第三代腺病毒载体的改良与应用

腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、低致病性、高滴度及不整合入宿主细胞染色体等优点,广泛应用于基因治疗.第一、二代腺病毒载体仍有许多不足之处,在其基础上发展了第三代腺病毒载体.第三代腺病毒载体与前者相比,具有低免疫原性及高容量等优点,在基因治疗中表现出独特优势.然而,由于辅助病毒污染的存在及病毒产量有待提高,第三代腺病毒载体的临床应用仍面临一定困难.     

重组腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒载体转导目的基因具有效率高、滴度高、在体内不与宿主细胞染色体整合等优点,使腺病毒载体在肿瘤的基因治疗研究与实践方面得以广泛运用。本文就三代腺病毒载体的构建与改进,腺病毒载体介导的肿瘤基因治疗策略及其应用进展进行了简要地综述,并讨论了在肿瘤基因治疗中仍需解决的安全问题和面临的挑战。     

腺病毒载体的改进策略

腺病毒载体具有多种优点,有望成为理想的基因转移载体并广泛应用于临床.但由于其基因转导的有效性、靶向性方面的不足及宿主的免疫原性,使许多具有潜力的临床基因治疗方案被搁浅.本文回顾了腺病毒的发展历程,提出了六点腺病毒载体的改进策略,以期对以后的腺病毒载体研究有所帮助.     

腺病毒载体在肿瘤靶向性治疗中应用的研究进展

肿瘤已经成为威胁人类健康和生命的重大疾病之一，有效地治疗肿瘤是当前医学研究的迫切任务。基因治疗在肿瘤治疗中的应用正在快速发展。肿瘤基因治疗常用的病毒载体有腺病毒载体、逆转录病毒载体及腺病毒相关病毒载体。腺病毒在体内能有效地感染肿瘤细胞，已经在肿瘤的基因治疗研究与实践中显示出了较好的应用前景，本文对其研究进展综述如下。[第一段]     

肿瘤基因治疗的病毒载体研究进展

肿瘤基因治疗是通过载体将遗传物质转移入宿主细胞,使肿瘤细胞凋亡,包括原发瘤和转移瘤。目前,应用于肿瘤基因治疗的载体分为病毒载体和非病毒载体,病毒载体的转移效率高,其中腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、反转录病毒载体和疱疹病毒载体等已广泛应用于基础研究和临床试验。     

腺病毒载体纯化及在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒是一种线性无包膜的双链DNA病毒,用于载体构建的主要是人类2型和5型腺病毒.现在通过对腺病毒的改造,已经成功构建出第一代、第二代、第三代和条件复制型腺病毒载体.随着腺病毒载体在蛋白质表达中的广泛使用,对高产量、高纯度腺病毒载体的需求量逐渐增大,因此近年来在传统纯化腺病毒载体的基础上发展出各种纯化新方法.同时,由于腺病毒载体自身的一些优点,使其在疫苗和肿瘤基因治疗中也得到了较为广泛的应用.     

反义Smad3腺病毒表达载体的构建及体外表达

目的构建在体外细胞中高效表达的反义Smad3腺病毒载体,探讨应用于基因治疗病理性瘢痕的可行性.方法用DNA直接克隆连接的方法,构建反义Smad3腺病毒重组质粒,再用293细胞包装.重组腺病毒经扩增、纯化后,感染体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞, RT-PCR检测细胞中反义Smad3 mRNA的转录.结果经酶切和PCR鉴定证实反义Smad3重组腺病毒质粒构建成功,RT-PCR证实瘢痕疙瘩细胞中有腺病毒载体介导的反义Smad3 mRNA的表达.结论所构建的反义Smad3腺病毒表达载体可在瘢痕疙瘩成纤维细胞中表达,可进一步应用于瘢痕疙瘩基因治疗的研究.     

腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒载体目前广泛地应用于肿瘤的基因治疗。随着对腺病毒分子结构、功能以及感染机制的进一步深入了解,人们在降低其免疫原性,增强基因导入特异性,增强感染和表达效率等方面进行了许多探索,开发具有肿瘤靶向性的溶瘤腺病毒载体是其发展方向与研究热点。本文对腺病毒载体的生物学、构建策略及其在肿瘤基因治疗中的应用进行综述。     

壳聚糖纳米粒作为基因治疗载体的研究进展

20 0 3年底 ,首个基因治疗药物—重组人P5 3腺病毒注射液[1～ 3 ] 在我国批准临床应用 ,标志着基因治疗进入了新时代。在基因治疗三要素 :目的基因、表达载体、递送载体中 ,递送载体的构建和改进 ,一直是基因治疗研究的重点。基因递送载体有病毒载体和非病毒载体。前者作为一种     

腺病毒及其研究进展

本文从腺病毒的分类、结构和受体等方面对腺病毒进行了介绍,同时对腺病毒的感染和致病性做了综述,并进一步介绍了抗腺病毒治疗研究进展和腺病毒载体的应用.对腺病毒多方面进行较全面的了解,有助于促进抗腺病毒药物的研发和加强腺病毒载体在基因治疗中得到更好的应用.     

以Ad-Easy载体系统快速构建PTEN重组腺病毒表达载体

目的 应用Ad-Easy腺病毒载体系统构建携带抑癌基因PTEN的重组腺病毒表达载体.方法 用插入有抑癌基因PTEN和绿色荧光蛋白的穿梭载体pAdTrack-CMV转化已经含有腺病毒骨架载体pAdEasyl的E.coliBJ5183(Ad-1 cells)进行同源重组,获得重组腺病毒质粒,经Pac Ⅰ线性化后,转染293细胞.结果 得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的293细胞出现细胞病变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因,荧光显微镜能观察到293细胞内有绿色荧光.结论 腺病毒Ad-Easy系统是一种较为简便、快速的构建重组腺病毒的好方法,且生成的病毒滴度高、转导效率好,为进一步研究PTEN基因应用于癌症基因治疗提供实验基础.     

腺病毒载体及其应用

随着疾病分子水平机理研究的不断深入,基因治疗已成为很多疾病防治及医学研究工作新的切入点。理想的基因治疗方案需具备有效性与安全性,因此安全有效的基因转导载体及技术是决定基因治疗成败的关键。在众多的基因转导载体中,重组腺病毒载体能利用病毒自身感染宿主细胞的特点,简便有效地将目的基因导入靶细胞,并使其有效表达。而且腺病毒为DNA病毒,极少发生插入突变,载体操作方便、宿主广泛、容易增殖,并具有携带外源基因容量大,可表达接近翻译后成熟水平蛋白质等特点,已被广泛用于多种疾病的基因治疗。本文拟就腺病毒载体的构建,载体效能…     

腺病毒载体，最有潜力的心血管疾病治疗载体？

心血管疾病在当今社会仍有很高的死亡率,基因治疗的可行性在不断探索。腺病毒载体可高效实现心血管内基因转移,但其组织特异性和免疫原性限制了其应用。近年来腺病毒载体不断发展,涌现的第三代腺病毒载体成为极有潜力的理想基因治疗转导载体。本文综述腺病毒载体的性质、优点及发展过程,在心血管疾病中的具体应用,总结目前应用中的障碍和改进策略。     

反向克隆法大鼠anti- ERK2腺病毒载体构建

目的正义基因反向克隆法构建大鼠anti-ERK2腺病毒载体.方法酶切质粒p3XFLAG-CMV7.1-ERK2,得到ERK2 cDNA片段,连接到T载体进行测序,经测序正确反向克隆法插入质粒pShuttle中,最后转入AdEasy(tm)XL Adenoviral Vector System系统中得到anti-ERK2基因腺病毒载体.结果DraI和NotI双酶切鉴定anti-ERK2基因腺病毒载体,发现插入的基因序列与插入方向均符合预期目标.结论成功构建了大鼠anti-ERK2腺病毒载体,为研究移植排斥中ERK2基因治疗的作用提供了良好工具.     

慢病毒载体在基因治疗中的应用研究进展

基因治疗(gene therapy)是上世纪末发展起来的一项新技术,其利用基因转移技术纠正或补偿基因缺陷和异常,达到治疗疾病的目的,是当今医学研究的前沿.随着分子生物学、生物化学等学科的发展和基因序列的不断深入研究,极大地带动了基因治疗技术的发展,已成为治疗先天遗传性、免疫性、某些感染性、血液性疾病以及肿瘤尤其是恶性肿瘤的新焦点.其中借助于慢病毒载体(Lentivirus vector,LV)对疾病进行基因靶向治疗又是研究热点区域中的热点.而某些病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体等,均或多或少地存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性.如逆转录病毒载体存在无法高效转导非分裂期细胞,腺病毒载体在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引起免疫反应等.     

人类腺病毒载体介导的人肺囊性纤维化基因治疗的研究展望

根据人类腺病毒(Ad)载体特性,人肺囊性纤维化(CF)细胞分子生物学进展.及包含正常人肺囊性纤维他穿膜传导调节因子(CFTR)cDNA的复制缺陷型Ad载体(Ad CFTR)介导的CF基因治疗的实验研究进展,主要从安全性和有效性两方面,论述了Ad—CFTR指导的CF临床基因治疗要求与进一步研究策略,痘苗病毒、逆转录病毒和腺病毒载体分别介导的CF基因治疗研究结果表明,正常CFTR基因在呼吸上皮的低水平表达,即可达到治疗目的,从而为治疗CF展示了光明前景。CF基因治疗的人体安全性试验已在美国批准实施,不久将进行有效性试验。     

携带反义热休克蛋白70抑制人喉癌细胞的生长

目的 构建携带反义热休克蛋白70(HSP70)的重组腺病毒载体以用于喉癌的基因治疗研究.方法 将HSP70基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒PAdTrack-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌Bj5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带反义HSP70的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASHSP70.结果 成功的构建携带反义HSP70的重组腺病毒载体系统,经测病毒滴度可达8×109.HSP70反义RNA阻断了Hep-2细胞的HSP70的表达,经Western blotting和免疫组化证实,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70,而对照和空载体组高表达HSP70.转染反义HSP70的腺病毒载体的Hep-2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰,而空载体组没有.结论 构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASHSP70可望有效地将反义HSP70导入人喉癌细胞株,为进一步研究喉癌基因治疗提供实验基础.     

黑素瘤基因治疗中病毒载体的研究进展

黑素瘤是一种皮肤恶性肿瘤,晚期患者预后不良,目前尚无有效的治疗方法。基因治疗是以改变人的遗传物质为基础的生物医学治疗手段。基因治疗用于针对恶性肿瘤的临床试验方案占了总数的2/3。基因治疗关键在于选择和构建相应的载体。常用于黑素瘤基因治疗的病毒载体包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒载体等。不同病毒载体各有优势和劣势。安全性、靶向性、高效性是目前病毒载体的研究方向。     

新型腺病毒载体的制备及其特性研究

目的：本研究在普通腺病毒载体（Adv）纤毛头节区插入了具有整合素特异性的RGD肽,制备了一种新型RGD-Adv,以克服Adv基因转导的柯萨奇腺病毒受体依赖性.方法：用体外连接法构建RGD-Adv,并考察其基因转效率、稳定性及体外、体内毒性.结果：RGD-Adv可有效地实现向受试细胞转导基因,其转导能力随病毒量的增加而加强.结论：具有av亲和性的RGD-Adv是一种安全高效的新型腺病毒载体,将在基因治疗及实验研究中发挥重要作用.     

基因治疗病毒载体的研究进展

基因转移载体是基因治疗的重要组成部分,包括病毒载体和非病毒载体。目前应用的病毒载体主要有逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒、慢病毒载体、单纯疱疹病毒载体等。不同的病毒载体各有利弊。随着对病毒载体的不断改造完善,提高其基因转移效率和安全性,病毒载体将在基因治疗中继续发挥重要作用。