丹参对口腔癌细胞粘附和增殖能力的抑制作用

目的 观察活血化瘀药物丹参对颊、舌癌细胞株（ＢｃａＣＤ８８５,Ｔｃａ８１１３）细胞的粘附及增殖能力的影响。方法 采用体外培养细胞的实验方法,分别对药物组和对照组细胞的形态、纤维样物形成的能力、贴附力及增殖能力进行了观察。结果 丹参抗粘附的作用主要体现在细胞形态学的变化,抗纤维样物形成和抑制贴壁等方面,并有一定的浓度依赖关系。丹参对这二株癌细胞的增殖抑制较对照组具有非常显著的作用Ｐ〈０．００１。最强     

乳杆菌A2代谢产物对人舌鳞癌细胞系Cal-27凋亡的诱导

目的:观察乳杆菌A2代谢产物LM1和LM2对人口腔舌鳞癌细胞系Cal-27细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:将乳杆菌A2经复原乳清培养基培养制备相应的代谢产物1(LM1),除去代谢产物中的钙离子得到产物2(LM2);用MTT法和流式细胞仪检测口腔舌鳞状细胞癌的细胞凋亡的情况;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的变化。结果:乳杆菌A2代谢产物LM1和LM2作用Cal-27细胞48 h时,最大抑制率分别为(39.9±1.56)%和(30.5±6.85)%;Annexinv-FITC/PI染色法检测LM2(8 mg/mL)培养40、44 h时,细胞早期凋亡率分别为19.93%和21.42%;琼脂糖凝胶电泳LM2(8 mg/mL)培养54 h时,在250⁷50 bp之间显现出典型的"梯"状DNA条带。结论:LM1和LM2能抑制口腔舌鳞癌细胞Cal-27的增殖,呈剂量依赖性关系,LM2能够诱导细胞凋亡。     

重组人乳铁蛋白对口腔癌细胞周期及周期因子表达影响的实验研究

目的：探讨重组人乳铁蛋白（Recombinate human lactoferrin,rhLF）对口腔癌Tea8113细胞周期及周期调控因子cyclinD1、p19和p27基因表达的影响。方法：分别采用流式细胞仪和RT—PCR方法分析细胞周期及周期调控因子cyclinD1,p19和p27的mRNA水平。结果：50μg／mL、100gg／mLrhLF作用Tca8113细胞后,细胞增殖减慢,G0／G1期细胞明显增多,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）;Tca8113细胞的cyclinDlmRNA表达下降显著,50μg／mL和25μg／mL rhLF实验组与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）;p19和p27mRNA表达水平的变化不明显。结论：rhLF通过下调口腔癌细胞周期蛋白cyclinD1的表达来调控周期阻滞,为乳铁蛋白用于肿瘤的预防及治疗提供实验基础。     

姜黄素联合紫杉醇对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨姜黄素和紫杉醇对人口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖和凋亡的影响.方法:培养人口腔鳞癌细胞系CAL27,采用不同浓度的姜黄素和紫杉醇及联合用药处理细胞24 h、48 h及72 h.MTT法检测对细胞增殖的影响,Tunel法检测对细胞凋亡的影响,Western印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和活性caspase-3表达的影响.采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:相对于姜黄素或紫杉醇对CAL27的单独作用,两者联合用药能更显著地抑制CAL27细胞增殖和促进CAL27细胞凋亡,更显著地下调Bcl-2表达和Bcl-2/Bax表达比例,上调Bax和活性caspase-3的表达.结论:相比于单一用药,姜黄素和紫杉醇联合用药对CAL27有更好的增殖抑制和凋亡诱导作用.     

三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的机制探讨

目的：探讨三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的机制。方法：通过对两种舌鳞癌细胞系OSC－19，Tca8113经三氧化二砷作用后电镜下形态学改变、流式细胞仪测得的细胞周期变化、线粒体跨膜电位改变、凋亡相关蛋白BCL－2、p16、p53、Caspase-3及PARP变化；初步探讨三氧化二砷诱导舌鳞癌细胞系凋亡的机制。结果：（1）三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞生长通过毒性损伤和诱导凋亡双重途径来实现；（2）经三氧化二砷作用后，western blot检测bcl-2、p53、p16基因表达蛋白无变化，而caspase-3,PARP发生改变；（3）经三氧化二砷作用后，两类舌鳞癌细胞系线粒体跨膜电位明显下降，细胞周期G2－M期阻滞，且与凋亡产生同步。结论：（1）线粒体和微管可能是三氧化二砷的主要作用位点，为三氧化二砷发挥凋亡诱导效应的启动因素；（2）Caspase-3途径的激活可能为三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的关键途径之一。     

口腔癌细胞Cal27外泌体对人正常牙龈成纤维细胞的生物学作用

通过将Cal27外泌体（Cal27-exo）与正常人牙龈成纤维细胞（NHGFs）共培养,测定共培养后NHGFs+Cal27-exo的增殖迁移能力及相关蛋白表达情况,探讨Cal27-exo对NHGFs的活化及生物学行为的影响。     

天然产物五味子乙素对口腔癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 研究天然产物五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）对口腔癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 用不同浓度的五味子乙素分别处理口腔癌细胞株SCC15和CAL27细胞24 h和48 h,采用CCK-8法和AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术,检测五味子乙素对口腔癌细胞增殖及凋亡的影响;采用Transwell实验分别检测五味子乙素对细胞侵袭的影响,采用qRT-PCR和Western Blot检测五味子乙素对Prx1 mRNA与蛋白表达的影响。结果 CCK-8和流式细胞术检测发现五味子乙素明显抑制SCC15和CAL27细胞增殖并促进细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性（P<0.05）。Transwell实验结果显示,五味子乙素对侵袭的抑制作用呈时间和剂量依赖性。五味子乙素对Prx1 mRNA的表达无显著影响,但对其蛋白表达有显著的抑制作用（P<0.05）。结论 五味子乙素可能通过调控Prx1蛋白的表达抑制口腔癌细胞的增殖、侵袭,促进细胞凋亡。     

姜黄素对口腔鳞癌细胞生长增殖及相关蛋白影响的实验研究

目的：研究姜黄素对人类口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinom a,0SCC）生长增殖及相关蛋白表达的影响。方法：MTT法评定姜黄素细胞的毒性作用;形态学观察及流式细胞仪测定细胞凋亡;免疫组化法获得NF-KappaB和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达变化。结果：5、10、20mg/L浓度的姜黄素具细胞毒性作用,流式反应显示≥5mg/L时24h即具有凋亡作用,NF-KappaB和Cyclin D1的表达随药物浓度增加而渐减弱。结论：姜黄素抑制鳞癌细胞生长,减少NF-KappaB和CyclinD1的表达,可作为口腔肿瘤的化学预防剂加以应用。     

对口腔鳞状细胞癌行微波凝固治疗的可行性探讨

目的:观察微波凝固疗法(microwave coagulation therapy,MCT)治疗口腔鳞状细胞癌后引起的组织和细胞形态学变化及临床效果,探讨口腔鳞状细胞癌MCT的可行性。方法:实验组选用40例原发口腔鳞状细胞癌,采用MCT方法治疗原发灶,颈部行舌骨上清扫或全颈淋巴结清扫,手术治疗前后辅以平阳霉素化疗,对照组选用40例全身与局部情况与实验组类似的口腔癌,原发灶采用手术切除,其余治疗同实验组。2组标本均于手术当时采集并作光镜、透射电镜观察组织和细胞形态学变化。另随访3年观察疗效。结果:实验组经MCT治疗后,原发灶处组织病理报告变为变性坏死组织、炎性肉芽样改变、渗出坏死、增生或不典型增生样改变。电镜下可见癌邻近组织处出现大量细胞凋亡现象及肥大细胞。随访3年MCT组局部复发率低于手术组(P<0.05)。结论:MCT可有效杀灭口腔鳞状细胞癌原发灶,同时诱导邻近组织细胞凋亡和免疫增强来控制肿瘤的局部复发,临床证明对口腔鳞状细胞癌施行MCT有可行性。     

巨噬细胞来源的白细胞介素6对口腔鳞癌细胞增殖活性的影响

目的: 探讨巨噬细胞来源的白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）对口腔鳞状细胞癌细胞系增殖活性的影响。方法: 通过MTT法检测不同浓度重组IL-6对口腔鳞状细胞癌细胞系SCC-15和CAL-27增殖活性的影响。建立佛波酯诱导的THP-1巨噬细胞分化模型,分别通过实时定量荧光PCR（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验,分析脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激下的THP-1细胞中mRNA水平的变化以及THP-1细胞培养基中IL-6的含量。利用MTT法检测含THP-1条件培养基对SCC-15和CAL-27细胞系增殖活性的影响。采用GraphPad 7.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 培养基中添加IL-6,可促进SCC-15和CAL-27细胞系的增殖活性。LPS可刺激活化的THP-1巨噬细胞分泌IL-6;活化的THP-1细胞培养基可促进SCC-15和CAL-27细胞的增殖活性。结论: LPS刺激巨噬细胞分泌的IL-6,可促进口腔鳞状细胞癌细胞系SCC-15和CAL-27的增殖活性。     

姜黄素和乳香酸对口腔鳞癌细胞系Tea8113抑制作用的研究

目的观察姜黄素和乳香酸对人口腔鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及对炎症代谢通路中Cox-2、5-Lox的作用。方法培养人口腔鳞癌细胞系Tca8113,采用不同浓度的姜黄素和乳香酸及二者联合处理Tca8115细胞24、48、72h。MTY方法检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC／PI染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,RT—PCR及Western—blotting法检测对Cox-2、5-Lox表达的影响。结果姜黄素和乳香酸均能抑制Tca8113细胞增殖,呈现一定的浓度和时间依赖关系。姜黄素和乳：香酸均能促进TcaSll3细胞凋亡,呈现一定的浓度依赖关系。两种药物联合应用抑制细胞增殖和促进凋亡的作用明显强于单独作用。姜黄素能抑制炎症代谢通路中限速酶Cox-2、5-Lox的表达,乳香酸可以抑制5-Lox表达,且有一定的剂量相关性,两者联合应用时对Cox-2、5．Lox的表达均有抑制作用,尤其是对5-Lox通路的抑制,联合应用较单独应用作用显著增强。结论姜黄素和乳香酸均能抑制口腔鳞癌细胞TcaS113的增殖,促进凋亡。姜黄素能抑制炎症代谢通路中Cox-2和5-Lox的表达。乳香酸能抑制5-Lox表达,天然植物药姜黄素和乳香酸可能通过抑制花生四烯酸代谢通路发挥口腔癌的化学预防作用。     

增生平对口腔癌预防作用的实验和临床研究

目的观察增生平对二甲基苯蒽(dimethyl-benzanthracene,DMBA)诱发的金黄地鼠口腔癌的阻断作用和对口腔癌前病变一口腔粘膜白斑的治疗效果.方法实验室研究50只雄性金黄地鼠,随机分为3组,阴性对照组10只,仅涂丙酮液.增生平治疗组和DMBA组各20只动物.DMBA组涂0.5%DMBA丙酮液,每周3次,共涂6周,治疗组DMBA同样处理后,每天给地鼠灌胃6.Og/kg剂量的增生平,治疗10周,进行肉眼和病理观察,同时进行微核、银染核仁组织区(Argentums Nucleolar Organizer Regions,AgNOR)和细胞增殖抗原(Proliferation Cell Nuclear Antigen,PCNA)检测.临床研究112名经临床和病理检查诊断为口腔粘膜白斑的患者随机分为治疗组59名和对照组53名.治疗组服用增生平,3次/日,每次4片,治疗8～12个月,对照组定期观察.治疗期间观察白斑病损变化.结果动物实验增生平组平均瘤数目和瘤负荷显著低于DMBA组,其抑制率分别为44.6%和69.6%,癌变率为55.0%,显著低于阳性对照组95.0%,实验组细胞微核发生率、AgNOR数目和PCNA标记指数均显著低于阳性对照组.临床治疗组有67.8%的患者白斑病损缩小,而对照组仅16.9%的患者白斑病损缩小.结论增生平可以使口腔癌前病变逆转,降低口腔癌的发生率.增生平对口腔粘膜白斑有一定的治疗作用.     

ANXA1对口腔鳞癌TPF化疗敏感性的影响及作用机制探讨

目的 探讨ANXA1在口腔鳞癌TPF化疗中的作用机制。方法 构建ANXA1过表达及低表达细胞系,通过细胞增殖、细胞毒性实验、实时荧光定量PCR和Western免疫印迹方法,分析ANXA1在TPF化疗中的作用,并探讨ANXA1通过上皮-间质转化（EMT）通路在TPF化疗中的作用机制。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果 过表达口腔鳞癌细胞系ANXA1后,细胞生长速率降低,细胞周期减慢,对TPF诱导化药物敏感性降低,口腔鳞癌细胞出现EMT;低表达口腔鳞癌细胞系ANXA1后,细胞生长速率增快,细胞周期加快,对TPF化疗药物敏感性增加,口腔鳞癌细胞出现逆EMT。结论 在口腔鳞癌TPF化疗中,ANXA1过表达导致细胞出现EMT,对化疗敏感性降低。     

Apoptosis of human tongue squamous cell carcinoma cell (CAL-27) induced by Lactobacillus sp. A-2 metabolites

Objective

To study the effect of Lactobacillus sp. A-2 metabolites on viability of CAL-27 cells and apoptosis in CAL-27 cells.

Methods

Lactobacillus sp. A-2 metabolites 1 and 2 (LM1 and LM2) were obtained by culturing Lactobacillus sp. A-2 in reconstituted whey medium and whey-inulin medium; the cultured CAL-27 cells were treated with different concentrations of LM1 and LM2 (0, 3, 6, 12, 24, 48 mg/mL) and assayed by methyl thiazolyltetrazolium (MTT) method; morphological changes of apoptotic cell were observed under fluorescence microscopy by acridine orange (Ao) fluorescent staining; flow cytometry method (FCM) and agarose gel electrophoresis were used to detect the apoptosis of CAL-27 cells treated LM1 and LM2.

Results

The different concentrations of LM1 and LM2 could restrain the growth of CAL-27 cells, and in a dose-dependent manner; the apoptosis of CAL-27 cells was obviously induced and was time-dependent.

Conclusions

Viability of CAL-27 cells was inhibited by Lactobacillus sp. A-2 metabolites; Lactobacillus sp. A-2 metabolites could induce CAL-27 cells apoptosis; study on the bioactive compounds in the Lactobacillus sp. A-2 metabolites and their molecular mechanism is in progress.     

Human neutrophil peptide-1 affects matrix metalloproteinase-2, -8 and -9 secretions of oral squamous cell carcinoma cell lines in vitro

ObjectivesThe present study aimed to investigate the effect of HNP-1 on the matrix metalloproteinase (MMP)-2, -8 and -9 secretions of two oral squamous cell carcinoma (OSCC) cell lines (UT-SCC-43A and UT-SCC-43B).DesignIn all experiments, the two OSCC cell lines were incubated with graded concentrations (0, 1, 5, and 10 μg/ml) of HNP-1 for 24 and 48 h. Cell viability was measured using a colorimetric proliferation test and cell death was analyzed with a colorimetric cytotoxicity detection kit. Enzyme activity of MMP-2 and MMP-9 was detected by using gelatin zymography, and molecular weight forms of MMP-8 were determined by Western-blot and a densitometric quantitation method.ResultsBoth cell lines showed a significant increase in LDH toxicity at 24 h (UT-SCC-43A: p = 0.005 & UT-SCC-43B: p = 0.014). Reduced gelatinolytic activities of proMMP-2 were detected in UT-SCC-43B cell line after 24 and 48 h of incubation with HNP-1 (1 μg/ml: p < 0.001, 5 μg/ml: p < 0.001, and 10 μg/ml: p = 0.0225). MMP-8 levels of both cell lines decreased at 200–250 kDa after 24 h of incubation, while after 48 h only UT-SCC-43B decreased at 45–50 kDa.ConclusionsOur results indicate that HNP-1 suppresses the secretion of MMP-2, -8, and -9 in OSCC cell lines.     

Acetylshikonin inhibits growth of oral squamous cell carcinoma by inducing apoptosis

ObjectivesRecently, shikonin derivatives from Lithospermum erythrorhizon have been suggested as potential chemotherapeutic agents against numerous types of cancers in addition to their traditional uses, e.g., as anti-inflammatory agents. Acetylshikonin, one of shikonin derivatives, has also been reported to possess anticancer activity. However, few studies of the effectiveness of acetylshikonin against cancer cells have been conducted, and there are no studies of oral cancers. In this study, we investigated the usefulness of acetylshikonin as a treatment regimen for oral cancers by observing the growth inhibitory function of acetylshikonin and the involved mechanisms.DesignsThe viability, cell cycle, and ratio of apoptotic cells of oral squamous cell carcinoma (OSCC) cells were observed after treatment with acetylshikonin using MTT assay, flow cytometric analysis, and Annexin V/PI staining, respectively. In addition, molecular changes of apoptosis-related pathways and the role of reactive oxygen species (ROS) were analyzed in acetylshikonin-treated cells.ResultsWe observed that acetylshikonin significantly suppressed the growth of OSCC cells by inducing apoptotic cell death, and acetylshikonin affected the viability of a normal keratinocyte cell line HaCaT to a lesser degree, suggesting that acetylshikonin may be a good chemotherapeutic reagent with less toxicity to normal tissues. In addition, we found that acetylshikonin-induced apoptosis of OSCC cells is mediated by ROS as well as G2 cell cycle arrest. ROS production in response to acetylshikonin treatment enhanced the phosphorylation of JNK and p38 MAPK, which are in the major pathways of apoptotic cell death mechanisms.ConclusionsIn summary, our data suggest that acetylshikonin is a strong candidate for use as a selective chemotherapeutic agent for the treatment of OSCC.     

自噬在Tca83细胞中的作用及自噬相关基因的表达

目的 探讨自噬与口腔癌发生、发展的关系及其在口腔癌Tca83细胞中的作用,以期为口腔癌的治疗提供新的靶点.方法 采用免疫组织化学方法,观察自噬相关基因Beclin-1和MAP1LC3在口腔癌和癌旁组织中的表达;在口腔癌Tca83细胞株中加入顺铂(cisplatin),甲基噻唑基四唑(methy thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞生存率的变化,激光共聚焦显微镜检测自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ的表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素流式细胞术检测细胞凋亡率的变化.结果 Beclin-1在口腔癌组织和癌旁组织中的表达率分别为40％(19/47)和12/16;MAP1LC3在口腔癌组织和癌旁组织中的表达率分别为30％(14/47)和10/16,Beclin-1和MAP1LC3在癌组织中的表达率明显低于癌旁组织,两组间差异均有统计学意义(P＜0.05).MTT结果显示,与对照组相比,使用顺铂作用于Tca83细胞,随时间的延长细胞生存率不断降低,P＜0.05;细胞免疫荧光结果显示,对照组荧光染色强度(213±20)显著低于2、6、12、24、48 h组(分别为233±16、315±27、298±46、259±36、225±27),P＜0.05;流式细胞术结果显示,对照组细胞凋亡率(0.68％)显著低于2、6、12、24、48 h组(分别为2.25％、3.08％、5.23％、7.56％、9.46％),P＜0.05.结论 自噬可能与口腔癌的发生、发展相关,不同水平的自噬对口腔癌Tca83细胞的作用不同,Tca83细胞自身基础水平的自噬可以保护Tca83细胞的生存,过度激活的自噬作为一种细胞程序性死亡与凋亡一起促进细胞死亡.     

平阳霉素化疗对口腔癌患者端粒酶活性的影响

目的 :测定平阳霉素化疗的口腔癌肿瘤组织中的端粒酶活性 ,以探讨平阳霉素化疗效果。材料与方法 :取35例口腔癌患者的病案为资料 ,并依是否术前接受平阳霉素化疗分为用药组及对照组。分别测定两组的端粒酶活性 ,并进行统计分析。结果 :用药组端粒酶活性检出率及强阳性表达率明显比对照组的端粒酶活性检出率及强阳性表达率低 ,有显著性差异。结论 :平阳霉素化疗是一种有效的治疗鳞癌的药物。通过测定端粒酶活性变化来评估平阳霉素化疗的疗效可能是一种较为客观的方法。