全氟化碳通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖刺激A549细胞分泌TNF-α的研究

目的探讨全氟化碳对内毒素诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)炎症因子TNF-α表达的影响及机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞,传代培养后,均分为3组:空白对照组(C组)、脂多糖(LPS)组、全氟化碳+LPS(P+LPS组),P+LPS组在给予LPS同时加入全氟化碳,LPS的终浓度为10μg/ml,全氟化碳的终浓度为12.5%,各组分别孵育30 min、2 h、4 h、12 h、24 h,结束后用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清中TNF-α的水平。结果 (1)Western blot结果显示,C组人肺泡Ⅱ型上皮细胞上有TLR4蛋白的表达,但表达量较低;LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞在30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TLR4及NF-κB蛋白的表达量明显高于C组(P<0.05);与LPS组比较,P+LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TLR4及NF-κB蛋白表达明显下降(P<0.05),C组人肺泡Ⅱ型上皮细胞的TLR4及NF-κB蛋白表达量与P+LPS组相比,无明显差异(P>0.05)。(2)ELISA结果显示,与C组比较,LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TNF-α均明显升高(P<0.05)。P+LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TNF-α较LPS组均明显降低(P<0.05)。结论 (1)TLR4可能介导了LPS诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应。(2)全氟化碳减轻LPS诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应,可能与抑制细胞表面TLR4的信号活化,进一步抑制下游NF-κB的转导路径,从而降低TNF-α的产生有关。     

TNF-α通过PKCα信号通路诱导人系膜细胞IP3R1表达

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对人肾小球系膜细胞(HMCs)Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R1)蛋白和mRNA表达的影响及其分子机制,以期为肝肾综合征(HRS)肾小球滤过率下降的发生机制和防治思路提供理论依据.方法 用实时定量PCR和免疫印迹法检测TNF-α刺激HMCs 0、2、4、8、24 h的IP3R1mRNA和蛋白表达的情况.以TNF-α刺激HMCs 8 h为对照,应用D609,U73122,PP1,Safingol和Rottlerin预处理HMCs后,实时定量PCR法检测TNF-α对IP3R1 mRNA表达的影响；以TNF-α刺激HMCs 24 h组为对照,免疫印迹法检测上述抑制剂预处理后,TNF-α对IP3R1蛋白表达的影响.此外,应用非放射性测活法检测0、4、8、24 h TNF-α对PKC-α的活化影响,并予D609、Safingo干预后,检测TNF-α对PKC-α的活化的影响.结果 TNF-α刺激HMCs 2 h到8 h IP3R1mRNA表达明显增加,于8h达高峰(P＜0.01),而于24 h有所下降(P＜0.01)；而IP3 R1蛋白表达于TNF-α刺激4h开始升高,至24 h IP3R1蛋白升高达高峰(P＜0.01).与8h组比较,抑制剂+TNF-α各组中,Safingol+ TNF-α组和D609+ TNF-α组IP3R1mRNA的表达明显下降,差异具有统计学意义(3.30±0.81) vs.(1.95±0.13),P＜0.05； (2.10±0.49),P＜0.01.与24 h相比,Safingol+ TNF-α组和D609+ TNF-α组,IP3R1蛋白的表达亦明显下降(3.09±0.13) vs.(1.86 +0.39),P＜0.01；(1.98±0.02),P＜0.01.非放射性测活检测显示TNF-α处理8h使PKC-α自动磷酸化而活化,而D609或Safingol预处理后,可抑制TNF-α对PKC-α的活化.结论 TNF-α能上调IP3R1 mRNA及蛋白的表达,PC-PLC/PKC-α信号途径可能在TNF-α上调IP3R1的表达中起重要作用.     

黄芪甲苷对妊娠期高血压模型大鼠胎盘组织中HIF-1α、sFLT-1和PLGF表达水平的影响

目的探讨黄芪甲苷对妊娠期高血压(HDCP)模型大鼠胎盘组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFLT-1)和胎盘生长因子(PLGF)表达水平的影响。方法将30只SD孕鼠随机分为对照组、模型组和黄芪组各10只。于妊娠第12天,模型组和黄芪组灌胃亚硝基左旋精氨酸甲酯10 mg/kg,连续7 d,建立大鼠HDCP模型,对照组灌胃等量生理盐水。于妊娠第16天,黄芪组灌胃20 mg/kg黄芪甲苷溶液,模型组和对照组分别灌胃等量的生理盐水,1次/d,连续灌胃6 d。于妊娠第12天、16天、17天及21天测尾动脉血压和24 h尿蛋白含量;处死后,采用ELISA法测定血清中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western Blot胎盘组织中HIF-1α、sFLT-1和PLGF的表达。结果与对照组相比,模型组和黄芪组尾动脉血压、24 h尿蛋白含量、血清IL-6和TNF-α、HIF-1α和sFlt-1蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P 0. 05),模型组PLGF的蛋白和mRNA表达水平显著下降(P 0. 05),黄芪组PLGF的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P 0. 05);与模型组相比,黄芪组尾动脉血压、24 h尿蛋白含量、血清IL-6和TNF-α、HIF-1α和sFlt-1蛋白和mRNA表达水平均显著下降(P 0. 05),PLGF的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P 0. 05)。结论黄芪甲苷可以使HDCP大鼠的HIF-1α和sFlt-1的表达下调,PLGF的表达上调,对HDCP具有一定的治疗作用。     

血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α及其靶基因诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 104只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,血必净组于CLP后2、12、24、36、48、60 h经阴茎背静脉注射血必净注射液4 ml/kg,其余各组注射等量生理盐水.各组分别于CLP后6、12、24、72 h分别活杀大鼠取肝脏,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织HIF-1α和iNOS的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α和iNOS的mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组CLP后6 h HIF-1α和iNOS蛋白表达均迅速升高,其中HIF-1α蛋白表达24 h升高幅度最明显,iNOS蛋白表达12 h达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h差异仍有统计学意义(P<0.05或P<0.01);血必净治疗组HIF-1α、iNOS 蛋白表达受到明显抑制,CLP后12、24、72 h HIF-1α、iNOS蛋白表达均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01).模型组CLP后6 h HIF-1α、iNOS mRNA表达开始升高,12 h均达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h仍明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);血必净注射液能显著抑制肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达升高,CLP后6、12、24、72 h肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达均明显下调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液能抑制脓毒症大鼠HIF-1α及其靶基因iNOS的表达.     

肿瘤坏死因子-α、白介素-6、丙二醛、超氧化物歧化酶在大鼠腹腔海水浸泡伤中的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)在大鼠腹部开放合并海水浸泡中的表达.方法:采用腹部开放伤合并海水浸泡大鼠致伤模型.在光镜下观察肠黏膜损伤程度;利用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血浆TNF-α、IL-6含量的变化;分光光度法检测小肠组织MDA、SOD的含量.结果:腹部开放伤合并海水浸泡后,大鼠小肠病理学检查出现小肠充血、淋巴细胞浸润及肠上皮细胞间紧密连接破坏等改变;血中TNF-α、IL-6水平升高(P＜0.05或P＜0.01):肠组织MDA水平升高,SOD活性降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:腹部开放合并海水浸泡可致大鼠肠黏膜屏障功能受损,TNF-α、IL-6、氧自由基参与了腹部开放海水浸泡伤后继发性炎症反应过程.     

缺氧诱导因子-1α对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其信号转导

目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(IRI)的保护作用及蛋白激酶C(PKC)信号转导作用.方法 采用结扎冠状动脉左前降支30 min、再灌注180 min的方法建立IRI动物模型.将32只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、IRI组、缺血预处理(IPC)组、IPC加PKC抑制剂组(IPC+Ⅰ组,IPC前静脉注射PKC抑制剂白屈菜季铵碱5 mg/kg),每组8只.再灌注180 min后取出心脏,测定HIF-1α、血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA和蛋白以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达;心内取血测定白细胞介素-8(IL-8)和髓过氧化物酶(MPO)水平.结果 与假手术组比较,IRI组心肌HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白及caspase-3蛋白表达均明显增多(HIF-1α mRNA:0.849±0.032比0.356±0.022,HIF-1α蛋白:0.762±0.042比0.324±0.016,HO-1 mRNA:0.862±0.045比0.332±0.012,HO-1蛋白:0.792±0.044比0.335±0.031,caspase-3蛋白:0.371±0.015比0.061±0.012,均P＜0.01),血IL-8、MPO显著升高[IL-8:(812±26)ng/L比(72±13)ng/L,MPO:(78.7±2.9)kU/L比(13.3±1.5)kU/L,均P＜0.01].与IRI组比较,IPC组HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白表达(HIF-1α mRNA,1.412±0.039,HIF-1α蛋白:1.362±0.045,HO-1 mRNA:1.523±0.038,HO-1蛋白:1.420±0.041)明显增多,caspase-3蛋白表达(0.129±0.019)明显降低(均P＜0.01),血IL-8[(432±59)ng/L]和MPO水平[(43.2±5.9)kU/L)明显降低(均P＜0.01).IPC+Ⅰ组各指标与IRI组无明显差异.结论 HIF-1α对心肌IRI具有重要保护作用,HIF-1α的表达是依赖PKC激活的,PKC是HIF-1α表达的重要信号转导通路.     

β-七叶皂苷钠对心肺复苏后大鼠脑细胞中低氧诱导因子-1α的影响

目的 探讨自主循环恢复(return of spontaneous circulation,ROSC)后大鼠脑细胞中低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达及β-七叶皂苷钠对其影响.方法 清洁级SD成年大鼠60只,随机(随机数字法)分3组(n=20).(1)实验组:ROSC后即刻腹腔注射β-七叶皂苷钠(5 mg/kg)一次;(2)对照组:ROSC后即刻腹腔注射等量生理盐水一次;(3)假手术组:未经历心搏骤停-心肺复苏和未给药.采用窒息合并冰氯化钾停跳液法制备大鼠心搏骤停-心肺复苏模型.分别在ROSC后1、6、12、24 h抽血,然后处死取脑组织.ELISA检测血清NSE、S100β,免疫组化和Real-time PCR检测脑细胞HIF-1α、VEGF、EPO蛋白和mRNA.各组同一时间点之间比较采用成组t检验,组内不同时间点之间比较采用单因素方差分析,多重比较采用Bonferroni法.相关性分析采用Pearson法.结果 与假手术组比较,ROSC后1、6、12和24 h对照组大鼠血清NSE与S100β明显升高(P＜0.05),脑细胞中HIF-1 α、VEGF、EPO蛋白和mRNA表达均明显增加(P＜0.05).与对照组比较,ROSC后1、6、12、24 h实验组大鼠血清NSE与S100β明显降低(P＜0.05),脑细胞中HIF-1α、VEGF、EPO蛋白和mRNA表达均明显增加(P＜0.05).ROSC后大鼠脑细胞HIF-1αmRNA与EPO mRNA、VEGF mRNA均呈正相关(r=0.866,P＜0.05;r =0.952,P＜0.01).结论 心肺复苏后大鼠脑细胞HIF-1α表达增加,β-七叶皂苷钠能上调HIF-1α转录和蛋白表达,可能是通过增加EPO、VEGF基因转录及蛋白表达而增加脑细胞对缺血缺氧的耐受性,从而起神经保护作用.     

长期有氧运动对代谢综合征大鼠炎症及心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响

目的:研究有氧运动对代谢综合征(MS)大鼠炎症反应的影响以及心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的表达,探讨运动对MS心血管炎症反应调节的可能机制。方法:4周龄SD雄性大鼠随机分为基础对照组(C)和高脂高盐饲料喂养组。18周后将MS大鼠随机分为模型对照组(MC)、模型运动组(ME)。运动组大鼠行60min/d、27m/min、5%坡度跑台训练12周。ELISA法测定血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量;荧光定量R-PCR测定心肌组织PPARαm RNA表达、Western Blot测定心肌PPARα蛋白含量。结果:(1)与C组相比,MC组血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量显著升高(P0.05、P0.01、P0.01)、MC组心肌PPARαm RNA和蛋白表达显著降低(P0.05);(2)与MC组相比,ME组大鼠血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量显著降低(P0.05、P0.01、P0.01)、ME组心肌PPARαm RNA和蛋白表达显著升高(P0.05、P0.01)。结论:MS大鼠炎症反应明显,长期有氧运动干预能有效降低其炎症反应,PPARα可能介导了机体的炎症反应。     

白细胞介素-1β在人肾小管上皮细胞转分化中的作用及Janus激酶2抑制剂AG490的影响

目的 探讨Janus激酶2抑制剂AG490对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响. 方法 将体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs)分为空白对照组、IL-1β(5 ng/ml)刺激组及AG490干预组(IL-1β 5 ng/ml+AG490 10 μmol/L).分别于处理后24、48、72 h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测细胞角蛋白-18(CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达. 结果 正常肾小管上皮细胞内其自身标志物CK-18高表达(1.25±0.08),而α-SMA表达很少(0.17±0.01).IL-1β刺激组随刺激时间延长CK-18表达逐渐减少(24 h:0.69±0.04,48 h:0.52±0.03,72 h:0.30±0.01),而α-SMA蛋白合成逐渐增加(24 h:0.56±0.04,48 h:1.05±0.07,72 h:1.43±0.07),与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).AG490干预能使CK-18的表达逐渐恢复(24 h:1.07±0.07,48 h:0.93±0.06,72 h:0.83±0.06),并减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用(24 h:0.33±0.01,48 h:0.52±0.01,72 h:0.61±0.04),且作用显著(均P＜0.05).免疫细胞化学染色观察结果与其一致. 结论 炎症因子IL-1β通过降低肾小管上皮细胞CK-18表达,上调α-SMA表达,促使肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞;Janus激酶2抑制剂AG490能部分阻断IL-1β对肾小管上皮细胞的促转分化作用.     

HIF-1α通过TLR4/NF-κB信号通路对 心肌缺血-再灌注大鼠心肌损伤的保护机制分析

目的分析缺氧诱导因子1α(HIF-1α)通过TLR4/NF-κB信号通路保护心肌缺血-再灌注(MIRI)大鼠心肌损伤的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、MIRI组和HIF-MIRI组各10只,HIF-MIRI组于造模前24 h腹腔注射二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG,20μg/g),MIRI组和HIF-MIRI组大鼠采用手术结扎法制备MIRI模型,对照组只打开心包,不结扎。造模成功后,HE染色检测各组大鼠心肌组织损伤;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平; ELISA法测定心肌组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β和IL-6水平;实时荧光定量(RT)-PCR测定HIF-1αmRNA的表达; Western Blot检测HIF-1α、Toll-样受体4(TLR4)、核转录因子(NF-κB)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达。结果与对照组相比,MIRI组和HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA的表达显著上调(P 0. 01),HIF-1α、TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与MIRI组相比,HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH水平、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6显著下降(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA和蛋白的表达显著上调(P 0. 01),TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著下调(P 0. 01),HE染色显示心肌组织的病理变化明显减轻。结论 HIF-1α可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放,降低机体炎症因子水平,改善MIRI心肌损伤。     

肿瘤坏死因子-α对内皮细胞组织因子和组织因子途径抑制物表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达TF及TFPI的影响.方法:设不同时间组,TNF-α 10 ng/mL分别培养0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h,另设不同溶度组,TNF-α 0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、20ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL分别培养6 h;ELISA法测定TF及,TFPI抗原的表达;RT-PCR检测TF及TFPI基因的表达.结果:各浓度的TNF-α对HUVECs的细胞活力无明显影响;TNF-α促进TF抗原的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α 10 ng/mL作用6 h时最明显(P＜0.01);TNF-α促进TF mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在3 h时达到高峰(P＜0.01);TNF-α对HUVECs表达TFPI抗原及TFPI mRNA无明显影响.结论:TNF-α可以诱导HUVECs细胞表达TF:TNF-α对HUVECs细胞TFPI的表达无明显影响.     

乙型肝炎病毒携带者血清IL-6、IL-8、TNF-α检测及临床意义

目的 探讨乙型肝炎病毒携带者血清IL-6、IL-8 及TNF-α水平的变化,并分析与肝功能相关指标的关系.方法 采用ELISA 法检测血清IL-6、IL-8 及TNF-α的含量及前S1 抗原,并采用酶动力学法进行肝功能相关酶学指标检测.结果 乙型肝炎病毒携带者血清IL-6 及TNF-α水平与对照组相比较均明显升高(P ＜0.01),血清IL-8 水平"大三阳"组和前S1 抗原阳性组与对照组相比较差异有统计学意义(P ＜0.05);肝功能检测结果显示:ALT、AST、GGT 各组与对照组相比较均有升高(P ＜0.05);ALP 与对照组相比较除"小三阳"外,其他组均升高(P ＜0.05).结论 血清IL-6、IL-8 及TNF-α水平能反映机体免疫损害情况,对判断乙型肝炎病毒携带者病情变化有较重要的临床意义.     

补阳还五汤对大鼠脑缺血后白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨补阳还五汤对脑缺血后大鼠脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 按随机数字表法将SD大鼠分为正常对照组、假手术组、模型组、补阳还五汤组,后3组再按给药后1、3和7 d分为亚组,每组5只.采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立右侧局灶性脑缺血大鼠模型;补阳还五汤组于术后2 h起灌服补阳还五汤10 ml/kg(14.2 g/kg)、每日1次.分别于相应时间点处死大鼠后取脑组织,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定IL-1β和TNF-α的蛋白及mRNA表达.结果 正常对照组和假手术组有低水平的IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达.模型组IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA表达于给药后1 d开始升高,IL-1β蛋白及mRNA表达在3 d时达高峰后开始下降,TNF-α蛋白及mRNA表达于7 d达高峰.与模型组比较,补阳还五汤组给药后1、3和7 d脑组织中IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达均明显下降[IL-1β蛋白(ng/L),1 d:90.290±8.693比102.556±13.934,3 d:129.632±11.050比150.117±8.552,7 d:66.185±9.020比91.362±9.901;TNF-α蛋白(ng/L),1 d:210.341±19.247比236.887±20.137,3 d:267.503±21.006比322.659±15.068,7 d:299.637±17.717比386.678±16.297;IL-1β mRNA,1 d:0.54±0.09比0.64±0.11,3 d:0.80±0.06比0.89±0.07,7 d:0.70±0.09比0.78±0.08;TNF-α mRNA,1 d:0.64±0.09比0.73±0.11,3 d:0.74±0.13比0.85±0.07,7 d:0.82±0.07比0.93±0.08],差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 补阳还五汤可能通过下调缺血脑组织IL-1β和TNF-α的蛋白及mRNA表达来调控炎症因子的释放,从而起到脑保护作用.     

辛伐他汀对脂多糖诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞钠通道α亚基的影响

目的 通过体外给药的方式观察辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导的原代培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(ATⅡ)钠通道α亚基(α-ENaC)mRNA表达的影响.方法 ATⅡ细胞原代培养,分为空白对照组、LPS损伤组(终浓度1 mg/L)、辛伐他汀低和高剂量组(20μmol/L、30μmol/L)、溶剂对照组.分别于培养1、12、24 h用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1 β(IL-1β)的浓度,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中α-ENaC mRNA表达.结果 LPS损伤后1、12、24 h时TNF-α、IL-1β浓度均较空白对照组显著升高.辛伐他汀低剂量组1、12、24h TNF-α(ng/L)和IL-1β(ng/L)均较LPS损伤组明显下降(TNF-α 1h:1178.80±127.43比2336.00±170.04,12 h:1003.60±59.61比2479.80±210.41,24 h:695.80±25.24比1167.60±132.72;IL-1β 1 h:285.00±42.60比429.60±27.39,12 h:238.60±24.12比822.20±12.74,24 h:213.40±17.87比637.60±22.96,均P＜0.05),高剂量组较低剂量组下降更明显(TNF-α1h:965.60±24.45比1178.80±127.43,12 h:522.80±16.89比1003.60±59.61,24 h:252.40±17.64比695.80 ±25.24;IL-1β 1 h:225.60±34.44比285.00 ±42.60,12 h:190.60 ±17.64比238.60±24.12,24 h:152.80±14.70比213.40±17.87,均P＜0.05),但仍较空白对照组明显上升.在培养1h时各组α-ENaC mRNA表达差异均无统计学意义.培养12h、24 h时,LPS损伤组α-ENaC mRNA表达(A值)明显低于空白对照组(12 h:0.211±0.021比0.496±0.027,24 h:0.253±0.030比0.482±0.030,均P＜0.05);辛伐他汀低剂量组α-ENaC mRNA表达均较LPS损伤组明显上升(12 h:0.363 ±0.030比0.211±0.021,24 h:0.309±0.024比0.253±0.030,均P＜0.05),高剂量组较低剂量组升高更明显(12h:0.413±0.034比0.363±0.030,24h:0.346±0.024比0.309±0.024,均P＜0.05),但仍较空白对照组明显下降.空白对照组与溶剂对照组各指标差异无统计学意义.结论 大剂量辛伐他汀可上调LPS诱导的大鼠ATⅡ细胞α-ENaC mRNA表达,其机制可能与调节TNF-α、IL-β的分泌有关.     

海水淹溺性急性肺损伤兔几种细胞因子的动态变化

目的 探讨TNF-α、IL-1β、IL-6 、IL-8、IL-10等细胞因子在海水淹溺性ALI中的作用.方法 36只新西兰兔随机分成六组:0(对照组),灌注1、3、6、12、24 h组,每组6只动物.灌注组经气管插管灌注2 mL/kg海水.不同时间点观察各组动物血气分析的变化.计算肺湿干质量比(W/D)、肺通透指数(LPI).以ELISA法检测肺组织和血清中TNF-α、IL-1β、IL-6 、IL-8、IL-10表达水平,同时进行病理学检查,并计算肺病理评分.结果 灌注海水后氧合指数迅速低至300以下,持续时间长达6 h.W/D值于S3h达高峰,肺通透指数以S6h组数值最高.各时间点肺组织和血清中TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-10均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01).TNF-α、IL-1β、IL-10高峰在6 h,IL-8高峰在12 h.血清IL-6于1 h后持续在最高水平,肺组织IL-6浓度仅在6 h时升高(P<0.05).肺大体标本于灌注后3 h瘀血水肿最严重,体积最大.显微镜下炎症细胞浸润于6～12 h最突出,肺泡间隔宽度随时间延长而加重.肺病理评分1 h时已显著高于对照组(P<0.01),6 h达最高.LPI,肺组织和血清TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-10及血清IL-6表达与肺损伤程度呈正相关(P<0.05或P<0.01),TNF-α与IL-1β、IL-10以及血清IL-6亦密切相关.结论 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10等细胞因子以协同或拮抗的方式参与了海水淹溺性ALI的病理过程,全身性炎症反应和抗炎反应的失衡在海水淹溺性ALI发生发展中可能起重要作用.     

缺血后处理对缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIF-1α的影响

目的 观察缺血后处理对缺血再灌注损伤（IRI）大鼠肾脏缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法 将72只成年SD大鼠随机分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、缺血后处理组（IPO组），每组24只。S组结扎右肾动脉，暴露左肾45min后关闭腹腔；IR组结扎右肾动脉并完全阻断左侧肾动脉45min后恢复血流；IPO组在IR模型的基础上，恢复血流前给予反复10次20s供血20s缺血处理。每组分别在造模后0．5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h留取血和肾组织标本，检测血肌酐和血尿素氮，并对肾组织行免疫组化染色和单言评分；Western blot检测HIF-1α的表达强度。结果 HIF-1α主要在小管上皮细胞中表达，肾小球中未发现阳性染色。各组HIF-1α表达情况：与S组相比IR组HIF-1α在1h表达开始显著升高，6h达到高峰，12h开始下降。而IPO组HIF-1α在3h表达开始升高，6h达到高峰，且高峰水平显著高于IR组，24h后HIF-1α开始下降，48h其表达水平与IR组差异无显著性。结论 缺血后处理能增加缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIF-1α表达并延长其表达高峰时间，从而减轻缺血缺氧对肾脏的损伤。     

戊四氮诱导的癫痫对发育期大鼠海马内低氧诱导因子-1α和血红素加氧酶-1的影响

目的探讨发育期大鼠癫痫持续状态对其海马内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法 21 d SD大鼠随机分为2组:生理盐水组(NS组)、戊四氮(PTZ)致癫痫持续状态模型组(模型组)。1%PTZ(80 mg/kg)予大鼠腹腔注射诱导建立癫痫持续状态模型,生理盐水组予等量生理盐水腹腔注射,采用免疫组化和Western blot分别检测海马内HIF-1α、HO-1蛋白和阳性细胞数的表达。结果 HIF-1α、HO-1蛋白在正常生理状态下(NS组)均表达,而且表达平稳;在模型组存在明显的表达时程和表达高峰变化,HIF-1α蛋白1 h即有表达,4 h增多,8 h达高峰,然后逐渐下降;HO-1蛋白1 h少量表达,4~8 h逐渐增多,12 h达高峰,后渐下降。结论癫痫持续状态后,HIF-1α和HO-1表达升高可能是癫痫后的一个重要的脑保护机制。     

缺血后处理对缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIE-1α的影响

目的 观察缺血后处理对缺血再灌注损伤(IRI)大鼠肾脏缺氧诱导冈子-I α(HIF-1α)表达的影响.方法 将72只成年SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPO组),每组24只.S组结扎右肾动脉,暴露左肾45min后关闭腹腔;IR组结扎右肾动脉并完全阻断左侧肾动脉45min后恢复血流;IPO组在IR模型的基础上,恢复血流前给予反复10次20s供血-20s缺血处理.每组分别在造模后0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h留取血和肾组织标本,检测血肌酐和血尿素氮,并对肾组织行免疫组化染色和单盲评分;Western blot检测HIF-Iα的表达强度.结果 HIF-1α主要在小管上皮细胞中表达,肾小球中末发现阳性染色.各组HIF-1 α表达情况:与S组相比IR组HIF-1 α在1h表达开始显著升高,6h达到高峰,12h开始下降.而IPO组HIF-1α在3h表达开始升高,6h达到高峰,儿高峰水甲显著高于IR组,24h后HIF-1α开始下降,48h其表达水平与IR组差异无显著性.结论 缺血后处理能增加缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIF-1 α表达并延长其表达高峰时间,从而减轻缺血缺氧对肾脏的损伤.     

热打击对培养人骨骼肌细胞的损伤和释放IL-6、TNF-α的影响

目的:研究梯度热打击对体外培养骨骼肌细胞的损伤和表达IL-6、TNF-α的影响.方法:利用CCK-8法对比各组不同时相细胞存活率和24 h增殖率.采用ELISA法对比梯度热打击量对骨骼肌细胞释放IL-6和TNF-α的影响.结果:对比37℃对照组,热打击组各个时相细胞活力均下降(P＜0.001),并呈时间及温度依赖关系.对比37℃对照组,39℃组7h时段及41℃和43℃组各时相增殖率显著下降(P＜0.001),并呈时间及温度依赖关系.ELISA检查显示,热打击组IL-6和TNF-α的表达量较37℃对照组显著上升(P＜0.001),41℃和43℃组较39℃组显著上升(P＜0.01).结论:热打击对骨骼肌细胞具有细胞毒效应,抑制骨骼肌细胞的增殖,并促进细胞因子IL-6和TNF-α的释放.     

缺氧诱导因子HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的:研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)与缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF-2α)在宫颈癌组织中的表达和相关性.方法:免疫组织化学染色方法检测宫颈癌组织中HIF-1α与HIF-2α的表达.用SPSS统计软件分析HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的相关性.结果:原位癌组、浸润癌组HIF-1α蛋白阳性表达率分别为57.7％、78.6％;HIF-2α蛋白阳性表达率分别为65.4％、85.7％,宫颈癌组织中HIF-1α阳性表达得分为1.56±1.60,HIF-2α阳性表达得分为4.51±1.04,HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达呈显著正相关(rs=0.855,P＜0.05).结论:宫颈原发癌、浸润癌中,HIF-1α、HIF-2α表达与宫颈癌临床病理特征有密切关系,且两者表达呈显著正相关,两者在宫颈癌的发生发展及浸润转移过程中可能起协同作用.