应用实时定量PCR技术检测慢性粒细胞白血病患者bcr/ablP190融合基因转录本

目的研究bcr/ablP190融合基因转录本在慢性粒细胞白血病(CML)中表达水平及其临床相关性.方法应用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测74例CML患者骨髓单个核细胞中的bcr/ablP190转录本.结果 bcr/ablP190转录本阳性54例(77.1%),中位含量2.60(1.08～8.58)×10-3,与性别、年龄、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板计数、bcr/ablP210转录本类型和表达水平均不相关,但bcr/ablP190阳性患者的白细胞总数和血小板计数较阴性者明显降低.bcr/ablP190转录本水平在急变期与慢性期患者以及不同类型急变患者中都无差异,而细胞遗传学完全缓解患者的bcr/ablP190水平较慢性期患者、干扰素无效患者和急变期患者则明显下降.结论不同阶段CML患者体内大都存在着不同的bcr/abl剪切型转录本,不同剪切型的存在具有一定的血液学相关性.     

骨髓增生性疾病bcr/abl融合基因表达及临床意义

目的 :探讨骨髓增生性疾病 (MPD) bcr/ abl融合基因出现的频率及临床意义。方法 :采用骨髓细胞 2 4 h短期培养法制备染色体标本 ,RHG显带技术进行核型分析 ;以筑巢式逆转录聚合酶链反应 (nested- RT- PCR)技术检测bcr/ abl融合基因转录本。结果 :84例慢性粒细胞白血病 (CML )中 ,79例费城染色体 (ph′)阳性 ,其余病例包括 5例CML、5例真性红细胞增多症 (PV )、3例原发性血小板增多症 (ET)和 2例原发性骨髓纤维化 (IMF) ,均为正常核型。79例 ph′(+)的 CML ,bcr/ abl均为阳性 ,5例 ph′(- )的 CML ,3例 bcr/ abl阳性 ;5例 PV ,3例 bcr/ abl阳性 ;3例ET,1例 bcr/ abl阳性 ;2例 IMF,1例 bcr/ abl阳性。结论 :bcr/ abl融合基因在 ph′(- )的 CML、PV、ET、IMF中均有不同程度的表达 ,筑巢式逆转录聚合酶链反应技术是检测 bcr/ abl融合基因转录本的有效手段     

慢性髓性白血病bcr/abl融合基因的克隆与表达

目的：克隆bcr／abl融合基因融合位点基因片段。方法：以慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞株总RNA作为模板,采用RT—PCR方法扩增包含Bcr／abl（b3a2）融合位点基因片段。将RT—PCR物按正确的阅读框架,定向克隆到pEGFP—N3的下游,将重组质粒转化大肠杆JM109大肠杆菌,用PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定,并进行序列的测定。结果：扩增出470bp的Bcr／abl融合位点基因片段,构建重组质粒pEGFP—bcr／abl,酶切产物的大小分别与预期相符。结论：成功地扩增bcr／abl融合位点基因片段及构建真核表达重组质粒pEGFP—bcr／abl,为在体外表达重组bcr／abl蛋白奠定基础。     

酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性粒细胞白血病的研究进展

慢性粒细胞白血病（Chronic myelogenous leukemia，CML）是一种以粒系增生为主要表现的获得性造血干细胞恶性克隆性疾病。95％以上患者骨髓细胞中有特征性的Ph染色体，即t（9；22）（q34；q11）或Bcr／Abl融合基因，该融合基因是CML发病的主要原因。Bcr／Abl融合基因产物激活结构性酪氨酸激酶，该激酶激活细胞中多条信号传导途径（如Ras／MAPK、PI3K／Akt、JAK／STAT），导致细胞增殖加快，生长因子依赖性减低，凋亡细胞减少，细胞外基质与基质细胞的相互作用受到干扰，最终导致造血细胞转化为异常增生的白血病细胞。因此，Bcr／Abl酪氨酸激酶被认为是最理想的分子靶向治疗的目标。