI组）和艾灸组（MOX组）。HI组和MOX组采用右侧颈总动脉结扎联合缺氧法制备HIE模型，MOX组建模后艾灸刺激大椎穴，35 min/次，1次/d，连续治疗3 d。处理结束后麻醉取脑，DAPI染色观察脑组织形态结构，TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡；免疫荧光染色检测脑组织caspase-9表达；放射免疫分析法测定脑组织caspase-3含量。结果　与Sham组相比，HI组小鼠脑组织排列疏松，脑组织凋亡细胞数和caspase-9表达显著增多（P＜0.05）；与HI组相比，MOX组小鼠脑组织排列较致密，脑组织凋亡细胞数、caspase-9和caspase-3表达显著减少（P＜0.05）。结论　艾灸可能通过降低脑组织caspase-9和caspase-3的表达来减少细胞凋亡，从而减轻新生小鼠缺氧缺血性脑损伤。     

热敏灸对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质 CD11b 表达的影响

目的 制备局灶性脑缺血性再灌注损伤大鼠模型, 观察热敏灸对模型大鼠大脑皮质 CD11b 表达的影响。 方法 雄性 SD 大鼠 51 只, 采用随机数字表法将大鼠分为假手术组 （n=10）、 模型组 （n=14）、 艾灸组 （n=27）。艾灸组 根据艾灸前后尾温变化再分为非热敏灸组 （n=13） 和热敏灸组 （n=14）。应用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注损伤大 鼠模型。采用神经功能缺失评分法观察大鼠的行为学表现; 光照测痛仪测定大鼠的甩尾潜伏期; TTC 染色法观察大 鼠的脑梗死面积; 免疫组织化学法检测大脑皮质 CD11b 的表达。结果 术后 3 d 时, 非热敏灸组（9.32±1.11） s 与热 敏灸组（8.69±0.51） s 大鼠甩尾潜伏期均明显短于模型组（12.21±1.04） s, 以热敏灸组缩短更为明显; 非热敏灸组 （20.59±2.25） %和热敏灸组（13.18±3.50） %大鼠脑梗死面积小于模型组（32.22±14.20） %, 以热敏灸组缩小更为明显; 非热敏灸组 （5.40±0.58） 和热敏灸组 （2.89±0.71） 大鼠大脑皮质 CD11b 表达低于模型组 （7.83±1.60）, 以热敏灸组降低 更为明显。结论 热敏灸具有改善大鼠的感觉功能、 减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用, 减少大脑皮质 CD11b 的表 达、 减轻炎症反应可能是其作用机制之一。     

新生小鼠缺氧缺血性脑病脑组织 caspase-3#br# 表达的变化

摘要： 目的 观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （caspase） -3 在新生儿缺氧缺血性脑病 （NHIE） 小鼠模型脑组织中表 达的变化。方法 选取 7 d CD1 新生小鼠 30 只, 按随机数字表法分为假手术组 （9 只） 和 NHIE 模型组 （21 只）, 后者 制备 NHIE 动物模型。用 TTC 染色法检查 2 组的脑组织梗死面积; DAPI 染色观察脑组织病理变化; 原位末端标记 技术检测脑组织细胞凋亡; 荧光免疫组化法检测脑组织中 caspase-3 表达水平。结果 假手术组小鼠脑组织未见梗 死灶, 脑组织细胞排列致密整齐, TUNEL 阳性细胞数（ [ 18.57±4.98） 个]和 caspase-3 阳性细胞数[(9.17±2.14)个]明显低 于 NHIE 模型组的 TUNEL 阳性细胞数（ [ 209.57±41.27） 个]和 caspase-3 阳性细胞数（ [ 63.33±16.22） 个]; 与假手术组相 比, NHIE 模型组小鼠的右侧半球可见梗死灶, 脑组织细胞大量坏死脱落、 周围组织间隙变大。结论 NHIE 模型鼠 出现的脑组织损伤可能与caspase-3 表达增加、 脑组织细胞凋亡增加有关。     

孕酮干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织中的表达及孕酮对其影响,从分子水平探讨孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑病星形胶质细胞的保护机制。方法:24只新生Wistar大鼠随机均分成3组,假手术组、缺氧缺血组和药物预防组动物,建立缺氧缺血脑病动物模型。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,亦不做缺氧处理。药物预防组动物于建立模型前30min按8mg/kg腹腔注射0.5g/L的孕酮溶液,24h后动物被全部处死,采用免疫组化和RT-PCR方法检测各组大鼠脑组织中GFAP表达的变化。结果:各组大鼠星形胶质细胞中都有GFAP表达,缺氧缺血组的GFAP阳性细胞数和GFAPmRNA的表达水平明显高于假手术组(均P<0.05),药物预防组的GFAP阳性细胞数和GFAPmRNA的表达明显低于缺氧缺血组(均P<0.01)。结论:缺氧缺血性脑损伤可引起新生鼠脑组织GFAP大量表达,孕酮可抑制缺氧缺血后脑组织星形胶质细胞过度表达,发挥抗缺氧缺血性脑损伤的作用。     

丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织SOD、MDA的影响

目的 观察丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织SOD、MDA的影响及探讨丹参素的脑损伤保护作用机理.方法 7日龄SD新生大鼠78只,随机分成5组:假手术组(n =6);缺氧缺血模型组(n =18);丹参素低剂量组(n =18);丹参素中剂量组(n =18);丹参素高剂量组(n =18).通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型.假手术组不进行缺氧缺血处理.丹参素各治疗组按低、中、高剂量分别于造模后0、24 h两个时点按15 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg腹腔注射用生理盐水稀释至0.5 ml的丹参素注射液.缺氧缺血模型组及假手术组于相应时点腹腔注射生理盐水0.5 ml.假手术组于缺氧缺血后6 h,HIBD组与各丹参素组于缺氧缺血后6 h、24 h、48 h断头取脑,测定脑组织匀浆SOD、MDA.结果 与假手术组比较,缺氧缺血模型组新生大鼠大脑中MDA水平升高,SOD活性降低;应用丹参素治疗后MDA水平回降,SOD活性回升,且呈剂量效应.差异有统计学意义(P<0.05).结论 丹参素有减轻新生大鼠缺血再灌注时氧自由基引起的氧化损伤作用,从而发挥脑保护作用.     

丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织iNOS、NOS、NO的影响

目的:观察丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织iNOS、NOS、NO的影响并探讨其脑保护作用机制.方法:将78只SD新生大鼠随机分成假手术组(n=6),缺氧缺血模型组(n=18),丹参素低剂量组(n=18),丹参素中剂量组(n=18),丹参素高剂量组(n=18).通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型.假手术组不进行缺氧缺血处理.丹参素各治疗组按低、中、高剂量分别于造模后0、24 h两个时点按15,30,60 mg·kg-1腹腔注射用生理盐水稀释至0.5 mL的丹参素注射液.缺氧缺血模型组及假手术组于相应时点腹腔注射生理盐水0.5 mL.假手术组于缺氧缺血后6 h,缺氧缺血模型组与各丹参素治疗组于缺氧缺血后6,24,48 h断头取脑,测定脑组织匀浆iNOS、NOS、NO浓度.结果:与假手术组比较,缺氧缺血模型组新生大鼠大脑中iNOS在缺氧缺血后6 h时变化不大;而在缺氧缺血24 h后升高,应用丹参素治疗后回降,呈一定的量效关系,差异有统计学意义(P＜0.05);NOS及NO在缺氧缺血后6,24,48 h均升高,应用丹参素治疗后回降,且呈一定的量效关系,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:丹参素能抑制nNOS、iNOS的产生,从而减少过高的NO的产生,而发挥对新生鼠HIBD时脑的保护作用.     

Z-没药甾酮联合11-羰基-β-乙酰乳香酸对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的改善作用研究

目的:研究Z-没药甾酮(Z-GL)联合11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的改善作用。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和Z-GL+AKBA低、高剂量组(二者低、高剂量均分别为25、50 mg/kg),每组10只。除假手术组外,其余各组均采用线栓法复制大脑中动脉闭塞/再灌注损伤模型。各给药组大鼠均于再灌注后灌胃相应药物,假手术组和模型组大鼠灌胃等容二甲基亚砜,每12 h给药1次,连续7 d。采用改良Longa评分法评价各组大鼠的神经功能缺损情况,采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠脑组织的病理学变化,采用TTC法检测其脑梗死面积并计算脑梗死百分比,采用TUNEL法检测其脑组织中在体细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法、免疫印迹法分别检测其脑组织中CD34、血管内皮生长因子(VEGF)、Delta样配体4(DLL4)的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑组织皮层细胞数量减少且排列不规则,可见明显梗死区,并伴有新生血管明显减少;其神经功能缺损评分和脑梗死面积百分比均显著升高,TUNEL阳性细胞数显著增多,CD34、VEGF、DLL4的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠上述症状均有明显改善,其神经功能缺损评分和脑梗死面积百分比均显著降低,TUNEL阳性细胞数显著减少,CD34、VEGF、DLL4的表达水平均显著升高,且Z-GL+AKBA高剂量组神经功能缺损评分、脑梗死面积百分比、TUNEL阳性细胞数均显著低于或少于低剂量组,CD34、DLL4的表达水平均显著高于低剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论:Z-GL和AKBA联用可减轻脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经功能缺损,改善其脑损伤;这种作用可能与促进血管新生以及上调VEGF、DLL4蛋白的表达有关,并具有一定的剂量依赖性。     

rhG-CSF对新生鼠缺氧缺血性脑损伤HIF-1α表达的影响

目的：探讨重组人粒细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF）对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马区及皮质HIF-1α（hypoxiainducible factor 1α）表达的影响。方法：将7日龄新生Wistar大鼠随机分成假手术组,HIBD组和rhG-CSF治疗组。在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎,氮氧混合气缺氧2.5h制备HIBD模型。应用免疫组织化学法检测HIF-1α。结果：免疫组化结果显示：在新生大鼠大脑皮层和海马区,HIBD组较假手术组HIF-1α表达明显增加（P〈0.01）,治疗组较HIBD组HIF-1α表达明显增加（P〈0.01）。结论：缺氧缺血性脑损伤后,脑组织HIF-1α表达增加,可能与促进血管形成及抑制神经细胞凋亡有关。rhG-CSF可能通过调节HIF-1α的表达,减少神经细胞凋亡,增强脑组织对缺氧的耐受,从而改善缺氧缺血性脑损伤小鼠的预后。     

激活素A对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后CC3的影响

目的:探讨腹腔注射激活素A对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后的凋亡细胞CC3的影响。方法:7日龄Wistar新生大鼠144只,随机分为三组:假手术组,HIBD组,激活素A治疗组(ACTA组),按处死时间的不同分为6个亚组即6h、12h、24h、48h、3d、5d每亚组数量8只(n=8)。在乙醚麻醉下行左侧颈总动脉结扎,之后放入通入氮氧混合气体(92%氮气和8%氧气)缺氧仓中缺氧2h制备HIBD模型。采用免疫组化方法检测凋亡细胞CC3在各组的表达,应用SPSS17.0软件进行统计分析结果。结果:免疫组化结果显示为在脑组织中大脑皮层及海马区可见凋亡细胞,假手术组中有少量表达,HIBD组的CC3的表达比假手术组的明显增加(P<0.05),治疗组的CC3的表达比HIBD组的明显减少(P<0.05)。结论:激活素A对神经元细胞有明显的保护作用,可减轻缺氧缺血多脑细胞的损伤;可减少脑组织中凋亡细胞的数量,对损伤的脑组织有修复和保护作用,为HIBD在临床上的治疗提供实验依据和新的思路。     

芍药苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中脑细胞凋亡的影响

目的 观察芍药苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中脑细胞凋亡的影响,并探讨其脑保护的作用机制.方法 30只7日龄SD大鼠,随机均分成假手术组、缺氧缺血模型组、芍药苷低、中、高剂量治疗组.通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型.假手术组不进行缺氧缺血处理,各组新生鼠均于缺氧缺血后48 h处死,取大脑皮层及海马区组织进行HE染色及TUNEL法凋亡细胞检测.结果 假手术组大鼠的大脑皮层及海马区组织、细胞形态正常;缺氧缺血模型组的大脑皮层及海马区组织水肿,细胞周围间隙增宽,胞体肿胀变圆、变大、胞浆染色变浅;各芍药苷组的神经元细胞胞体肿胀及组织水肿情况较缺氧缺血模型组明显好转.假手术组的大脑皮层及海马CA1区未见凋亡细胞;缺氧缺血模型组的可见较多凋亡细胞;各芍药苷组的凋亡细胞较相应时点缺氧缺血模型组的减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 芍药苷能减轻新生大鼠HIBD时的脑病理损伤,抑制大鼠HIBD时的脑细胞凋亡,对新生大鼠HIBD脑损伤具保护作用.     

亚甲基蓝对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护作用

目的 探讨亚甲基蓝对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、亚甲基蓝低剂量组(1 mg/kg)、亚甲基蓝中剂量组(2 mg/kg)、亚甲基蓝高剂量组(4 mg/kg),每组12只.线栓法制备大鼠左侧颈动脉栓塞2 h再灌注24 h模型.亚甲基蓝组于术前1 d,再灌注时腹腔注射相应剂量...     

依达拉奉联合奥扎格雷对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

目的观察依达拉奉联合奥扎格雷对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法将50只SD雄性大鼠随机分为5组,即假手术组、缺血/再灌注组、生理盐水对照组、奥扎格雷组和依达拉奉联合奥扎格雷组。采用线栓大鼠大脑中动脉法建立局灶性脑缺血/再灌注模型,观察依达拉奉联合奥扎格雷对各组大鼠的神经行为、脑梗死面积,脑组织中IL-1,TNF-α的含量的影响。结果与假手术组比较脑缺血/再灌注组大鼠神经功能缺陷严重,脑梗死面积大,脑组织中IL-1,TNF-α的含量明显增多,差异具有显著性(P<0.05);与奥扎格雷组相比脑组织中IL-1含量明显减少,差异具有显著性(P<0.05),其它指标无差异。结论依达拉奉联合奥扎格雷对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,可以改善大鼠神经功能,减少梗死面积,降低脑组织中IL-1,TNF-α的含量,其机制可能与其抑制了IL-1,TNF-α的表达有关。     

Cannabidiol administration after hypoxia-ischemia to newborn rats reduces long-term brain injury and restores neurobehavioral function

Cannabidiol (CBD) demonstrated short-term neuroprotective effects in the immature brain following hypoxia–ischemia (HI). We examined whether CBD neuroprotection is sustained over a prolonged period. Newborn Wistar rats underwent HI injury (10% oxygen for 120 min after left carotid artery electrocoagulation) and then received vehicle (HV, n = 22) or 1 mg/kg CBD (HC, n = 23). Sham animals were similarly treated (SV, n = 16 and SC, n = 16). The extent of brain damage was determined by magnetic resonance imaging, histological evaluation (neuropathological score, 0–5), magnetic resonance spectroscopy and Western blotting. Several neurobehavioral tests (RotaRod, cylinder rear test[CRT],and novel object recognition[NOR]) were carried out 30 days after HI (P37). CBD modulated brain excitotoxicity, oxidative stress and inflammation seven days after HI. We observed that HI led to long-lasting functional impairment, as observed in all neurobehavioral tests at P37, whereas the results of HC animals were similar to those of sham animals (all p < 0.05 vs. HV). CBD reduced brain infarct volume by 17% (p < 0.05) and lessened the extent of histological damage. No differences were observed between the SV and SC groups in any of the experiments. In conclusion, CBD administration after HI injury to newborn rats led to long-lasting neuroprotection, with the overall effect of promoting greater functional rather than histological recovery. These effects of CBD were not associated with any side effects. These results emphasize the interest in CBD as a neuroprotective agent for neonatal HI.     

脂氧素A_4对颅脑损伤伴失血性休克心肌损伤保护作用的实验研究

目的观察脂氧素A4(LXA4)对颅脑损伤伴失血性休克(TBIS)大鼠心肌损伤的保护作用。方法Wistar大鼠36只,随机分成假手术组(C组)、TBIS模型组和LXA4治疗组,每组12只。对大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)进行检测;采用TTC染色法对心肌梗死区及心肌缺血区进行测定,计算心肌梗死面积;病理切片观察心肌炎性细胞浸润。结果与C组比较,TBIS组血清MDA、CK水平及心肌梗死面积明显升高(P<0.01),而SOD水平明显下降(P<0.01),心肌炎性细胞浸润增加;LXA4治疗组血清MDA、CK-MB水平及心肌梗死面积较TBIS组明显下降(P<0.01),而SOD水平明显升高(P<0.01),心肌炎性细胞浸润减少。结论 LXA4治疗可减轻TBIS大鼠心肌损伤,可能与其减轻脂质过氧化和自由基损伤有关。     

Reduction of canine myocardial infarct size by CI-959, an inhibitor of inflammatory cell activation.

CI-959, a cell-activation inhibitor that prevents the formation of oxygen-derived free radicals by inflammatory cells, was studied to determine its effects on myocardial infarct size and subsequent scar formation in dogs. The left circumflex coronary artery was occluded for 90 min, followed by 6 h of reperfusion. Drug infusion was started 15 min before reperfusion at a loading dose of 8 mg/kg i.v., followed immediately by 2 mg/kg i.v. infused over 80 min. The infarct size, assessed by TTC staining techniques, was significantly reduced in 12 dogs treated with CI-959 (23.3 +/- 3.6% of the area at risk) when compared to 11 vehicle-treated animals (35.5 +/- 4% of the area at risk, p less than 0.05). This reduction in infarct size was not attributed to changes in regional myocardial blood flow, as measured by radioactive microspheres, or to a reduction in myocardial oxygen demand, as estimated by changes in the rate-pressure product. The scar thickness, measured after a 6-week recovery period in 9 animals treated with CI-959, was not significantly reduced in comparison with 11 controls. In vitro, CI-959 effectively inhibited oxygen free radical formation by canine neutrophils. The results of this study show that CI-959 significantly reduces the myocardial infarct size without causing scar thinning, which might lead to ventricular aneurysm, and suggests the most likely mechanism for its beneficial action is the prevention of formation of toxic oxygen radicals.     

Rho激酶抑制剂对大鼠慢性低灌注脑损伤脑组织的保护作用

目的 探讨Rho激酶抑制剂对大鼠慢性低灌注脑损伤脑组织的保护作用。方法 选择SD大鼠，随机分为假手术组、脑损伤组、法舒地尔组。检测脑组织功能、梗死面积及炎症因子水平。结果 脑损伤组的脑组织功能评分高于假手术组和法舒地尔组，脑组织损伤面积大于假手术组和法舒地尔组，差异有统计学意义（P〈0．05）。脑损伤组的IL-8、TNF-α水平高于假手术组和法舒地尔组，差异有统计学意义（P〈0．05）。IL-8、TNF-α水平与脑组织功能评分及损伤面积呈正相关。结论 Rho激酶抑制剂能控制炎症反应水平、改善慢性低灌注损伤的脑组织功能，具有积极的应用价值。     

肝脏CD4、CD8及CD68表达与Kasai术后胆管炎的关系研究

目的　探讨T淋巴细胞表面抗原CD4、CD8、巨噬细胞特异性抗原CD68表达与胆道闭锁肝门-空肠吻合术（Kasai术）后胆管炎的关系。方法　选取Kasai术后行肝移植手术的27例胆道闭锁患儿,根据既往胆管炎发作情况将其分为频发胆管炎组（10例）、早期胆管炎组（7例）和无胆管炎组（10例）,比较各组患儿的一般临床资料。取患儿肝移植时病肝的肝门部肝组织,行HE染色观察肝纤维化、胆管增生、肝组织炎性细胞浸润程度及胆栓情况,免疫组织化学染色检测CD4、CD8及CD68蛋白表达情况。结果　3组患儿性别、年龄、Kasai手术年龄、自体肝生存时间、肝移植时白细胞计数、C反应蛋白及肝功能指标差异均无统计学意义;HE染色示3组患儿肝纤维化、胆管增生及胆栓分级差异均无统计学意义,而频发胆管炎组汇管区炎性细胞浸润程度较无胆管炎组和早期胆管炎组严重;免疫组化染色显示3组患儿CD4蛋白表达差异无统计学意义;频发胆管炎组CD8、CD68蛋白表达水平均高于无胆管炎组和早期胆管炎组（P＜0.05）。结论　Kasai术后胆管炎肝脏病理改变主要为CD8＋T细胞及CD68＋巨噬细胞参与的炎症反应,CD8及CD68表达增高可能是胆管炎反复发作的危险因素。