重组质粒pcDNA3.1IL-2/Fc对HBV preS2S DNA疫苗免疫作用的影响

目的 探讨IL-2/Fc融合表达后对HBVpreS2S基因疫苗诱导免疫反应的佐剂效应.方法 采用HBV preS2S DNA疫苗作为基础免疫,重组质粒pcDNA3.1IL-2/Fc作为佐剂加强免疫BALB/c小鼠,采用0、2、4周的方案接种,检测各次接种后抗体水平.初次免疫后7周,测定免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性和细胞因子的分泌水平.结果 pcDNA3.1IL-2/Fc作为佐剂在HBV preS2S注射3 d后免疫组小鼠抗体滴度、免疫脾细胞的杀伤活性和增殖活性、TH1型细胞因子的分泌水平,均比各对照组明显增强.结论 IL-2/Fc是有效的HBV preS2S DNA疫苗佐剂之一.     

DNA疫苗及其优化策略

DNA疫苗既可以诱导细胞免疫又可以诱导体液免疫反应，是最有希望成功的新一代疫苗之一。但免疫原性相对较弱，限制了DNA疫苗的广泛应用，需要进一步优化。本文对DNA疫苗的历史，优缺点，免疫机制，尤其是优化策略进行了综述，并对DNA疫苗的应用前景进行了展望。     

IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 探讨IL—2 preS DNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法 应用基因重组技术，构建人白细胞介素2(hIL-2)和前表面抗原(preS)的真核表达载体，将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB／c小鼠和HBV转基因小鼠，通过ELISA方法检测BALB／c小鼠和HBV转基因鼠的抗-preS2、HBsAg及抗-HBs抗体水平；荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBV DNA拷贝数，并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度，同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后，100％小鼠能在第4、6周检测到抗preS1抗体，持续时间长达10周。②用IL-2 preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式，且所需质粒量(10μg／只)仅为后者(100μg／只)的1／10。③在第4周高峰期检测IgG亚类，是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒(1μg／只)免疫转基因小鼠后，80％的小鼠产生了抗体，HBV DNA量下降，其中20％的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示：肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL-2 preS DNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫，可部分打破小鼠机体的免疫耐受，为新型乙肝疫苗和抗HBV持续性感染的特异性免疫治疗剂的设计和构建提供理论与实践依据。     

IL-2／IFN-γ融合蛋白基因质粒联合HBVDNA疫苗治疗HBV转基因小鼠效果评价

目的评价融合蛋白基因质粒（pFP）联合在体电脉冲（EP）介导的HBVDNA疫苗（pS2．S）免疫HBV转基因（Tg）小鼠的治疗效果。方法HBVTg小鼠随机分成3组，每组5只，分别为pS2．S＋pFP、pS2．S＋pcDNA3．1免疫治疗和pcDNA3．1对照组。联合免疫质粒总剂量40μg／只，按1：1比例混合接种。初次免疫后第4、8周分别进行第一、二次增强免疫，免疫前后分别检测血清学、组织学及HBV特异性免疫应答。结果HBVDNA血清定量检测结果，pS2．S＋pFP组免疫第8周（13317±2539）拷贝／ml、第12周（6462±3359）拷贝／ml时分别较免疫前（36159±7769）拷贝／ml明显减低，差异具有统计学意义（P〈0．01）；pS2．S＋pcDNA3．1组第4周（20618±9523）拷贝／ml及第8周（23818±5319）拷贝／ml时均较其免疫前水平（36090±4421）拷贝／ml明显降低（P〈0．01），但不能持续到12周（27691＋13071）拷贝／ml。并明显高于此时pS2．S＋pFP组水平，差异有统计学意义（P〈0．01）；观察终点（12周）pS2．S＋pFP组强小鼠个体血清HBVDNA及肝组织HBsAg表达水平降低的同时，伴随其血清ALT水平及HBsAg特异性IFN-γ分泌细胞数目的升高。结论，Th1类细胞因子IL-2／IFN-γ融合蛋白基因表达质粒能够增强HBVDNA疫苗抑制强鼠HBVDNA复制和表达的治疗作用。     

免疫刺激DNA及IL-2表达质粒对乙肝病毒DNA疫苗诱导抗体的影响

分别将含免疫刺激ＤＮＡ序列（ＩＳＳ）的质粒ｐＵＣ１９、ｐｃＤＮＡ３及编码ＩＬ ２的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３ ＩＬ ２,与乙肝病毒ＤＮＡ疫苗共同注射于小鼠胫前肌内。定量检测免疫小鼠体内ＨＢｓＡｇ的表达及血清中抗ＨＢｓ的水平。结果显示：ｐＵＣ１９、ｐｃＤＮＡ３及ｐｃＤＮＡ３ ＩＬ ２对乙肝病毒ＤＮＡ疫苗在肌肉内表达ＨＢｓＡｇ无影响或有抑制,但它们均能显著促进疫苗诱导抗体的产生（Ｐ＜００１）,抗体水平的增加与ＩＳＳ的数量呈剂量反应关系。     

DNA疫苗的免疫机制及其优化策略

DNA疫苗的研究成为疫苗研究领域的热点,被誉为疫苗研究的第三次革命,开创了人类与疾病作斗争的疫苗研究新篇章。DNA疫苗既可以诱导细胞免疫又可以诱导体液免疫应答,成为最有希望的新型疫苗之一,但其免疫机制还不是十分清楚,免疫原性相对较弱,限制了DNA疫苗的广泛应用。     

B7-2表达质粒对HBV DNA疫苗诱导的特异性免疫应答的影响

目的：探讨B7－2分子是否能够增强乙型肝炎病毒（HBV）DNA疫苗诱导的特异性免疫应答。方法：将B7－2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种于小鼠腓肠肌内，检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性，迟发性超敏反应（DTH）及抗－HBs滴度。结果：B7－2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种组的DTH反应和CTL活性，明显强于单独接种HBV DNA疫苗组（P＜0．01）。两组的抗－HBs滴度差异无显著性（P＞0．05）。结论：B7－2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种可显著增强抗－HBV特异性细胞免疫应答（CMI）。     

增强DNA疫苗免疫原性的研究进展

DNA疫苗是疫苗领域的研究热点,与传统疫苗相比,具有能够同时诱导体液免疫和细胞免疫、安全、廉价等多种优势,但也存在免疫后抗体滴度不高、免疫效果差的问题。本文就目前DNA疫苗的免疫机制研究现状及其优化研究的进展进行了综述。     

IL-15增强小鼠卵透明带3DNA疫苗的滴鼻免疫效果

目的:观察以细胞因子IL-15作为DNA疫苗的免疫佐剂,壳聚糖作为发送载体,增强经滴鼻途径接种的小鼠卵透明带3(mZP3)DNA疫苗的免疫效果。方法:将壳聚糖包裹的mZP3 DNA疫苗(pcD-mZP3)单独或IL-15+pcD-mZP3通过滴鼻途径免疫雌性C57BL/6 36只小鼠后。用ELISA法检测小鼠体内特异性抗mZP3抗体IgG和sIgA的水平。免疫后的雌鼠和有生育能力的雄鼠合笼后进行生育实验。观察小鼠免疫和生育后的肺脏和卵巢病理切片。结果:ELISA法检测结果显示,IL-15能够增加免疫小鼠抗mZP3 IgG的水平,生育率有一定的下降。结论:IL-15与壳聚糖可以增强mZP3DNA疫苗诱导的抗体水平,可一定程度上降低小鼠的生育率。     

基因佐剂注射时相对HBV preS2S疫苗免疫作用的影响

目的：HBV preS2S基因疫苗接种不同时相应用佐剂peDNA3．1IL-2／Fc，观察其对诱导免疫反应效果的影响。方法：采用HBV preS2S DNA基因疫苗作为基础免疫，重组质粒peDNA3．1IL-2／Fc作为佐剂加强免疫，设计实验组与HBVpreS2S基因疫苗同时及在注射BALB／c小鼠后第3天加用佐剂，采用0、2、4周的方案接种，检测各次接种后抗体水平、免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性和细胞因子分泌水平。结果：HBV preS2S注射3天后应用佐剂的免疫小鼠，其抗体滴度、免疫脾细胞杀伤活性、增殖活性和Th1型细胞因子分泌水平均比同时免疫组、单独应用HBV preS2S组及空载体对照组明显增强。结论：预先接种疫苗后加用IL-2／Fc佐剂，能明显增强疫苗免疫效应。     

The Experimental Study on Treating Transgenic HBV Mice with Recombined IL-2-PreS DNA Vaccine

There are estimated 350 million chronic HBV carriersworldwide, third in China [1]. Unfortunately, there is nogood curative therapy approach for these patients. The pro tein vaccine contains surface protein of HBV (encoded Sgene), which (produced in…     

免疫途径及载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究

目的探讨ＤＮＡ载体结构及接种途径对ＤＮＡ疫苗免疫效果的影响。方法分别构建插入ＨＢＶ表面抗原编码基因的表达载体ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ（无抗性基因）和ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ（含氨苄青霉素抗性基因）,肌注小鼠后比较其诱生特异性免疫应答的能力;同时比较不同接种途径（肌内、皮内、皮肤划痕）及ＣｐＧ免疫刺激元件（ＩＳＳ）对ＤＮＡ疫苗诱生免疫效果的影响。结果ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ的免疫效果优于ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ。ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ的免疫效果可被ＩＳＳ增强,而ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ诱生特异性免疫应答的能力则可被ＩＳＳ抑制;诱生免疫应答的能力以肌内注射最强,皮内注射免疫其次,皮下划痕法较弱。结论不同ＨＢｓＡｇ表达载体诱生免疫应答的能力不尽相同;ＣｐＧ免疫刺激元件在决定ＤＮＡ疫苗免疫原性中起重要作用,可增强不含相应结构ＤＮＡ疫苗的免疫效果;皮内注射可诱发与肌内接种相似的免疫应答,是一种简便、有效的免疫接种途径     

The increasingly anti-tumor effect of a colonic carcinoma DNA vaccine carrying HER2 by the adjuvanticity of IL-12

The present study aimed to determine the effect of recombinant DNA vaccine-based human epidermal growth factor receptor-2 (HER2) and Interleukin 12 (IL-12) on the development of colonic carcinoma in mice and the potential immune mechanisms involved. Recombinant plasmids pVAX1-HER2, pVAX1-IL-12 and pVAX1-HER2-IL-12 were constructed, and injected into female mice intramuscularly (i.m.) followed by an electric pulse. The humoral and cellular immune responses after immunization were examined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and enzyme-linked immunospot assay (ELISPOT), respectively. To evaluate the anti-tumor efficacy of the plasmids, a mouse model with a HER2-expressing tumor was designed. Mice vaccinated with the HER2-IL-12 plasmid generated the strongest inhibition efficacy on the growth of HER2-expressing tumors and prolonged mouse survival. These observations emphasized the potential of IL-12 as an adjuvant for DNA vaccines and of vaccines based on HER2 and IL-12 as a promising treatment for colonic carcinoma.     

Effectivity of oral recombinant DNA vaccine against Streptococcus agalactiae in Nile tilapia

The effects of oral vaccination by two immune routes (gavage and mixed fodder administration) using a recombinant DNA vaccine SL7207-pVAX1-sip against Streptococcus agalactiae were assessed. SL7207-pVAX1-sip significantly enhanced various innate immune responses of tilapia, such as total serum protein, superoxide dismutase activity, lysozyme activity, complement C3 concentration in serum, serum antibacterial activity, and interleukin 1β and tumor necrosis factor-α. Vaccinated fish had higher relative percent survival values (57% and 63% for gavage group and mix fodder administration, respectively) at 10 weeks after S. agalactiae infection. When administered mixed fodder, the DNA vaccine SL7207-pVAX1-sip against S. agalactiae may produce more effective protection. These findings can promote the application and development of DNA vaccines in aquaculture.     

不同免疫方式对新冠DNA疫苗应答效果的影响

目的探究气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)DNA疫苗免疫应答的影响。方法利用真核表达载体pVAX-1,设计并构建p RBD、p S-2P和p S-2P.351 3种SARS-CoV-2 DNA疫苗。在第0、2和4周采用气管灌注以及电脉冲肌肉导入2种方式免疫小鼠。末次免疫后2周,ELISA检测血清及阴道灌洗液特异性IgG抗体水平,肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)、鼻腔灌洗液(nasal solution, NS)以及阴道灌洗液(vaginal wash)特异性sIgA抗体水平;ELISpot检测免疫后小鼠脾细胞分泌特异性IFN-gamma的水平。结果气管灌注及电脉冲肌肉导入2种方式免疫SARS-CoV-2DNA疫苗,仅气管灌注免疫可诱导特异性呼吸道黏膜sIgA应答,而电脉冲肌肉导入诱导了更强的细胞免疫应答。与气管灌注pRBD相比,气管灌注pS-2P和p S-2P.351可诱导更强的黏膜免疫应答和细胞免疫应答。结论气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式均可诱导特异性体液免疫以及细胞免疫应答,电脉冲肌肉导...     

NDV F基因DNA疫苗对新城疫病毒灭活油乳苗的免疫协同作用

目的：为进一步探讨控制新城疫发生和流行的新途径。方法：利用所构建的F基因pcDNA3真核表达质粒（DNA疫苗）和新研制的地方流行株灭活油乳苗，观察了新城疫病毒F基因DNA疫苗对地方分离株灭活油乳苗的免疫协同作用。结果：在7日龄时应用灭活油乳苗和DNA疫苗联合免疫的鸡群，在14～57日龄整个观察期内，不但其胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA的反应均明显强于单纯油乳苗免疫组（其中除在接种后第7天时两组鸡的B淋巴细胞增殖OD570值差异不显著外，其余各检测时间两组间均表现为差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01），特别是T淋巴细胞增殖情况在接种第14天后均表现为差异极显著（P〈0．01））；而且HI抗体效价水平也持续性高于单纯油乳苗免疫鸡群，并在免疫接种后35～49天时差异显著（P〈0．05）。在免疫接种后第49天时进行的攻毒保护试验中，联合免疫组的保护率为100％，而单纯油乳苗免疫组鸡在观察期内则有2只发病，保护率为86．7％，且有1只死亡。结论：试验所用F基因DNA疫苗和灭活油乳苗联合免疫可显著提高机体的体液免疫和细胞免疫水平，产生较好的免疫协同作用，从而使机体对NDV的综合免疫保护能力得到进一步的提高。     

IL-18和HIV-1 gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答

目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。