JAK2/STAT3通路参与过氧化氢抑制小鼠原代颗粒细胞增殖的研究

目的通过过氧化氢(H2O2)处理体外培养的小鼠原代颗粒细胞(mGC),探讨JAK2/STAT3信号通路在H2O2抑制mGC增殖中的作用。方法应用H2O2、JAK2抑制剂AG490(不同浓度、不同作用时间)处理mGC;用CCK-8、增殖细胞核抗原蛋白(PCNA)水平检测细胞增殖情况,RT-PCR检测JAK2mRNA水平,Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Cyclin D1的蛋白表达水平。结果 H2O2与AG490均以剂量和时间依赖方式降低mGC活率。750μmol/L的H2O2处理mGC 24h明显降低细胞活率(P0.01),降低PCNA蛋白水平(P0.01),并下调JAK2mRNA和蛋白表达水平(P0.01);80μmol/L的JAK2抑制剂AG490可降低细胞活率(P0.01),且使细胞中的p-JAK2、JAK2、STAT3、p-STAT3、PCNA、Cyclin D1表达均下降(P0.05)。结论 H2O2抑制mGC增殖可能与JAK2/STAT3信号通路有关。     

连翘苷调节相关信号通路对地塞米松诱导的成骨细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨连翘苷(phillyrin, PHN)调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对地塞米松(dexamethasone, DEX)诱导的成骨细胞自噬和凋亡的影响。方法 将MC3T3-E1细胞分为对照组(NOR组)、DEX组(10μmol/L DEX处理MC3T3-E1细胞)、L-PHN组(5μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、M-PHN组(10μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、H-PHN组(20μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、ZSTK474组(用20μmol/L PHN和2μmol/L的PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂ZSTK474处理MC3T3-E1细胞);MTT法检测细胞毒性和细胞活力;流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡;透射电子显微镜(TEM)观察自噬小体;Western blot法检测MC3T3-E1细胞中自噬、凋亡和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达;ALP活性及ALP染色检测MC3T3-E1细胞分化能力。结果 0～80μmol/L PHN对...     

JAK2/STAT3信号通路在大脑缺血缺氧后小胶质细胞活化中的作用

缺血缺氧脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是导致新生儿死亡和婴幼儿神经发育障碍的主要原因,部分患儿有不同程度的神经系统后遗症,如脑瘫、认知和运动功能发育障碍。缺血缺氧可激活JAK2/STAT3信号通路,进而导致小胶质细胞异常活化,引发神经炎症反应;通过下调JAK2/STAT3信号通路可抑制小胶质细胞异常活化,改善神经系统炎性损伤。当前缺血缺氧脑病的治疗方法有限,因此研究小胶质细胞活化的调控机制对于缺血缺氧脑病的治疗具有重要临床价值。本文对JAK2/STAT3信号通路在小胶质细胞活化中的作用及二者相互关系的研究进展作一综述,以期为缺血缺氧脑病的治疗提供新的研究思路。     

骨质疏松中的自噬相关信号通路

骨质疏松症（osteoporosis,OP）是以全身性骨量的丢失、骨微观结构的退行性改变为特征的骨骼疾病,根本原因在于成骨细胞和破骨细胞的动态平衡失调。自噬（Autophagy）能够通过影响成骨和破骨细胞分化的过程改变两者的平衡关系,这就提示我们可以从调控自噬的角度对骨质疏松的病情发展进行干预。本文就自噬的信号通路在骨质疏松症方面的研究进展进行综述,希望为进一步探究自噬信号通路的内在调控机制,选择适当的干预靶点,选择性发挥自噬对成骨、破骨细胞的调节作用,为临床上治疗骨质疏松症提供新的思路。     

SOX2基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的影响研究

目的 探讨SOX2基因对人骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响及机制。方法 以正常软骨组织作为对照,通过Western blotting检测OA软骨组织SOX2蛋白表达。从人OA中分离软骨细胞,参照Lipofectamine TM2000说明将重组体pcDNA3.1-SOX2及空载体pcDNA3.1转染软骨细胞,并设置空白对照组。AG490作为JAK2/STAT3信号通路抑制剂,各组细胞处理48 h,通过流式细胞术、ROS试剂盒分别检测各组细胞凋亡率及ROS水平。Western blotting检测JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3的蛋白相对表达量。结果 人OA软骨组织SOX2表达明显低于在正常软骨组织表达（0.065±0.009 vs 0.313±0.028, P<0.05）。转染pcDNA3.1-SOX2的OA软骨细胞SOX2表达明显高于空白组（0.556±0.048 vs 0.122±0.013, P<0.05）。pcDNA3.1-SOX2可明显降低OA软骨细胞凋亡率(3.11±0.42 vs 8.54±0.68)及ROS水平(23.46±2.15 vs 52.67±4.41),上调p-JAK2（0.142±0.013 vs 0.065±0.009）和p-STAT3表达（0.218±0.020 vs 0.126±0.015）（P<0.05）,AG490（15.23±1.13 vs 8.15±0.62）可诱导OA软骨细胞凋亡,而pcDNA3.1-SOX2可减弱AG490对OA软骨细胞凋亡促进作用（P<0.05）。结论 SOX2可抑制OA软骨细胞凋亡,其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路有关。     

白头翁皂苷B4通过调控JAK/STAT3信号通路抑制SKOV3细胞增殖并诱导凋亡的研究

目的:探索白头翁皂苷B4对卵巢癌SKOV3细胞株细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,利用CCK-8法检测不同浓度白头翁皂苷B4处理SKOV3细胞后其增殖情况,并计算IC 50值;流式细胞术检测IC 50值浓度下不同时间白头翁皂苷B4处理细胞后的凋亡情况;Tra...     

基于JAK/STAT信号通路探讨夏枯草提取物对间变性大细胞淋巴瘤的作用及机制研究

目的 研究夏枯草提取物对间变性大细胞淋巴瘤作用及机制.方法 收集2011年到2021年淋巴瘤患者的病历资料,详细筛选并规范化处理,将其录入数据挖掘系统"中医传承辅助平台V2.5",建立处方数据库,采用频数分析的方法,对处方用药进行研究.体外培养Karpas299细胞,采用CCK8的方法计算不同浓度的夏枯草提取物在不同时...     

紫草素调控PI3K/Akt/mTOR通路对人胃癌MGC803细胞自噬和凋亡的影响

目的：研究紫草素对人胃癌MGC803细胞自噬和凋亡的影响及作用机制。方法 ：取对数生长期MGC803细胞,设空白对照组、紫草素组、紫草素+IGF-1(PI3K激活剂)组、紫草素+LY294002(PI3K抑制剂)组。药物干预24 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,GFP-LC3质粒转染法观察细胞自噬小体,Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR、Caspase-3、cleaved Caspase-3、LC3、Beclin-1的表达。结果：与空白对照组比较,紫草素组细胞增殖抑制率、凋亡率升高（P<0.05）,自噬小体数量明显增多,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平降低（P<0.05）,cleaved Caspase-3/Caspase-3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及Beclin-1表达量升高（P<0.05）。IGF-1可明显逆转紫草素对MGC803细胞增殖抑制、凋亡、自噬,PI3K、Akt、mTOR磷酸化和cleaved Cas...     

益母草碱对骨关节炎大鼠细胞自噬的机制研究

目的 探讨益母草碱对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞自噬和凋亡的影响以及PTEN诱导假定激酶1(PINK1)/帕金森病蛋白(Parkin)信号通路发挥作用。方法 采用标准前交叉韧带横断术(ACLT)构建OA大鼠模型,将建模成功的大鼠分为OA组、益母草碱-L组、益母草碱-M组、益母草碱-H组,每组12只,另取12只为假手术组;HE染色检测各组大鼠软骨细胞形态变化;透射电镜观察各组大鼠软骨细胞超微结构;TUNEL法检测各组大鼠软骨细胞凋亡;RT-qPCR检测各组大鼠软骨组织PINK1、Parkin、P62、LC3B mRNA表达水平;Western blot检测各组大鼠软骨组织PINK1、Parkin、P62、LC3B蛋白表达水平。结果 与假手术组相比,OA组大鼠软骨形态异常、结构模糊、表面出现裂缝、软骨细胞线粒体数量减少、少量自噬体存在,软骨细胞凋亡率、软骨组织P62 mRNA和蛋白水平显著升高,软骨组织PINK1、Parkin、LC3B mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05)。与OA组比较,益母草碱-L、M、H组大鼠软骨形态逐渐恢复、结构逐渐清晰、表面裂缝减少、软骨细胞数量恢复、...     

自噬在肿瘤细胞休眠中作用及相关机制研究进展

转移和复发占肿瘤相关死亡的绝大多数。原发肿瘤治愈后或于数月、数年、数十年内出现复发转移。常用的抗癌药物通常作用于增殖活跃的癌细胞,肿瘤细胞在休眠状态下出现耐药并逃避常规治疗,导致近期或远期肿瘤复发,但相关分子机制尚不完全清楚。自噬在休眠的肿瘤细胞中高度活跃,多项研究初步表明自噬在肿瘤细胞休眠状态的启动和维持以及从休眠状态到增殖状态的转换中发挥了重要的作用,但具体机制有待进一步论证。     

藕节对糖尿病肾病大鼠肾组织JAK2/STAT3及凋亡因子表达的影响

也页目的：探讨藕节对糖尿病肾病大鼠肾组织p-JAK2、p-STAT3及凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠60只,随机选取10只为正常组（ N组）,其余采用单次腹腔注射链尿佐菌素（ STZ,45 mg/kg）制作DN模型,造模成功后随机分为糖尿病肾病组（DN）、藕节小剂量组（RL,1.5 g·kg-1·d-1）、中剂量组（RM,3.0 g·kg-1·d-1）、大剂量组（RH,6.0 g·kg-1·d-1）及氯沙坦钾组（LP,30 mg·kg-1·d-1）,均采用灌胃给药,N组和DN组给予等量蒸馏水。12周后检测大鼠生化指标;HE、Masson染色及电镜观察肾脏病理改变;免疫组化法测定p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2及Bax在肾组织表达情况;原位末端标记法（ TUNEL）检测肾组织细胞凋亡情况。结果：实验12周末,与N组比较,DN组大鼠肾小球肥大、系膜基质增多、细胞凋亡明显,BUN、Scr、24 h尿蛋白定量明显升高（P〈0.05）,肾组织Bax、p-JAK2、p-STAT3表达明显上调,Bcl-2表达下调（P〈0.05）;与DN组比较,藕节中、高剂量组肾脏病理改变减轻、细胞凋亡减少,24 h尿蛋白定量较DN组明显降低（P〈0.05）,但降尿蛋白作用弱于氯沙坦钾组,同时肾组织Bax、p-JAK2、p-STAT3表达下调,Bcl-2表达上调（P〈0.05）。结论：藕节可能通过上调Bcl-2在肾组织的表达,下调Bax、p-JAK2、p-STAT3的表达,从而减少尿蛋白,延缓DN进展。     

阿托伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾组织中JAK/STAT信号通路及其抑制因子SOCS-1表达的影响

目的：观察糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织中JAK-STAT-SOCS负反馈调节机制的变化,以期阐明阿托伐他汀对DN炎症发病机制及其防治措施。方法：60只Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组（对照组）、DN模型组（模型组）、阿托伐他汀治疗组（治疗组）,每组20只,利用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素（50mg/kg）建立DN大鼠模型,治疗组每日每只灌胃阿托伐他汀（8mg·kg-1·d-1）,正常对照组及模型组每日每只给予等量蒸馏水,连续给药12周。记录大鼠体重;观察尿微量白蛋白（MALB-U）、24h尿蛋白定量（24hUpr）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）变化;取肾组织行PAS、HE染色观察病理组织学变化;用免疫组织化学染色方法检测肾组织中p-STAT3,p-JAK2,SOCS-1表达水平的变化。结果：12周末,模型组大鼠MALB-U、24hUpr、Scr、BUN显著升高,与对照组比较（P〈0.05）;阿托伐他汀治疗后,各指标显著降低,与模型组比较（P〈0.05）。12周时模型组大鼠肾组织中p-STAT3、p-JAK2、SOCS-1表达水平升高,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;经阿托伐他汀治疗12周后,大鼠肾组织SOCS-1表达水平较同期模型组明显上调（P〈0.05）,而p-STAT3、p-JAK2的表达受到抑制,低于同期模型组（P〈0.05）。结论：JAK-STAT-SOCS负反馈调节机制可能参与DN的发病过程;阿托伐他汀可能通过调节肾组织p-STAT3、p-JAK2、SOCS-1的表达,减轻DN大鼠的炎症反应,对肾脏有一定保护作用。     

Effect of the JAK2/STAT3 signaling pathway on epithelial mesenchymal transition of the peritoneum in uremic peritoneal dialysis rats

Objective To investigate whether the JAK2/STAT3 signaling pathway is involved in the epithelial-mesenchymal transition (EMT) of peritoneal mesothelial cells in uremic peritoneal dialysis (PD) rats. Methods A total of 48 male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly separated into six groups: normal control group (NC group, n=8), sham group (n=8), uremic group (n=8), PD group (n=8), S3I-201 control group (n=8) and S3I-201 group (n=8). Uremic model generated by 5/6 nephrectomy surgery in rats was established. The rats of PD group, S3I-201 control group and S3I-201 group received daily infusion of 4.25% glucose-based peritoneal dialysate fluid (3 ml/100 g) from PD catheters for 28 days. Rats of S3I-201 group were injected with STAT3 inhibitor S3I-201 (2.5 mg/kg) solution from the catheters every other day; the same dose of the solvent of S3I-201 was simultaneously given to S3I-201 control group rats. After PD for 28 days, peritoneal function, pathologic changes, and microvessel density (MVD) were evaluated. Creatinine, urea nitrogen and interleukin-6 (IL-6) concentration in blood and dialysate, and protein and mRNA levels of phospho-JAK2 (p-JAK2), phospho-STAT3 (p-STAT3), E-cadherin, alpha-smooth muscle actin (α-SMA) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in peritoneum were determined. Results Uremia and peritoneal dialysate could aggravate the peritoneal function and elevate peritoneal thickness and MVD. They could also increased the concentration of IL-6 in blood and dialysate and the expression levels of α-SMA, VEGF, p-JAK2 and p-STAT3 in peritoneum, while lowering E-cadherin expression in peritoneum. These manifestations were even more remarkable in PD group compared to those in uremic group. There was no statistical difference between the S3I-201 control group and the PD group as regards all the index (all P＞0.05). Compared with the S3I-201 control group, the rats treated with S3I-201 showed better peritoneal function. S3I-201 could reduce peritoneal thickness (P＜0.05), MVD (P＜0.05), the concentration of IL-6 in blood and dialysate, the mRNA and protein expression of α-SMA, VEGF, p-JAK2 and p-STAT3 (all P＜0.05), while enhance the mRNA and protein expression of E-cadherin (all P＜0.05). Conclusions After STAT3 is inhibited, the peritoneal thickness, MVD and IL-6 concentration in PD rats are decreased, and EMT is also inhibited, while peritoneal function is improved. The JAK2/STAT3 signaling pathway may thus be involved in the process of EMT of peritoneum in uremic peritoneal dialysis rats by regulating the expression of IL-6.     

再生美 Wnt-5ARor2 信号通路的软骨细胞增殖方法

目的 探讨再生美Wnt-5ARor2信号通路的软骨细胞增殖方法。方法 配置软骨细胞的培养基,制备与培养软骨细胞,分析不同浓度细胞增殖制剂对软骨细胞生长的影响,同时添加两种增殖制剂对软骨细胞生长的影响,采用WESTERN检测芦荟大黄素和咖啡酸对于细胞增殖的信号途径。结果 将相应浓度的芦荟大黄素及咖啡酸添加培养基中能够促进软骨细胞的培养,其增殖效果优于其他培养基。结论 再生美能够通过对Wnt-5ARor2信号通路进行抑制的途径调控IL-1β诱导软骨细胞增殖及再生。     

骨痨愈康丸通过JAK3/STAT3信号通路对佐剂性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的 基于JAK3/STAT3信号通路探讨骨痨愈康丸对类风湿关节炎模型大鼠的影响机制。方法 将60只Wistar大鼠,随机分为正常对照(Control)组、模型(CIA)组、骨痨愈康丸(GL)组、骨痨愈康丸+JAK受体酪氨酸激酶抑制剂AG490(GL+AG490)组、JAK受体酪氨酸激酶抑制剂AG490(AG490)组,除正常对照组外,其余四组均建立胶原诱导性类风湿关节炎(CIA)大鼠模型。通过ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6、IL-17水平,运用免疫组化法与实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测踝关节软骨和滑膜组织中JAK3、STAT3蛋白及mRNA的表达情况。结果 与Control组比较,CIA、GL、GL+AG490、AG490组大鼠踝关节肿胀明显,伴关节畸形、大鼠活动明显减少、跛行、毛色暗淡无光泽、体重减轻;模型大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-17水平显著升高;JAK3、STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05)。与CIA组相比,各治疗组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-17水平降低;JAK3、STAT3蛋白及mRNA表达下调(P...     

MiR-197靶向JAK2调节人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖侵袭能力的研究

目的:探讨miR-197通过调控JAK2对人皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖和侵袭的影响。方法:收集2018年7月-2019年5月于笔者医院经手术切除且被证实为皮肤鳞状细胞癌的组织标本以及对应的癌旁组织标本各40例,RT-qPCR检测miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织、癌旁组织、人正常皮肤细胞系HaCaT、人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431、A431-miR-197-siRNA和A431-miR-197-siRNA-NC中的表达情况;Western-Blot检测JAK2在各细胞株中的表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-197和JAK2的靶向关系;MTS法检测miR-197对A431增殖能力的影响;Transwell检测miR-197对皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响;IFA检测miR-197对上皮间质转化(EMT)相关分子N-cadherin表达的影响。结果:miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织和皮肤鳞状细胞癌细胞株A431中的表达水平分别高于癌旁组织和人正常皮肤细胞系HaCaT,差异均具有统计学意义(P<0.05);与A431和A431-miR-197-siRNA-NC相比,稳定下调细胞系A431-miR-197-siRNA中miR-197、JAK2的表达水平均显著下降(P<0.05)。经Target Scan数据库分析发miR-197和JAK2有互补结合位点。下调miR-197能显著降低皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力,同时抑制N-cadherin的表达水平。结论:下调miR-197能够靶向抑制皮肤鳞状细胞癌中JAK2的表达和降低EMT相关分子N-cadherin的表达,进而抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的EMT进程以及增殖侵袭能力。