中药四性的生物热动力学研究——左金丸与反左金寒热药性的微量热学比较

目的 :从生物物理和生物化学的角度 ,探讨中药药性的客观真实性。方法 :利用微量热法 ,测定了大肠杆菌在左金丸、反左金水煮液作用下的生长热谱曲线 ,得到了相应的生物热动力学参数 ,结合本草文献报道 ,综合分析了左金丸与反左金的药性差异。结果 :左金丸、反左金水煮液均能不同程度地抑制细菌的生长 ,温热药方反左金使细菌指数生长期的生长速率常数显著减小 ,生长代谢过程中热量释放显著增加。寒凉药方左金丸则使细菌指数生长期的生长速率常数减小 ,生长代谢过程中热量释放有所增加 ,两者存在较稳定的差异。结论 :微量热法可作为刻划中药药性的有效的新方法。     

微量热法对小檗碱类生物碱抑菌作用的量效关系研究

目的测定黄连中的3种生物碱小檗碱、药根碱、巴马汀对痢疾杆菌生长代谢的影响,从热力学角度研究小檗碱类生物碱抑菌作用的量效关系。方法以微量热法测定小檗碱类生物碱作用于痢疾杆菌生长代谢的热谱曲线,并得出相应的热动力学参数,如生长速率常数、产热功率、最大热功率出现时间、抑制率、传代时间等,根据热动力学模型,拟合了3种生物碱产热功率-质量浓度关系,并进行初步的量效关系分析。结果小檗碱、药根碱、巴马汀对痢疾杆菌的生长代谢均有不同程度的抑制作用,在0.08～1.20 mg/mL内随着质量浓度的增加,最大热功率出现时间和传代时间延长,生长速率常数降低和最大产热功率降低,抑制率增加,且与药物质量浓度呈现一定的量效关系。结论 3种生物碱对痢疾杆菌的抑菌活性的强度顺序为小檗碱巴马汀药根碱,从热力学角度研究抑菌类中药的量效关系具有定量、灵敏、快速等优势。     

基于微量量热法的不同来源黄芩抑菌活性对比研究

目的:构建基于生物热技术的不同来源黄芩抑菌活性区分方法,基于生物热技术考察不同来源黄芩的抑菌活性差异。方法:采用微量量热技术,研究不同来源黄芩对大肠杆菌生长代谢的热动力学参数的影响,考察栽培区域、采收期、生长年限和种质等的差异对黄芩抑菌活性的影响。结果:不同产地黄芩热动力学参数特征差异较大,其抑制率在24.3%~129.5%,其中河北承德和内蒙古武川黄芩抑菌活性显著高于山东莒县和山西运城;随着药材采收月份的变化(7—11月),黄芩的抑菌活性出现了先下降后急剧增加的现象,且在11月份抑菌活性达到最强;对比不同生长年限的黄芩(2~5年),总体上黄芩药材的抑菌活性随着药材生长年限的增加而增强;多点试验考察不同种质黄芩药材抑菌活性发现,不同种质黄芩抑菌活性差异较大,其表现出来的抑菌活性与纬度跨越有关。结论:不同产地黄芩抑菌活性存在一定的差异,药材的采收时间、生长年限以及种质等的差异均能对黄芩抑菌率产生影响。基于生物热技术的微量量热技术用于不同来源药材的区分,较传统的药理、化学和形态学方法具有一定的便捷性和快速性,可作为进一步区分不同来源药材药效差异的依据之一。     

微量量热法研究天然中药的抗菌作用

 目的：利用微量量热法研究细菌在不同条件下的生长规律，评价天然中药的抗菌作用。方法：利用热活性检测仪，测定了白色葡萄球菌、大肠杆菌、福氏1a，1b，5b，6，x，y，3及绿脓杆菌在不同条件下的生长热谱曲线。根据细菌生长的Malthus模型，计算出各细菌在指定条件下的生长速率常数。以生长速率常数大小为依据评价天然中药的抗菌性能。结果：定性研究了黄连水煎液对白色葡萄球菌等8种细菌的抗菌作用。定量测定了丹参水煎液对福氏3和绿脓杆菌的抗菌作用，拟合出其抑菌生长的临界剂量分别为299.6μl／10ml和41.5μl／10ml。结论：微量量热法是体外研究天然中药抗菌作用的具有理论研究意义和实际应用价值的新方法。     

左金丸及反左金丸对寒性功能性胃肠疾病模型大鼠脑及胃肠组织c-fos表达的影响

目的:比较研究左金丸与反左金的作用差异。方法:选用SD大鼠将厚朴、枳实、大黄以3∶3∶2比例制成1g/ml水煎剂,隔日灌胃1次,剂量为10g/kg体重,同时隔日喂饲造成寒性功能性胃肠疾病模型。进行肛门直肠内压力测定,比较组间差异并重点考察了左金丸和反左金丸对寒性功能性胃肠疾病模型脑及胃肠组织c-fos阳性表达的影响。结果:反左金丸能明显改善寒性功能性胃肠疾病模型动物的状态,降低直肠内压力变化值,且能显著降低胃寒证模型动物脑及胃肠组织中c-fos的阳性表达,而左金丸的作用不明;吴茱萸能表现出与反左金丸相似的药理作用,而单味黄连的作用不明显。结论:左金丸及反左金丸对寒性功能性胃肠疾病模型的作用差异与方剂药物组成的寒热属性有关。     

川乌和石斛中的生物碱对金黄色葡萄球菌代谢作用的微量量热法研究

从中药川乌、石斛中提取其中的生物碱,用瑞典产的2277型热活性检测仪测定了不同浓度的生物碱液对金黄色葡萄球菌代谢作用的热功率--时间曲线,计算出细菌的生长速率常数,建立了生长速率常数与药物浓度之间的关系,进而确定了最佳抑菌浓度.     

左金丸及类方药性差异的生物热动力学研究

目的:从生物物理和生物化学的角度,探讨由不同比例黄连和吴茱萸组成的汤剂的生物热动力学。方法:黄连和吴茱萸在左金丸中的比例为6:1;甘露散为2:1;茱萸丸为1:1;反左金丸为1:6。利用微量热法,测定了金黄色葡萄球菌在左金丸、甘露散、茱萸丸和反左金丸水煮液作用下的生长热谱曲线,获得相应的生物热动力学参数,结合本草文献报道,综合分析左金丸及类方的药性差异。结果:左金丸及类方的水提取液对金黄色葡萄球菌的生长代谢表现出不同的活性作用。寒凉药方左金丸使细菌指数生长期的生长速率常数显著减小,发热功率显著降低。温热药方反左金丸使细菌指数生长期的生长速率常数和生长代谢过程中热量释放的减少不显著。寒热性能介于二方之间的甘露散和茱萸丸对细菌指数生长期的生长速率常数和热量释放的影响较小。四方之间存在较明显的药性差异,其抑菌作用强弱为:左金丸>甘露散>茱萸丸>反左金丸。结论:微量热法可作为刻画中医经典类方药性差异的有效方法。     

肠道菌群对中药有效成分代谢机制研究进展

通过对中药有效成分在肠道菌群作用下的代谢机制研究,为开展中药代谢研究提供参考。查阅国内外文献,本文主要针对黄酮类化合物,木脂素类化合物,萜类化合物,蒽醌类化合物,甾体类化合物和生物碱类化合物在肠道菌群作用下的代谢研究进行分析归纳总结。通过对中药有效化学成分在肠道菌群代谢的研究,有利于了解中药的作用机理及作用物质基础,并对加快中药现在化的发展起到一定的促进作用。     

微量热法对不同生长年份黄连品质的评价

目的尝试构建基于生物热力学表达的中药品质评价方法体系。方法以不同生长年份黄连为例,利用微量热法,测定黄连作用于大肠杆菌生长代谢过程中的热功率图,建立生物热动力学模型,分析热动力学参数、生物活性与化学成分之间的相关性。结果在不同生长年份黄连的作用下,大肠杆菌生长代谢的热功率图不尽一致,呈现较明显的指纹特征;与正常对照组比较,不同生长年份黄连均能不同程度地使大肠杆菌生长速率常数减小,传代时间延长,最大产热功率降低,说明不同生长年份黄连对大肠杆菌生长代谢均有不同程度的抑制作用,其中以含总生物碱最高的四年生黄连的抑制作用最强。结论不同生长年份黄连作用于大肠杆菌生长代谢过程的部分热动力学参数与热生物活性和化学成分之间具有显著的相关性;是具有实时、在线、微量、高效、高通量、普适性好等特点的生物热力学方法和指标,既可以间接地反映黄连的生物活性,也可作为评价中药品质的一种新方法。     

大鼠肠道菌群对芍药苷体外代谢转化的研究

为研究肠道菌群对芍药苷在体内吸收和代谢的影响,该课题在离体培养的大鼠肠道菌群中,加入芍药苷进行厌氧孵育,分析芍药苷在48 h内的变化过程,探讨体外大鼠肠道菌群对芍药苷的代谢转化。采用UPLC监测芍药苷在不同孵育时间点的变化,色谱条件为:WelchromTMC18色谱柱(4.6 mm×100 mm,5μm),流动相0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速0.4m L·min-1,柱温30℃;同时运用UPLC-Q-TOF-MS/MS对转化产物进行分析鉴定(ESI离子源,正离子模式检测),结合化合物精确相对分子质量和MS裂解碎片信息,并辅以保留时间及文献数据对代谢产物进行结构解析,分析芍药苷肠道代谢规律。结果发现孵育24 h后,芍药苷已经完全被代谢转化,得到的代谢产物包括芍药内酯苷、芍药内酯苷元、脱酰基-芍药内酯苷、脱酰基-芍药内酯苷元和芍药内酯B等。通过代谢途径分析发现,离体的大鼠肠道菌群先将芍药苷转化成芍药内酯苷,然后通过脱葡萄糖、脱苯甲酰基和四元环裂解重排等多个途径被进一步代谢,将芍药苷逐步转化生成相对分子质量更小、疏水性更强的代谢产物,从而更好被肠道吸收。     

仿生法提取左金丸工艺技术研究

目的左金丸方药仿生提取工艺的探索、改进与优化。方法以不同提取溶剂提取左金丸方药,并通过酸种类和pH值变化对工艺进行优化,采用高效液相色谱法对左金丸主要生物碱提取率进行测定和镇痛模型的药效学实验加以验证。结果用仿生提取法优化工艺后,相同时间内,人工胃液提取率最强(人工胃液>60%乙醇提液>人工肠液>水提液),且较之其他方法可提高近2倍或2倍以上,与水提和醇提组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01),且在提取的较短时间内可达到峰值。优化实验证明仿生提取液中采用盐酸调节pH值效果最好。镇痛实验表明胃液左金组与正常对照组相比,痛阈提高率存在显著性差异(P<0.05)。结论用仿生提取液作为提取工艺稳定可行,可作为左金丸提取工艺并为日后的剂型改造奠定基础。     

LC-MS/MS同时测定左金丸和香连丸中6种生物碱的含量

目的:建立左金丸(黄连、吴茱萸)和香连丸(黄连(吴茱萸制)、木香)中6种生物碱含量的LC-MS/MS测定方法。方法:色谱条件:Phenomenex Luna C18柱(5μm,250 mm×4.60 mm);乙腈-水(4 mmol/L乙酸铵和0.08%甲酸)为流动相,梯度洗脱;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,MRM模式。结果:左金丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的平均回收率分别为101.0%,101.3%、101.2%、100.2%、99.6%、99.7%,RSD分别为1.1%、1.8%、0.98%、1.0%、1.3%、1.3%,香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱和吴茱萸碱的平均回收率分别为101.6%、99.8%、101.9%、101.0%、101.3%,RSD分别为1.0%、1.9%、0.75%、1.1%、1.9%。结论:本方法可同时测定左金丸和香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,具有快速、简便等特点。     

RP-HPLC同时测定左金丸中盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

目的:建立同时测定左金丸中盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的液相色谱方法。方法:采用Agilent ODS C18柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈-0.3%磷酸-0.3%三乙胺为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0mL.min-1;柱温为40℃;检测波长为225nm。结果:盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在5.00～500.00(R2=0.9992)、1.13～30.00(R2=0.9999)、1.25～50.00(R2=1)μg.mL-1范围内有良好的线性关系,平均回收率分别为105.04%(RSD=3.04%)、92.98%(RSD=1.23%)、97.90%(RSD=1.44%)。结论:本方法准确、可靠、灵敏度高、重复性好,可用于左金丸制剂的质量控制。     

基于网络药理学探讨左金丸的作用机制

目的:探讨左金丸的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台、蛋白数据库、疾病数据库,查询左金丸有效化合物、相关靶蛋白和靶基因,构建成分-靶点网络图、靶点-疾病网络图和蛋白互作网络图,并对靶点蛋白进行基因本体生物学过程(GO-BP)和基因组百科全书(KEGG)通路分析和作图。结果:共获取槲皮黄酮、小檗碱等42个有效化合物,经分子在线对接平台筛选后,获取214个靶点、622种相关疾病、10个hub蛋白,包括白细胞介素-6、白细胞介素-10、基质金属蛋白酶-9等;GO-BP富集涉及转录调控、信号通路、物质反应、细胞凋亡等生物过程,KEGG分析涉及癌症、肝病、内分泌等相关信号通路。结论:左金丸作用靶点涉及癌症、肝病、代谢、心血管、炎症等疾病,与癌症尤为相关。     

反相高效液相色谱法测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱的含量

 目的建立同时测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量的反相离子对液相色谱法。方法采用Agilent ZOR-BAX SB-C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-乙腈-15 mmol·L^-1SDS水溶液(20∶40∶40,pH 7.5)流动相,检测波长343 nm。结果盐酸小檗碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为12～120和0.45～6.81 mg·L^-1,盐酸小檗碱的回收率为99.21%,RSD=1.60%;吴茱萸次碱的回收率为101.40%,RSD=3.32%。结论采用本方法同时测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量具有简便、快速、准确等优点。     

左金丸合香砂平胃散治疗胆汁反流性胃炎120例

目的：观察左金丸合香砂平胃散治疗胆汁反流性胃炎的疗效。方法：120例用左金丸合香砂平胃散治疗40天。结果：治愈68例,显效22例,有效20例,无效10例,总有效率91．7％。结论：用左金丸合香砂平胃散治疗胆汁反流性胃炎疗效较好。     

加味左金丸联合西药治疗胃溃疡随机平行对照研究

[目的]观察加味左金丸联合西药治疗胃溃疡疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将124例住院患者按病志号抽签简单随机分为两组。对照组62例奥美拉唑,40mg/次,2次/d,口服;克拉霉素,0.5g/次,2次/d,口服;阿莫西林,1g/次,2次/d,口服。治疗组62例加味左金丸,6g/次,2次/d,口服;西药治疗同对照组。连续治疗28d为1疗程。观测临床症状、胃溃疡性状、幽门螺杆菌、不良反应。治疗1疗程,判定疗效。[结果]治疗组痊愈23例,显效29例,有效8例,无效2例,总有效率96.77%。对照组痊愈18例,显效24例,有效11例,无效9例,总有效率85.48%。治疗组疗效优于对照组(P0.05)。[结论]加味左金丸联合西药治疗胃溃疡效果显著,值得推广。     

苗药联合左金丸治疗胃食管反流性咳嗽随机对照临床观察

[目的]探讨苗药联合左金丸治疗胃食管反流性咳嗽临床疗效。[方法]选取我院160例病例,分为对照组和治疗组,各80例。对照组给予西药治疗,治疗组在对照组的基础上给予苗药及左金丸,比较两组治疗效果。[结果]治疗组总有效率为93.75%,复发率22.50%;对照组总有效率为80.00%,复发率为55.00%,治疗组总有效率优于对照组,复发率低于对照组(P<0.05)。[结论]苗药联合左金丸治疗胃食管反流性咳嗽效果优于单纯采用西药治疗。