成体小鼠脊髓实质神经干细胞的分离培养及其多能性的鉴定

目的从成年小鼠脊髓实质中分离培养并鉴定成体神经干细胞。方法采用无血清培养基及单细胞克隆技术，从成年小鼠脊髓实质中分离培养获得大量具备单细胞克隆能力的细胞，经免疫荧光染色证实单克隆细胞表达Nestin抗原并在分化后表达各种特异性的神经细胞抗原。结果从成年小鼠脊髓实质中分离培养获得的具备连续克隆能力的细胞可表达神经干细胞的Nestin抗原，并且分化后表达神经元及胶质细胞的特异性抗原。结论成功地从成年小鼠的脊髓实质中分离出具备增殖分化能力的成体神经干细胞，为进一步利用其进行脊髓损伤治疗的研究提供了实验基础。     

干细胞的研究与应用

干细胞可分为胚胎干细胞 (ＥＳ细胞 )和组织干细胞 (又称成年干细胞 )两大类 ,是动物机体所有或某些组织细胞的祖细胞 ,具有无限分裂和产生特化细胞的多能性。ＥＳ细胞由胚胎ＩＣＭ和胎儿ＰＧＣｓ分离克隆而来 ,可形成体内各种类型的细胞和组织。组织干细胞存在不同组织内 ,既可分化为有特殊功能的细胞 ,又可逆转分化为另一组织细胞 ,如肌肉干细胞可分化为神经细胞等。定向分化的细胞可作为种子细胞发育成各种组织细胞或器官 ,用于临床克隆治疗或器官移植 ,是目前组织工程的研究热点。ＥＳ细胞可用于克隆动物 ,加快良种家畜繁殖和保护濒危珍…     

成人骨髓源性神经干细胞诱导分化实验研究

为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ;以NESTIN、NSE及GFAP免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。细胞培养所涉及的细胞因子主要有GDNF(2 0ng/ml)、LIF(10ng/ml)和RA(0 5 μg/ml)等。结果发现 ,成人骨髓源细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为大而圆并含粗大胞质颗粒的神经干细胞 ,后者形成细胞球 (或称“神经球”) ,该细胞球表达特殊的神经干细胞NESTIN抗原 ;若进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养 ,单个的细胞又很快形成新的神经球。神经干细胞球进一步分化 ,可见到有的细胞胞体增大并出芽 ,逐渐发育成为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接、交织成网并建立有神经纤维样联系 ,表达NSE或GFAP抗原。说明成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞 ;用人骨髓组织诱导神经干细胞作为种子细胞具有可行性和有效性     

动物胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(Inner cell mass ICM)或原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)经体外分化抑制培养分离克隆的,ES细胞在动物克隆、转基因动物生产、细胞工程、组织工程、临床克隆治疗和发育生物学等的研究应用中起着重要的作用。本文介绍了胚胎干细胞的生物学特性,国内外研究进展和研究动态,阐明了建立ES细胞系的技术要点以及ES细胞的应用及发展前景。     

核心结合因子(Cbfa1/Runx2)重组腺病毒载体的构建、鉴定及在脂肪来源干细胞中的表达

目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白。方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化。将Cbfa1/Runx2cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ5183细菌内和pAdEasy1同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad-Cb-fa1/Runx2。经酶切、PCR鉴定,线性化后以脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测。通过RT-PCR、间接免疫荧光检测Ad-Cbfa1/Runx2感染脂肪组织来源干细胞后Cbfa1/Runx2基因的表达。结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍。在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化。酶切及PCR鉴定证实Cbfa1/Runx2基因重组腺病毒载体构建成功。Ad-Cbfa1/Runx2对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81.39%。转染3天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源干细胞中Cbfa1/Runx2蛋白的表达。结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/Runx2基因的重组腺病毒载体,证明了Ad-Cbfa1/Runx可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/Runx2蛋白。     

成年皮肤干细胞原位培植研究的哲学思考

干细胞是动物体内一种独特的基本细胞类型，当分化时，有些可能发展成为特殊类型的细胞、组织和器官，另一些仍维持干细胞，准备替代机体损伤和衰老的细胞。它们本身能自我复制，以供机体终生组织更新的需要。干细胞的培育研究为人类治疗破坏性和消耗性疾病带来了新的希望。国外学着重于干细胞的的离体培育研究，而我国徐荣祥运用整体性原则构建了成年皮肤干细胞生长发育的微环境，已原位培植成功，使烧伤创面达到再生愈合。现就有关干细胞的研究进展作如下阐述。     

骨肉瘤干细胞分离方法与鉴定标志物研究现状

<正>近年来,由于耐药和复发/转移,骨肉瘤(osteosarcoma,OS)患者的5年生存率停滞于约60%。OS干细胞可能是OS耐药和复发/转移的原因之一。成功分离与鉴定OS干细胞是对其靶向研究的前提。目前,有多种方法可对OS干细胞进行分离,主要的方法是细胞分离法和荧光激活细胞分选法(fluorescent activated cell sorting,FACS)等。而OS     

人输卵管内膜干细胞和输卵管间充质干细胞生物学特性的比较研究

目的 探讨人输卵管内膜中是否存在干细胞,并比较输卵管内膜干细胞(FMSC)与输卵管间充质干细胞(FTMSC)的生物学特性。方法 体外分离、培养及扩增人FMSC和FTMSC,比较两种干细胞的细胞形态、细胞表型、克隆形成率、增殖能力和分化能力。结果 体外分离、培养及扩增的两种干细胞均呈长梭形,细胞形态相似,但与FTMSC比较,FMSC形态更为均一,有更高的细胞累积群倍数,克隆形成检测也显示其克隆形成率较高。流式细胞术检测显示两种干细胞有相似的细胞表型,体外诱导分化结果显示两者都具有成骨、成脂肪及成软骨分化能力。结论 输卵管内膜层存在干细胞,且FMSC较FTMSC有更强的增殖能力,推测FMSC较FTMSC有更高的临床应用价值。     

一种表皮干细胞检测方法的建立

1975年以来 ,表皮细胞膜片应用于封闭深度烧伤创面取得了一定的效果[1～ 3 ] ,但所得到的细胞膜片中大部分细胞为终末分化细胞 ,已失去进一步增殖的能力。因此如何保持表皮细胞较强的分裂增殖能力或者说干细胞特性 ,是提高表皮细胞膜片移植存活率及在体外获得工程化皮肤的技术关键之一。表皮干细胞是组织工程化皮肤的种子细胞之一 ,但由于缺乏单一的、特异性的鉴别标志 ,使得其分离和获得十分困难。本研究试图利用流式细胞仪检测表皮干细胞表面整合素 β1 (CD2 9)和细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的荧光标记强度 ,建立简便易行的表皮干细胞…     

共培养系统下骨髓间充质干细胞分化为颌下腺腺泡细胞的实验研究

目的 研究使用共培养系统将骨髓间充质于细胞分化为有分泌功能的颌下腺腺泡细胞的可行性.方法 分离成年SD大鼠骨髓间充质干细胞于体外培养、纯化和鉴定,同时分离新生SD大鼠的颌下腺细胞于体外培养、纯化和鉴定,取颌下腺腺泡细胞第二代和间充质干细胞第一代置于共培养系统诱导干细胞定向分化.使用免疫细胞化学法分析骨髓间充质干细胞是否表达淀粉酶抗体.结果 纯化后的颌下腺腺泡细胞呈铺路石样形态,原代至第5代培养基及细胞内均可检测到淀粉酶表达;体外培养的骨髓间充质干细胞呈梭形,呈束状、漩涡状排列,可成功诱导成脂肪细胞,油红-O染色显示含有脂滴;共培养后的骨髓间充质干细胞表达淀粉酶抗体,约30%的骨髓间充质干细胞在共培养1周后转化为腺泡细胞,约50%的骨髓间充质干细胞在共培养2周后转化为腺泡细胞.结论 成功构建大鼠颌下腺腺泡细胞和骨髓间充质干细胞的体外培养体系,并证明大鼠骨髓间充质干细胞具有转化为腺泡细胞的能力,因此骨髓间充质干细胞将有望应用于涎腺组织工程.     

表皮干细胞体外分离与培养

探索和建立表皮干细胞体外分离与培养的技术方法。通过酶消化法获得幼鼠表皮 ,并制成单表皮细胞悬液 ,以表皮干细胞培养基 ,即无钙EMEM培养基 (添加 9%FBS ,0 0 5mmol/LCaCl2 ,4ng/mlEGF ,0 5ng/ml硫酸庆大霉素及 5 0 %成纤维细胞条件培养基 )置细胞培养箱内培养。成纤维细胞条件培养基为无钙EMEM培养基(添加 9%FBS、0 0 5mmol/LCaCl2 、0 5 μg/ml硫酸庆大霉素 )培养幼鼠皮肤块 4 8h后所得培养液。将 1×10 6/ml上述培养的角质形成细胞经TGG细胞消化液 37℃下振荡消化后 ,接种至鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内 ,37℃下静置 10～ 15min,留用快速贴壁细胞继续培养 ,所得细胞分别以能否呈克隆状生长和透射电镜观察其超微结构及β1整合素、K19免疫细胞化学染色进行鉴定。结果显示 ,鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞经继续培养 ,可见细胞呈克隆状生长。电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征 ,β1整合素、K19免疫细胞化学染色阳性。研究表明 ,表皮干细胞可在体外分离与培养 ,本实验方法为较好方法之一。     

毛囊Bulge细胞的分离培养及生物学特性研究

目的分离培养大鼠毛囊Bulge细胞并观察其生物学特性。方法运用显微分离法及酶消化法分离大鼠毛囊Bulge细胞并进行培养,观察其增殖能力及细胞形态等的改变;采用免疫组化方法,检测毛囊Bulge细胞K19、岛整合素的表达情况。结果本方法培养的大鼠毛囊Bulge细胞纯度高、活力好,具有高增殖、低分化特性,同时表达K19、岛整合素。结论成功地分离培养了毛囊Bulge细胞,并在体外长期保持其低分化特性,为进一步深入研究毛囊发育分化提供了实验基础。     

2000年干细胞研究成为热点

2000年，干细胞研究成为许多生物学家、医学家和遗传学家的研究热点，并取得了可喜的成就：日本大阪大学和美国康奈尔大学成功地从人脑中分离出神经干细胞，神经干细胞经过进一步发育会成为脑细胞；日本东京大学研究生院教授浅岛诚用蛙胚胎中未分化的细胞在试管中培育出了眼球，并成功地移植给一条美西螈；英国帝国理工大学、伦敦大学学院和帝国癌症研究基金会用取自成年人骨髓的造血干细胞培育出了肝细胞；中国烧伤创疡科技中心通过对烧伤残存组织中的干细胞研究，确立了利用原位干细胞实现人类皮肤再生修复技术；意大利干细胞研究所用成年…     

干细胞治疗新进展

治愈各种各样的疾病 ,数量无限 ,为您量身定制……中国生命科学家徐荣祥教授在干细胞研究和应用领域取得的科研进展对于科学家和广大的普通百姓们来说已经不再是天方夜潭 ,而是带来了希望。干细胞技术被美国《科学》杂志冠以“1999年度排名第一的科学成就”和“医学的未来”。自从生物学家ＪａｍｅｓＴｈｏｍｓｏｎ首先宣布他在培养皿内培养出人类胚胎干细胞 ,科学家们就对干细胞在医学上的潜在的应用前景兴奋不已。干细胞具有产生构成身体各种类型细胞的潜能 ,这些细胞可取代因衰老、创伤或疾病而损伤的组织。数月前 ,加利福尼亚大学洛杉矶…     

表皮干细胞及其微环境研究进展

表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)是皮肤组织中的专能干细胞,主要位于表皮基底层及毛囊外根鞘隆突部.表皮干细胞的生长发育、分化增殖受周围微环境的影响.     

《中国烧伤创疡杂志》2002年1～4期(总50～53期)总目录

论　文　名　称作者期 (总 )页码[特　　讯 ]干细胞研究攀向生命科学高峰 -我科学家率先在体外培养成功胃肠器官阎新华 1(5 0 ) 1原位干细胞复制胃肠壁组织的研究报告徐荣祥 1(5 0 ) 2原位干细胞再生医学在国际烧伤治疗中成为主流———第十九届夏威夷国　际会议纪实 黄新凡 2 (5 1)封 2体外培植干细胞复制肠粘膜组织的研究徐荣祥等 2 (5 1) 6 5成体干细胞原位再生修复深度烧伤创面的研究徐荣祥等 2 (5 1) 71再生医学理论与实践———在第七届全国烧伤创疡学术会议上的报告徐荣祥 4 (5 3) 2 0 1生命之美 ,美在细胞———在第二次世界中西医…     

什么是干细胞

干细胞是未成熟细胞,它未充分分化,具有再生各种组织器官和人体的潜在功能,医学界称之为“万用细胞”。人体干细胞分两种类型,一种是全功能干细胞,可直接克隆人体;另一种是多功能干细胞,可直接复制各种脏器和修复组织。人类寄希望于利用干细胞的分离和体外培养,在体外繁育出组织或器官,并最终通过组织或器官移植实现对临床疾病的治疗。“原位培植皮肤干细胞再生新皮肤技术”不仅实现了利用干细胞复制皮肤器官,而且做到了人体原位皮肤器官的复制,从而使人类从干细胞体外培植组织或器官移植治疗,直接跨入了人体原位干细胞复制器官…     

SD大鼠神经干细胞培养鉴定实验研究

为探讨从SD胎鼠室管膜、皮质以及SD成年大鼠脑室下区、皮质分离并鉴定神经干细胞的可行性 ,以从上述部位分离的细胞作为种子细胞来源 ,在本实验室特制“CYTOKINE·神经干细胞培养基”中进行了神经干细胞培养诱导 ,单细胞连续传代培养 ,并分别以Nestin、NSE及GFAP免疫抗体鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。结果发现 ,4种来源的组织细胞在相应培养条件下均有神经干细胞快速增殖 ,并有由多细胞组成的神经球形成 ,经鉴定 ,该细胞球表达特殊的胚胎神经干细胞Nestin抗原 ;进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度进行培养 ,单个的细胞又很快形成神经球。对神经干细胞进行连续培养或加血清传代培养可使其进一步分裂增殖 ,有小芽形成并发育成突起、建立神经纤维联系 ,其中有的胞体增大 ,逐渐发育为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接 ,交织成网 ,经鉴定为神经元及神经胶质细胞。 4种组织来源的细胞中所含有的干细胞数量不同 ,胎鼠较成年鼠更富含神经干细胞 ,室管膜或脑室下区所含神经干细胞较皮质更丰富 ,皮质来源的神经干细胞和室管膜来源的神经干细胞在形态学和分化程度上无特殊区别。该结果提示 ,SD胎鼠室管膜、皮质以及SD成年大鼠脑室下区、皮质 4种组织来源的细胞均含有神经干细胞 ;神经干     

毛囊隆突细胞体外诱导分化的形态学观察

目的：探讨体外诱导毛囊隆突细胞向毛囊和皮脂腺上皮细胞分化潜能。方法：体外分离培养人胎儿毛囊隆突细胞，分别利用与毛乳头细胞共培养，雄激素、胰岛素和地塞米松等为诱导剂诱导，观察毛囊隆突细胞的生长特性及形态变化。结果：毛囊隆突细胞与毛乳头细胞共培养后成克隆性生长，并被毛乳头细胞围绕，随着培养时间延长。细胞出现堆积和分层，中心形成毛囊样结构；在成脂诱导剂作用下，毛囊隆突细胞体积变大，出现特异的“扇贝”形细胞，胞浆内出现大小不等脂滴，随着培养时间延长，细胞形态变为椭圆、纺锤或不规则形，部分伸展的细胞相互融合，包裹形成不规则的网格状。结论：在不同诱导条件下，毛囊隆突细胞在形态上具有向毛囊和皮脂腺上皮细胞分化的潜能。     

毛囊干细胞的基因调节、生物学特征及其与疾病发生的关系

毛发组织主要是由外胚层起源的上皮性毛囊和中胚层起源的结缔组织性毛囊构成,两者相互作用诱导毛囊发生和重建,但关于毛囊上皮(干)细胞生物学特征及其调控机制至今所知甚少。本文就毛囊干细胞的基因调节、生物学特征及其与疾病发生的关系进行概述。