“非抗菌药物剂量和频次智能化监控系统”的研发

目的研究3,5,4'-三甲基白藜芦醇(trans-resveratrol derivative3,5,4'-trimethoxystilbene,TMS)对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)和钾电流(IK1)的直接作用,探讨其心肌保护作用。方法用全细胞膜片钳技术记录TMS对单个心室肌细胞INa和IK1的作用。结果TMS(10μmol·L-1)可快速抑制豚鼠心室肌细胞INa,用药后3min左右即开始起效,10min时抑制率为(36.8±5.6)%(P<0.005),洗脱后可完全恢复;1,3μmol·L-1TMS未影响INa大小。TMS不改变INa的最大激活电压,也不影响IK1的大小。10μmol·L-1使半数最大失活电压(V1/2)由(-87.0±3.3)mV变化到(-96.7±3.5)mV(P<0.001),使失活曲线斜率(S)由(4.9±0.3)mV变化到(5.4±0.3)mV(P<0.01);使半数最大激活电压(V1/2)(-38.9±1.4)mV变化到(-47.3±1.3)mV(P<0.001),未改变激活S。结论TMS可直接作用于豚鼠心室肌细胞,快速抑制INa,且此作用快速、可逆。     

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响,探讨其心肌保护机制.方法 用全细胞膜片钳技术记录RES对单个心室肌细胞INa的作用.结果 RES(10,30,100 μmol·L-1)浓度依赖性的抑制豚鼠心室肌细胞INa,其中30 μmol·L-1对INa的抑制率为(17.3±3.1)%(P<0.005),100 μmol·L-1抑制率(52.7±10.2)%(P<0.01),抑制作用迅速,用药后3 min左右即开始起效,洗脱后均可以完全恢复;100 μmol·L-1使半数最大失活电压(V1/2)由(-89.3±2.0)mV变化到(-100.7±3.3)mV(P<0.005),RES未改变S和半数最大激活电压(V1/2).结论 RES浓度依赖性的抑制INa,作用出现快,并且可逆.     

舒必利致心律失常的电生理研究

目的：观察不同浓度舒必利对缺血兔心浦肯野纤维动作电位的影响及舒必利对豚鼠心室肌细胞钠通道电流的作用。方法：采用标准微电极技术,观察不同浓度（1～100μmol／L）舒必利对模拟缺血液灌流的离体兔心浦肯野纤维动作电位0期去极化幅值（APA）、最大除极速率（Vmax）、有效不应期（ERP）及90％动作电位时程（APD50）的影响。应用酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录舒必利对钠通道电流（INa）的影响。结果：不同浓度的舒必利对缺血兔浦肯野纤维动作电位的APA和APD90无明显影响,对Vmax有降低趋势。舒必利（3～300μmol／L）浓度依赖性地抑制INa（IC50=10．79μmol／L,测试电压-35mv）。10μmol／L舒必利降低了INa的最大电导gmax,使半激活、失活电压负值分别减小了1．91mV（P〈0．01）和5．22mV（P〈0．01）;恢复时间常数增加,但最大激活电流可以基本恢复至给药前。结论：舒必利可轻度逆转缺血液灌流造成的心浦肯野纤维动作电位缩短,并浓度依赖性地抑制钠电流,舒必利作用于钠通道的失活态。     

葡萄糖对豚鼠心室肌细胞跨膜离子电流的影响

目的观察葡萄糖对豚鼠心室肌细胞膜APD,IK1,IK,ICa-L的影响.方法采用全细胞膜片技术记录单个豚鼠心室肌细胞膜的动作电位时程和离子电流.比较0、10和20mmol·L-1葡萄糖对心室肌细胞跨膜离子电流的作用.结果(1)与10 mmol·L-1葡萄糖相比,0和20mmol·L-1均可使豚鼠心室肌细胞的APD缩短(P＜0.05);(2)在细胞外葡萄糖浓度为10 mmol·L-1时,内向整流钾电流IK1的电流密度最大,标准化I-V曲线显示0和20mmol·L-1葡萄糖均可抑制IK1,并使I-V曲线左移,其翻转电位从-72.4移至-64.6 mV;(3)与mmol·L-1葡萄糖相比,0和20mmol·L-1葡萄糖均可增加ICa-L的电流幅度和电流密度.当钳制电位为10 mV,细胞外葡萄糖浓度为0 mmol·L-1时,ICa-L的电流密度为(-8.03±0.82)pA/pF(n=8),而10mmol·L-1和20mmol·L-1葡萄糖分别使电流密度增加为(-5.45±0.67)pA/pF和(-6.50±0.56)pA/pF;(4)当钳制电压为 70mV,细胞外葡萄糖浓度为0、10和20 mmol·L-1时,IK的电流密度分别为(18.96±2.86)pA/pF,(8.66±1.87)pA/pF,(15.32±3.12)pA/pF.结论细胞外不同浓度的葡萄糖可使豚鼠心室肌细胞APD,IK1,IK,ICa-L发生改变.细胞外葡萄糖浓度为0和20mmol·L-1对细胞膜离子电流产生相似的影响.     

前列腺素E1预处理对缺血再灌注心肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响

目的研究前列腺素E1（PGE1）预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞瞬时外向钾电流（Ito）和内向整流钾电流（IK1）的影响．方法应用Langendorff法制备大鼠离体心肌缺血再灌注模型,酶解法分离单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录正常组、缺血再灌注组及不同浓度PGE1预处理组心肌细胞Ito和IK1的变化。结果在＋60mV刺激电压时,正常大鼠心室肌细胞Ito为（15．54±2．24）pA／pF（n=16）,缺血再灌注时k减小到（9．99±2．03）pA／pF（n=16）,与缺血再灌注组相比,PGE1（14,42,126μg·L^-1）预处理使气分别增大到（14．24±1．97）pA／pF（n=17,P＜0．05）、（18．41＋1．39）pA／pF（n=13,P＜O．05）和（21．63±3．2）pA／pF（n=12,P＜0．05）;Uto 半数失活电压（V1／2）由缺血再灌注组的（-18．61±7．81）mV（n=10）分别降低到（-27．95±8．00）mV（n=11,P＜0．05）、（-31．34±7．59）mV（n-16,P＜0．05）和（-39．50±7．38）mV（n=13,P＜0．05）。在-120mV刺激电压时,PGE1（14,42,126μg-L^-1）预处理使Ik1由缺血再灌注组（-11．68±3．82）pA／pF（n=6,P＜O．05）分别增大到（-31．89±8．83）pA／pF（n=7,P＜0．05）、（-32．36士9．13）pA／pF（n=13,P＜0．05）、（-34．70±8．99）pA／pF（n=11,P＜0．05）。结论PGE1预处理能增大大鼠缺血再灌注心室肌细胞Ito及IK1,降低It0的V1/2。     

3, 5, 4'-三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流和钾电流的影响

目的 研究3, 5, 4'-三甲基白藜芦醇(trans-resveratrol derivative 3,5,4'-trimethoxystilbene,TMS)对豚鼠心室肌细胞钠电流(I_Na)和钾电流(I_K1)的直接作用,探讨其心肌保护作用。方法 用全细胞膜片钳技术记录TMS对单个心室肌细胞I_Na和I_K1的作用。结果 TMS(10 μmol·L^-1)可快速抑制豚鼠心室肌细胞I_Na,用药后3 min左右即开始起效,10 min时抑制率为(36.8±5.6)％(P<0.005),洗脱后可完全恢复;1,3 μmol·L^-1 TMS未影响I_Na大小。TMS不改变I_Na的最大激活电压,也不影响I_K1的大小。10 μmol·L^-1使半数最大失活电压(V_1/2)由(-87.0±3.3)mV变化到(-96.7±3.5)mV (P<0.001),使失活曲线斜率(S)由(4.9±0.3)mV 变化到(5.4±0.3)mV (P<0.01);使半数最大激活电压(V_1/2) (-38.9±1.4)mV 变化到(-47.3±1.3)mV (P<0.001),未改变激活S。结论 TMS可直接作用于豚鼠心室肌细胞,快速抑制I_Na,且此作用快速、可逆。     

乙醇对豚鼠心室肌细胞钙钠离子通道电流的影响

目的：观察乙醇对豚鼠心室肌细胞L-型钙离子通道电流（IGLL）和电压依赖性钠离子通道电流（INa）的影响，并探讨两者在乙醇致心肌损伤中的意义。方法：采用蛋白酶消化的成年豚鼠单个心室肌细胞及膜片钳全细胞技术，记录不同浓度乙醇对ICal.和INa的作用。结果：（1）乙醇抑制ICaL峰值，24mmol/L和240mmol/L乙醇抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）24、80、240mmol／L乙醇使ICaL的电流-电压（I-V）曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，但不影响曲线形状，用乙醇后最大激活电压仍在0mV左右。（3）24mmol／L乙醇基本不影响I、峰值，80、240mm01]L乙醇抑制I。峰值，与24mmol／L乙醇的抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（4）24mmol／L乙醇对INa的I-V曲线无明显影响。80、240mmol／L乙醇使INa的I-V曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，曲线形状无明显改变，用药后最大激活电压仍在-30mV左右。结论：致毒浓度（24mmol／L）的乙醇对ICal.具有明显抑制作用，可导致心肌产生负性肌力作用，动作电位时程缩短，诱发心律失常。但致毒浓度（24mmol／L）的乙醇不影响INa，而致死浓度（80mmol／L）对INa有明显抑制作用。     

雌二醇抑制豚鼠心室肌细胞内向整流和延迟整流钾通道电流

目的:研究雌二醇(Estradiol,Est)对心室肌细胞动作电位(AP)、内向整流钾通道电流(I_(K1))及延迟整流钾通道电流(I_K)的影响。方法:全细胞膜片箝技术。结果:EST 10μmol·L~(-1)使豚鼠心室肌细胞AP时程明显缩短,APD_(50)由给药前(474±71)ms缩短至(330±75)ms(P<0.05),Est 100μmol·L~(-1)使APD_(50)缩短至(229±67)ms(P<0.01),使APD_(90)由(587±60)ms缩短至(418±79)ms(P<0.05)。Est浓度依赖性地抑制I_K尾电流(I_K·tail),10μmol·L~(-1)浓度下,I_K·tail减少53％(P<0.05),100μmol·L~(-1)浓度下,I_K·tail减少80％(P<0.05)。10μmol·L~(-1)以上浓度Est明显抑制I_(K1),在-100mV刺激电压下,内向电流最大抑制为49％(P<0.01);在-40mV刺激电压下,外向电流最大抑制为72％(P<0.01)。同时,Est使I_(K1)翻转电位向负电位方向移位(由-70mV变为-76mV)。结论:Est对豚鼠心室肌细胞I_(K1)和I_K通道具有明显的抑制作用。     

双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞L-钙电流的影响

目的:观察双苯氟嗪(Dip)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(I_(Ca-L))的影响。方法:酶解法制备单个心室肌细胞。应用全细胞膜片箝技术记录豚鼠单个心室肌细胞钙电流。结果:在0.3-30μmol/L范围内,Dip可浓度依赖性地降低电压依赖性激活I_(Ca-L)峰值,被Dip 3μmol/L所抑制的I_(Ca-L)在冲洗5min后可得到部份恢复。但Dip对I_(Ca-L)的电压依赖特征,最大激活电压,以及I_(Ca-L)稳态激活无明显影响。在Dip3μmol/L存在下,半数激活电压(V_(0.5))和斜率参数(к)与对照组相比,差异均无显著性。V_(0.5)分别为(-12.8±1.7)mV和(-13.2±2.4)mV,к分别为(7.1±0.4)mV和(7.5±0.5)mV(P>0.05)。Dip3μmol/L可明显使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性稳态失活。V_(0.5)分别为(-19.7±2.4)mV和(-31±6)mV,к分别为(3.6±0.3)mV和(1.8±0.2)mV(P<0.05).Dip 3μmol/L还使I_(Ca-L)从失活状态下的恢复明显减慢。结论:Dip主要作用于L-型钙通道的失活状态,加速钙通道失活,并使其从失活状态下恢复减慢,从而抑制I_(Ca-L)。     

RP58866对哺乳动物心室肌细胞跨膜钾电流的作用(英文)

目的:研究RP58866对于豚鼠或犬分离心室肌细胞I_K,I_(to),和I_(Kl)的影响。方法:采用全细胞膜片箝技术。结果:在-100 mV时,RP58866以浓度依赖方式明显减少了豚鼠心室肌细胞I_(kl),其IC_(50)为(3.4±0.8)μmol·L~(-1)(n=6)。在犬心室肌细胞,RP58866可明显抑制I_(to),其IC_(50)为(2.3±0.5)μmol·L~(-1)。RP58866 100μmol·L~(-1)阻断豚鼠的心室肌细胞I_K,在 40mv时使I_(Kstep)减少(58±13)％,其IC_(50)为(7.5±0.8)μmol·L~(-1),I_(Ktail)减少(86±17)％,其IC_(50)为(3.5±0.9)μmol·L~(-1)。尾电流分析表明,RP58866对I_(Kr)和I_(Ks)均有阻断作用。结论:RP58866对心肌细胞的I_(Kl)和I_(to),I_K均有抑制作用,而不是一种特殊的I_(Kl)抑制剂。     

牛磺酸镁对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的研究牛磺酸镁(taurine magnesium coordination compound,TMC)对正常豚鼠心室肌细胞钾电流的影响,旨在探讨TMC抗心律失常的作用机制。方法酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录豚鼠单个心室肌细胞IK、IK1的影响。结果应用200μmol·L-1TMC使豚鼠单个心室肌细胞IK在实验电压+70mV时,从给药前(8.67±1.04)pA/pF减少到(6.31±1.16)pA/pF(n=5,P<0.01);TMC对IK1无影响。结论本实验表明TMC具有直接抑制心室肌细胞IK作用,减少IK可能会使动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)延长,这可能是其发挥抗心律失常作用的基础之一。     

壬基苯酚对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流和动作电位的影响

目的：观察环境内分泌干扰物质——壬基苯酚（Nonylphenol,NP）对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流和动作电位的影响。方法：应用酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞,用全细胞膜片钳方法记录不同浓度NP作用下单个心室肌细胞L-型钙电流（如。）和动作电位（AP）的变化。结果：1）NP（10^-5、10^-7、10^-6、10^-5mol．L^-1）使ICa-l峰值电流密度分别从-3．72&#177;1．5pA／pF减少到-2．44&#177;0．4pA／pF（P〈0．05）,-2．34&#177;0．6pA／pF（P〈0．05）,-1．79&#177;0．8pA／pF（P〈0．01）,以及-1．66&#177;0．7pA／pF（P〈0．01）;2）NP使ICa-l的I—V曲线上移,但其形状和峰值电压无明显变化;3）NP对ICa-l稳态激活曲线无明显影响;4）NP可缩短动作电位复极50％和90％的时程（APD50,APD50）,但对静息电位（RP）和动作电位幅值（APA）无明显影响。结论：NP能剂量依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞ICa-l,并能够缩短动作电位时程。     

CPUY11018选择性抑制豚鼠心室肌晚钠电流

目的观察CPUY11018对急性分离的豚鼠心室肌细胞晚钠电流的作用。方法运用全细胞膜片钳技术记录晚钠电流,并观察其在药物作用下的变化。结果 CPUY11018可以浓度依赖性抑制心肌晚钠电流,其IC50为（0.11±0.02）μmol·L-1。CPUY11018对心肌快钠电流抑制的IC50为（1.06118±0.034）μmol·L-1,明显高于晚钠电流的IC50。结论 CPUY11018可选择性抑制心肌细胞的晚钠电流。     

H-89对大鼠心肌细胞膜电流的影响

目的评估蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89对大鼠心室肌细胞膜主要离子通道和转运体的影响。方法应用全细胞膜片钳技术观察H-89对胶原酶分解的成年SD大鼠心室肌细胞膜离子电流L-型钙电流(ICa-L)、电压门控钠电流(INa)、内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)和钠钙交换体电流(INa/Ca)的影响。结果1～10μmol.L-1H-89可浓度依赖性抑制ICa-L、INa、Ito(P<0.05);对IK1有更强的抑制作用,在较低浓度(5μmol.L-1)时即可完全抑制IK1(P<0.05),与0.5mmol.L-1氯化钡的作用类似。但在1～10μmol.L-1浓度范围内H-89对INa/Ca无明显作用(P>0.05)。结论H-89对心肌细胞膜电流的影响可能是其对通道的直接作用或间接通过抑制PKA所致。     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的:研究过氧化氢(H2O2)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法:用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L-1H2O2引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果:在5mmol·L-1H2O2作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pA/pF增加至9.80±0.65pA/pF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H2O2对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H2O2对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论:H2O2可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

盐酸戊乙奎醚对离体豚鼠心室肌细胞IKM3的影响

目的 建立膜片钳实验中适于记录延迟整流钾电流(IKM3)的单个豚鼠心室肌细胞快速分离方法,研究盐酸戊乙奎醚对IKM3的作用.方法 单纯Ⅱ型胶原酶二步灌流法分离豚鼠心室肌细胞;膜片钳全细胞记录模式记录盐酸戊乙奎醚对IKM3的影响.结果 分离的心肌细胞质量高,形态结构完整,成功记录了IKM3;0.2 μmol·L-1盐酸戊乙奎醚在不同钳制电压下对IKM3有不同程度的抑制,试验电压为+50 mV时,可使心室肌细胞上IKM3的电流密度由588.63±189.32 PA降至72.85±41.91 PA,抑制率为86.95%.结论 二步灌流法分离得到的豚鼠心室肌细胞可用于IKM3的研究;盐酸戊乙奎醚能作用于心室肌细胞上的M3受体,减小IKM3的电流密度.     

氟康唑对豚鼠心室肌细胞I_K和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用

目的研究氟康唑对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用。方法应用酶解法消化豚鼠单个心室肌细胞,观察氟康唑对IK的影响;采用磷酸钙沉淀瞬时转染的方法将HERG基因表达于HEK-293细胞上,观察氟康唑对野生型HERG钾通道电流、激活和失活曲线的影响,以及氟康唑对Y652A和F656C突变型HERG钾通道的作用;IK和HERG电流的记录均采用全细胞膜片钳技术。结果氟康唑(0.01、0.1、1、3、10、30、100、300和1 000μmol.L-1)浓度依赖性地抑制IK和HERG钾电流,其IC50值分别为(68.1±21.6)μmol.L-1和(48.2±9.4)μmol.L-1,对HERG钾通道的电压依赖性激活和失活曲线无影响;与野生型(WT)比较,Y652A和F656C突变型可减弱氟康唑对HERG通道的阻断作用。结论氟康唑能阻断IK和HERG通道,Y652和F656是氟康唑与HERG通道结合的关键位点。     

孤啡肽对大鼠顶叶皮层神经元延迟整流钾电流的抑制作用

目的研究孤啡肽(orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N)对大鼠顶叶皮层神经元延迟整流钾电流(IK)的影响,初步探讨其干扰学习记忆过程的离子机制。方法采用全细胞膜片钳技术,观察OFQ/N对急性分离的大鼠顶叶皮层神经元IK的作用。结果①OFQ/N明显抑制IK,并呈剂量依赖性(P<0.05)。②0.1μmol.L-1OFQ/N使IK的电流-电压(I-V)曲线降低(n=8,P<0.01)。③0.1μmol.L-1OFQ/N使IK激活曲线的半数激活电压(V1/2)和斜率因子(k)分别由给药前的(-43.4±6.1)mV和(11.5±1.1)mV变为给药后的(-19.1±4.6)mV和(17.3±3.2)mV(n=8,P<0.01)。④0.1μmol.L-1OFQ/N使IK失活曲线的半数失活电压(V1/2)和斜率因子(k)分别由给药前的(-68.8±2.6)mV和(16.5±1.7)mV变为给药后的(-76.8±2.8)mV(n=5,P<0.01)和(15.7±3.1)mV(n=5,P>0.05)。结论OFQ/N可抑制大鼠顶叶皮层神经元IK,使IK激活曲线右移,失活曲线左移。     

花生四烯酸乙醇胺对大鼠心肌细胞L型钙电流的影响

目的研究anandamide(花生四烯酸乙醇胺)对单个大鼠心肌细胞L型钙电流(I Ca-L)的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录I Ca-L,并观察anandamide对该电流的作用。结果 (1)anandamide浓度依赖性地减小I Ca-L,其IC50值为(1.3±0.3)μmol·L-1。(2)1μmol·L-1anandamide可明显使稳态失活曲线左移,失活中点电压(V1/2)由(-34.4±0.2)mV变为(-42.2±0.6)mV,K值由(5.7±0.2)变为(6.4±0.4),表明anandamide改变了钙通道失活的电压依赖性。anandamide 1μmol·L-1对稳态激活曲线无明显影响。结论 anandamide可使稳态失活曲线左移而剂量依赖性地减小I Ca-L。     

甲基苯丙胺对豚鼠心室肌细胞动作电位及延迟整流钾电流的影响(英文)

目的研究甲基苯丙胺对心血管系统的毒性作用及其机制。方法分离豚鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术获取并分析心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)及动作电位(AP)水平。结果甲基苯丙胺0.5mmol·L-1使豚鼠心室肌细胞AP幅值从121.6mV降至106.0mV,能延长动作电位时程(APD),但不改变静息电位水平。其中动作电位复极10%,25%,50%,75%及90%时程(APD10,APD25,APD50,APD75,APD90)分别延长179.0%,88.7%,47.7%,43.4%和31.9%(P<0.05)。甲基苯丙胺0.5mmol·L-1使快速激活延迟整流钾电流(IKr)和缓慢激活延迟整流钾电流(IKs)的膜电位水平降低,电流-电压曲线下移,但曲线形状不变,冲洗后能部分恢复。用含甲基苯丙胺0.01,0.1,0.5,1.0和3.0mmol·L-1的细胞外液分别灌流细胞5min,甲基苯丙胺对IKr尾电流幅度呈浓度依赖性的阻断作用,冲洗后能部分恢复。甲基苯丙胺对IKs尾电流的影响也非常显著(P<0.05)。结论甲基苯丙胺对豚鼠心室肌细胞的IK及AP都有不同程度的影响,这可能是甲基苯丙胺造成心脏损伤的电生理机制之一。