维生素Ｅ对1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿保护作用的研究

目的探讨维生素E (vitamin E,Vit E)对1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)中毒性脑水肿的保护作用。方法将雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、Vit E对照组、1,2-DCE单纯染毒组及Vit E低、中和高剂量干预组。连续给予药物灌胃4 d后,采取静式吸入方式染毒3. 5 h/d,持续3 d。结果与空白对照组相比,单纯染毒组小鼠脑组织呈现明显脑水肿病理改变,脑含水量、脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及细胞色素P450 2E1 (cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白和mRNA表达水平显著升高,脑组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase assay kit,CAT)活性、Occludin蛋白和mRNA及Claudin 5蛋白表达水平显著降低。与单纯染毒组相比,各干预组小鼠的脑含水量、脑组织MDA含量、CYP2E1蛋白和mRNA表达水平显著降低,GSH含量、Occludin蛋白及mRNA水平显著升高;中和高剂量干预组的小鼠脑组织中SOD和CAT活性及Claudin 5蛋白表达水平亦显著升高(P0. 05)。结论单纯1,2-DCE染毒可引起小鼠脑水肿,诱导脑组织中CYP2E1的表达,诱发脑组织氧化损伤,破坏紧密连接蛋白,并抑制Occludin和Claudin 5的表达;而Vit E干预可显著抑制CYP2E1的表达,缓解CYP2E1介导的氧化损伤,有效预防1,2-DCE引起的中毒性脑水肿。     

亚急性1,2-二氯乙烷中毒性脑水肿实验动物模型的建立

目的建立小鼠亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)中毒性脑水肿实验动物模型,探索较为合适的染毒剂量及染毒时间。方法将昆明种小鼠随机分为4组:对照组及1.0、1.1和1.2mg/L 1,2-DCE染毒组。采用静式吸入方式染毒,每天染毒4h,各组染毒天数根据半数以上小鼠在染毒过程中出现明显中毒症状或死亡而确定。末次染毒结束后次日处死小鼠,快速取脑组织,分别测定脑含水量、脑脏器系数及HE染色观察脑组织病理改变。结果各组小鼠的实际染毒天数:1.0mg/L组染毒4d,1.1mg/L组染毒3d,1.2mg/L组染毒2d。各染毒组小鼠在染毒结束时,其脑含水量及脏器系数均高于对照组,根据脑组织病理观察结果判定,1.0mg/L组染毒4d、1.1mg/L组染毒3d及1.2mg/L组染毒2d的小鼠脑水肿模型成功率分别为30%、40%和60%。结论该实验成功建立了亚急性1,2-DCE中毒性脑水肿实验动物模型,1.2mg/L 1,2-DCE每天染毒4h、连续染毒2d所建立的中毒性脑水肿模型的成功率最高。     

兴奋性氨基酸与1,2-二氯乙烷急性中毒性脑病关系的探讨

目的　探讨兴奋性氨基酸 (EAAs)与 1 ,2 二氯乙烷 (1 ,2 DCE)急性中毒性脑病的关系。方法　将SD大鼠随机分为 7组 :对照组、3个染毒组 (5 .0、1 0 .0、2 0 .0g/m31 ,2 DCE)和 3个时间组(1 0 .0g/m31 ,2 DCE染毒后 2、4、6h) ;连续静式吸入染毒 1 2h ;干湿重法测定大鼠脑皮质和髓质含水量 ;高效液相色谱法 (HPLC)检测脑组织中谷氨酸 (Glu)、天冬氨酸 (Asp)、甘氨酸 (Gly)及γ 氨基丁酸(GABA)含量的变化。结果　 (1 )大鼠脑皮质和髓质含水量 :不同剂量染毒组大鼠脑皮质含水量分别为 76 .1 0 %± 1 .41 %、76 .45 %± 0 .75 %、79.95 %± 1 .45 % ,均高于对照组 (74.2 2 %± 1 .77% ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;髓质含水量仅 2 0 .0g/m3组 (71 .77%± 3 .0 7% )有明显升高 ,差异有显著性(P <0 .0 5)。染毒后 2、4、6h脑皮质含水量分别为 79.36 %± 2 .1 0 %、79.48%± 1 .2 1 %、80 .64 %±1 .93 % ,均高于 1 0 .0g/m3即刻组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5)。 (2 ) 4种氨基酸递质含量 :不同剂量染毒组Asp含量分别为 (4.83± 0 .35)、(7.1 7± 0 .40 )、(1 0 .52± 0 .39) μmol/g ;Glu含量分别为 (2 3 .86± 0 .62 )、(31 .2 1± 2 .50 )、(2 8.2 3± 1 .58) μmol/g;Gly含量分别为 (5 .59±     

1,2-二氯乙烷染毒对小鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响

探讨1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)对小鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响,为揭示1,2-DCE的神经毒性损伤机制提供实验参考数据。将昆明种小鼠随机分为4组,对照组和不同剂量1,2-DCE染毒组(0.25 mg/L、0.50 mg/L、1.00mg/L),每组10只小鼠。静式吸入染毒14 d,每天染毒2 h。染毒结束后取大脑组织,测定小鼠脑脏器系数;高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果小鼠脑脏器系数随染毒剂量的增加呈下降趋势,但各组间差异无统计学意义。各染毒组的Asp、Glu和Tau含量随染毒剂量的增加而升高,且中、高剂量染毒组与对照组比较差异有统计学意义;各染毒组的Gly含量随染毒剂量的增加也有升高的趋势,但与对照组比较差异无统计学意义;中剂量染毒组的GABA含量与对照组比较差异具有统计学意义,但高剂量组与对照组比较未见明显差异。提示亚急性1,2-DCE暴露可引起小鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的异常,其可能是1,2-DCE神经毒性损伤的主要机制之一。 更多还原     

N-甲基-D-天冬氨酸Ⅰ型受体在1,2-二氯乙烷急性中毒性脑病中的表达

目的研究N-甲基-D-天冬氨酸Ⅰ型受体(NMDAR1)在1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)急性中毒性脑病发病中的作用。方法SD大鼠42只,随机分为1个对照组、3个染毒组和3个染毒后时间观察组,每组6只。染毒组和时间观察组连续静式吸入1,2-DCE 12 h,对照组不接触1,2-DCE和其他化学物。染毒组接触剂量分别为5.0、10.0、20.0 g/m~3,时间观察组接触剂量均为10.0 g/m~3,染毒结束后在干净无毒的环境中分别放置2、4、6 h；NMDAR1在大鼠脑组织中的表达采用免疫组织化学法检测。结果NMDAR1阳性神经元主要分布在大脑皮质和海马。阳性细胞百分比结果：(1)10.0、20.0g/m~3剂量组表达量高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。大脑皮质分别为(18.33±1.86)%、(64.17±2.86)%,对照组(1.83±0.75)%；海马分别为(15.5±1.87)%、(47.83±2.16)%,对照组(0.83±0.75)%；(2)时间观察组表达量：大脑皮质2、4、6 h组高于对照组和10.0 g/m~3剂量组,差异有统计学意义(P＜0.05)；表达量分别为(39.07±3.01)%、(70.17±2.93)%、(39.83±2.32)%。海马2、4、6 h组也高于对照组,表达量分别为(16.30±1.03)%、(19.80±1.17)%、(16.50±1.05)%,差异有统计学意义(P＜0.05)；但与10.0 g/m~3剂量组比较,仅4 h组有明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论1,2-DCE急性中毒过程中,NMDAR1表达数量明显上调,兴奋性氨基酸可能通过大量NMDAR1的快速开放参与脑皮质细胞的急性肿胀过程,加重脑水肿的发生。     

亚慢性1,2-二氯乙烷染毒对小鼠空间学习记忆能力的影响

为探讨亚慢性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)染毒对小鼠空间学习记忆能力的影响及其可能机制,将昆明种小鼠随机分为4组,分别为对照组及1,2-DCE低、中、高剂量染毒组(0.225、0.45、0.9 g/m~3),每组5只。采用静式吸入方式染毒4周,染毒3.5 h/d。末次染毒结束后次日立即进行Morris水迷宫实验。处死小鼠,取大脑组织,采用高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织中谷氨酸(G1u)、天冬氨酸(Asp)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果显示,在定位航行实验中,从训练第3天起高剂量组小鼠的逃避潜伏期均显著高于其他各组;训练第5天,中剂量组小鼠的逃避潜伏期与对照组和低剂量组相比,差异均有统计学意义;各剂量组游泳速度差异无统计学意义。空间探索实验中,各染毒组小鼠在目标象限停留时间随染毒剂量的增加而减少,但与对照组相比差异无统计学意义。高剂量染毒组小鼠脑组织中GABA含量显著高于其他各组,而各组间G1u和Asp含量差异均无统计学意义。提示亚慢性1,2-DCE染毒对小鼠空间学习能力的抑制性作用,可能与脑组织中抑制性氨基酸含量升高有关。     

p38 MAPK/AP-1信号通路在1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿形成中对iNOS表达的上调作用

目的探究p38 MAPK/AP-1信号通路在小鼠1?2-二氯乙烷(1?2-DCE)中毒性脑水肿形成过程中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其对脑水肿的影响。方法选取40只雌性昆明种小鼠随机分为对照组、染毒组、低剂量以及高剂量p38抑制剂组。染毒小鼠于染毒柜中1.2 mg/L 1?2-二氯乙烷染毒3.5 h/d,连续染毒3 d,低、高剂量抑制剂组小鼠于染毒前1 h腹腔注射200μl 3.75、15 mg/kg的p38 MAPK抑制剂(SB202190)。染毒结束次日取材,测定各组小鼠脑含水量及HE病理观察脑水肿,Western Blot检测各组小鼠脑组织中磷酸化p38、激活蛋白1(AP-1)两个亚基c-fos、c-jun的磷酸化形式表达水平以及iNOS的蛋白表达,Real-Time RT-PCR检测iNOS mRNA表达水平。结果单纯染毒组的小鼠出现抱爪现象,SB202190干预能够明显改善1?2-DCE中毒小鼠的抱爪症状。染毒组小鼠脑组织含水量与对照组小鼠相比明显增加,SB202190干预能够有效缓解小鼠出现脑水肿。单纯染毒组小鼠脑组织中p-p38蛋白、磷酸化c-jun和c-fos表达水平明显上调,iNOS蛋白和mRNA表达水平也显著增加,而SB202190能够显著降低iNOS、磷酸化c-jun和c-fos的表达水平。结论小鼠脑组织iNOS mRNA和蛋白表达水平在1?2-DCE中毒性脑水肿形成过程中显著上调。p38 MAPK/AP-1信号通路参与iNOS表达增多的调控过程。     

亚急性1,2-二氯乙烷染毒对小鼠行为及脑神经递质含量的影响

目的 探讨亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)染毒对小鼠行为及脑神经递质含量的影响,为揭示1,2-DCE神经毒性机制提供参考.方法 将昆明种小鼠随机分为4组:对照组和低、中、高剂量1,2-DCE染毒组(225、450、900 mg/m3),每组8只小鼠,静式吸入染毒10 d,每天染毒3.5 h.最后一次染毒结束后立即进行旷场试验,实验结束后处死小鼠,快速取大脑组织,采用高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量.结果 各染毒组小鼠脑组织中Asp和Glu含量随染毒剂量的增加而升高,且各染毒组小鼠的Glu含量[低、中、高剂量染毒组分别为(67.69±9.89)、(67.99±6.23)、(71.16±5.96)μmol/g Pro]与对照组[(50.78±5.15)μmol/g Pro]比较,差异均有统计学意义(P<0.01);低剂量染毒组小鼠脑组织中GABA含量[(8.08±2.37)μmol/g Pro]较对照组[(12.83±3.36)μmol/g Pro]明显降低,但高剂量组[(19.87±5.30)μmol/g Pro]与对照组比较,明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).低剂量1,2-DCE染毒对小鼠的行为有兴奋作用;而高剂量1,2-DCE染毒对小鼠的探索性及运动性行为有抑制作用.结论 亚急性1,2-DCE染毒可引起小鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量及比值的变化,进而导致出现行为的改变,这可能是1,2-DCE神经毒性作用的机制之一.

Abstract：

Objective To explore the effects of 1,2-dichloroethane (1,2-DCE) on the behavior and the brain neurotransmitter levels in mice.Methods Thirty mice were randomly divided into four groups,which were control group and groups of low,meddle and high exposure (225,450 and 900 mg/m3) to 1,2-DCE for 10 days (3.5 h a day) by inhalation.After the last exposure,the open field test was performed immediately.After exposure all mice were killed and the brain tissues were taken up rapidly.The levels of aspartate (Asp),glutamate (Glu) and gamma-aminobutyric acid (GABA) in the brain were detected by high performance liquid chromatography (HPLC ).Results Levels of Asp and Glu in all exposure groups increased with doses.As compared to the control group,levels of Glu in all exposure groups increased significantly (P<0.05 ).Levels of GABA in the low exposure group were significantly lower than those in control group,but those in the high exposure group were significantly higher than those in control group.The results of the open field test showed that effect of low exposure to 1,2-DCE on the behavior was stimulant,but the high exposure to 1,2-DCE inhibited behavior of exploration,excitement and sport.Conclusions Subacute exposure to 1,2-DCE could result in the change of amino acid neurotransmitter content and ratio in the brain,thereby change the behavior of mice appeared,which might be the mechanism of neurotoxicity caused by 1,2-DCE in part.     

CYP2E1在小鼠1,2-二氯乙烷中毒性肝损伤中的作用

目的探讨亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)染毒对小鼠肝微粒体中CYP2E1表达的影响及其在1,2-DCE中毒性肝损伤中的作用。方法 (1)将32只昆明种雌性小鼠随机分为对照组及1,2-DCE低、中和高剂量染毒组,染毒剂量分别为0.225、0.45和0.9 g/m3。采用静式吸入方式对小鼠染毒10 d,末次染毒的次日,处死小鼠,迅速取血和肝组织。对肝组织进行病理学观察,并检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和活性。(2)将60只昆明种雌性小鼠随机分为空白对照组、玉米油对照组、二烯丙基硫化物(DAS)对照组、单纯染毒组及低和高剂量DAS干预组(150和300 mg/kg)。将DAS溶于玉米油中,于1,2-DCE染毒前4 h通过灌胃给予DAS。1,2-DCE染毒时间及检测指标同上。结果 (1)中、高剂量染毒组小鼠肝组织出现不同程度病理性损伤;高剂量染毒组小鼠血清中ALT活性显著高于对照组(P0.05);中、高剂量染毒组小鼠肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和活性与对照组相比均显著升高(P0.05)。(2)高剂量DAS干预组小鼠肝细胞病理损伤明显改善,其小鼠血清中ALT活性也显著低于单纯染毒组(P0.05);低、高剂量DAS干预组小鼠肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和酶活性均显著低于单纯染毒组(P0.05)。结论 1,2-DCE染毒可明显诱导肝微粒体中CYP2E1蛋白的表达,并导致肝组织损伤,DAS通过抑制CYP2E1蛋白的表达可以减轻1,2-DCE引起的肝损伤。     

1,2-二氯乙烷对血脑屏障的损伤作用

目的 探讨1,2-二氯乙烷对血脑屏障的损伤作用.方法 用1,2-二氯乙烷静式呼吸道急性染毒复制大鼠急性中毒性脑病模型,用硝酸镧染色法测定脑组织的含水量并检测血脑屏障的通透性;同时在体外培养脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞,用1,2-二氯乙烷对生长良好的脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞染毒,在光镜和电镜下观察细胞形态学特征.结果 （1）脑组织主要表现为细胞外水肿,镧示踪法检测到血脑屏障有镧颗粒的大量渗漏.（2）中高剂量染毒组大鼠大脑皮质含水量较对照组明显升高,并且随着染毒后时间的延长更趋严重;大脑髓质含水量仅在染毒后观察6 h组有统计学意义（P＜0.05）.（3）1,2-二氯乙烷能破坏脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞的正常形态学结构,且对神经胶质细胞的损伤表现得较早、较严重.结论 1,2-二氯乙烷可造成血脑屏障的损伤,引起血管源性脑水肿.     

1,2—二氯乙烷中毒性脑病脑水肿类型的实验研究

目的 为研究１,２－二氯乙烷中毒性脑病的脑水肿的类型。方法 以１,２－二氯乙烷为毒物,浓度为６００－８８０００ｍｇ／ｍ＾３,用动式吸入法对ＳＤ大鼠和ＮＩＨ小鼠染毒研制动物模型,后用１０００ｍｇ／ｍ＾３浓度,每天１０ｈ,连续染毒三天,复制ＳＤ大鼠中毒模型,以病理学的光镜和电镜检查为指标,研究其脑水肿类型。     

ATP酶变化在1,2二氯乙烷致脑水肿过程中的作用研究

为探索Na+ K+ATP酶、Ca2 +、Mg2 +ATP酶在 1,2 -二氯乙烷 (1,2 DCE)致脑水肿过程中所起的作用 ,在复制脑水肿模型的基础上 ,检测受试动物脑组织中Na+ K+ATP酶、Ca2 +、Mg2 +ATP酶活力的变化。结果显示 ,随着染毒剂量的增加 ,Na+ K+ATP酶活力逐渐降低 ,最高剂量组与各组相比 ,具有显著性差异 ;Ca2 +、Mg2 +ATP酶活力显著下降 ,与其余各组相比 ,P <0 0 5。结果提示 :1,2 DCE引起了ATP酶活力的下降导致脑组织能量代谢障碍 ,从而可能引起“Ca2 +超载” ,ATP酶活力下降和“Ca2 +超载”可能是引起脑水肿的主要原因     

亚急性1,2-二氯乙烷染毒致小鼠肝组织氧化损伤的研究

本研究的目的是探讨亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)中毒致肝脏氧化损伤情况,为阐明1,2-DCE中毒性肝损伤的机制提供参考依据。将昆明种小鼠随机分成对照组和不同剂量1,2-DCE染毒组(0.35、0.7、1.2 mg/L),采用静式吸入方式染毒1周;然后,取血和肝组织,分别检测血中总胆红素(TB)和谷胱甘肽(GSH)含量,肝组织中丙二醛(MDA)、GSH含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果中、高剂量染毒组小鼠的血浆中TB含量显著高于对照组小鼠;而中、高剂量染毒组小鼠的肝组织中GSH-Px活性和GSH含量及高剂量组的SOD活性显著低于对照组,高剂量染毒组小鼠的肝组织中MDA含量显著高于对照组。提示亚急性1,2-DCE中毒可引起肝组织的氧化性损伤。     

1，2-二氯乙烷致中毒性脑病中神经细胞的变化

目的用体外实验方法研究1,2-二氯乙烷染毒后神经细胞形态学的变化。方法将体外培养的新生SD大鼠的脑皮质细胞,分为设对照组、低、中、高剂量组,观察各组细胞形态学、超微结构和细胞活力的变化。结果染毒后神经细胞形态和超微结构均发生明显变化：在荧光显微镜下随着染毒剂量的增高,细胞核由亮绿色变为桔红色,胞体胀大甚至消失;在透射电镜下染毒组神经细胞的细胞核核膜溶解消失,染色质聚集深染,线粒体和内质网等细胞器肿胀,崩解,且线粒体嵴排列紊乱甚至消失;各染毒组神经细胞活力比对照组有所下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论1,2-二氯乙烷可以导致神经细胞水肿坏死,并且有剂量依赖关系,随着染毒剂量的增加神经细胞破坏程度越大。