Rho/Rho激酶信号通路在缺氧性肺血管收缩中的机制

目的 探讨15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)致大鼠肺动脉收缩的信号转导途径,阐明15-HETE引起慢性缺氧性肺动脉收缩作用的可能机制.方法 采用组织浴槽血管环方法测量15-HETE对缺氧模型组、正常组大鼠血管收缩作用,并观察加入Rho激酶抑制剂Y-27632后肺动脉环收缩强度的改变,明确Rho/Rho激酶信号转导途径在15-HETE收缩肺动脉中的作用.结果 15-HETE对正常组、缺氧模型组大鼠血管环均有收缩作用,当加入Rho激酶抑制剂Y-27632可明显阻断15-HETE对缺氧大鼠肺动脉的收缩作用(P＜0.05).结论 15-HETE通过Rho/Rho激酶信号转导途径收缩慢性缺氧性大鼠肺动脉.     

K+v通道在缺氧性肺血管收缩中的作用研究

目的 探讨K+v通道在缺氧性肺血管收缩（HPV）中的作用。方法Wistar大鼠40只随机分为两组:常氧对照组和低氧组, 采用酶消化的方法获得单个肺动脉血管平滑肌细胞（PASMC）,将分离细胞经a-actin免疫组化鉴定为PASMC。采用膜片钳技术记录PASMC静息膜电位（Em）和电压门控性钾通道电流（Ikv）。细胞内灌流Kv1.2、Kv1.3、Kv1.5、Kv2.1、Kv9.3抗体混合液（1：125）,探讨钾通道在HPV中的作用。结果 低氧组膜电位明显去极化,细胞内灌流Kv1.2、Kv1.3、Kv1.5、Kv2.1、Kv9.3抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC的Ikv,使Em去极化,细胞内灌流Kv1.2、Kv1.3、Kv1.5、Kv2.1、Kv9.3抗体混合液对低氧组PASMC的Ikv和Em均无显著影响。结论Kv1.2、Kv1.3、Kv1.5、Kv2.1、Kv9.3可能是氧敏感型通道,并可能介导了缺氧性肺血管收缩。     

PI3K/Akt信号通路在增生性瘢痕中的调控作用

目的 探讨PI3K/AKT信号通路在增生性瘢痕中的调控作用。方法 构建兔耳增生性瘢痕模型,并随机分为4组：正常兔耳皮肤组（A）、瘢痕模型组（B）、DMSO刺激模型组（C）、PI3K特异性抑制剂（LY294002）刺激模型组（D）。通过组织病理学观察兔耳瘢痕的形态学变化;免疫组化和Western blot检测pAkt[S473]和p-Akt[T308]的表达量;免疫荧光双染色评估p-Akt[S473]和p-Akt[T308]的共定位情况;以及TUNEL评估皮肤组织中成纤维细胞的凋亡水平。结果 D组中瘢痕厚度及成纤维细胞数明显高于B和C组。免疫组化和Western blot检测结果表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]在B组中的表达量明显高于A组,但在D组中显著低于C组。免疫荧光表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]主要定位于瘢痕组织中的细胞浆内,且在D组中的共表达量低于B组。TUNEL检测结果证实,与A组相比,B组皮肤组织中细胞凋亡水平明显下调,且D组中细胞凋亡水平高于C组（P <0.01）。结论 阻断PI3K/Akt信号通路可通过抑制Akt磷酸化,导致...     

K+v通道亚型在急性缺氧性肺血管收缩中的作用研究

目的 探讨K+v通道亚型在急性缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用.方法 Wistar大鼠30只随机分为两组:常氧对照组和低氧组,采用酶消化的方法 获得单个肺动脉血管平滑肌细胞(PASMC).将分离细胞经a-actin免疫组化鉴定为PASMC细胞.采用膜片钳技术记录PASMC静息膜电位(Em)和电压门控性钾通道电流(Ikv).细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液(1:125),探讨钾通道在HPV中的作用.结果 低氧组膜电位明显去极化,细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC的Ikv,使Em去极化,细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液对低氧组PASMC的Ikv和Em均无显著影响.结论 Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1可能是氧敏感型通道,并可能介导了急性缺氧性肺血管收缩.     

K~+v通道在缺氧性肺血管收缩中的作用

目的 探讨K+v通道在缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用.方法 Wistar大鼠40只随机分为两组:常氧对照组和低氧组,采用酶消化的方法获得单个肺动脉血管平滑肌细胞(PASMC),将分离细胞经a-actin免疫组化鉴定为PASMC.采用膜片钳技术记录PASMC静息膜电位(Em)和电压门控性钾通道电流(Ikv).细胞内灌流Kv1.2,Kv1.3,Kv1.5,Kv2.1,Kv9.3抗体混合液(1:125),探讨钾通道在HPV中的作用.结果 低氧组膜电位明显去极化,细胞内灌流Kv1.2,Kv1.3,Kv1.5,Kv2.1,Kv9.3抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC的Ikv,使Em去极化,细胞内灌流Kv1.2,Kv1.3,Kv1.5,Kv2.1,Kv9.3抗体混合液对低氧组PASMC的Ikv和Em均无显著影响.结论 Kv1.2,Kv1.3,Kv1.5,Kv2.1,Kv9.3可能是氧敏感型通道,并可能介导了缺氧性肺血管收缩.     

白三烯在大鼠急性缺氧性肺血管收缩反应中的作用

本实验对白三烯在大白鼠缺氧性肺血管收缩反应(HPV)中的作用进行了研究。结果发现脂氧酶抑制剂枸橼酸乙胺嗪(DEC)可明显地抑制活体大鼠的HPV,对血管紧张素Ⅱ的缩血管作用无明显影响。单独应用环氧酶抑制剂消炎痛可使HPV增强;予先用消炎痛或扑尔敏也不改变DEC对HPV的抑制作用。说明本实验所用DEC抑制HPV的作用与血管紧张素,前列腺素和组胺无关。白三烯受体拮抗剂FPL55712可明显或完全阻断Hilltop和SD大白鼠的HPV,进一步证明白三烯很可能是大白鼠HPV中最主要的介导者。     

缺氧性肺血管收缩的细胞机制

缺氧性肺血管收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction，HPV)是一个重要的自身调节机制，它可使低氧肺泡的血流减少而使较多血液转移到通气较好的肺，使通气和血流更好匹配，减少功能性分流，但也是导致肺动脉高压乃至肺源性心脏病的重要原因。急性缺氧引起肺血管收缩的机制尚未完全阐明，近年来，由于电生理研究方法的进展，对直接作用机制有了进一步的了解。现仅就HPV的细胞机制简述如下。     

PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞SGC7901生长的研究

目的 探讨PI3K/Akt(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B)信号转导通路在人胃癌细胞株SGC7901生长中的作用机制.方法 应用PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002用SGC7901,并设对照组和实验组.MTT法检测LY294002作用24、48、72 h后,对SGC7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测胃癌细胞周期的变化;Western-blot检测P-Akt蛋白的表达水平的变化.结果 LY29400对SGC7901细胞的增殖有抑制作用,与正常培养组比较,培养24 h时尚无差异,培养48、72 h后差异显著(P<0.05)具有统计学意义.流式细胞法及Western blot结果显示:LY29400作用于SGC7901细胞后,胃癌细胞SGC7901的凋亡率增强、G0/G1期细胞比例增加并使P-Akt 蛋白表达减弱.与正常培养组比较(P<0.05),具有统计学意义.结论 阻断PI3K/Akt信号转导通路,胃癌细胞生长、分化受到抑制,凋亡率增强.PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901的调控起一定作用.     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路阻断地塞米松降尿蛋白的作用

目的通过活体阿霉素（ADR）大鼠肾病模型探讨受地塞米松及LY294002影响的PI3K/Akt信号通路以及下游分子Bad的 表达、尿蛋白变化相关性及其意义。方法应用随机数表法将SD大鼠分为正常对照组（NC组）,阿霉素肾病组（ADR组）,阿霉 素+地塞米松治疗组（DEX组）,阿霉素+地塞米松+LY294002干预组（LY294002组）。分别于第7、14、28天进行24 h尿蛋白定 量检测;Western Blot检测肾皮质p-Akt、Akt和Bad蛋白表达水平,Q-PCR检测肾皮质Bad mRNA表达水平。结果ADR组蛋白 尿持续增加,p-AKT/AKT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad-mRNA表达增加,较正常NC组有统计学差异（P<0.05）;DEX组 尿蛋白明显减少,p-AKT/AKT 比值升高和Bad 蛋白表达下调、Bad mRNA 表达减少,与NC 组无统计学差异（P>0.05）; LY294002组的尿蛋白无减少,p-AKT/AkT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad mRNA表达增加,与DEX组有显著性统计学差 异（P<0.05）。结论地塞米松通过激活PI3K/Akt信号通路,下调其下游分子Bad的表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白;LY294002 干预后可抑制该信号通路,阻断地塞米松减少尿蛋白的作用。这些结果表明PI3K/Akt信号通路是激素减少尿蛋白的信号传导 机制之一。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

PI3K/AKT 及 MEK/ERK 信号通路抑制剂对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的作用

目的：探讨PI3K/AKT信号通路抑制剂（LY294002）及MEK/ERK信号通路抑制剂（PD98059）对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的影响。方法实验分为对照组和实验组,其中对照组分正常组和二甲基亚砜（DMSO）组（0.1%DMSO）,实验组分PI3K/AKT信号通路抑制剂组LY294002及MEK/ERK信号通路抑制剂组PD98059（实验组设4个浓度梯度）,比较结直肠癌血管内皮细胞在不同抑制剂浓度（2.5、5、10、20μmol/L）作用下在Matrigel胶上管道形成的情况,6h后观察并取每个孔上、下、左、右、中5个区域中的图片,测其管道形成的总长度,每组均设3个复孔,数据以均数依标准差表示,采用SPSS 16.0软件进行统计分析,以P〈0.05为差异有统计学意义。结果对照组中正常组与DMSO组两者管道形成总长度之间差异无统计学意义[（4.16±0.26）mm比（4.17±0.18）mm],而实验组管道形成总长度较对照组都有明显减少（P〈0.05）。其中LY294002浓度在2.5、5、10、20μmol/L管道形成的长度分别为（3.08±0.51）、（2.65±0.24）、（2.02±0.18）、（1.08±0.13）mm,而PD98059管道形成的长度分别为（3.39±0.18）、（2.98±0.12）、（2.53±0.18）、（1.88±0.12）mm,随着浓度的增加,管道形成长度逐渐减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。 LY294002与PD98059相比,在相同浓度下,LY294002管道形成长度较PD98059减少（P〈0.05）。结论PI3K/AKT信号通路抑制剂及ERK/MEK信号通路抑制剂能够明显抑制结直肠癌血管内皮细胞的管道形成,且随着抑制剂浓度的升高,管道形成能力进一步降低,PI3K/AKT信号通路抑制剂抑制肿瘤血管内皮细胞管道形成的能力比ERK/MEK信号通路抑制剂明显。     

磷脂酰肌醇3(PI3K)激酶信号途径对血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂（LY294002），对血小板源生长因子（PDGF-BB）促大鼠肝星状细胞（HSC）增殖与Ⅰ型胶原表达的影响，并探讨其作用机制。方法用不同浓度的PDGF-BB和LY294002对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）进行处理，MTT法检测细胞的增殖，逆转录聚合酶链反应方法（RT-PCR）检测HSC-T6内Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果PDGF-BB在浓度1～10ng／ml时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖（P〈0．05），当浓度大于10ng／ml时处理组间无显著差异（P〉0．05），其促增殖作用达到饱和。5μmol／L、10μmol／L、25μmol／L的LY294002均能显著且剂量依赖性地抑制PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖（P〈0．001）。PDGF-BB能促进HSCI型胶原mRNA表达，24h、48h时相对于对照组的表达量为112．2％。182．5％。LY294002能显著抑制PDGF-BB促Ⅰ型胶原表达，24h、48h时相对表达量为76．4％，52．6％。结论磷脂酰肌醇3激酶信号途径是调节血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与分泌胶原的重要通道，抑制该通路可以抑制肝星状细胞增殖和胶原表达，具有抗肝纤维化的作用，对防治肝纤维化有一定的意义。     

PI3K/Akt抑制剂对肺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对肺癌细胞A549、SPC-A1化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于肺癌细胞A549、SPC-A1,用MTT法检测单独使用顺铂、紫杉醇及联合PI3K抑制剂LY294002对体外培养的肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物的敏感性,用流式细胞术检测肺癌细胞A549、SPC-A1凋亡率和细胞周期变化.结果 联合LY294002作用后肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物顺铂、紫杉醇敏感性显著增强(P<0.01),且细胞凋亡率显著提高(P<0.01),G0/G1期细胞比例增加,S+G2/M期细胞比例减少(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物顺铂、紫杉醇体外对A549、SPC-A1细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,显著提高肺癌化疗效果.     

LY294002对SGC7901/VCR细胞VCR耐药逆转作用研究

目的观察LY294002对SGC7901/VCR胃癌细胞长春新碱(VCR)耐药的逆转作用,并探讨其可能机制。方法通过MTT法明确LY294002可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药作用后,采用TUNEL检测细胞的凋亡,高效液相法检测细胞内药物浓度,RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中MDR1、caspase-3和XIAP的基因和蛋白表达水平。结果 LY294002能明显提高VCR的诱导细胞凋亡作用,明显增加细胞内VCR的浓度,并可降低耐药细胞中MDR1、XIAP的基因和升高caspase-3表达水平。结论抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控凋亡相关基因caspase-3和XIAP的表达有关。     

人参皂苷Rg1激活PI3K/Akt信号通路对6-OHDA毒性作用的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对抗6-羟基多巴胺(6-OHDA)毒性作用的信号通路.方法 MES23.5细胞常规培养,免疫印迹法观察人参皂苷Rg1预处理对6-OHDA诱导的磷酸化蛋白激酶B (Akt) 表达的影响,MTT法观察细胞的存活率.结果 6-OHDA可时间依赖性地降低MES23.5细胞磷酸化Akt的表达(F=24.51,P<0.01),人参皂苷Rg1预处理可明显增强磷酸化Akt的表达(t=471.60,P<0.01);人参皂苷Rg1预处理可明显降低6-OHDA对MES23.5细胞的损伤作用,此作用可以被磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002所阻断(F=25.12,P<0.01).结论 人参皂苷Rg1通过激活PI3K/Akt信号通路对抗6-OHDA对MES23.5神经细胞的毒性作用.     

抑制P13K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制

目的 观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制. 方法 通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)埘SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01). 结论 抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bel-2的表达有关.     

冬凌草甲素作用PI3K/AKT通路诱导HeLa细胞凋亡

 【目的】研究冬凌草甲素诱导HeLa细胞凋亡的作用及其机制。【方法】MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的生长抑制实验,Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核形态学变化;LDH法研究细胞死亡的途径。流式细胞仪检测细胞的凋亡,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。【结果】25μmol/L以上的冬凌草甲素对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高,冬凌草甲素抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中,细胞端粒酶Akt、FKHRL、GSK3表达水平及活性显著降低。【结论】冬凌草甲素能够通过诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡而发挥抑制HeLa细胞生长作用,抑制Akt和GSK3的活性是冬凌草甲素体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡的重要作用机制之一。