青春期大鼠受己烯雌酚持续作用对成年后睾丸波形蛋白表达的影响

目的:探讨青春期大鼠受己烯雌酚(DES)持续作用,成年后睾丸曲细精管和间质区波形蛋白表达的影响。方法:将SD大鼠,随机分成对照组与3个DES实验组,对照组注射0.3ml纯玉米油,实验组分别注射含DES2μg·kg-1·d-1(低剂量组)、10μg·kg-1·d-1(中剂量组)、50μg·kg-1·d-1(高剂量组)的玉米油0.3ml,每组6只动物。各组隔日腹腔注射,28d后采集标本。采用免疫组化法观察睾丸波形蛋白的表达和变化。结果:在睾丸曲细精管内仅见波形蛋白表达于支持细胞胞浆,生精细胞中未见表达。在支持细胞中,波形蛋白由基膜基部绕核成环状,并随胞质呈辐射状向曲细精管管腔延伸。随着DES染毒剂量的增加,其表达变弱,向管腔的辐射状部分变短、消失。与对照组相比,DES实验组波形蛋白的阳性支持细胞表达率及表达量均显著下降(P<0.01),各实验组间比较均有显著性差异(P<0.01)。波形蛋白也见表达于睾丸间质区的间质细胞胞浆与结缔组织,3个实验组中的表达量分别与对照组相比均有显著性下降(P<0.01),低剂量组波形蛋白表达量与高剂量组相比也有显著减少(P<0.05)。各组波形蛋白在间质区的表达量均显著高于支持细胞胞浆的表达(P<0.01)。结论:青春期大鼠受DES持续作用后,成年大鼠睾丸支持细胞和间质区的波形蛋白表达量显著下降,且损伤呈剂量效应。     

雷洛昔芬和依普黄酮对去卵巢大鼠骨干力学的影响

目的:研究雷洛昔芬和依普黄酮对切除成熟卵巢大鼠骨干生物力学性能的影响,探讨此两种药物治疗绝经后骨质疏松症的疗效。方法:选用6月龄未交配健康雌性Sprague-Dawley大鼠50只,随机分为5组,每组10只:(1)假手术组(sham);(2)骨质疏松组(OVX);(3)OVX加戊酸雌二醇组(Valerate Estriol,E_2;0．8mg·kg~(-1)·d~(-1));(4)OVX加雷洛昔芬组(Raloxifene,RLX;5mg·kg~(-1)·d~(-1));(5)OVX加依普黄酮组(Ipriflavone,IPR; 100mg·kg~(-1)·d~(-1));于去势手术3周后开始按分组设计喂药(灌胃),治疗3个月后处死。取大鼠右股骨及第三腰椎测定骨密度;然后对右股骨中段进行三点弯曲试验,测定多个股骨干生物力学指标。结果:(1)骨密度:OVX组椎骨及股骨干骺端密度明显下降,使用E_2和RLX能够显著提升骨密度;但股骨干密度各组间差异无统计学意义;(2)骨干生物力学性能:三点弯曲实验结果显示,OVX组股骨干生物力学指标较sham组明显下降,用RLX和IPR治疗与E_2一样可阻止这种变化(P＜0．05)。结论:雷洛昔芬和依普黄酮能阻止卵巢切除所致的成熟雌性大鼠股骨干(皮质骨)生物力学性能受损。     

大鼠睾丸热作用后各类生精细胞DNA分析

目的:探讨热作用后大鼠睾丸各类生精细胞DNA变化和生精功能的改变。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠80只,随机分热处理组(43℃,30min)和对照组(22℃,30min),热处理组按热处理后0.5d、1d、3d、6d、10d、25d、35d和50d随机分成8个亚组(n=6),每亚组相应设立对照组(n=4)。应用流式细胞仪,对各组大鼠睾丸各类生精细胞DNA含量进行检测和分析。结果:与对照组相比较,热作用后0.5-35d组4C(初级精母细胞)细胞群和6-50d组1C(精子细胞和精子)细胞群的比例显著降低(P<0.05),3-35d组2C(精原细胞和次级精母细胞)细胞群比例显著升高(P<0.05)。8个实验组4C∶2C和3-35d组1C∶2C均显著低于对照组(P<0.05),1d组1C∶4C显著高于对照组(P<0.05)。结论:热作用后首先引起初级精母细胞数量显著下降,其次为精子细胞及精子。热作用使生精过程多个环节效率降低,流式细胞术是一种研究热作用引起生精功能变化的有效方法,有助于分析各类生精细胞在热损伤后的DNA变化。     

亚慢性口服氯化镉对成年大鼠睾丸生精功能的影响

目的:探讨亚慢性口服氯化镉(CdCl2)对成年SD大鼠睾丸生精功能的影响。方法:将SD大鼠分成8组,每组6只,分别喂含Cd2+0mg/kg(A组),8mg/kg(B组),40mg/kg(C组),200mg/kg(D组)的全价鼠粮1个月,及含Cd2+0mg/kg(E组),8mg/kg(F组),40mg/kg(G组),200mg/kg(H组)的全价鼠粮2个月。采用光镜和透射电镜观察睾丸生精上皮的组织学和细胞学变化,以精子常规参数来评价精子品质的改变。结果:光镜观察见D组和H组曲细精管初级精母细胞层与精原细胞层之间发生分离,局限性生精上皮脱落;H组生精上皮细胞层次减少。透射电镜观察到D组支持细胞胞质电子密度减小,残余小体增多,精原细胞核固缩,胞质内出现空泡。H组还出现曲细精管界膜内陷,支持细胞次级溶酶体、脂滴和残余小体增多,精子尾部中段外周致密纤维及外周微管部分缺失。D组体重增长值、睾丸每日精子生成量、附睾尾精子量与A组相比明显减少(P<0.05)。G和H组睾丸每日精子生成量、附睾尾精子量明显少于E组(P<0.01)。睾丸每日精子生成量、附睾尾精子量与染Cd2+剂量呈明显负相关关系(P<0.001)。H组与E组相比,体重增长下降,睾丸水肿,精子存活率、活动率和精子正常形态率下降,精子畸形指数上升(P<0.05)。结论:亚慢性口服CdCl2可造成成年大鼠睾丸生精上皮损伤,生精功能下降,损伤具有?     

枸杞多糖对生精障碍模型小鼠生精能力作用的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对生精功能和生精干细胞的影响。方法 122只雄性昆明小鼠中随机选取92只,通过35 mg/kg白消安造模,获得生精障碍动物模型,另外30只小鼠为正常对照组。40 d后对造模成功的小鼠随机分为自然恢复组(n=23)和LBP低剂量组(n=16,75 mg/kg)、中剂量组(n=19,150 mg/kg)、高剂量组(n=16,300 mg/kg),连续灌胃给药70 d(小鼠2个生精周期)后进行观察,并与正常对照组进行比较,观察其生理状态和生殖功能变化。结果 LBP在造模动物的外观体征、机能和行为的表现、动物正常发育状态(体质量)、生殖器官组织重量(睾丸、附睾和储精囊、前列腺-会阴复合体)、附睾精子质量、睾丸组织精子生成量、睾丸组织形态学和c-kit表达量、精曲小管直径和空泡化程度、生精上皮厚度和细胞层数、c-kit阳性细胞数、H-score评分、平均吸光度(IA)等系列指标均显示明显高于自然恢复组(P0.05,P0.01),并具有剂量效应关系,但仍未达到正常对照动物的水平。结论 LBP具有明显促进白消安生精障碍模型小鼠的生精能力的作用,可以显著增加生精干细胞、附睾精子质量和睾丸精子生成量。     

大鼠睾丸受氯化镉损伤后生精上皮恢复的观察

目的:探讨氯化镉(CdCl2)染毒大鼠致睾丸损伤后生精上皮能否恢复。方法:20只雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)与3个CdCl2实验组(B、C、D组),每组5只动物。B-D组的动物分别腹腔注射CdCl21mg/kg,qd×14d。对照组腹腔注射等体积0.9%NaCl。染毒结束后,处死A和B组大鼠,C组经口服灌胃给予ZnCl2100mg/kg,qd×7d,D组不给予ZnCl2。C和D组染毒结束后再继续饲养2个月(恢复期),观察睾丸生精上皮的组织学改变,比较4组的异常曲细精管率。结果:B组部分曲细精管显示病理改变,B组的异常曲细精管率与A组的比较有显著升高(P<0.01)。恢复期后C和D组的曲细精管有明显恢复,大多数曲细精管显示正常曲细精管组织学图像,C和D组的异常曲细精管率与B组的比较均有显著降低(P<0.01)。C和D组之间的异常曲细精管率比较没有显著差异(P>0.05)。结论:在本实验条件下,CdCl2损伤后的大鼠睾丸,在自然状态下和给予ZnCl2,生精上皮均可得到显著恢复。     

不同病因无精子症的生殖激素水平

目的 :探讨不同病因无精子症患者生殖激素水平及病变部位和睾丸生精功能的关系。方法 :采用 RIA法检测 6 5 1例患者血清中的生殖激素 FSH、LH、T、PRL值。结果 :FSH值升高者 ,病变在睾丸 ,且生精功能受损 ;而在正常值上限 2倍以上 ,则生精功能丧失。病变不在睾丸和特发性无精子症者 ,FSH值水平正常或低下 ,LH、T、PRL值不一 ,部分患者生精障碍可随疾病的治愈而恢复。结论 :生殖激素水平可表示无精子症的不同病因 ,FSH值的升高是睾丸生精功能损伤的指标     

喜炎平联合利巴韦林治疗小儿疱疹性咽峡炎的临床疗效观察

目的:评价喜炎平联合利巴韦林对小儿疱疹性咽峡炎的临床疗效。方法:将90例疱疹性咽峡炎患儿随机分为两组,均采用抗生素常规抗感染治疗,对照组患儿在此基础上给予利巴韦林10mg·kg~(-1)·d~(-1);研究组患儿在对照组基础上另给予喜炎平10mg·kg~(-1)·d~(-1),两组患儿均连续给药5 d,比较两组的临床疗效。结果:与对照组比较,研究组患儿在体温恢复至正常时间、咽峡疱疹消退时间均明显缩短,差异均具统计学意义(P<0.05);研究组与对照组总有效率差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论:喜炎平联合利巴韦林用于小儿疱疹性咽峡炎的临床疗效显著,值得推广。     

昆明山海棠片所致大鼠睾丸损伤的病理学研究

目的:观察昆明山海棠片连续给药90 d对大鼠睾丸结构的损伤。方法:80只SD雄性大鼠随机分为5.0 g/kg、10.0 g/kg、20.0 g/kg 3个给药组及正常对照组(等量蒸馏水),连续灌胃3个月。于给药1个月、2个月、3个月,采用光学显微镜、透射电子显微镜观察睾丸组织形态学的变化。结果:各给药组均可引起大鼠生精细胞损伤和破坏;睾丸超微结构的改变主要包括各级生精细胞坏死、空泡化,细胞质内溶酶体数量增多,线粒体肿胀、固缩,内质网扩张,细胞核染色质异常分布、溶解、固缩,核崩解消失等;支持细胞、间质细胞未见明显异常。结论:昆明山海棠片连续给药主要导致大鼠睾丸生精细胞超微结构损伤,其损伤存在剂量效应和时间效应关系。     

热诱导大鼠睾丸生精上皮多核细胞的出现和变化

目的:研究大鼠睾丸局部热作用后生精上皮多核细胞的出现和变化。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠50只,随机分热处理组和对照组,热处理组按热处理后1d、3d、6d、10d和25d随机分成5个亚组(n=6),每亚组相应设立对照组(n=4)。应用HE染色、原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法检测大鼠睾丸局部受热后1d、3d、6d、10d和25d生精上皮组织学结构变化,多核细胞凋亡情况以及Fas和FasL在多核细胞中的表达情况。结果:热作用后生精上皮出现多核细胞,以1d、3d组最多见,并且多核细胞存在凋亡现象, Fas和FasL在多核细胞中亦可见表达。结论:大鼠睾丸局部热作用诱导生精上皮多核细胞出现,且随热作用后时间不同而变化。多核细胞在生精上皮热损伤中可能具有独特的生物学意义。     

三七总皂苷对大鼠睾丸精子发生的影响

目的:探讨三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng,PNS)对大鼠睾丸曲细精管精子发生的影响。方法:20只雄性SD大鼠随机均分为对照组与3个实验组,每组5只动物。实验组经口灌胃分别给予含PNS300mg/kg(B组)、600mg/kg(C组)、900mg/kg(D组)的生理盐水1ml,对照组(A组)以等量生理盐水代替,连续给药14d。采用HE染色法观察睾丸曲细精管生精上皮和间质区的组织学改变,比较4组的睾丸每日精子生成量(DSP)和异常曲细精管率。结果:B和C组的睾丸组织学与A组的相似,D组的可见病理改变明显的曲细精管。3个实验组的间质区未见异常改变。3个实验组中以D组的DSP最低及异常曲细精管率最高,但3组的DSP和异常曲细精管率分别与A组的比较无统计学差异(P>0.05)。结论:本实验在组织学水平未显示PNS引起睾丸精子发生有显著的变化,但高剂量长期给予PNS对曲细精管的影响需予以重视。     

雷公藤单体(TW_(19))雄性抗生育活性的研究

雷公藤单体(TW_(19))系从雷公藤中分离、提纯出的一个二萜类化合物,本实验观察其对雄性大鼠抗生育作用及可能机理.TW_(19)(400μg/kg·d)给药三周后无抗生育作用,五周后生育力丧失,附睾尾部精子活力和密度明显降低,畸形率升高,附睾重量减轻,但对附睾上皮的形态变化无明显影响,管腔内可见畸形精子及脱落生精细胞.附睾尾部液中肉毒碱含量,给药组较对照组显著降低.TW_(19)对附睾头部α-糖苷酶和酸性磷酸酶含量没有明显影响;对生精上皮影响轻微,各期曲细精管基本正常,少数表现出精子细胞轻度损伤;TW_(19)可使睾丸重量减轻,并可显著降低睾丸透明质酸酶含量,但对睾丸乳酸脱氢酶-C_4没有明显抑制作用;对前列腺、储精囊等附属性腺器官重量没有影响.结论:TW_(19)对雄性大鼠具有确定的抗生育效果,作用环节可能在精子细胞及附睾.     

米非司酮对子宫内膜癌细胞株HHUA裸鼠移植瘤生长及survivin、caspase-3的影响

目的:研究米非司酮(mifeprisitone,MIF)对子宫内膜癌细胞系HHUA裸鼠移植瘤生长的抑制作用及对survivin、caspase-3的影响。方法:体外培养子宫内膜癌HHUA细胞接种裸鼠皮下建立裸鼠移植瘤动物模型,随机将20只移植瘤荷瘤裸鼠分为两组,分别用MIF、精制花生油治疗6周。观察治疗前后移植瘤体积的变化。HE染色观察肿瘤组织的病理变化。免疫组织化学染色法检测移植瘤组织survivin表达,Image-proplus 4．1．00软件分析系统进行染色结果半定量分析,应用RT-PCR方法检测肿瘤组织survivin、caspase-3的mRNA表达,并用Alphalmager 2200系统进行分析。结果:MIF组移植瘤体积115．25±10．97mm~3,对照组移植瘤体积313．25±43．92mm~3,二者差异有统计学意义(P＜0．01);HE染色示MIF组移植瘤坏死面积较对照组显著增加;MIF组survivin HSCOREs为85．9±11．2,对照组207．6±39．6,两者差异有统计学意义(P＜0．01);MIF组survivin mRNA光密度比值为1．65±0．17,对照组2．75±0．23,两者差异有统计学意义(P＜0．01);MIF组caspase-3的mRNA光密度比值为3．98±0．32,对照组2．12±0．25,两者差异有统计学意义(P＜0．01)。结论:MIF具有抑制子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的作用;其机制可能与下调survivin、上调caspase-3表达有关。     

Spermatogonial proliferation and apoptosis in hypospermatogenesis associated with nonobstructive azoospermia.

OBJECTIVE: To provide evidence that a pathological process in spermatogonial proliferation and apoptosis may participate in developing hypospermatogenesis of infertile men. DESIGN: Case-controlled retrospective analysis. SETTING: University-based male infertility clinic. PATIENT(S): Thirty-four patients with idiopathic hypospermatogenesis. INTERVENTION(S): Collecting blood samples for measurement of hormones and performing testicular biopsy for assessment of spermatogenesis. MAIN OUTCOME MEASURE(S): The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) of spermatogonia and the frequency of apoptosis of spermatogonia demonstrated by the in situ DNA 3'-end-labeling method were investigated to determine the degree of cell degeneration. RESULT(S): We could classify 34 infertile patients into four subgroups according to spermatogonial proliferation and differentiation. No significant difference in the expression of PCNA was demonstrated between these four groups and the control group. In all groups, the balance of spermatogonial proliferation (PCNA-positive rate) to apoptosis was significantly lower than that of the control group. CONCLUSION(S): It was demonstrated that accelerated apoptosis, rather than proliferative dysfunction in the mitotic phase, may induce the decreased number of spermatogonia in hypospermatogenesis. These findings suggest that disorders of the control and regulation of apoptosis may participate in the pathogenesis of idiopathic hypospermatogenesis.     

The effect of pure FSH administration in non-obstructive azoospermic men on testicular sperm retrieval

BACKGROUND: In cases of azoospermia due to impaired spermatogenesis, spermatozoa can be retrieved by sperm extraction (TESE) from testicular biopsy. OBJECTIVE: To evaluate the efficacy of pure follicle-stimulating hormone (pFSH) on sperm recovery, and measure the predictive value of testicular histology. STUDY DESIGN: In all, 108 patients were studied. These included those with Sertoli cell-only (n=16), focal spermatogenesis (n=36), maturation arrest (n=19) and hypospermatogenesis (n=37) in previous explorative biopsies. All had normal serum FSH, LH and testosterone levels. In 63 cases, 75IU pFSH were administered, either i.m. or s.c., three times a week, for 3 months and the control group (n=45) no treatment was given. RESULTS: The sperm retrieval rate was 64% (40/63 pts.) in pFSH treated men versus 33% (15/45 pts.) in controls (P<0.01). In Sertoli cell-only patients, the rate was 2/7 (28%) versus 4/9 (44%) in controls and treated men, respectively (P>0.05); and 3/8 (37%) versus 5/11 (45%) in maturation arrest (P>0.05); 6/14 (42%) versus 18/23 (78%) in hypospermatogenesis (P<0.05); and 4/16 (25%) versus 13/20 (65%) in focal spermatogenesis (P<0.01). Treatment with pFSH also improved the quantity of retrieved spermatozoa compared to control values (P<0.05). CONCLUSION: pFSH treatment improves the success of TESE for non-obstructive azoospermic men with normal FSH levels.     

Increased apoptosis of germ cells in patients with AZFc deletions

Purpose  

AZFc deletions are associated with variable testicular histology ranging from the Sertoli cell only to spermatogenic arrest and hypospermatogenesis. Such variable phenotypes may be explained by progressive germ cell regression over time. Increased apoptosis is likely responsible for progressive regression of spermatogenic potential. This study evaluated germ cell apoptosis as a cause of the progressive decrease in the number of germ cells in patients with AZFc deletions.     

A comparative study of three techniques for the analysis of sperm recovery: touch-print cytology, wet preparation, and testicular histopathology

Purpose: The aim of this study is to evaluate the efficacy of simultaneous testicular touch-print cytology, testicular histopathology, and wet preparation in nonobstructive azoospermic (NOA) males. Methods: Three hundred and sixty-three males with NOA underwent a multiple testicular sampling prior to ICSI for histopathologic evaluation, diagnostic testicular sperm extraction, and simultaneous touch-print cytology to evaluate sperm presence or absence. A total of 979 testicular samples were taken. Results: Sperm recovery was achieved in 106 cases (29.2%). Patients with hypospermatogenesis and focal spermatogenesis needed 2.8 and 5.9 biopsies, respectively, to retrieve spermatozoa, while in patients with germ cell aplasia and maturation arrest, even after eight to nine samples no spermatozoa were recovered. Neither the FSH levels nor the testicular volume was found to be significant in the prediction of sperm recovery. If only a single testis was to be biopsied, 25% of the cases with sperm recovery would have been missed. The combination of touch-print cytology with histopathology and wet preparation increased the accuracy of spermatozoa identification. Conclusion: Touch-print cytology was found to be more predictive than wet preparation in the diagnosis of spermatogenesis; moreover, it was found to be a quick and easy technique providing an accurate diagnosis in prediction of sperm recovery.