MMP-1在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：在基因和蛋白水平检测体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）金属基质蛋白酶-1（MMP-1）的表达情况。方法：①收集4～6代体外培养的人PDL细胞,使用PCR方法检测细胞内MMP-1的基因表达;②取细胞外液用Westernblot方法检测MMP-1蛋白表达。结果：PCR结果显示MMP-1在PDL中基因水平上有表达,而Westernblot结果在蛋白水平上也证明了MMP-1在PDL中有表达,结论：体外培养的PDL具有MMP-1的功能。     

葡萄糖对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKLmRNA表达的影响

目的：以体外培养的人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）为研究对象,观察不同浓度的葡萄糖对HPDLF中骨保护素（OPG）、核因子KB受体活化剂配体（RANKL）mRNA表达的影响,探讨葡萄糖在牙槽骨吸收中的作用。方法：组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,选择4-8代的HPDLF作为实验的靶细胞,不同浓度的葡萄糖（0、5．5、11．1、16．7、22．2、33．3mmol／1）干预HPDLF,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果：高浓度的葡萄糖可下调HPDLF中OPG mRNA的表达,呈剂量依赖性;可上调RANKL mRNA的表达,也呈剂量依赖性,且使RANKL／OPG mRNA的比值随着葡萄糖浓度的增高而呈现持续上升的趋势。结论：糖尿病时,牙周组织中高浓度的葡萄糖,可下调OPG的表达,上调RANKL的表达,使RANKL／OPG的比值升高,调节破骨细胞分化,刺激骨吸收,导致牙槽骨的破坏,加重牙周病的病情。     

脂多糖对小鼠肺成纤维细胞Thy-1 mRNA表达的影响

目的 评价脂多糖(LPS)对小鼠肺成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)mRNA表达的影响.方法 原代培养小鼠肺成纤维细胞接种于96孔培养板密度(1×104/ml).培养48 h后,将其分为4组(n=3):PBS对照组(C组)、0.01 μg/ml LPS组(LPS0.01组)、0.10 μg/ml LPS组(LPS0.10组)和1.00μg/ml LPS组(LPS1.00组),分别加入PBS或以上终浓度LPS,在加入后即刻、6、24、48和72 h时(T0-4),分别采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖水平,RT-PCR法检测细胞Thy-1 mRNA表达.结果 与C组相比,T3,4时其余组细胞增殖水平升高,Thy-1 mRNA表达下调(P＜0.05);T3,4时LPS0.01组、LPS0.10组和LPS1.00组细胞增殖水平依次升高,Thy-1 mRNA表达依次下调(P＜0.05).结论 LPS可下调Thy-1 mRNA表达,引起小鼠肺成纤维细胞异常增殖,提示内毒素血症诱发肺纤维化与肺成纤维细胞Thy-1表达下调有关.     

rhBMP2作用下人牙周膜成纤维细胞中OCIF、ODF的表达研究

目的：本研究通过反转录聚合酶链反应来测定不同浓度的重组人骨形成蛋白2（rhBMP2）对人牙周膜成纤维细胞中OCIF、ODFmRNA在不同作用时间点表达的影响,了解rhBMP2对骨改建相关基因的调控方式。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞,取生长良好的第六代细胞,分别用25ng/ml、50 ng/ml及100 ng/ml的rhBMP2作用于细胞,于作用1、3、5、7天后收集细胞。反转录聚合酶链反应检测各组细胞四个时间作用点OCIF、ODF mRNA含量,PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳后,采用Image Pro Plus5.0图像分析软件对电泳胶带亮度进行分析。结果：在rhBMP2作用初期,由于OCIF mRNA的表达快速上升,ODF mRNA的表达缓慢增高,二者的表达差异远大于正常生理水平;随作用时间的延长,由于OCIF mRNA的表达下降,ODF mRNA的表达缓慢增高,二者的表达差异逐渐缩小,在作用末期低于正常生理水平。结论：基于OCIF与ODF二者表达的相对变化,HPDLfs在rhBMP2的作用下可能对破骨细胞的形成在初期表现为较强的抑制,随着作用时间的延长,HPDLfs对破骨细胞的抑制作用逐渐转变成为促进其活化的作用。     

rhBMP2作用下人牙周膜成纤维细胞中cbfα1的表达研究

目的：本实验通过反转录聚合酶链反应,测定不同浓度的重组人骨形成蛋白2（rhBMP2）对人牙周膜成纤维细胞中cbfα1mRNA在不同作用时间点表达,了解rhBMP2对骨改建过程的调控。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞,取生长良好的第6代细胞,分别用25ng/ml、50ng/ml及100ng/ml的rhBMP2作用于细胞,于作用1、3、5、7天后收集细胞。反转录聚合酶链反应检测各组细胞4个时间作用点cbfα1 mRNA含量,PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳后,采用Image Pro Plus5.0图像分析软件对电泳胶带亮度进行分析。结果：不同浓度rhBMP2对cbfα1mRNA的表达均表现为初期降低,而后明显增高,至峰值后回落。不同浓度对cbfα1 mRNA表达上调的峰值没有明显差异。100ng/ml和50ng/ml的rhBMP2浓度组能够较快地上调cbfα1mRNA表达至峰值,然后100ng/ml组表现为缓慢下降,50ng/ml组迅速回落;25ng/ml组较慢上调cbfα1mRNA的表达至峰值后,迅速回落。结论：①根据实验各组中cbfα1的表达变化,提示笔者BMP2可以上调HPDLfs中cbfα1的转录水平,并且对cbfα1的表达调控主要为启动作用,cbfα1的表达增高幅度似乎与rhBMP2浓度并不相关。②高浓度组对cbfα1的上调作用迅速而持久,低浓度组的作用则相对迟缓而短暂。提示笔者BMP2可能通过上调cbfα1的表达而促进HPDLfs向成骨细胞转化。     

脂多糖对皮肤成纤维细胞生物学特性的影响及与创面愈合的关系

目的探讨脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成的影响，以研究细菌内毒素与皮肤创面愈合的关系。方法取正常皮肤按黄勇等方法行成纤维细胞培养后，分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为0．005、0．010、0．050、0．100、0．500和1．000μg／ml大肠杆菌LPS（E．coli055：B5）培养，对照组为DMEM培养。分别通过MTT比色法及细胞计数法观察各组1～9d吸光度（A）值和细胞数量的变化；于LPS加入后7d细胞处于融合状态时，通过^3H-脯氨酸掺入、胃蛋白酶消化法检测细胞胶原合成量的变化，并绘制细胞生长曲线。结果与对照组比较，0．005～0．500μg／ml组A值增加，于5～9d差异有统计学意义（P〈0．05）；1．000μg／ml组A值降低，于3～9d差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，0．005～0．500μg／ml组促进细胞胶原合成，且0．100μg／ml组作用达高峰（P〈0．05），1．000μg／ml LPS抑制细胞胶原合成，差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，0．005～0．500μg／ml组细胞数量明显增加，分别于3～6d、1～6d、3～6d、2～6d及3～6d时比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；1．000μg／ml组细胞数量明显降低，于2～9d差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成，但过高浓度LPS则产生抑制效应。提示一定量的细菌内毒素可能有利于皮肤创面愈合，当内毒素过多时将对创面愈合产生负面作用。     

白细胞介素-1对病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的　探讨细胞因子对瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控。方法　以病理性瘢痕成纤维细胞为研究对象,观察白细胞介素１（以下简称ＩＬ１）对共胶原合成、核酸、超微结构的影响。结果　ＩＬ１ 可以抑制病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成及核酸的量。结论　ＩＬ１ 是瘢痕调控机制中的负性调节因子,在病理性瘢痕的防治中有一定的应用价值     

CGF在炎症微环境下对人牙周膜细胞成骨抑制作用的影响

目的 研究浓缩生长因子（CGF）在炎症微环境下对人牙周膜细胞（hPDLCs）成骨抑制作用的影响。 方法 分离、培养并鉴定hPDLCs,并采用脂多糖（LPS）制造细胞炎症微环境,分别将全血（对照组）、Con组、LPS组和CGF组与hPDLCs共培养,使用1%、5%、10%的LPS、CGF分别对hPDLCs处理24、48、72 h,进行成骨诱导,观察不同TGFβ1和IGF-1浓度下各组CGF中含有存在成骨相关生长因子水平、炎症微环境下hPDLCs的各组ALP活性、qPCR检测各组成骨相关生长因表达量。 结果 CGF+DMEM培养基中TGFβ1、IGF-1浓度均显著高于DMEM培养基、CGF析出液（P＜0.01）;hPDLCs细胞较为均一,无明显杂质细胞,形态稳定,生长旺盛,进一步对hPDLCs进行LPS及CGF干预后,与Con组比较,ALP在LPS组明显下降,而经过CGF干预后ALP的浓度有所回升,甚至比Con组更高;CGF组干预后ALP活性显著高于对照组、LPS组,且LPS组低于对照组、炎症组（P＜0.01）;炎症微环境下,CGF组hPDLCs成骨标志物ALP、COL1及OCN的表达量显著高于Con组、LPS组（P＜0.01）。 结论 CGF在炎症微环境下对改善人牙周膜细胞成骨抑制作用具有积极的影响,可提高成骨相关因子（ALP、COL1、OCN）水平,促进成骨分化的相关转录因子表达量,从而有效修复人牙周膜细胞在炎症微环境下的成骨抑制作用。     

IL——1对病理性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的：阐明白细胞介素－１对病理性瘢痕效应的作用机理。方法：观察白细胞介素－１对病理性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响。结果：该介素明显破坏了线粒体、粗面内质网、核糖体等重要细胞器。结论：证明白细胞介素－１是成纤维细胞合成胶原的负性调节因子。     

IL-1对病理性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的 :阐明白细胞介素 - 1对病理性瘢痕效应的作用机理。　方法 :观察白细胞介素 - 1对病理性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响。　结果 :该介素明显破坏了线粒体、粗面内质网、核糖体等重要细胞器。　结论 :证明白细胞介素 - 1是成纤维细胞合成胶原的负性调节因子     

口腔正畸对牙周病致前牙移位患者前牙功能及血清炎症因子水平的影响

的:探讨口腔正畸对牙周病致前牙移位患者前牙功能及血清炎症因子水平的影响。方法:选取牙周病致前牙移位患者64例,经牙周基础治疗后进行口腔正畸。观察治疗6个月、12个月患者的临床疗效、牙周情况及牙齿松动度,进行牙齿功能评估,测定血清炎症因子。结果:64例患者,显效26例,有效33例,无效5例,治疗有效率为92.19%;治疗前、治疗6个月、治疗12个月,患者的牙周袋深度、前牙覆盖度、探诊出血率逐渐减小(P<0.05)。不同时间,患者的牙槽骨高度比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗6个月和12个月,患者的牙齿松动度均小于治疗前(P<0.05)。治疗前、治疗6个月、治疗12个月,患者牙齿的咀嚼功能、固定程度、美观程度及舒适程度评分逐渐增加(P<0.05);治疗6个月和12个月,患者的IL-6、IL-8、TNF-α水平均小于治疗前(P<0.05)。结论:牙周病致前牙移位采用口腔正畸效果良好。正畸后可降低机体炎症反应,改善患者牙周情况,减轻牙齿松动,提高咀嚼功能及美观程度。     

A型肉毒毒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad通路和ERK通路表达的影响

目的:探讨A型肉毒毒素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Human keloid fibroblasts,HKF)生物学行为和TGF-β/Smad信号通路和ERK信号通路表达的影响。方法:在HKF培养过程中加入A型肉毒毒素进行干扰,观察A型肉毒毒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad通路和ERK通路相关分子的变化及细胞增殖、侵袭、凋亡情况。结果:A型肉毒毒素可以抑制HKF增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,并且明显抑制Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、α-SMA和CTGF基因的表达水平,上调IFN-γ、TGF-β3基因的表达水平。上调Smad7基因和蛋白的表达,下调VEGF基因表达,明显抑制p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平,并且抑制P-ERK1/2蛋白表达。以上生物学变化均且呈药物浓度依赖性。结论:A型肉毒毒素可抑制HKF的增殖、侵袭、血管生成和胶原积累,这些效应与TGF-β/Smad和ERK1/2信号通路有关。