胃癌上皮-间充质转化过程中微小RNA-579-3p/含锌指和BTB域4通路的作用及其机制

目的探讨微小RNA-579-3p(miR-579-3p)/含锌指和BTB域4(ZBTB4)通路在胃癌上皮-间充质转化(EMT)中的作用机制。方法生物信息学筛选胃癌与癌旁组织差异表达的微小RNA(miRNA);实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测50例患者胃癌和癌旁癌旁组织中miR-579-3p、ZBTB4表达;检测胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株HGC27、AGS、MKN45中miR-579-3p的表达, 分析miR-579-3p与临床病理特征的关系。生物信息学分析miR-579-3p靶基因。双荧光素酶报告基因验证miR-579-3p与ZBTB4的调控关系。应用miR-579-3p抑制物(inhibitor)干扰HGC27细胞株miR-579-3p表达, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕实验、Transwell小室实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测mRNA和蛋白表达水平。采用t检验、χ2检验分析数据。结果生物信息学筛选后RT-qPCR检测结果发现miR-579-3p在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织(3.259...     

FEZF1-AS1靶向miR-610对膀胱癌细胞生长、迁移和侵袭的调节作用

目的:探讨长链非编码RNA FEZF1-AS1对膀胱癌细胞生长、迁移和侵袭的调节作用及其机制。方法:通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FEZF1-AS1和miR-610在膀胱癌组织中的相对表达量;通过在膀胱癌细胞中干扰FEZF1-AS1后,采用CCK-8实验检测膀胱癌细胞增殖能力的变化;采用Transwell迁移和侵袭实验检测膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,通过蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测FEZF1-AS1与miR-610的靶向结合,通过荧光素酶实验验证FEZF1-AS1和miR-610的靶向关系;通过细胞周期实验验证FEZF1-AS1对细胞周期的影响;通过细胞凋亡实验验证FEZF1-AS1对细胞凋亡的影响;通过裸鼠荷瘤实验验证FEZF1-AS1在体内对肿瘤细胞增殖的影响;通过以上实验推测FEZF1-AS1在膀胱癌中的作用。结果:FEZF1-AS1在膀胱癌组织中高表达(P0.01),miR-610在膀胱癌组织中低表达(P 0.01),二者呈负相关(r=-0.572 6,P=0.000 3);shFEZF1-AS1能显著抑制FEZF1-AS1表达并促进miR-610表达(P0.05),miR-610inhibitor可减弱sh-FEZF1-AS1对miR-610表达的促进作用(P0.05),FEZF1-AS1能明显抑制miR-610表达(P0.05),miR-610mimic可减弱FEZF1-AS1对miR-610表达的抑制作用(P0.05)。RIP实验显示FEZF1-AS1能够靶向结合miR-610;荧光素酶报告实验表明FEZF1-AS1序列上有miR-610的结合位点。sh-FEZF1-AS1能显著抑制T24细胞增殖、侵袭和迁移、抑制细胞分化、促进细胞凋亡(均P0.05);miR-610 inhibitor能显著减弱sh-FEZF1-AS1对T24细胞的增殖、侵袭、迁移、促进细胞分化、抑制细胞凋亡(P0.05)。结论:FEZF1-AS1可通过靶向miR-610促进膀胱癌细胞T24的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与FEZF1-AS1对miR-610的吸附有关。     

miR-597调控FOSL2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的 探讨miR-597对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,及其与FOS样抗原2(Fos-related antigen 2,FOSL2)的靶向关系。方法 选取乳腺癌细胞株T-47D,SK-BR-3,MDA-MB-231,MCF7及BT-474,正常乳腺细胞株MCF10A为研究对象,分别转染miR-597 (miR-597组)及RNA阴性对照序列(NC组),同时选取30例乳腺癌病人癌组织及癌旁正常乳腺组织,迅速液氮冻存以提取RNA用于qRT-PCR检测。采用实时荧光定量PCR法检测细胞、组织中miR-597表达水平; MTT、流式细胞术检测细胞增殖能力; Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力; Western blot检测细胞FOSL2表达水平;生物信息预测miR-597与FOSL2的靶向作用关系,荧光素酶实验验证。结果 乳腺癌组织miR-597水平低于正常乳腺组织,乳腺癌细胞株细胞miR-597表达低于正常乳腺细胞株细胞,差异有统计学意义(P 0. 01); miR-597组细胞增殖能力明显低于NC组,差异有统计学意义(t=9. 833,P=0. 003),miR-597组G0G1期细胞百分率高于NC组,S期细胞百分率低于NC组(t=10. 215,10. 336,P=0. 000,0. 000); miR-597组细胞侵袭能力低于NC组(t=8. 404,P=0. 000),miR-597组细胞迁移能力低于NC组(t=5. 801,P=0. 016); miR-597组细胞FOSL2表达水平低于NC组(t=13. 658,P=0. 000); miR-597与FOSL2有良好的靶向关系。结论 miR-597在乳腺癌组织及细胞株中低表达,其高表达可可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制与调控FOSL2有关。     

微小RNA-4317通过锌指蛋白322调控结肠癌细胞增殖和转移的分子机制

目的探讨微小RNA(miR)-4317通过锌指蛋白322(ZNF322)调控结肠癌细胞增殖和转移的分子机制。方法选取2019年6月至2022年6月河南省人民医院收集的68例结肠癌组织和癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析分析肿瘤组织和癌旁组织中miR-4317表达水平。人结肠癌细胞系SW1116分为miR对照组和miR-4317组, 分别采用miRNA对照慢病毒和miR-4317过表达慢病毒感染建立稳转细胞系, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验、划痕实验和Transwell分析两组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-4317的靶蛋白;蛋白质免疫印迹分析肿瘤组织和细胞靶蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果癌旁组织中miR-4317表达水平(1.13±0.14)明显高于结肠癌组织(0.67±0.11), 差异有统计学意义(t=21.120, P<0.05)。miR对照组细胞吸光度(A)值(2.00±0.08)明显高于miR-4317组(1.13±0.14), 差异有统计学意义(t=15.780, P<...     

长链非编码RNA牛磺酸上调基因靶向作用于微小RNA-145对甲状腺癌细胞侵袭的影响及其机制

目的观察甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因(TUG1)靶向作用于微小RNA(microRNA,miR)-145/锌指E-盒结合同源异形盒-1(ZEB1)对细胞侵袭能力的影响。方法实验标本选自2018年4月至2019年12月间河北医科大学第二医院甲状腺乳腺外科收集的甲状腺乳头状癌及癌旁标本共30例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法观察乳头状甲状腺癌及其癌旁组织中lncRNA TUG1及miR-145的表达水平;将lncRNA TUG1 shRNA和miR-145 mimics分别转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中,利用Transwell细胞侵袭实验观察lncRNA TUG1和miR-145对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响。应用生物信息学及双荧光素酶报告基因分析lncRNA TUG1和miR-145的关系及miR-145的靶基因。同时,利用蛋白质印迹法(Western blot)实验检测lncRNA TUG1和miR-145对靶蛋白表达水平的影响。两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析。结果实时荧光定量PCR实验结果显示,lncRNA TUG1在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平(4.43±0.07)高于癌旁组织(1.13±0.06),差异有统计学意义(t=3.124,P<0.05),miR-145的表达水平(0.39±0.08)低于癌旁组织(1.08±0.04),差异有统计学意义(t=2.937,P<0.05);甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中转染lncRNA TUG1 shRNA组及miR-145 mimics组侵袭细胞数[(292.4±48.2)、(234.2±42.4)个]低于各自对照组侵袭细胞数[(452.9±50.8)、(439.4±39.8)个],差异有统计学意义(t=3.205,P<0.05;t=3.186,P<0.05);生物信息学及双荧光素酶报告基因分析结果显示,lncRNA TUG1可以与miR-145互补结合,ZEB1是miR-145的靶基因;lncRNA TUG1 shRNA组细胞ZEB1蛋白表达水平(0.33±0.12)低于lncRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.17±0.12),差异有统计学意义(t=3.320,P<0.05),miR-145 mimics转染组细胞蛋白表达水平(0.46±0.11)低于miRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.05±0.12),差异有统计学意义(t=3.450,P<0.05)。结论lncRNA TUG1能够靶向作用于miR-145/ZEB1调控甲状腺癌细胞的侵袭能力。     

miR-301a在结肠直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的:分析结肠直肠癌组织miR-301a的表达及其与结肠直肠癌病人临床病理特征的关系。探讨下调miR-301a表达对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力以及PTEN蛋白表达的影响。方法:应用实时定量PCR方法检测48对结肠直肠癌组织和癌旁组织以及5种结肠癌细胞株中miR-301a的表达。应用瞬时转染方法将miR-301a抑制剂转入结肠癌细胞株HCT116后,用细胞增殖实验(CCK-8法)、transwell侵袭实验检测细胞的增殖和侵袭力;采用transwell迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;并用Western印迹技术检测下调miR-301a后其靶蛋白PTEN表达的变化。结果:PCR结果显示,miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较其对应的癌旁组织和无淋巴结转移的癌组织为高(P<0.05);5种结肠癌细胞中均有不同程度表达;transwell侵袭、迁移实验显示,miR-301a抑制剂转染后HCT116细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05);增殖实验显示,下调miR-301a对结肠癌细胞抑制作用明显(P<0.05)。划痕实验表明,miR-301a抑制剂转染组细胞迁移能力明显受到抑制。Western印迹法显示,miR-301a抑制剂转染组细胞PTEN蛋白表达增加。结论:miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较高;下调miR-301a的表达抑制HCT116细胞的增殖、侵袭和迁移能力,且PTEN蛋白表达增加。miR-301a对结肠癌细胞生物学功能的影响可能是通过PTEN信号通路实现的。     

微小RNA-1246靶向糖原合成酶激酶3β激活Wnt/β-连环蛋白信号通路促进前列腺癌细胞的迁移、侵袭和增殖

目的探讨微小RNA(miR)-1246靶向糖原合成酶激酶3β(GSK3β)对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭和增殖的作用及分子机制。方法采用miRNA-Seq技术检测PCa组织及癌旁组织中差异表达的miRNA;采用实时荧光定量聚合酶连反应(qRT-PCR)技术检测PCa患者癌组织和血清中miR-1246的表达水平;采用生物信息学分析、荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR、蛋白质印迹法分析miR-1246对GSK3β的靶向调控关系。人PCa细胞DU145和LNCaP分别转染miR-1246类似物(mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-1246抑制剂(inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor), 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖能力, 通过划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移侵袭能力。两组间比较采用独立样本t检验。结果 miRNA-Seq结果显示, 与癌旁组织比较, PCa组织中有15个miRNA表达显著升高, 51个miRNA表达显著降低, 其中miR-1246在PCa患者组织及血清中表达显著升高(组织:7.93±2.39比...     

CircDONSON靶向miR-4458对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨CircDONSON对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法检测肝癌组织中CircDONSON、miR-4458表达量;肝癌细胞Huh-7分为si-NC组、si-CircDONSON组、miR-NC组、miR-4458组、si-CircDONSON+anti-miR-NC组、si-CircDONSON+anti-miR-4458组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭情况;双荧光素酶报告实验检测miR-4458与CircDONSON靶向的关系;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果:肝癌组织中CircDONSON表达量较癌旁组织升高(4.82±0.38比1.00±0.12,P<0.05),miR-4458表达量较癌旁组织降低(0.34±0.04比1.00±0.07,P<0.05);抑制si-CircDONSON或过表达miR-4458降低肝癌细胞活力、划痕愈合率和MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.05)减少,细胞克隆...     

lncRNA SNHG8通过靶向miR-335-5p调控膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨lncRNA SNHG8对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其分子作用机制。方法选取本院2017年1月至2019年1月收治的30例膀胱癌患者的癌组织及相应的癌旁组织;将膀胱癌T24细胞分为si-NC组、si-SNHG8组、miR-NC组、pcDNA组、pcDNA-SNHG8组、miR-335-5p组、si-SNHG8+anti-miR-NC组及si-SNHG8+anti-miR-335-5p组。对各组细胞采用qRT-PCR、MTT、Transwell、Western blot和双荧光素酶报告实验等检测并进行比较分析。结果与癌旁组织比较, 膀胱癌组织中SNHG8的表达水平升高, miR-335-5p表达水平下降(均P<0.001)。抑制lncRNA SNHG8或过表达miR-335-5p后, T24细胞的活力、迁移和侵袭能力显著下降, CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低, p21蛋白表达水平升高(均P<0.001)。lncRNA SNHG8靶向调控miR-335-5p的表达水平。与si-SNHG8+anti-miR-NC组比较, si-S...     

MiR-4258靶向调控CDH19对膀胱癌T24细胞分化和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-4258在膀胱癌T24细胞分化和侵袭过程中的作用机制。方法 通过TargetScan和荧光素酶报告基因验证miR-4248靶基因。将T24细胞分为正常对照NG组、阴性对照miR-ctrl组、miR-4258inhibitor组和miR-4258mimics组,采用脂质体(Lipo 2000)细胞转染法转染;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time qPCR)检测组织和细胞的miR-4258表达水平;运用免疫印迹(Western blot)检测Cadherin-19(CDH19)、E-cadherin、α-SMA的表达水平。通过Transwell检测侵袭能力的变化,明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶2(MMP2)的活性。结果 miR-4258在膀胱上皮癌组织中的表达水平明显高于其癌旁组织,差异有统计学意义(t=3.711,P0.01);生物信息学预测和荧光素酶报告基因验证miR-4258作用靶点为CDH19 3′UTR。miR-4258mimics转染T24细胞后,CDH19和上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达水平较miR-ctrl组显著下调(P0.05),而α-SMA的表达水平较miR-ctrl组显著提高(P0.01);上调miR-4258表达MMP2的活性较miR-ctrl组显著提高(P0.01),同时T24细胞的侵袭能力也得以明显增强。结论 miR-4258调控靶点为CDH19,可能通过下调CDH19的表达水平,促进了T24细胞分化,增强了T24的迁移和侵袭能力。     

微小RNA-135a调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和凋亡

目的探讨微小RNA-135a(miR-135a)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能的机制。方法构建miR-135a过表达和空载病毒的Saos-2细胞分别为miR-135a UP组(实验组), Control组(对照组)。采用实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测c-Myc信使核糖核酸(mRNA)的改变, 采用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测c-Myc蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(PAM)通路蛋白的改变。细胞集落形成和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力, 划痕和Transwell实验分别检测迁移和侵袭能力, 细胞流式技术检测抗凋亡能力, 两组比较采用t检验。结果 miR-135a表达量实验组高于对照组(59.006±5.034比1.008±0.151, t=23.031, P<0.01), c-Myc与PAM通路蛋白表达量实验组低于对照组, 细胞增殖能力实验组低于对照组(CCK-8法:1.311±0.048比2.029±0.046, t=24.301, P<0.01...     

miR-4783-3p在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究miR-4783-3p在肝癌组织中的表达及对肝癌Huh-7细胞增殖及迁移产生的影响。方法采用cBioPortal数据库分析肝癌组织和癌旁组织中miR-4783-3p的表达, 严格按照Lipofectamine? 2000转染试剂盒说明书, 分别将miR-4783-3p过表达模拟物或过表达对照模拟物转染至Huh-7细胞, 即过表达组和对照组。通过CCK-8实验分析Huh-7细胞增殖情况, 细胞划痕法分析Huh-7细胞迁移情况。双荧光素酶报告基因法检测miR-4783-3p与胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)mRNA的靶向关系。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测IGFBP2mRNA的表达。Western-blotting检测IGFBP2蛋白和EGFR-STAT3分子通路蛋白的表达。正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示, 组间比较采用t检验或单因素方差分析。结果肝癌组织中miR-4783-3p的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。与对照组比较, 过表达组Huh-7细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。对照组和过表达组中Huh-7细胞划痕愈合率...     

miR-18a-5p通过靶向调控PTEN影响膀胱癌增殖迁移能力的研究

目的探索miR-18a-5p影响膀胱癌(BC)增殖迁移能力的分子调控机制。方法选取本院2019年至2021年行全膀胱切除手术的30例膀胱癌患者, 收集癌组织和癌旁组织样本。根据转染不同的小分子物质, 将T24和EJ细胞分为对照组、miR-18a-5p过表达组、miR-18a-5p干扰组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-18a-5p和PTEN基因的表达。采用Western blot检测PTEN蛋白水平的表达。采用EdU实验检测细胞增殖。采用Transwell实验检测细胞迁移。采用双荧光素酶实验验证miR-18a-5p与PTEN靶向关系。通过裸鼠皮下移植瘤实验验证miR-18a-5p对BC细胞增殖能力的影响。结果 miR-18a-5p在癌组织与T24和EJ细胞中均高表达(均P<0.05)。在PTEN-WT和miR-18a-5p模拟物共同转染后, 双荧光素酶表达明显下降(P<0.05)。miR-18a-5p过表达会导致PTEN表达水平下调(P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示, 与对照组比较, miR-18a-5p过表达组的肿瘤体积和重量明显增加(均P&...     

微小RNA-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法选取2020年5月至2022年5月我院收治的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-499-5p表达水平。采用对照miRNA和miR-499-5p抑制剂转染宫颈癌细胞Hela, 命名为对照miRNA组和miR-499-5p KD组, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)染色法分析肿瘤细胞增殖能力;采用划痕和Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-499-5p靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析两组细胞增殖、侵袭和靶蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果宫颈癌组织中miR-499-5p表达水平(1.78±0.21)明显高于癌旁组织(1.07±0.14), 差异有统计学意义(t=22.920, P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值水平(2.23±0.15)明显高于mi...     

微小RNA-590-5p靶向CCNG2对神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-590靶向CCNG2对神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法选取2017年3月至2021年3月南阳市中心医院收集的59例神经胶质瘤和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析分析癌旁组织和肺癌组织miR-590表达水平。神经胶质瘤细胞U251分为miRNA对照组、miR-590组和miR-590 KD组, 并采用转染试剂转染对照miRNA、miR-590-5p模拟物、miR-590-5p抑制剂, 48 h后检测。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞增殖能力;采用Transwell实验分析两组细胞的侵袭能力。采用成球实验和流式细胞术分析两组细胞的干细胞特性;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-590靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞和肿瘤组织靶基因的表达水平。组间比较采用t检验。结果癌旁组织中miR-590-5p表达水平(1.03±0.15)明显低于神经胶质瘤组织(2.25±0.27), 差异有统计学意义(t=30.640, P<0.05)。对照组细胞...     

微小RNA-125b靶向调控乳腺癌易感基因相关蛋白1调节胰腺癌细胞增殖及侵袭

目的探究微小RNA(miR)-125b可否通过调节乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)调节胰腺癌细胞的发生与发展进程, 探讨其在胰腺癌中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测2018年1月至2020年12月21例在我科接受手术患者的胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞系中miR-125b和其靶蛋白的表达水平。通过细胞克隆实验、流式细胞凋亡检测技术、划痕实验以及细胞侵袭实验检测转染前后胰腺癌细胞增殖、凋亡、细胞迁移和侵袭能力, 组间比较采用t检验。结果 miR-125b在胰腺癌组织中的表达显著上调(2.48±0.46比0.68±0.15, t=13.991, P<0.01)。过表达miR-125b组的BAP1的表达明显低于对照组(465.57±11.28比933.80±15.46, t=5.894, P<0.01)。过表达miR-125b组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组(214.56±8.45比78.43±5.15, t=3.482, P<0.01)。过表达BAP1组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显...     

MiR-134通过靶向调节KRAS抑制786-0肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程

目的探索miR-134在肾癌组织中的表达并研究其对肾透明细胞癌细胞786-0上皮间质转化的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中的表达情况;miR-134模拟物转染786-0后,划痕实验和Transwell实验分别检测肾癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况,Western blot检测细胞中靶蛋白KRAS及其相关信号通路蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-134与KRAS 3′-UTR结合情况。结果 MiR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中明显低表达(P0.01);miR-134模拟物转染后能够抑制肿瘤细胞侵袭(P0.01)和迁移的能力(P0.05),显著降低肿瘤细胞中KRAS蛋白的水平(P0.05)并抑制RAS/MAPK/ERK通路中关键蛋白p-ERK的表达(P0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-134能与KRAS 3′-UTR结合,显著降低荧光值(P0.05)。结论 MiR-134在肾透明细胞癌中显著低表达,能通过靶向抑制KRAS表达调控下游RAS/MAPK/ERK通路活性,阻滞786-0细胞上皮间质转化过程,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。     

miR-105-5p在胃癌中的表达及其意义与生物学功能

目的:探讨miR-105-5p在胃癌(GC)中的表达情况、临床意义及生物学功能及其潜在的作用机制。方法:应用real-time PCR检测miR-105-5p在GC组织与癌旁组织以及不同GC细胞(MGC-803,MKN-1,SGC-7901,BGC-823和AGS)与正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达;分析miR-105-5p的表达与GC临床病理特征及患者预后的关系;采用Transwell迁移和侵袭实验以及MTT实验检测miR-105-5p对GC细胞迁移与侵袭能力以及增殖能力的影响;应用生物信息学工具预测miR-105-5p的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-105-5p对靶点的调节作用。结果:miR-105-5p在GC组织的表达明显高于癌旁组织,在各GC细胞中的表达均明显高于正常胃黏膜细胞(均P0.05)。miR-105-5p的表达水平与肿瘤大小(P=0.020)和远处转移(P=0.004)明显有关;miR-105-5p低表达GC患者的总体生存率明显高于miR-105-5p高表达组的患者(P=0.001 8)。选择miR-105-5p表达量相对较低的BGC-823细胞和相对较高的MKN-1细胞,分别转染miR-105-5p模拟物和miR-105-5p抑制物,转染后结果显示,BGC-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,而MKN-1细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显抑制(均P0.05)。生物信息学分析发现,DIRAS家族GTP结合RAS样3(DIRAS3)可能是miR-105-5p的作用靶点;荧光素酶报告实验显示,miR-105-5p能够负向调节DIRAS3-3'UTR的荧光素酶活性;Western blot显示,转染miR-105-5p模拟物的BGC-823细胞中DIRAS3的表达明显下调,转染miR-105-5p抑制物的MKN-1细胞DIRAS3的表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-105-5p在GC中表达升高,其可能通过靶向作用于DIRAS3增强GC细胞的迁移、侵袭及增殖,进而促进GC的发生发展。     

miR-146a在原发性肝癌组织中表达及对细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-146a在原发性肝癌组织中表达,以及上调原发性肝癌HepG2细胞中miR-146a表达水平对细胞增殖和侵袭的影响。方法:2015年3月至2018年3月,行肝癌手术治疗的原发性肝癌患者89例,利用实时荧光定量PCR技术检测原发性肝癌和癌旁组织中miR-146a表达,培养HepG2细胞并分为miR-146a模拟物组、阴性对照组和空白组,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞中miR-146a表达,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:原发性肝癌组织中miR-146a相对表达量为0.36±0.09,癌旁组织中则为1.04±0.11,差异有统计学意义(t=43.947,P=0.000);miR-146a表达量在中高分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、发生淋巴结转移及有门静脉癌栓的原发性肝癌组织中降低(P 0.05);miR-146a模拟物组细胞中miR-146a相对表达量高于阴性对照组和空白组(P 0.05);miR-146a模拟物组24、48、72和96h时细胞吸光度A值低于阴性对照组和空白组(P 0.05);miR-146a模拟物组迁移细胞数和侵袭细胞数低于阴性对照组和空白组(P 0.05)。结论:miR-146a在原发性肝癌组织中呈低表达,且与肿瘤发生及恶性化进展有关,特异性提高HepG2细胞中miR-146a表达水平可降低细胞增殖能力,抑制细胞迁移和侵袭能力     

微小RNA-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响。方法选取郑州大学第一附属医院2017年1月到2021年12月手术切除的59例胆囊癌及其癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织miR-146b-5p表达水平;采用免疫组织化学分析两种组织Robo1蛋白表达水平。采用转染试剂转染miRNA对照和miR-146b-5p抑制剂至人胆囊癌细胞系GBC-SD, 分别命名为miRNA对照组和miR-146b-5p KD组, 采用噻唑蓝(MTT)和克隆形成实验分析两组细胞活力和增殖能力;采用划痕实验、Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力;采用生物信息学和荧光素酶报告基因分析miR-146b-5p的靶基因;采用Western blot分析靶基因表达水平。计量数据比较采用t检验。结果胆囊癌组织miR-146b-5p表达水平(1.01±0.16)明显低于癌旁组织(1.94±0.30), 差异有统计学意义(t=20.860, P<0.05)。mi...