整合素αⅤ对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的:探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用,是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响,进而初步探讨其可能机制。方法:采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体(多细胞球)培养;血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性;AnnexinV/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果:(1)成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型;(2)CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后,并在一定的照射剂量下,其表达的整合素αV量,随着照射剂量的增加而增加;(3)阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论:以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况,证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性,抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

整合素αV对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的：探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用，是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响，进而初步探讨其可能机制。方法：采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体（多细胞球）培养；血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性；AnnexinV／PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果：（1）成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型；（2）CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后，并在一定的照射剂量下，其表达的整合素αV量，随着照射剂量的增加而增加；（3）阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论：以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况，证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性，抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡的关系

目的评估人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡敏感性的相关性。方法用流式细胞仪、荧光显微镜、电镜、Western-blot检测H5和S1凋亡能力的不同及凋亡相关蛋白表达的差异。结果H5、S1两种细胞的凋亡率均随着照射后时间的延长而增加,但H5比S1高且差异有显著性(P<0.05)。结论人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性的异质性,与细胞受射线照射后凋亡呈正相关,对射线敏感的亚细胞系凋亡率高。     

CpG ODN107增强人鼻咽癌CNE-2细胞对β射线照射的敏感性

目的：筛选能提高鼻咽癌CNE-2细胞对β射线放射敏感性的CpGODN序列，观察筛选获得的CpGODN序列放射增敏的作用特点，为寻找新的鼻咽癌放疗增敏剂提供实验依据。方法：应用MTT实验筛选21种CpGODN序列中对人鼻咽癌CNE-2细胞放射增敏作用最强的序列，以MTT实验、集落形成实验、划痕实验和流式细胞术检测该最强作用序列与β射线联合作用对CNE-2细胞的增殖、集落形成、细胞迁移、细胞周期与凋亡的影响。结果：筛选实验显示CpGODN107对CNE-2细胞具有最高的增敏比（1．59&#177;0．06），CpGODN107和β射线联合作用能以剂量依赖方式显著抑制CNE-2细胞的增殖，抑制效应显著高于单纯照射（P〈0．05，P〈0．01）；联合作用显著抑制CNE-2细胞集落形成和迁移能力，显著诱导细胞周期阻滞于G0／G1期，显著增加细胞凋亡（P〈0．01），上述作用效应均明显强于单纯B射线照射（P〈0．05或P〈0．01）。结论：CpGODN107可显著增强人鼻咽癌CNE-2细胞对β射线的照射敏感性，其放射增敏作用可能与诱导细胞周期阻滞和凋亡有关。     

CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的 探讨CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响.方法 采用流式细胞术检测鼻咽癌CNE-2细胞膜CD166阳性表达率,免疫磁珠分选技术获得CNE-2-CD166(+)、CNE-2-CD166(-)细胞亚群,克隆形成实验验证其放射敏感性,CCK-8法及流式细胞术检测10 Gy剂量照射前后的细胞增殖率及细胞凋亡率.结果 CNE-2细胞膜CD166阳性表达率为(24.27±5.31)％,分选后CNE-2-CD166(+)细胞CD166阳性表达率为96.5％,CNE-2-CD166(-)细胞为0.6％.克隆形成实验结果显示,CNE-2-CD166(-)细胞相对CNE-2-CD166(+)细胞的放射增敏比(sensitization enhancement ratio,SER)为1.24.10Gy照射后24 h、48 h和72 h,CNE-2-CD166(+)细胞的存活分数分别为(76.66±3.36)％、(62.44± 1.66)％和(55.21±3.39)％,CNE-2-CD166(-)细胞为(60.34±5.13)％、(41.11±3.00)％和(35.28±4.36)％,同时段内两组细胞的存活分数比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).10 Gy照射前,CNE-2-CD 166(+)细胞和CNE-2-CD166(-)细胞凋亡率分别为(5.87±1.14)％和(6.67±1.68)％,差异无统计学意义(P＞0.05);10 Gy照射后48 h,CNE-2-CD166(+)细胞凋亡率为(19.37±2.54)％,显著低于CNE-2-CD166(-)细胞的(28.90±4.04)％,差异有统计学意义(P=0.026).结论 CD166表达阳性的鼻咽癌CNE-2细胞对放射更具抗拒性,可能与减少细胞受照射后的凋亡率降低有关.     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的放射增敏作用及其作用机制

目的:研究姜黄素(curcumin)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测姜黄素药物毒性,用克隆形成实验观察其对放射敏感性的影响,用流式细胞仪(FCM)技术分析对CNE-2Z细胞周期分布和姜黄素联合辐射引起的细胞周期阻滞的影响。结果:不同浓度的姜黄素作用于CNE-2Z细胞后,其细胞毒性呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时,即可降低放射后CNE-2Z细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.52±0.25。姜黄素以及姜黄素联合辐射作用CNE-2Z细胞24h后,细胞周期主要阻滞在辐射敏感时相G2/M期。结论:姜黄素对CNE-2Z细胞有放射增敏作用,其机制可能与其引起的细胞周期阻滞等因素有关。     

E1A基因通过抑制NF-κB信号通路增加鼻咽癌细胞放射敏感性实验研究

目的 探讨E1A基因对人鼻咽癌细胞放射敏感性的影响及其可能机制。方法 通过腺病毒载体介导,将E1A基因转染至鼻咽癌CNE-2R细胞,采用RT-PCR鉴定E1A基因的表达;分别给予未转染组(PBS组)、转染空载体Ad-β-gal组(Ad-β-gal组)和转染E1A组(Ad-E1A组)的CNE-2R细胞0、2、4、6、8 Gy照射,应用克隆形成实验检测各组CNE-2R细胞放射敏感性的变化;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;蛋白印迹法检测各组细胞NF-κB、CK2α、Bcl-2及Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 RT-PCR确认E1A基因已整合到CNE-2R细胞中且稳定表达;Ad-E1A组CNE-2R细胞克隆形成率明显少于PBS和Ad-β-gal组的克隆形成率,Ad-E1A组CNE-2R细胞SF2为0.217小于 PBS组和Ad-β-gal组的0.602和0.585(P<0.05),Ad-E1A组α/β值为24.68大于PBS组和Ad-β-gal组的5.268和5.132(P<0.05);流式细胞术显示单独放射可促进CNE-2R细胞的凋亡,当与E1A基因联合使用时,细胞凋亡率明显增加(P<0.05);蛋白印迹法显示E1A基因可下调NF-κB/P65、CK2α、Bcl-2和上调Cleaved caspase-3的表达。结论 E1A基因可以通过抑制CK2的表达阻断NF-κB信号通路以及促进细胞凋亡,来提高鼻咽癌细胞对放射的敏感性。     

奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞放射增敏研究

[目的]观察奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞系放射敏感性的影响,初步探讨其作用机制.[方法]采用CCK-8法检测奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞存活率影响.克隆形成实验计算各处理组的细胞存活分数,单靶多击模型拟合细胞存活曲线并求出放射敏感性参数及放射增敏比.流式细胞仪检测奈达铂用药前后的细胞周期分布及凋亡率.Western Blot检测p-AKT和bcl-2蛋白表达.[结果]奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞生长有抑制作用,具有时间及浓度依赖性.在奈达铂为0.25mg/L时,SERDo和SERDq分别为1.16和1.32;奈达铂0.5mg/L时,SERDo和SERDq分别达1.23和1.82.以0、0.25、0.5mg/L奈达铂作用CNE-2细胞24h时G2/M期比例分别为(3.66±0.38)％、(13.84±0.45)％和(42.09±0.79)％,凋亡率分别为(4.28±1.20)％、(6.60±1.15)％和(9.20±0.65)％,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).Western Blot结果显示:药物组、单纯照射组及联合照射组较对照组p-AKT、bcl-2蛋白表达减少,且联合照射组p-AKT、bcl-2蛋白表达低于其它各组.[结论]奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞系具有放射增敏作用,其机制可能与改变细胞周期分布及增加凋亡等有关.     

抑制Polo样激酶1对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响

目的:探索抑制Polo样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的影响.方法:分别运用siRNA和小分子抑制剂BI2536抑制CNE-1和CNE-2细胞内PLK1的表达或磷酸化,通过MTT法检测抑制PLK1对NPC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测对细胞周期和凋亡的影响,细胞免疫荧光检测对辐射后DNA损伤位点的影响,克隆形成实验及曲线拟合计算对辐射后细胞放射生物参数和放射增敏比(sensitizationenhancement ratio,SER)的影响.结果:与对照组相比,抑制PLK1可以明显抑制NPC细胞增殖,并诱导细胞发生G2-M期阻滞和有丝分裂灾难.抑制NPC细胞PLK1联合射线辐射后,NPC细胞克隆形成能力下降(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05),且随着BI2536浓度的增大克隆形成能力下降更加明显(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05);细胞生存分数明显降低(均P＜0.05);核中γ-H2AX位点数目明显增加(P＜0.05);细胞凋亡率显著升高(均P＜0.05);siR-PLK1转染CNE-1和CNE-2后SER分别为1.1988和1.3198,BI2536处理CNE-1和CNE-2后SER分别为1.5508和1.2028.结论:抑制PLK1可以抑制NPC细胞增殖,诱导发生细胞周期阻滞和有丝分裂灾难,并能显著提高NPC细胞辐射敏感性.     

DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。     

反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞乏氧条件下放射敏感性的影响

目的:探讨乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在乏氧状态下对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响.方法:氯化钴处理CNE-1细胞模拟乏氧条件下的培养传代,通过脂质体将不同HIF-1α反义寡核苷酸酸导入CNE-1细胞中,根据转染复合物的不同将CNE-1细胞分为反义联合组、正义联合组、脂质体组和单纯放疗组(放疗对照组).X射线单次照射,照射条件为照射率4 Gy/min,共8Gy,细胞照射后继续乏氧条件下培养24 h.MTT法检测CNE-1细胞的存活率,Western blotting检测CNE-1细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达.结果:在乏氧条件下,反义联合组的鼻咽癌CNE-1细胞存活率明显大于正义联合组和单纯放疗组.Western blotting结果显示,与正义联合组和单纯放疗组相比,反义联合组CNE-1细胞中HIF-1α蛋白表达显著下降(0.162 ±0.055vs 0.872 ±0.191,0.768±0.217,0.863±0.245,P＜0.05);同时反义联合组CNE-1细胞中VEGF蛋白的表达量较正义联合组和单纯放疗组明显减少(0.364±0.078 vs 1.165±0.346,1.068±0.379,1.087±0.266,P＜0.05).结论:HIF-1α反义寡核苷酸能有效抑制HIF-1α的表达,对乏氧状态下的鼻咽癌CNE-1细胞具有放射增敏作用.     

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞辐射效应的协同作用

 目的 探讨薏苡仁酯(coixenolide,CXL)对人鼻咽癌细胞CNE-2Z辐射效应的影响.方法 以60Co为放射源,采用微量细胞克隆形成法检测CNE-2Z对γ射线的敏感性.结果 CXL使CNE-2Z的辐射-存活曲线向左移,Do、Dq和N值下降.不同浓度的CXL(5-20 μmol/L)使放射剂量减少17.26%-41.90%(在D37水平),其增效比(ER):Do比值1.14-1.64,Dq比值1.27-1.79.另外,CXL和射线的合并效应大于两者单独效应之和.结论 CXL和射线的相互作用产生协同效应.     

沉默CDKN1A基因对鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞放射敏感性的影响

目的：探讨CDKN1A基因的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法构建慢病毒表达载体LV-CDKN1A-RNAi并转染鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞,设转染LV-CDKN1A-RNAi慢病毒的CNE-2R细胞为实验组,转染阴性对照慢病毒的CNE-2R细胞为阴性对照组,未转染的CNE-2R细胞为空白对照组。用CCK-8法、细胞克隆形成实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖、放射敏感性及细胞周期的变化。结果成功构建了CDKN1A基因沉默的CNE-2R细胞,CCK-8法检测显示实验组CNE-2R细胞在照射6 Gy后生长受到抑制,且随时间延长其抑制作用更为明显。细胞克隆形成实验显示实验组CNE-2R细胞放射敏感性增强（放射增敏比为SER=1.24）。流式细胞术检测显示实验组与对照组细胞相比, G0/G1期和G2/M期细胞分布在X射线照射6 Gy前后明显改变（P约0.05）。结论 CDKN1A基因沉默能增强鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞的放射敏感性,CDKN1A基因的表达可能与鼻咽癌放射敏感性相关,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及 凋亡的影响

 目的探讨姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制。方法体外培养的 CNE-2Z细胞经不同剂量姜黄素处理后,用MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡 率的改变,Western blot检测姜黄素处理后相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化。结果姜黄素对CNE-2Z细 胞的生长和增殖都具有一定程度的抑制作用,阻断细胞于S期和G2/M期。姜黄素处理后CNE-2Z细胞凋亡抑 制基因Bcl-2蛋白表达减少,同时促凋亡基因Bax蛋白表达增加。 结论姜黄素可抑制CNE-2Z细胞增殖并促进 其凋亡。     

转导人baxα基因的CNE-2B细胞株凋亡及其裸鼠成瘤能力的改变

目的　观察导入 baxα基因并稳定表达的人低分化鼻咽癌细胞株 (CNE- 2 B)生物学行为变化。方法　琼脂糖凝胶电泳分析 DNA片段化 ;γ-射线照射。结果　CNE- 2 B在进行正常及受 γ-射线照射后传代培养时 ,其细胞总数的增加速度比导入载体的对照组 CNE- 2 P细胞株明显减慢 ;自发性细胞凋亡数明显增加。 CNE- 2 B细胞接种到 10只裸鼠双侧背部皮下均未见形成移植瘤 (0 / 2 0 ) ,而对照的 10只裸鼠的成瘤率为 10 0 % (2 0 / 2 0 )。结论　转导人 baxα基因的CNE- 2 B细胞株的生物学行为发生了显著性改变 (P<0 .0 1)     

MNNG诱导的哺乳类细胞信号转导通路的改变

目的:本实验室曾用烷化剂N - 甲基- N’- 硝基- N - 亚硝基胍(N2methyl2N’2nitro2N2nitrosoguanidine ,MNNG) 在非洲绿猴肾vero 细胞上诱导出非定标性突变。进一步的研究提示细胞信号转导通路在非定标性突变的发生中扮演了重要角色。所以本实验的目的是研究与非定标性突变发生有关的细胞信号转导通路的改变。方法:本研究中,vero 细胞在0. 2μmol·L - 1MNNG处理2. 5h 后在不同的时间点制备全细胞抽提液,然后利用一种偶联抗Anti2Phosphotyrosine2Peroxidase) 进行Western 印迹分析来观察细胞蛋白质酪氨酸磷酸化的变化。为了评估MNNG处理vero 细胞引起的胞内JNK/ SAPK通路激活情况,我们用Western 印迹法和固相激酶活性测定法分别检测JNK1 的磷酸化程度和JNKs 的激酶活性。在这部分实验中,vero细胞在MNNG或1mg·L - 1放线菌素酮(CHM) 处理后在不同的时间点制备全细胞抽提液,Western 印迹法用抗JNK1 兔多克隆IgG和羊抗兔IgG- HRP 分别作为一抗和二抗。在固相激酶活性测定实验中,细胞抽提液在[γ232 PATP 存在下与GST2cJ un (79)2agarose 混合孵育,标记的磷酸化GST2c2J un 经SDS2PAGE 分离后进行放射自显影。结果:在磷酸化酪氨酸Western印迹分析中发现MNNG处理vero 细胞后再经0h 和12h ,细胞内45kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强。在MNNG处理vero细胞后再经6h ,有62kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强。1mg·L - 1CHM 处理vero 细胞12h 也可引起胞内45kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强。在JNK1 磷酸化程度和JNKs 激酶活性测定中发现0. 2μmol·L - 1MNNG处理vero 细胞2. 5h 和1mg·L - 1CHM 处理vero 细胞1h 都可引起细胞抽提液中磷酸化JNK1 的比例增高,同时,通过测定JNKs 的底物c2J un 的磷酸化水平,发现这两种处理也都可使JNKs 的激酶活性大大增强(分别为对照的6. 7 倍和3. 0 倍) 。结论:本研究发现0. 2μmol·L - 1MNNG处理vero 细胞可引起胞内45kDa 的62kDa 蛋白质酪氨酸磷酸化改变,提示MNNG可诱导哺乳类细胞内应激信号转导通路激活。另外,0. 2μmol·L - 1MNNG处理vero 细胞2. 5h 和1mg·L - 1CHM 处理vero 细胞1h 都可引起全细胞抽提液中磷酸化JNK1 的比例增高和JNKs 的激酶活性成倍增强。证明用于诱导vero 细胞产生非定标性突变的实验条件可以引起vero 细胞内信号转导通路发生改变,并且至少可以激活vero 细胞内JNK/ SAPK通路。     

顺铂对人鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性和细胞周期及凋亡的影响

目的研究顺铂对人鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性、细胞周期及凋亡的影响,以探讨顺铂诱导CNE-2Z细胞凋亡与端粒酶活性水平的关系以及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制。方法分别以不同的药物浓度作用于体外培养的CNE-2Z细胞不同的时间,用TRAP-ELISA的方法定量检测CNE-2Z细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平,同步进行细胞形态观察,流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果CNE-2Z细胞端粒酶呈阳性。用不同浓度的顺铂不同的时间作用于CNE-2Z细胞,结果细胞周期被阻滞在G1期,出现细胞凋亡,下调端粒酶活性,且呈时间依赖性及剂量依赖性。结论化疗药物顺铂可能是通过改变细胞周期分布(G1期阻滞)并同时诱导细胞凋亡、下调其端粒酶活性而发挥抗癌作用的,故可将化疗前后细胞端粒酶活性的变化作为鼻咽癌化疗敏感性指标之一。     

血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂联合放射对鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ受体(ATlR)阻滞剂缬沙坦对鼻咽癌细胞系(CNE-2)是否具有放射增敏作用,以及它与放射联合对CNE-2细胞侵袭能力的影响.方法 用成克隆分析法观察缬沙坦与放射联合对CNE-2细胞体外存活效应的影响,用流式细胞术和体外侵袭实验(小室法)检测对细胞凋亡和侵袭能力的影响.结果 CNE-2细胞经10-9、10-8、10-7 mol/L缬沙坦与放射联合作用后,放射增敏比(SER)分别为1.10、1.20、1.36;侵袭能力抑制率分别为8.11%、16.49%、16.77%.改变缬沙坦作用时间,SER随作用时间延长而增加.经10-8mol/L缬沙坦和放射处理24 h后,CNE-2细胞凋亡率为1.89%±0.09%,与单纯放射组1.62%±0.06%相比有所提高(t=4.79,P＜0.05).结论 ATlR阻滞剂缬沙坦在体外对CNE-2细胞有放射增敏作用,与放射联合能抑制细胞侵袭能力和在一定程度诱导细胞凋亡,为缬沙坦体内实验的放射增敏效应提供基础.     

敲除人乳腺癌MCF-7细胞中PTEN基因对JNK通路活性的影响

背景与目的:PTEN与多种肿瘤发生发展密切相关,大量研究表明PTEN基因通过直接或间接作用整合复杂的信号网络系统,并影响靶分子及其下游信号级联反应.本研究探讨敲除MCF-7细胞中PTEN基因对JNK通路活性的影响.方法:PTEN反义寡核苷酸转染后,激光共聚焦显微镜检测MCF-7细胞内PTEN蛋白表达:流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)及Western blot法分别检测SP600125诱导的细胞早期凋亡和细胞周期改变、细胞增殖抑制、细胞中JNK及其下游底物ATF-2、C-Jun的磷酸化水平.结果:FTEN反义寡核苷酸有效封闭MCF-7细胞中PTEN蛋白表达:SP600125(10 μmol/L)诱导已敲除PTEN的MCF-7细胞发生早期凋亡.凋亡率达(32.4±2.4)%,细胞发生G1期阻滞、细胞增殖明显受抑制,与SP600125组、反义组细胞相比差异有显著性(P<0.05);反义+SP600125组MCF-7细胞中磷酸化JNK及其下游底物ATF-2及C-Jun磷酸化水平下调.结论:MCF-7细胞中JNK通路激活与PTEN表达水平相关,PTEN缺失使MCF-7细胞中JNK通路活化,细胞对JNK相关抑制剂的敏感性增加.