地龙提取液的新型抗凝活性

用碱水解后再用乙醇分级分离,从地龙中获得抗凝血酶活性。该活性不能被AT—Ⅲ抗体及鱼精蛋白中和,表明其活性表达不依赖于AT—Ⅲ。活性提取液在216nm处有单一吸收峰,费林试验阴性,双缩脲试验阳性,提示该活性不属多糖或蛋白质,而可能是一种耐碱耐热的小肽或含双键化合物,与肝素及其类似物、水蛭素等抗凝物质不相同。     

人胎盘酸性a-1,4葡萄糖苷酶的纯化研究

本文对GAA的纯化进行了改良，通过CM-SephadexC-50离子交换、酸化沉淀、（NH_4)_2SO_4分段盐析和SephadexG-100亲和层析等步骤，从人胎盘中提纯了GAA，其比活性为698，729nmol（mgPto．h）~（-1），纯化倍数达3319.4倍，获得率为10．58％。IEF证明已达电泳单点纯，PI=4.7。PAGE上呈现两条蛋白带，与酶染位点一致，分子量分别为110kD和76kD。     

双胸蚓纤溶酶Ⅲ的分离纯化及其性质研究

用硫酸铵分段盐析，ＤＥＡＥ－纤维素，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析的方法，从双胸蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）显示一条区带，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量为２２．１ＫＤ     

用离子交换树脂法纯化从蚯蚓体中提取的复合氨基酸

从昆虫蛹中提取各种氨基酸是目前医药和化妆品生产中氨基酸的主要来源。从蚕蛹及家蝇中提取复合氨基酸的方法时有报道。从蚯蚓体中提取复合氨基酸是一种较为简单、方便、经济的方法，因为蚯蚓生长发育快、繁殖力高、适应性强、易于人工养殖。干蚯蚓体中含有大量的蛋白质，有15种氨基酸，其中，亮氨酸的含量最高，其次为谷氨酸、天门冬氨酸，占2％以上的氨基酸有缬氨酸、赖氨酸、精氨酸和丙氨酸，     

赤子爱胜蚓DNase活性测定方法

目的　研究赤子爱胜蚓 -地龙组织提取物DNase活性测定方法。方法　应用单相酶扩散法和紫外吸收法分别对其酶解底物DNA测定。结果和结论　两种方法同时应用可扩大其测定酶活力范围 ,且两方法的数据结果间存在稳定的函数关系 ,为赤子爱胜蚓DNase以及其他DNase的活力测定提供了可行的实验方法。     

K562细胞DNA聚合酶α—DNA引物酶复合物的纯化

用磷酸纤维素、DEAE纤维素、单链DNA纤维素和AMP-Sepharcse的顺序柱层析法从人慢性骨髓细胞性白血病K562细胞中纯化了DNA聚酶α与DNA引物酶的复合物。纯化过程经多次重复,结果稳定。DNA聚合酶纯化了117倍,DNA引物酶纯化了4583倍。共纯度足以满足研究化疗药物对这两种酶的抑制作用的需要。     

大肠杆菌多核苷酸磷酸化酶的快速高效纯化

利用快速蛋白质液相层析仪从大肠杆菌纯化到2500倍的多核苷酸磷酸化酶,回收率45.5％,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示为单一组分,经测定未检出RNA酶、磷酸单酯酶和5’-核苷酸酶活性。     

补骨脂中补骨脂素的提取及纯化

目的从中药材补骨脂中提取补骨脂素。方法补骨脂经粉碎后用50％乙醇浸渍提取，浸提液进行浓缩沉淀，得到膏状物，膏状物用甲醇溶解，活性碳脱杂质，再除去溶剂，放置过夜析出晶体。甲醇洗去稠状物得黄色片状晶体，甲醇重结晶后得针状白色晶体。薄层分析、高效液相色谱分析其纯度。紫外吸收光谱、HI-NMR谱鉴定其结构。结果与结论晶体物得率0．147％．是一个单体，经过波谱分析确定其为补骨脂素。用本方法获取纯品补骨脂素比较简便的方法。     

霍乱肠毒素的纯化与鉴定

本法纯化的肠毒素有下列特点:1.纯化毒素与粗制毒素对抗血清呈现单一线条,并与标准抗血清完全融合。2.经免疫电泳、等电点聚焦电泳等方法测定其结果与美国制备肠毒素一致。3.本法所纯化的毒素与自然类毒素未分开,其家兔兰斑试验为IBD/0.002μg,回收率达35%,且杀弧菌抑制试验为阴性。     

金属硫蛋白的提纯

金属硫蛋白(MT)是一类广泛分布、富含半胱氨酸,可结合金属的低分子量非酶蛋白质。它在金属中毒、微量元素代谢调节和抗射线、自由基损伤等方面有重要作用。本研究提纯了兔肝MT_1和MT_2(rlMT_1、rlMT_2)。方法是:先给家兔多次皮下注射CdCl_2诱导MT合成,之后取肝作匀浆,经冷乙醇提取制得MT粗提液。该粗提液通过Sepbaclx G—50 柱(4.5×95cm)和DEAE-cellulose DE52 柱(2.5×4cm)层析,使分离出rlMT_1和rlMT_2两种亚型。鉴定表明,rlMT_1和rlMT_2的分子量均约14KD,纯度为SDS—PAGE分析呈单一条带,与Sigma标准品的分子量和纯度一致。氨基酸组成中,半胱氨酸和硫基含量都接近每分子20个,不含芳香族氨基酸和组氨酸。本次研究为探寻MT检测工作,推动我国MT的研究奠定了良好基础。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其动力学性质研究

目的：建立一种高效的蚯吲纤溶酶（ＥＦＥ）的分离纯化技术,并研究其特性。方法：蚯蚓经组织匀浆、缓冲液抽提与选择性热变性,再经抑制剂１,６－己二胺（ＨＤ）偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析。结果及结论：分离纯化得到具有强烈纤溶活性的酶组分（ＥＦＥ－Ｆ１、２,ＥＦＥ－Ｆ３）。其中ＥＦＥ－Ｆ３对合成底物Ｓ－２２８８和Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍ Ｐ的Ｋｍ分别是０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ和０．０２ｍｍｏｌ／Ｌ,ＨＤ的Ｋｉ为１ｍｍｏｌ／Ｌ;该酶热稳定性强,能抗４ｍｏｌ／Ｌ脲。     

α-1酸性糖蛋白的分离纯化

本文报道α-1酸性糖蛋白的分离纯化。人血清经DEAE-Sephadex-A50和ReactiveBlue 2-Sepharose CL-6B两次柱层析即可获得纯化的α-1酸性糖蛋白。纯化产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳、免疫电泳和琼脂双向扩散等证明,其纯度和特异性均符合要求。     

简便快捷的小鼠胰岛分离纯化方法研究

目的 探讨小鼠胰岛分离与纯化的方法.方法 采用多点注射灌注胶原酶法消化胰腺,不连续密度梯度离心联合人工挑取的方法分离、纯化胰岛.双硫腙特异性染色后计算胰岛产量及纯度.葡萄糖刺激后测定培养上清液胰岛素水平检测胰岛功能.结果 (1)每只小鼠采用上述分离、纯化法平均得到(114±15)个胰岛,平均纯度为(77.12±3.23)％,胰岛细胞存活率＞90％; (2)分离、纯化的胰岛培养上清液中胰岛素水平在无糖、低糖(2.8 mmol/L)和高糖(22.2 mmol/L)刺激下分别为(23.80±3.52) mIU/L、 (67.57 ±4.04) mIU/L和(164.32±10.75) mIU/L,各组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).两两比较,低糖组的胰岛素水平为无糖组的2.84倍(P＜ 0.05),高糖组的胰岛素水平为低糖组的2.43倍(P＜0.05),高糖组的胰岛素水平为无糖组的6.90倍(P＜0.05).结论 采用多点注射灌注胶原酶法消化胰腺,不连续密度梯度离心联合人工挑取的方法分离、纯化的小鼠胰岛产量及纯度较高,形态完整,不同浓度葡萄糖刺激后胰岛素分泌反应良好,是一种简便、快捷的小鼠胰岛分离方法.     

幽门螺杆菌HspA-UreB融合蛋白可溶性表达产物的纯化及活性鉴定

目的 :建立一种有效的纯化幽门螺杆菌HspA UreB融合蛋白可溶性表达产物的方法。方法 :基因工程重组大肠杆菌BL2 1(pET HU2 7)诱导表达产物 ,超声破碎后收集上清 ,上清经盐析初步纯化后 ,在 ¨AKTAFPLC上运用HiTrapChelatingHP分离纯化 ,用SDS PAGE和Bradford法检测目的蛋白的纯度和含量 ,用West ern blot对纯化后蛋白进行免疫学活性鉴定。结果 :纯化后HspA UreB融合蛋白的纯度 >90 % ,含量达 0 15mg/ml,并可以被免疫小鼠血清识别。结论 :建立了从BL2 1(pET HU2 7)可溶性表达产物中纯化高纯度HspA UreB融合蛋白的方法 ,为进一步的动物实验研究奠定了基础。     

茯苓多糖的分离纯化、组成及其抗氧化活性研究

目的 分离纯化得到带电性不同的茯苓多糖组分,分析其化学组成性质,比较多糖粗提物和其不同组分的抗氧化活性。方法 采用水提醇沉法提取茯苓多糖粗提物（Poria cocos Polysaccharide,PCP）,利用二乙氨基乙基（diehlaminowthy,DEAE）-纤维素阴离子交换色谱柱法对多糖粗提物进行分离纯化,得到不同带电性的多糖组分PCP-1（水洗糖）和PCP-2（盐洗糖）。结合紫外-可见光分光光度测定法、傅里叶红外光谱法、高效液相色谱-衍生化法、高效凝胶渗透色谱法和扫描电子显微镜法等方法对多糖粗提物和2种不同组分的化学组成性质进行研究。以多糖的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺盐自由基和羟基自由基的清除能力作为评估体外抗氧化活性指标。结果 PCP、PCP-1和PCP-2的多糖含量分别为78.16%、93.53%、90.84%,红外光谱出现相似吸收峰,均有多糖的典型吸收。3种多糖均为主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖按照不同比例组成的杂多糖,分别由不同分子量的多糖片段构成,微观形态没有显著差异。体外抗氧化实验提示PCP-2的体外抗氧化活性最高。结论 经过分离纯化后的不同茯苓多糖组分的化学结构性质不同,相较于茯苓多糖粗提物体外抗氧化活性更强,其中PCP-2的活性最强。     

人血管抑素的分离纯化及对不同细胞体外增殖的影响

目的：探讨人血管抑素（angiostatin)对不同细胞体外增殖的影响。方法：用亲和层析、分子筛技术及有限酶解法从人血浆组分Ⅲ中分离纯化得到人血管抑素（human angiostatin,以下简单称angiostatin)，采用MTT法分别分析angiostatin24h,48h,72h原培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)不同剂量angiostatin（20nmol/L,40nmol/L,80nmol/L,160nmol/L,320nmol/L及640nmol/L作用下HUVEC和小鼠肺动脉内皮细胞（1H11）、angiostatin为160nmol/L时其他细胞（7721、Hela,A431,A549,H128,K562,LIC,SL7,3T3)体外增殖的抑制率；透率电镜下观察angiostatin作用后1H11细胞形态的变化。结果：纯化的angiostatin能特异地抑制HUVEC细胞的体外增殖，且呈现一定的剂量和时间依赖性，HUVEC对angiostatin的敏感性高于1H11（P＜0．05）；对其他细胞株的体外外增殖无影响，透射电镜可见1H11内皮细胞出现典型的凋亡的形态学改变。结论：人血浆组分Ⅲ来源的angiostatin能特异地显著抑制内皮细胞的体外增殖，其作用机制之一是诱导内皮细胞凋亡。     

人血浆前白蛋白的分离和纯化

建立一种新的分离纯化人血浆前白蛋白（ＰＡ）的方法。由酚试剂沉淀后的血浆，通过离子交换树脂分离所得ＰＡ，用高效液相色谱仪（ＨＰＬＣ）进行纯化，经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其分子量在５５０００左右，纯度达到电泳纯和免疫纯。此法步骤简单，用血量少，适用于实验室常规操作和临床人体研究。     

链霉菌I06A-02580发酵产物的分离提取及其结构鉴定

目的从链霉菌I06A-02580中提取分离和纯化小分子血管内皮细胞生长因子（VEGF）受体抑制剂,并进行结构鉴定。方法以酪氨酸酶活性测定方法即酶联免疫吸附测定法（ELISA法）为活性跟踪方法,利用大孔吸附树脂方法、高效液相色谱（HPLC）等方法进行分离纯化。利用紫外（UV）、红外（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）四谱联合分析,进行结构解析。结果分离纯化到两个已知化合物大豆苷元和染料木素并具有相关活性。结论大豆苷元和染料木素为已知化合物,大豆苷元对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有抑菌作用;染料木素有抗真菌的作用。该研究为首次报道该化合物具有VEGFR拮抗活性。