半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒的制备及性质评价

目的 制备具有半乳糖基和稳定磁性的半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒,并对半乳糖白蛋白磁性纳米粒的糖化比率、磁性及药物含量进行检测.方法 将乳糖和白蛋白用还原胺法合成半乳糖基人血白蛋白(galactosylated human serum albumin,Gal-HAS);采用滴定水解法制备直径在70mm左右Fe3O4磁性纳米粒.再将半乳糖白蛋白、Fe3O4磁性纳米粒及纯盐酸阿霉素按一定的比率混合,通过在精制棉子油中超声乳化、加热固化变性、乙醚洗涤等工艺制备出半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒;用苯酚-硫酸比色法测定半乳糖白蛋白的糖化比率;用乙醇提取法提取半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒中的阿霉素,并用液相色谱仪测定其含量.将纳米粒溶于生理盐水中,并在光学显微镜下观察在磁场的作用下,半乳糖基磁性纳米粒的运动情况,用激光粒度分析仪、原子力显微镜和透射电子显微镜观察纳米粒粒径的大小和内部结构.结果 半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒的糖化比率为32;Fe3O4纳米粒径在(70±30)nm左右,粒径均匀;阿霉素的含量为58.45μg/g,阿霉素的包含率为97.53%;半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒溶液在光学显微镜下观察,在磁场的作用下,纳米粒迅速向磁铁的方向移动并发生聚集,当磁铁与纳米粒的距离加大时,纳米粒运动速度减慢,并沿磁力线的方向成串珠状聚集.透射电子显微镜下观察Fe3O4颗粒均匀分布在半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒中.结论 半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒具有较高糖化比率、稳定的磁性、靶向性强、药物包含率高以及释药速率可控制等特点,为靶向药物治疗,提供了可靠的载药工具.     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常大鼠体内的分布特征

目的观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(ADR-GHMN)在正常肝脏中的靶向性,并观察ADR-GHMN在全身各脏器的分布特征.方法使用放射示踪技术,用125I标记纳米粒.肝动脉注射,分别于注药后5、15、30、60、120min处死,立即取肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血作γ计数.结果半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在注射后5 min后最高,为15054.4 CPM/g,各时相前者的肝摄取率均为同时刻后者的2,3倍.两药在肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血的分布有高度显著性(P＜0.05).结论半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝组织中有明显的主动靶向性,半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒主要分布肝脏,其它的脏器含量少.     

温度敏感性脂质体磁性阿霉素纳米粒的制备

目的 制备能够携带化疗药物阿霉素的温度敏感性脂质体磁性纳米粒,并对纳米粒的粒径大小、药物包裹率、稳定性等物理性质进行检测.方法 以化学共沉淀法制备四氧化三铁纳米粒,以逆相蒸发法制备空白温度敏感性磁性脂质体纳米粒,梯度反向装载法包封阿霉素,激光粒度分析仪检测粒径大小分布范围,透射电镜观察粒子形态;酸性乙醇荧光分光光度法测量阿霉素包裹率和泄漏率.结果 制备的温度敏感性脂质体磁性纳米粒平均粒径为(76±18)nm,粒径较均匀,平均包裹率为(42.6±0.7)%,室温下贮存稳定.结论 本实验制备的温度敏感性脂质体磁性纳米粒基本符合要求,可为进一步研究提供了基础.     

外加磁场对半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体内分布影响的研究

目的观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(ADR-GHMN)在正常肝脏中的靶向性,并观察ADR-GHMN在全身各脏器的分布特征及外加磁场对其分布的影响.方法大鼠正中开腹,肝动脉插管并固定,肝动脉注射125I-ADR-GHMN(相当于阿霉素0.5 mg/kg),左外叶加磁场,磁场应用30 min,移去磁场后,动物立即处死;对照组:肝动脉注射ADR-GHMN,左外叶不加磁场,30min后,移去磁场后,动物立即处死,立即取靶区肝、非靶区肝、肾、心、肺、小肠、脾及周围血作γ计数.肝组织作病理切片.结果注入的纳米粒75～85%分布于肝脏,其它脏器极少.病理切片显示磁区小动脉见大量纳米粒存在,对照组及非磁区肝中纳米粒很少见.结论ADR-GHMN在正常肝组织中有明显的磁靶向性;在磁场作用下,ADR-GHMN主要分布于肝脏,其它脏器含量很少;试验组肾、心、肺、小肠、脾及外周血于对照组的放射活性比较明显降低,表明磁性物质的存在使这些脏器的相对药物暴露明显减少.     

阿霉素白蛋白磁纳米粒在正常肝脏的靶向性

目的：观察阿霉素白蛋白磁纳米粒在正常肝脏中的磁靶向性。并观察阿霉素白蛋白磁纳米粒在全身各脏器的分布特征。方法：大鼠正中开腹,胃十二指肠动脉插管固定。实验组,左肝外叶加磁场,肝动脉注射阿霉素白蛋白的磁纳米粒（相当于阿霉素0．5mg/kg),磁场应用30min移去磁场后,动物立即处死,对照组：左肝外叶外不加磁场,肝动脉注射同等剂量的纳米粒后30min处死。动物处死后,立即取靶区肝、非靶区肝、心、肾、脾、肺、小肠和胃作γ计数。肝组织作组织学切片。结果：左肝外叶应用磁场30min后,磁共肝组织的放射活性较非磁共肝组织的放射活性明显增加（P＜0．0001）,磁区肝组织与非磁区肝组织的放射活性比值为2．6。而对照组磁区肝组织与非磁区肝组织的放射活性之间无统计学差异。肝外脏器的放射活性明显降低。除实验组肺的放射活性较对照组明显下降外,其它脏器两组之间没有统计学差异,另外,实验组,心、肾、脾、肺和小肠与靶区肝组织和的放射活性比值较对照组明显降低,胃与靶区肝组织的放射活性比值两组之间无统计学差异。注入纳米粒的70％－80％分布于肝脏,其它脏器含量极少。病理切片显示磁共小动脉中见大量纳米粒存在,对照组及非磁共肝中纳米粒很少见。结论：阿霉素白蛋白磁纳米粒在正常肝脏组织中有明显的磁靶向性,阿霉素白蛋白磁纳米粒主要分布于肝脏,其它脏器含量较少。实验组心、肾、脾、肺和小肠与靶区组织的放射活性比值明显降低,说明磁的存在使这些脏器的相对药物暴露明显减少。     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对肝癌细胞株侵袭力的影响的实验研究

目的研究半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对肝癌细胞株HepG2侵袭力的影响.方法应用半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒于HepG2细胞,并设A组:RPMI-1640对照组、B组:普通盐酸阿霉素组(ADM)、C组:磁性白蛋白阿霉素纳米粒联合磁场(MADM M)组、D组:半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM)组、E组:半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合磁场(Gal-MADM M)组.药物作用后以β-actin基因作为参照,半定量的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cathepsin B-mRNA的表达差异,应用Transwell 小室检测体外侵袭力的变化,并用裸鼠肝癌皮下转移模型检测对体内侵袭力的影响.结果半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒作用HepG2肝癌细胞后Cathepsin B-mRNA表达降低较其他各组更为明显且有显著性,侵过小室滤膜细胞数目减少于其他各组且差异有显著性(P＜0.01),裸鼠肝癌生长明显受到抑制(P＜0.01).结论半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒抑制肝癌细胞株HepG2的侵袭力的作用较阿霉素、磁性白蛋白阿霉素纳米粒和半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒为强.     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒的急性毒理实验研究

目的研究半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒经外周静脉用药的药物毒性。方法将受试动物分为8个剂量组,观察静脉给药后的急性毒性试验,采用Bliss法计算LD50,统计分析其对大鼠的外周血细胞和生化指标的影响。给予腹腔注射3次后,再皮下注射,观察其有无过敏现象发生。结果半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒的动物半数致死量为515.5mg/kg,同时肝、肾功能的损害和心肌酶学的改变也明显减轻。20只动物进行过敏实验,观察到一只动物有过敏现象。结论半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒是一种很好的新型改进性药物,它经过修饰后,明显的减轻了药物对心脏,肾脏和心脏的毒性损害作用。有望批量生产,在临床上推广试用。     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在家兔体内的药物动力学研究

目的对家兔一次性颈静脉给药,检测自制药物与普通阿霉素在药动力学方面有无差异及了解新药的药动学特点.方法家兔12只,随机分为两组,每组6只,均予颈静脉置管、注射、抽血,一组按3.0mg/kg给予阿霉素;一组按63.2 mg/kg给予半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒,每次抽血1ml,分离血清低温保存,以氯仿-甲醇液萃取阿霉素,在高效液相色谱仪下检测色谱峰高.根据阿霉素标准曲线求血清中阿霉素浓度.以"3P87"进行药动学分析.结果阿霉素与半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在家兔体内的药动学规律符合三室开放模型;与阿霉素相比,实验组药物的消除相半衰期延长了1.9～3.2倍,清除率是阿霉素的0.5369倍;血药浓度-时间曲线下面积(AUC)是阿霉素的1.3697倍.结论阿霉素经过与白蛋白、磁性微粒结合,并以半乳糖修饰,改变了原药的体内分布特性,延长了药物半衰期,增加了靶器官肝脏的药物浓度.     

载阿霉素磁性白蛋白纳米粒：—一种高效靶向抗肿瘤系统

本世纪 4 0年代以来 ,细胞毒性药物已广泛应用于癌症的化疗 ,而这些药物对癌细胞和人体的健康细胞的非特异性 ,使它在杀伤癌细胞的同时 ,也产生了全身严重的毒副作用。而且 ,多数化疗药物都存在明显的疗效 -剂量依赖关系[1～ 6 ] ,即加大药物剂量能明显提高疗效 ,但增加化疗药物的剂量 ,势必增加全身的毒性反应 ,使化疗药物的临床应用受到很大的限制。因此 ,提高局部的药物浓度 ,减少全身的毒性反应一直是人们研究的热门课题。近年来由于靶向药物载体研究的飞速发展 ,在这方面取得了很大成功。然而 ,目前大多数药物运载系统的主要局限是它们…     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒体对外肝癌细胞杀伤作用的实验研究

目的研究半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在体外对人肝癌细胞系HepG2的杀伤作用.方法应用电镜下的形态学观察,DNA电泳以及MTT法检测杀瘤活性.结果形态出现明显改变,电镜证实出现细胞凋亡;白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合磁场(MADM-NP M)组和半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM-NP)组抑制率及半数抑制率剂量相似(P＞0.05),半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(Gal-MADM-NP M)组抑制率明显提高,半数抑制剂量明显降低(P＜0.01).结论实验结果表明,白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合磁场、半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒、半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒都具有明显抑制体外培养肝癌细胞生长增殖的作用.半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对人肝癌细胞杀伤作用较白蛋白磁性阿霉素纳米粒及半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒组为强,作用机制可能与半乳糖配体的特异性介导和人肝癌细胞上半乳糖受体的识别内吞作用及联合外磁场有关.     

白蛋白阿霉素磁纳米粒在大鼠体内的生物分布

目的：观察白蛋白阿霉素磁纳米粒肝动脉给药与肝动脉给予高剂量的游离药物在体内生物分布上的差异。通过直接测量组织中阿霉素的浓度,进一步证实白蛋白阿霉素磁纳米粒的靶向性。方法：大鼠正中开腹,胃十二指肠动脉插管。实验组：肝动脉注射白蛋白阿霉素磁纳米粒（相当0．5mg/kg阿霉素）左肝外叶应用磁场30min,磁场去除后,动物处死。对照组：肝动脉注射10倍于实验组剂量的阿霉素（5mg/kg),30min后处死。动物处死后,取靶区肝组织、非靶区肝组织、心、肾、脾和肺捣碎、匀浆,用乙醇提取法提取阿霉素,用荧光光度计测量。结果：实验组左肝外叶应用磁场30min,磁区肝组织阿霉素的浓度较非磁区肝组织的阿霉素浓度明显升高,磁共肝组织阿霉素浓度为非磁区肝组织的2．6倍,对照组靶区肝组织和非靶区肝组织的阿霉素浓度无统计学差异,对照组和心和肾组织的阿霉素浓度平均为实验组的9倍以上,脾为4．6倍,肺两组之间无统计学差异。而对照组靶区肝组织的阿霉素只有磁区肝组织阿霉素浓度的1／4。实验组心、肾、肺和脾组织与靶区肝组织阿霉素浓度的比值大大低于对照组。结论：通过纳米粒加磁场的方法从肝动脉给予阿霉素在靶区产生的药物浓度比肝动脉给予10倍剂量的游离阿霉素在靶区产生的药物浓度高3倍。而在心、肾和脾的阿霉素浓度比对照组大为降低。另外,实验组心、肾、肺和脾组织和与靶区肝组织阿霉素的比值比对照组明显降低,其意义若在靶区产生同样的阿霉素的浓度,实验组肝外脏器的阿霉素浓度将大大降低对照组。     

给药途径对磁性白蛋白纳米靶向分布的影响

该实验用125I标记磁性白蛋白纳米粒,经荷肝癌鼠的肝动脉、门静脉及颈静脉三种不同途径给药,旨在比较外置定位磁场与否,各组的肝癌区(磁靶区)、正常肝和肺组织的克组织放射性量以及肝癌区血管栓塞程度,以探求一种较佳的给药途径和方法。结果显示外置磁场能使磁性白蛋白纳米粒在靶区定位聚集,并减少其在非靶区的分布;外置磁场下经肝动脉给药组的肝癌组织区克组织放射量最高(P＜O.01),而其正常肝和肺组织的克组织放射量最低(P＜0.01),其肝癌区血管栓塞程度也明显高于经门静脉及经颈静脉组。表明外置定位磁场下经动脉途径注入磁性白蛋白纳米粒的磁靶向化疗栓塞效果最好。     

磁性化疗纳米粒治疗大鼠移植性肝癌

目的：通过对移植性肝癌模型大鼠肝动脉注射磁性阿霉素白蛋白纳米粒,并在肝肿瘤区加磁场,观察磁性阿霉素白蛋白纳米粒对移植性肝癌的治疗效果。方法：建立大鼠移植性肝癌模型,将肿瘤模型大鼠分为4组。肝动脉注射生理盐水6只;肝动脉注射游离阿霉素0．5mg/kg6只;肝动脉注射磁性阿霉素白蛋白纳米粒（相当于0．5mg/kg阿霉素）6只;肝动脉注射磁性阿霉素白蛋白纳米粒（相当于0．5mg/kg阿霉素）,肝肿瘤区加磁场6只,各组动物肝动脉注药后,生存超过1周者,记录生存天数,生存期满60d者则处死,取肿瘤组织作病理切片观察,各组动物进行生存率分析。结果：生理盐水治疗组：生存期平均为23．5d;游离阿霉素治疗组,生存期为22．5d;纳米粒不加磁场治疗组,生存期平均为36．2d;纳米粒加磁场治疗组有3只动物到60d仍存活,最短存活期为48d。对各组动物进行生存率分析,并作Logrank检验发现,生理盐水治疗组与游离阿霉素治疗组生存期无统计学差异。磁性阿霉素蛋白纳米粒治疗,肿瘤区不加磁场组动物较生理盐水治疗组和游离阿霉素组肿瘤组织无明显变化,生存60d大鼠肿瘤组织病理切片发现肿瘤已完全由纤维和无结构的组织所代替。结论：肝动脉注射游离阿霉素对移植性肝肿瘤大鼠生存无明显改善,肝动脉注射磁性阿霉素白蛋白纳米粒,肿瘤区不加磁场,可以延长动物生存期（P＜0．05）,肝动脉注射磁性阿霉素白蛋白纳米粒,肿瘤区加磁场治疗组较瘤区不加磁场治疗组生存期明显延长（P＜0．05）。     

阿霉素、柔红霉素与单克隆抗体偶联的研究

利用对人红白血病细胞K_(562)特异的单克隆抗体作为载体,与抗肿瘤药物阿霉素、柔红霉素共价结合,制备了具有靶向性的免疫毒素。本文研究阿霉素、柔红霉素与单克隆抗体的反应分子比对单克隆抗体的收率、偶联的药物分子数的关系,确定在保持单抗和药物活性的前提下,制备该免疫毒素的最佳反应条件。通过体外实验,表明该免疫毒素具有明显的靶向性。     

补肾活血汤、强的松治疗阿霉素肾病的实验研究

用阿霉索肾病大鼠模型,采用补肾活血汤、强的松治疗。观察其疗效,并探讨其作用机理。结果表明,阿霉素肾病大鼠存在氧自由基所致脂质过氧化损伤。补肾活血涵能使其蛋白尿减轻。血生化指标和肾损害明显改善,其作用机制与抑制脂质过氧化有关。强的松能减轻蛋白尿和改善肾病变,但对血生化指标及脂质过氧化无明显影响。补肾活汤加半量强的松则疗效更为显著。     

癌基因与热疗及抗癌药物阿霉素敏感性的关系

癌基因很可能左右着癌细胞对各种治疗的反应性，本研究将６大类癌基因的代表性基因导入到ＮＩＨ３Ｔ３细胞中，使其发生转化，利用这些只含有１个活化癌基因的细胞调查了它们对阿霉素（ＡＤＭ）的敏感性。结果表明细胞对ＡＤＭ的敏感性因导入癌基因的种类不同而不同，癌基因产物可能影响着ＡＤＭ的摄取和排泄，加温（４２℃）可消除癌基因对细胞的这种影响。     

阿霉素对培养大鼠内髓集合管细胞生长与增殖的影响

目的 观察阿霉素对大鼠内髓集合管理细胞生长增殖的影响。 方法 对大鼠内髓集合管细胞进行原代培养并给予阿霉素刺激，测定＾３Ｈ－ＴＤＲ和＾３Ｈ－Ｌｅｕ的掺入。 结果 恶毒性剂量的阿霉素刺激细胞的生长，毒性剂量的阿霉素则抑制细胞的生长，且两种剂量的阿霉素均诱导细胞的肥大。 结论 在阿霉素肾病模型时的钠潴留和阿霉素诱导的肾小球硬化中，致病因子对小管细胞的直接作用可能发挥功能。     

胃癌单克隆抗体阿霉素结合物的制备及抗肿瘤作用的研究

本文用戊二醛法连接3株抗胃癌单克隆抗体与阿霉素。ELISA结果显示,结合物中抗体保留了较好的特异性,结合物对靶细胞具有较强的选择性杀伤作用,尤其是将3株单克隆抗体混合物与阿霉素连结时,杀伤作用更为显著。以上结果表明,此3株抗体具有较好的阿霉素导向作用。     

卵巢癌单抗·脂质体·阿霉素对荷瘤裸鼠导向治疗的研究

本文用自制卵巢上皮癌单抗COC166-9与包载阿霉素的脂质体结合制备成免疫脂质体MLA。通过应用MLA对24只荷人卵巢癌裸鼠进行导向治疗,初步结果证明,导向治疗效果明显高于非导向治疗,具有研究价值和临床应用前景。