小鼠核结合因子a1基因启动子报告载体的构建及鉴定

目的:构建小鼠核结合因子a1(Cbfa1)基因启动子萤光素酶报告载体,并检测其驱动报告基因的转录活性。方法:以小鼠基因组DNA为模板,巢式PCR扩增含有Cbfa1基因启动子(-1000～+200bp)的序列。限制性内切酶MluI和XhoI酶切这段序列后定向克隆到不含启动子的PGL3-Basic报告基因载体上,重组质粒命名为pGL3-Cbfa1。pGL3-Cbfa1瞬时转染成骨细胞系MC3T3-E1,检测其能否在Cbfa1基因启动子的调控下表达报告基因并提高萤光素酶活性。结果:pGL3-Cbfa1经酶切鉴定和序列分析证实与设计完全一致。细胞瞬时转染结果表明Cbfa1启动子具有转录活性,pGL3-Cbfa1的萤光素酶水平约是pGL3-Basic的35倍。结论:小鼠Cbfa1启动子报告基因载体的成功构建,为进一步将其用于抗骨质疏松药物的筛选与评价奠定了实验基础。     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织SREBP1c表达的影响

目的:观察三七对酒精性肝病(ALD)大鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白(SREBP)1c表达的影响。方法:110只雄性SD大鼠随机分为正常组30只,模型组35只,三七高、低剂量组和硫普罗宁组各15只,连续14周白酒-玉米油-吡唑混合液灌胃建立ALD模型,同时三七高、低剂量组和硫普罗宁组分别灌服1.2、0.6 g/(kg.d)的三七粉及0.1 g/(kg.d)的硫普罗宁;4周、8周、14周分别处死正常组大鼠10只,模型组8只;14周处死剩余大鼠。光镜观察肝脂肪变、炎症及纤维化程度,RT-PCR法检测肝组织SREBP1c及其下游靶基因乙酰辅酶A合成酶(ACS)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达,免疫组化法检测肝组织SREBP1c蛋白表达。结果:(1)各时间点模型组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度计分较同期正常组明显增高(P<0.01)。(2)正常组大鼠肝脏可见一定量SREBP1c、ACS、FAS mRNA表达,随时间延长模型组大鼠3个基因的表达均逐步增加,8周、14周时较正常组和模型4周组明显增高(P<0.01或0.05)。(3)模型8周、14周组较同期正常组肝组织SREBP1c表达明显增高(P<0.01或0.05)。(4)三七高、低剂量组及硫普罗宁组大鼠14周肝组织脂肪变及炎症程度、肝脏SREBP1c蛋白以及3个目标基因的表达均较模型组明显降低(P<0.01或0.05)。结论:三七可明显减轻ALD大鼠肝组织脂肪变和炎症程度,抑制肝脏脂代谢关键信号分子SREBP1c mRNA和蛋白及其靶基因ACS、FASmRNA的表达,从而改善肝组织病理,阻止ALD的慢性化进程。     

SREBP-1在1型糖尿病人鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究

目的探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-l（sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1）的表达以及胰岛素处理的影响。方法以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组。喂养2wk后处死,测定肾皮质组织甘油三酯含量,油红O染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Westernblot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红O检测示脂质沉积定位于。肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色。胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义。免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组。Westernblot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0．673&#177;0．027,成熟片段为0．670&#177;0．028,分别是正常组的1．86倍和1．77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52．8％,成熟片段表达量下降了30．9％。原位杂交结果证实SREBP-1mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;胰岛素处理后其表达明显下降。结论1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达。     

SREBP-1在1型糖尿病大鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究

目的探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的表达以及胰岛素处理的影响。方法以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组。喂养2 wk后处死,测定肾皮质组织甘油三酯含量,油红O染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Western blot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红O检测示脂质沉积定位于肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色。胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义。免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组。Western blot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0.673±0.027,成熟片段为0.670±0.028,分别是正常组的1.86倍和1.77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52.8%,成熟片段表达量下降了30.9%。原位杂交结果证实SREBP-1 mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);胰岛素处理后其表达明显下降。结论1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1 mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达。     

姜黄素对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏SREBP-1c mRNA表达的影响

目的:研究姜黄素干预小鼠固醇调节元件结合蛋白1c(sterol-regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)在肝脏表达与非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的相关性。方法:应用RT-PCR方法对比正常组、NAFLD模型组、姜黄素治疗组中肝脏SREBP-1c的mRNA表达进行分析。结果:SREBP-1c mRNA在模型组表达增高,在姜黄素治疗组与正常组相比表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NAFLD模型组肝脏中SREBP-1c mRNA的表达明显增高而治疗组表达也增高;应用姜黄素对于NAFLD的治疗作用可能不是通过调节SREBP-1cmRNA的表达而实现的。     

姜黄素对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏SREBP-1c mRNA表达的影响

目的:研究姜黄素干预小鼠固醇调节元件结合蛋白1c (sterol-regulatory element binding protein-lc,SREBP-1c)在肝脏表达与非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的相关性.方法:应用RT-PCR方法对比正常组、NAFLD模型组、姜黄素治疗组中肝脏SREBP-1c的mRNA表达进行分析.结果:SREBP-1c mRNA在模型组表达增高,在姜黄素治疗组与正常组相比表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:NAFLD模型组肝脏中SREBP-1c mR-NA的表达明显增高而治疗组表达也增高;应用姜黄素对于NAFLD的治疗作用可能不是通过调节SREBP-1c mRNA的表达而实现的.     

番茄红素对巨噬细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及其相关蛋白Srebp-1、Caveolin-1表达的影响

目的:研究番茄红素对巨噬细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及其相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1(Srebp-1)、小凹蛋白1(Caveolin-1)表达的影响。方法:建立巨噬细胞源性荷脂细胞模型,采用高效液相色谱法考察不同浓度(12.5、25、50μmol/L)番茄红素作用于荷脂细胞24h及25μmol/L番茄红素作用于荷脂细胞不同时间(12、24、48、72h)后细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;蛋白印迹法检测番茄红素(25μmol/L、24h)组及其与Srebp-1蛋白抑制剂ALLN(20μmol/L、24h)联用组对荷脂细胞中Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达的影响。另设立正常巨噬细胞组和荷脂细胞组进行比较。结果:与正常巨噬细胞组比较,荷脂细胞组细胞内TC、FC、CE含量均明显升高,Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达明显减弱(P<0.05);与荷脂细胞组比较,番茄红素组荷脂细胞内TC、FC、CE含量均明显降低且呈一定的浓度和时间依赖性,Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达明显增强(P<0.05);与番茄红素组比较,联用组细胞内Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达均明显减弱(P<0.05)。结论:番茄红素能引起巨噬细胞源性荷脂细胞内TC、FC、CE含量降低,且可能与Srebp-1及Caveolin-1蛋白的表达上调有一定关系。     

二甲双胍调节AMPK/SREBP-1通路及在临床中的应用进展

二甲双胍是临床上常用的降糖药物之一,除了降血糖外,还有多种医学生物价值在不断被发现而备受关注。近年研究表明,二甲双胍通过激活AMPK抑制固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)减少脂质合成,在治疗肝脏脂肪变性、改善胰岛素敏感性、预防动脉粥样硬化和心血管功能障碍、肿瘤、多囊卵巢综合征以及新型冠状病毒肺炎的辅助治疗等方面发挥一定作用。因此,本文就二甲双胍通过激活AMPK抑制SREBP-1调控糖脂质代谢的可能机制以及在临床中的应用做一综述。     

基于SREBPs通路的益肾通络方改善脂质代谢异常作用机制研究

目的 基于固醇调节元件结合蛋白（SREBPs）通路探究益肾通络方改善脂质代谢异常的作用机制。方法 以C57BLKS/J(db/db)小鼠为模型动物、 C57BLKS/J(db/m)小鼠为正常对照,通过测定小鼠肝脏系数及血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）含量,观察小鼠肝组织脂肪变性和脂质蓄积情况,测定小鼠肝组织中SREBP-1、SREBP-2蛋白和Srebp-1c、Srebp-2及其下游脂质代谢相关靶基因（Fasn、Acc1、Scd5、Fads1、Hmgcr、Dhcr24、Insig-1、Fdps）的mRNA转录水平,来考察1、2.5、5 g/kg益肾通络方改善db/db小鼠脂质代谢异常的作用机制。以低脂培养的人肝癌细胞HepG2为体外脂质代谢异常细胞模型,以25-HC(SREBPs抑制剂,10μmol/L)为抑制剂对照,考察125、250、500μg/mL益肾通络方干预24 h后对细胞中SREBP-1、SREBP-2蛋白和SREBP-1c、SREBP-2其下游脂质代谢相关靶基因mRNA转录水平的影响,进行体外机制验证。结果1、2.5...     

姜黄素与灵芝孢子对非酒精性脂肪肝SREBP-1c mRNA的影响

目的:分别研究姜黄素与灵芝孢子对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白1c(sterol-regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)表达的影响,从分子水平对比不同中药对于NAFLD的治疗作用.方法:采用RT-PCR方法对比不同分组(正常组、NAFLD模型组、姜黄素干预组、灵芝孢子干预组)小鼠肝脏SREBP-1c的mRNA表达.结果:与正常组对比,SREBP-1c mRNA在模型组表达明显增高,而在姜黄素干预组及灵芝孢子干预组均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).两种中药干预组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:NAFLD模型组肝脏中SREBP-1cmRNA的表达明显增高;姜黄素与灵芝孢子对于NAFLD小鼠肝脏SREBP-1 cmRNA表达的影响无明显差异.     

黄芪提取物对大鼠非酒精性脂肪性肝病SREBP-1表达的影响

目的观察黄芪提取物对大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）及其固醇调控元件结合蛋白-1（SREBP-1）的影响。方法应用高脂饮食复制大鼠NAFLD模型。雄性Wister大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组、低、中、高剂量黄芪干预组,每组各8只。药物干预组大鼠在进行高脂饮食同时每日给予不同剂量黄芪提取物灌胃。药物干预10周末结束实验,检测血清丙氨酸转移酶（ALT）、门冬氨酸转移酶（AST）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和肝组织TG、TC,并观察肝脏的病理改变,免疫组化法检测肝脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠病理显示脂肪变性、炎症或炎症坏死并伴有血清ALT、AST、TG、TC及肝组织TG、TC明显升高。药物干预组大鼠血清ALT、AST、TG、TC和肝组织TG、TC降低,且肝脏脂肪变性和炎症坏死程度减轻（P〈0．01,P〈0．05）。模型组SREBP-1的表达明显高于正常组（P〈0．01）,药物干预组SREBP-1的表达较模型组明显减少（P〈0．01）。结论黄芪提取物对大鼠高脂饮食诱导的NAFLD有防治作用,其机制可能与调节脂质代谢、抑制SREBP-1表达有关。     

Magnolia officinalis Reverses Alcoholic Fatty Liver by Inhibiting the Maturation of Sterol Regulatory Element–Binding Protein-1c

The generally accepted hypothesis for the pathogenesis of alcoholic liver disease (ALD) is the two-hit model, which proposes that fat accumulation in the liver increases the sensitivity of the liver to a second hit that leads to inflammatory liver cell damage. In this study we evaluated the effects of Magnolia officinalis (MO), which contains honokiol and magnolol as the primary pharmacological components, to eradicate fatty liver in rats fed an ethanol diet. In vitro studies showed that MO was able to protect RAW 264.7 cells from ethanol-induced production of tumor necrosis factor-α, reactive oxygen species, and superoxide anion radicals; the activation of NADPH oxidase; and subsequent cell death. We also investigated the therapeutic effects of MO on alcoholic fatty liver in Lieber-DeCarli ethanol diet–fed rats. MO treatment of the rats for the last 2 weeks of ethanol feeding completely reversed all the serum, hepatic parameters, and fatty liver changes. The increased maturation of sterol regulatory element– binding protein-1c in the liver by ethanol treatment was completely inhibited by treatment with MO. Therefore, MO may be a promising candidate for development as a therapeutic agent for ALD.[Supplementary Figures: available only at http://dx.doi.org/10.1254/jphs.08182FP]     

脂肪生成影响恶性肿瘤发展与转移机制的研究进展

正常组织中用于供能的脂肪酸主要来自饮食中的游离脂质,但在生长旺盛的肿瘤组织中,能量却来自于脂质的重新合成,所以在不同来源的肿瘤组织中见到脂质合成相关基因的变化,在原发肿瘤中和肿瘤发生相关的生脂基因功能已经基本明确。研究表明在肿瘤细胞中脂肪酸合成酶,硬脂酰辅酶A脱氢酶1、乙酰辅酶A羧化酶在肿瘤的生成和发展起非常重要的作用。脂肪酸的功能与能量贮存、生物膜的结构、信号转导和蛋白质的乙酰化有关,但是现在对脂肪重新生成进程在肿瘤转移中的作用尚不明确。由于耐药性的产生和化疗药物的毒副反应,恶性肿瘤的化疗效果一直不满意,为了寻找新的、选择性抗肿瘤方法,以脂代谢催化酶为靶点的抗肿瘤药物亟待进一步研究和应用。     

红芪多糖对ob/ob小鼠肝脂质合成影响

目的 研究红芪多糖(HPS)对ob/ob小鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)和肝脂质从头合成相关蛋白的影响.方法 按照体重将ob/ob雄性小鼠随机分为5组:模型组、阳性药对照组和高、中、低3个剂量实验组,每组10只;将同品系正常C57BL/6野生型雄性小鼠10只作为正常组.阳性药对照组灌胃硫辛酸30 mg...     

玳玳果黄酮提取物关键效应组分辨识及调控脂质代谢作用机制研究

目的 探究玳玳果黄酮提取物及其敲出目标组分对脂肪变性细胞调控脂质代谢作用及机制,辨识关键效应组分。方法 采用油酸诱导建立HepG2脂肪变性细胞模型,非诺贝特为阳性对照,油红O染色法及甘油三酯(triglycerides,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)为评价指标,考察玳玳果黄酮提取物、柚皮苷(目标组分)、新橙皮苷(目标组分)、其他相关组分(黄酮提取物敲除柚皮苷、新橙皮苷)、黄酮提取物敲除其他相关组分(柚皮苷-新橙皮苷6︰ 7)对脂肪变性模型细胞脂质集聚影响。基于AMPK/SREBP-1c及PPARα信号通路,采用qRT-PCR法、Western blotting检测大鼠肝脏相关基因、蛋白的表达。结果 预防性给药后,与模型组相比,玳玳果黄酮提取物、柚皮苷、新橙皮苷、提取物敲除其他相关组分的细胞脂质积聚、TG及TC含量均有明显的改善(P<0.01或P<0.05);玳玳果黄酮提取物及柚皮苷、新橙皮苷可使促腺苷酸激活蛋白激酶(ATP-activated protein kinase,AMPK)的mRNA及磷酸化蛋白表达水平明显升高(P<0.01或P<0.05);显著抑制并明显下调固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein,SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acidsynthase,FAS)、乙酰辅酶羧化酶(coenzyme carboxylase,ACC)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05);可促进过氧化物酶增殖物激活受体(peroxidase proliferator-activated receptor ,PPARα)、肉毒碱棕榈酰基转移酶(carnitinepalmitoyltransferase-1,CPT-l)的mRNA及蛋白表达水平明显上升(P<0.01或P<0.05);其他相关组分无明显差异。结论 玳玳果黄酮提取物及其关键效应组分柚皮苷、新橙皮苷可有效改善脂质积聚;其作用机制为激活AMPK促其蛋白磷酸化表达,从而抑制脂质合成,同时促进脂肪酸的氧化分解,由此减少脂肪沉积,发挥调控脂质代谢的作用。     

胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c的调节作用

目的：研究胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c（SREBP‐1c）的调节作用。方法将诱导分化完成的大鼠骨骼肌L6肌管细胞分为对照组、胰岛素组、磷酸酰基醇3激酶抑制剂wortmannin＋胰岛素组、单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AM PK ）抑制剂compound C＋胰岛素组、高脂对照组、高脂＋胰岛素组、高脂＋wortmannin＋胰岛素组和高脂＋compound C＋胰岛素组。Western blot检测SREBP‐1c、苏氨酸蛋白激酶（Akt）‐哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、AMPK‐mTOR通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,胰岛素组SREBP‐1c、p‐Akt、p‐AMPK、p‐mTOR蛋白表达升高（P＜0．05）;与胰岛素组相比,wortmannin＋胰岛素组SREBP‐1c表达降低（P＜0．05）;与高脂对照组相比,高脂＋胰岛素组 SREBP‐1c、p‐mTOR 蛋白表达降低,p‐Akt、p‐AMPK 蛋白表达升高（P＜0．05）;与高脂＋胰岛素组相比,高脂＋compound C＋胰岛素组SREBP‐1c表达升高（P＜0．05）。结论骨骼肌细胞生理状态下,胰岛素对SREBP‐1c的上调作用可能主要通过Akt‐mTOR通路;胰岛素抵抗状态下,胰岛素治疗对SREBP‐1c的下调作用可能主要通过AMPK‐mTOR通路。     

胰岛素对人肾小管上皮细胞SREBP-1、FAS表达及脂质代谢的时效性研究

目的探讨胰岛素对人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubularepithelial cells line,HKCcells)固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合成酶(fat acid synthase,FAS)表达以及细胞内脂滴形成的时效性影响。方法给予人肾小管上皮细胞100nmol·L-1胰岛素刺激并根据刺激时间分为0、2、4、6、12和24h组。SREBP-1和FAS mRNA采用RT-PCR检测,SREBP-1蛋白的表达用免疫细胞化学和Western blot检测,细胞内脂滴检测采用油红O染色。结果和0h组相比,2h组HKC细胞未见SREBP-1和FAS mRNA表达变化,而4、6、12h组HKC细胞SREBP-1和FAS mRNA表达均升高,其中6h组升高最明显,分别是0h对照组的3.578倍和4.272倍,差异有统计学意义。Western blot检测显示4、6和12h组HKC细胞SREBP-1蛋白的前体和成熟片段表达均较0h和2h组增强,其中也是6h组表达最强,前体和成熟片段分别是0h组的4.106倍和5.167倍。免疫细胞化学技术显示SREBP-1蛋白在人肾小管上皮细胞株中定位于细胞质,在4、6和12h组HKC内其表达明显强于0、2和24h组。油红O染色提示胰岛素刺激6h后HKC细胞内可见明显红染脂滴颗粒,而其他各组HKC细胞未见着色。结论胰岛素呈时间依赖性引起人肾小管上皮细胞SREBP-1和FAS的上调,且作用在6h达到高峰,并最终导致细胞内脂滴沉积,这可能是代谢综合征引起肾脏脂质沉积的重要机制之一。     

The effect of lead exposure on expression of SIRT1 in the rat hippocampus

Based on how the silent information regulator 2 homolog 1 (SIRT1) regulates the cyclic AMP response element binding protein (CREB), which is the molecular switch of long-term memory that maintains cognitive function, it is postulated that the impact of lead (Pb) on SIRT1 is one of the mechanisms leading to Pb-induced cognitive and learning deficits. Hence, the purpose of this study was to investigate the effect of Pb exposure on the expression of SIRT1, and the reversion effect of resveratrol, which is an activator of SIRT1. We examined the effects of maternal rat ingestion of Pb in drinking water during gestation and lactation on the expression of SIRT1 and CREB in the hippocampus of their offspring at postnatal week 3 (PNW3) and 52 (PNW52), and then reexamined these effects in offspring after intragastric administration of resveratrol for 4 weeks. Pb exposure decreased SIRT1 and CREB phosphorylation in a dose-dependent manner in the rat hippocampus at both PNW3 and 52, and resveratrol reversed those losses. These results indicated that SIRT1 might be a novel target to prevent Pb neurotoxicity.