环氧合酶2在人恶性黑素瘤中高表达

目的 探讨恶性黑素瘤组织及黑素瘤细胞系中环氧合酶2(COX-2)的表达及意义.方法 免疫组化法比较性研究25例皮内痣、45例恶性黑素瘤COX-2蛋白的表达情况.并结合患者的临床资料进行分析.同时,免疫印迹法检测正常黑素细胞及3种黑素瘤细胞系中COX-2蛋白的表达情况.结果 在恶性黑素瘤中,COX-2蛋白阳性表达率为80%(36/45),显著高于皮内痣组0%(0/25)(P<0.05);肿瘤组织中COX-2蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05).正常黑素细胞COX-2阴性表达,3种恶性黑素瘤细胞系中A375、1585细胞COX-2表达水平明显升高,而Libr细胞未见阳性表达.结论 COX-2在恶性黑素瘤组织及细胞系中表达率显著升高,可能在恶性黑素瘤发生发展中具有一定作用.     

恶性黑素瘤血管内皮细胞生长因子和nm23抑癌基因蛋白表达及微血管密度的研究

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)、nm23抑癌基因和微血管密度(MVD)与恶性黑素瘤发病的关系。方法 采用免疫组化法检测47例恶性黑素瘤和10例黑素细胞痣组织中VEGF、nm23和CD34的表达并计算其MVD。结果 恶性黑素瘤VEGF阳性表达率和MVD值均明显高于黑素细胞痣(P均<0.01),有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P值分别<0.05和<0.01);随着浸润深度增加,Ⅰ级与Ⅳ、Ⅴ级恶性黑素瘤比较,VEGF阳性表达率和MVD值差异均有统计学意义(P值分别<0.05和<0.01)。恶性黑素瘤中nm23阳性表达率明显低于黑素细胞痣(P<0.01),有淋巴结转移者明显低于无淋巴结转移者(P<0.01),与临床分型和浸润深度无明显关系。结论 VEGF和nm23表达在恶性黑素瘤的发展和转移中起重要作用。     

生存素在恶性黑素瘤中的表达及与VEGF和PCNA的关系

目的 探讨人恶性黑素瘤组织中凋亡抑制蛋白生存素的表达,及其与恶性黑素瘤临床特征、血管内皮生长因子(VEGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的关系.方法 免疫组化方法检测36例人恶性黑素瘤和30例色素痣组织中生存素、VEGF和PCNA蛋白表达.结果 ①生存素在恶性黑素瘤和色素痣中均有表达,但在恶性黑素瘤中表达明显高于色素痣(P<0.01).②在恶性黑素瘤组织中有30例表达VEGF(阳性率83.3%),36例表达PCNA(阳性率100%),而色素痣组织不表达VEGF和PCNA.③生存素的阳性表达与恶性黑素瘤患者的发病年龄、性别、淋巴结转移均无相关性(P>0.05),但其表达与VEGF和PCNA的表达密切相关(P<0.01).结论 生存素可能参与恶性黑素瘤的增殖和与VEGF相关的肿瘤血管生成.     

骨桥蛋白及基质金属蛋白酶—9在恶性黑素瘤中的表达

目的 探讨骨桥蛋白及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在人恶性黑素瘤中的表达及意义。方法 采用免疫组化SP法检测23例原发性恶性黑素瘤、17例转移性恶性黑素瘤及20例色素痣中骨桥蛋白和MMP-9的表达。结果 40例恶性黑素瘤中骨桥蛋白及MMP-9表达的阳性率分别为87.5%、75.0%;20例色素痣中的阳性表达率分别为15.0%、10.0%。骨桥蛋白及MMP-9在恶性黑素瘤中阳性表达率明显高于色素痣,差异具有统计学意义(P<0.05)。骨桥蛋白和MMP-9的表达与年龄、性别、发病部位、是否淋巴结转移等因素均无关(P>0.05)。40例恶性黑素瘤中,骨桥蛋白与MMP-9均表达29例,均不表达4例。结论 骨桥蛋白及MMP-9在人恶性黑素瘤中高表达,但与淋巴结转移无相关性。     

pU-VEGF-siRNA对裸鼠恶性黑素瘤生长影响的研究

目的 研究pU-VEGF-siRNA对恶性黑素瘤成瘤和凋亡的影响及其机制.方法 构建针对血管内皮生长因子(VEGF)的发卡样siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA,通过电穿孔法将构建重组体导入人恶性黑素瘤细胞系A375,并建立pU-VEGF-siRNA转染细胞荷瘤裸鼠模型,应用免疫组织化学方法检测荷瘤裸鼠肿瘤组织VEGF和血管内皮细胞特异性Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)的表达,依据FⅧRAg的表达评价肿瘤微血管密度,末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)定量检测荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织凋亡.结果 体内实验表明,实验组成瘤率明显低于对照组,且其肿瘤生长速度也明显减慢(P<0.01).实验组VEGF表达和肿瘤微血管密度明显低于对照组(P<0.01).实验组可见大量凋亡细胞,对照组仅见少许凋亡细胞,实验组凋亡指数与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 通过RNA干扰技术阻断VEGF的表达,在裸鼠体内可显著抑制恶性黑素瘤生长.     

恶性黑素瘤FHIT基因蛋白的表达与肿瘤细胞增殖、凋亡关系的研究

目的 研究恶性黑素瘤(maligmant melanoma,MM)脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的表达及与肿瘤细胞增殖、凋亡的关系。方法 用免疫组化SP法检测57例原发性MM和20例正常人皮肤中FHIT蛋白和增殖细胞核抗原的表达水平,用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测其细胞凋亡指数。结果 ①MM中,FHIT蛋白的表达水平明显低于正常人皮肤(P<0.001),增殖细胞核抗原的表达水平和细胞凋亡指数显著高于正常人皮肤(P<0.001);②FHIT蛋白、增殖细胞核抗原蛋白表达水平及细胞凋亡指数与MM患者的年龄、性别和肿瘤发生的部位无明显相关,而与其Clark分级和淋巴结转移状态明显相关(P<0.01);③MM与正常人皮肤相比,其细胞凋亡指数与增殖细胞核抗原的比值显著降低(P<0.001);④FHIT蛋白表达与MM细胞活跃增殖和凋亡受抑之间存在一定相关性(P<0.01)。结论 FHIT基因可能参与了MM肿瘤细胞的增殖、凋亡的调节,其表达下降可能与MM的发生、发展过程有关。     

恶性黑素瘤内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的表达

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和血管内皮生长因子(VEGF)与人恶性黑素瘤血管生成的关系。方法 免疫组化法检测31例人恶性黑素瘤标本eNOS、VEGF和第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色,计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果 24例恶性黑素瘤组织表达eNOS,26例表达VEGF,色素痣组织不表达eNOS和VEGF;VEGF与eNOS的表达呈正相关;eNOS、VEGF的表达与恶性黑素瘤MVD呈正相关,恶性黑素瘤MVD明显高于色素痣;eNOS、VEGF表达与淋巴结转移无关。结论 MVD随着eNOS和VEGF表达的增强而增加。     

RNA干扰技术抑制人恶性黑素瘤细胞A375中淋巴样增强因子mRNA及蛋白表达

目的 利用RNA干扰技术,以淋巴样增强因子(LEF-1)为靶基因,设计、构建重组体,研究其对人恶性黑素瘤细胞A375中LFF-1表达的抑制作用。方法 设计、合成针对LEF-1 mRNA序列的有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸,退火后与表达载体Psilencer3.1-H1 neo相连接,经鉴定正确后转染人恶性黑素瘤细胞A375,以G418筛选,获得稳定转染细胞株,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫细胞化学方法检测转染细胞中LEF-1 mRNA及蛋白表达水平的改变。结果 成功构建了靶向人LEF-1基因的siRNA表达载体,获得稳定转染细胞株,转染细胞LEF-1 mRNA及蛋白水平明显下调。结论 靶向LEF-1的RNA干扰重组体可抑制人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1表达。     

恶性黑素瘤和普通痣细胞痣组织中双链RNA依赖的蛋白激酶的表达

目的 探讨恶性黑素瘤和普通痣细胞痣组织中双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的表达情况,并分析PKR与恶性黑素瘤的细胞增殖程度及临床病理参数的关系。方法 应用免疫组化法检测42例恶性黑素瘤及25例普通痣细胞痣组织中PKR及增殖细胞核抗原的表达。结果 恶性黑素瘤中PKR阳性表达率显著高于普通痣细胞痣组织。恶性黑素瘤中PKR的表达水平与增殖细胞核抗原的表达呈显著负相关;与患者性别、年龄、有无淋巴结转移及TNM分级等临床病理特征均无明显相关性。结论 PKR在恶性黑素瘤细胞增殖过程中具有重要作用。     

基质金属蛋白酶10、金属蛋白酶组织抑制因子2等在皮肤鳞状细胞癌中的表达

目的 了解皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)中基质金属蛋白酶10(MMP-10)、金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和层粘连蛋白(LN)的表达及其与癌分化、淋巴结转移的关系。方法 用ABC免疫组化技术观察皮肤鳞癌患者的手术切除标本48例(高分化鳞癌34例,低分化鳞癌14例),其中伴淋巴结转移者12例。结果 MMP-10在低分化鳞癌中的表达明显高于高分化组(P<0.05),但其表达在淋巴结转移组与无转移组之间的差异无显着性(P>0.05).TIMP-2、ColⅣ和LN在高分化或无淋巴结转移的鳞癌中的表达明显高于低分化或有淋巴结转移者(P<0.05-0.01).结论 皮肤鳞癌中TIMP-2、ColⅣ和LN的表达与癌分化、淋巴结转移有关,而MMP-10表达仅与癌分化有关。     

内皮素3上调黑素瘤细胞株A375表达骨桥蛋白的研究

目的 探讨内皮素受体(ETR)-B拮抗剂BQ788和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂LY294002对黑素瘤细胞株A375骨桥蛋白基因的表达。方法 对照组在人A375细胞培养体系中加入100 nmol/L内皮素3,试验组除加入100nmol/L内皮素3外,分别加入1μmol/L BQ788和20μmol/L、50μmol/L LY294002,采用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测骨桥蛋白的mRNA和蛋白表达。结果 ETR-B拮抗剂BQ788和PI3K抑制剂LY294002均能显著减少人恶性黑素瘤细胞株A375中骨桥蛋白mRNA和蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。高浓度较低浓度LY294002对骨桥蛋白表达的抑制作用更明显(P<0.05)。结论 内皮素3/ETR-B能通过激活PI3K信号通路上调骨桥蛋白的表达。     

寻常型银屑病患者血管内皮生长因子及单核细胞趋化因子-1表达的研究

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在银屑病患者皮肤中的表达及其意义。方法 用免疫组化法检测银屑病患者皮损、非皮损及正常人皮肤中VEGF、MCP-1的表达与分布。用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者血清中VEGF、MCP-1水平。结果 ①银屑病患者皮损及非皮损中VEGF表达较正常人皮肤明显增强(P<0.05).皮损中MCP-1表达较非皮损及正常人皮肤明显增强(P<0.05).②患者血清中VEGF水平明显高于正常人(P<0.05),MCP-1水平与正常人比较差异无显着性(P>0.05).③皮损角质形成细胞中VEGF、MCP-1的表达与PASI评分无显着相关性(P>0.05)。结论 VEGF、MCP-1的表达增强在银屑病的发病机制中可能起重要作用。     

色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中色素上皮衍生因子的表达

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)在色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测正常人皮肤组织、正常人色素痣以及恶性黑素瘤组织中PEDF的表达与分布.用蛋白印迹法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF的表达与分布.用RTPCR法检测正常黑素细胞及A375中PEDF mRNA的表达.结果 ①PEDF在正常皮肤组织、正常人色素痣及恶性黑素瘤组织中的表达逐渐降低,三组间差异有统计学意义(P<0.05).②PEDF在正常黑素细胞中表达,而在恶性黑素瘤细胞株缺失.③PEDF mRNA在恶性黑素瘤细胞中的表达量明显低于正常黑素细胞.结论 PEDF的表达降低在恶性黑素瘤的发病机制中可能起一定作用.     

硬皮病患者皮损转化生长因子β1、β2 mRNA的表达

目的 探讨转化生长因子(TGF)β1和β2在硬皮病发病中的作用。方法 采用原位逆转录聚合酶链反应技术检测17例硬皮病患者皮损中TGF-β1、β2mRNA的原位表达情况,并以10例正常人皮肤组织作为对照。结果 TGF-β1mRNA在硬皮病组表达阳性率和表达程度均高于对照组(P<0.05);TGF-β2mRNA在硬皮病组表达阳性率和表达程度与对照组相近(P>0.05);硬皮病皮损中TGF-β1mRNA表达阳性率和表达程度均高于TGF-β2mRNA(P<0.05).结论 TGF-β1mRNA在硬皮病皮损中高度表达,提示其在硬皮病病理纤维化的形成过程中起一定作用。     

姜黄素对小鼠黑素瘤的抑制作用及对核因子κB激活和生存素表达的影响

目的 探讨姜黄素抑制小鼠黑素瘤作用的可能机制.方法 将黑素瘤细胞株B16F10接种于小鼠右大腿外侧皮下,建立荷黑素瘤小鼠模型,于接种后第7天分别予以50和100 mg/kg姜黄素干预,以0.5 mL无血清RPMI 1640培养基腹腔注射为对照组,观察不同处理组瘤体的变化,采用免疫印迹方法检测肿瘤组织核因子κB(NF-κB)p65表达程度,应用半定量逆转录聚合酶链反应方法检测生存素mRNA的水平.结果 姜黄素治疗组小鼠瘤重均较肿瘤对照组降低,尤以50 mg/kg姜黄素组为著,抑瘤率可达55.56%(P<0.01);治疗组肿瘤组织NF-κBp65表达水平均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg姜黄素组降低63.19%,100 mg/kg姜黄素组降低55.74%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);治疗组生存素mRNA均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg组降低51.02%,100mg/kg组降低34.69%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤组织NF-κB活性与生存素mRNA表达水平呈正相关(r=0.81,P<0.01).结论 姜黄素可能通过抑制NF-κB活化从而下调其下游生存素基因表达来抑制恶性黑素瘤的生长.     

芪加真武汤联合糖皮质激素体外对SLE患者外周血淋巴细胞凋亡及Fas、FasL表达的影响

目的 探讨中药芪加真武汤联合糖皮质激素对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞(PBL)凋亡及Fas、FasL表达的影响。方法 采用血清药理学方法 ,制取芪加真武汤含药兔血清。运用流式细胞仪检测19例SLE患者外周血淋巴细胞在不同浓度的芪加真武汤的含药血清(20%、10%、5%)、地塞米松(0.001mol/L)及两者联合刺激下细胞凋亡和Fas、FasL表达的变化。结果 ①SLE患者PBL凋亡率明显高于正常组(P<0.001),Fas表达明显多于正常组(P<0.01),FasL表达与正常组差异不明显(P>0.05)。②10%、20%含药血清显著减少SLE患者PBL的凋亡率(P<0.01),显著降低Fas表达(P<0.01),升高FasL的阳性细胞率(P<0.05);③地塞米松可增高SLE患者PBL的凋亡率(P<0.05),但对Fas、FasL的表达无影响(P>0.05);④含药血清联合地塞米松显著减少PBL凋亡率(P<0.01),降低Fas表达(P<0.05),明显升高FasL的阳性细胞率(P<0.01)。结论 SLE患者PBL存在凋亡及凋亡相关蛋白表达的紊乱,中药芪加真武汤在体外可纠正其紊乱,缓解由地塞米松引起的PBL过度凋亡。     

P16和视网膜母细胞瘤蛋白在高砷煤引起的砷中毒患者皮损中的表达

目的 研究P16和视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)在高砷煤引起的砷中毒患者皮损中的表达.方法 采用免疫组化SP法检测46例高砷煤引起的砷中毒患者皮损中P16和Rb蛋白的表达.结果 高砷煤引起的砷中毒患者皮损中P16蛋白的表达缺损率为59.7%,其表达随病损的加剧而减低,并与临床分级和病理分型明显相关(P<0.01).Rb蛋白的阳性表达率为60.9%,与临床分级相关(P<0.05).P16蛋白的阳性表达与Rb蛋白呈负相关(P<0.01).结论 P16蛋白表达降低和P16-Rb通路的失活可能与高砷煤引起的砷中毒患者皮损的发生密切相关.     

毛母质瘤中β联蛋白的突变基因分析

目的 探讨β联蛋白的突变基因及其蛋白表达与毛母质瘤发生的关系。方法 选取67例毛母质瘤的组织标本进行β联蛋白的免疫染色,提取基因组DNA,进行β联蛋白的PCR扩增及测序,用克隆、测序及限制性内切酶的方法证实突变的存在。结果 毛母质瘤中嗜碱粒细胞β联蛋白免疫染色阳性率为81%(26/32),β联蛋白外显子3基因突变率为61%(14/23)。其突变均位于β联蛋白外显子3的磷酸化位点或邻近位点。结论 β联蛋白的基因突变及其核阳性与毛母质瘤的发生有关。     

干细胞因子及其受体在寻常型白癜风表皮中的表达

目的 探讨SCF/c-kit信号通路在白癜风发病中的作用。方法 采用免疫组化和RT-PCR法检测17例寻常型稳定期白癜风患者和10例正常对照标本中表皮角质形成细胞的干细胞因子表达及基底层黑素细胞c-kit的表达情况。结果 白癜风非皮损区干细胞因子、c-kit蛋白表达与正常对照无明显差异(P>0.05),皮损区干细胞因子表达显著高于正常对照皮肤(P<0.05),而c-kit表达显著低于正常对照皮肤(P<0.05)。白癜风非皮损区表皮干细胞因子、c-kit mRNA表达平均水平与正常对照近似(P>0.05);皮损区干细胞因子mRNA表达水平高于非皮损区及正常对照组差异有统计学意义(P<0.05);皮损区c-kit mRNA表达水平显著低于非皮损区及正常对照组(P<0.05)。结论 SCF/c-kit的异常表达可能与白癜风的发病有关。     

反义寡核苷酸抑制人恶性黑素瘤A375细胞乙酰肝素酶mRNA及其蛋白的表达

目的 研究乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞乙酰肝素酶mRNA及其蛋白表达的影响.方法 分空白组、无关序列(N-ODN)组和反义(ASODN)组,以脂质体包埋后分别转染人恶性黑素瘤细胞株A375,采用原位杂交、免疫组化法检测乙酰肝素酶mRNA及其蛋白表达的变化.结果 转染24 h后,ASODN组A375细胞乙酰肝素酶mRNA表达较对照组、N-ODN组均显著下调(P均<0.01);转染48 h后,与对照组、N-ODN组相比,ASODN组A375细胞的乙酰肝素酶蛋白水平均显著下降(P均<0.01).结论 乙酰肝素酶ASODN可下调A375细胞乙酰肝素酶mRNA及其蛋白的表达.