抑制IGFBP-2基因的表达对U251细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨 RNA干扰技术沉默胰岛素生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）对胶质瘤细胞株 U251增殖、凋亡的影响,为胶质瘤的基因治疗提供一个可选择的靶点和方法。方法构建靶向 IGFBP-2基因的 RNAi表达载体;采用脂质体法将 siRNA转染U251细胞,设非特异的 siRNA阴性对照组和未转染 siRNA的阴性对照组;采用RT-PCR法半定量检测 siRNA对 IGFBP-2基因表达的抑制作用;用 MTT法测定 U251细胞增殖变化;流式细胞术检测 siRNA诱导细胞凋亡作用。结果构建的 RNAi表达载体抑制了 IGFBP-2基因的表达（P＜0．01）;RNA干扰沉默 IGFBP-2基因可抑制 U251细胞增殖,促进细胞凋亡。结论在细胞水平上,构建的靶向 IGFBP-2的 siRNA可明显抑制 IG-FBP-2基因的表达,导致胶质瘤细胞凋亡率明显上升（P＜0．01）,为进一步利用 RNA干扰进行胶质瘤的基因治疗研究奠定基础。     

RhoE在诱导人脑胶质细胞瘤凋亡中的作用

目的:研究和探讨RhoE在诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用,为胶质瘤分子靶向治疗寻找新的靶点.方法:采用western blotting检测RhoE在人脑胶质瘤细胞系中的表达水平;构建重组pcDNA3.1-RhoE真核表达载体,将质粒快速转染U87细胞,采用四唑盐法检测细胞增殖能力的变化;Hoechst染色法观察细胞核的形态改变;流式细胞术检测细胞凋亡的情况;western blotting分析细胞Bcl-2、Bax表达变化,以及capase-3和NF-kB的活化水平.结果:RhoE蛋白在T98、A172和U87细胞系中表达明显低于正常人脑胶质细胞(P＜0.05);上调RhoE表达后,U87细胞增殖能力明显下降(P＜0.05),并且发生了显著的细胞凋亡改变(P＜ 0.05);western bolt检测显示裂解的caspase-3水平增加,Bcl-2表达水平下降,Bax的表达水平升高,另外,p65在细胞核中的表达降低.结论:RhoE可能通过抑制NF-kB的活性,下调Bcl-2/Bax的比例,从而促进caspase-3的活化,最后诱导U87细胞发生凋亡.     

siRNA抑制人胶质瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖

目的研究siRNA对人胶质瘤U251细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入U251细胞;用半定量RT-PCR检测siRNA MDM2对MDM2基因表达的抑制作用;并用MTT法检测siRNA MDM2对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染siRNA MDM2的细胞的MDM2基因表达分别下调到对照组的31.61%和40.18%;转染阴性对照质粒的MDM2基因没有明显改变。MTT结果表明转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,与对照组比差异具有显著性（P〈0.5）;同时细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,转染siRNA MDM2-1,2的凋亡率分别为49.9%和40.0%,转染阴性对照质粒和对照组未检测出明显的增殖抑制和凋亡改变。结论 siRNA MDM2可以有效抑制U251细胞株中MDM2的表达,并抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

特定沉默胶质瘤U251细胞株的PDGF-B基因对细胞凋亡和增殖的影响研究

目的利用RNA干扰基因治疗技术,特定沉默胶质瘤U251细胞株的血小板衍生生长因子B(PDGF-B)基因,观察其对U251细胞株细胞凋亡和增殖的影响。方法用血清培养液(含10%胎牛血清DMEM培养基)体外培养人U251脑胶质瘤细胞系。随机分为3组,第1组为实验组:转染siRNA的细胞,第2组为阴性对照组:转染空白质粒的细胞;第3组为空白对照组:细胞常规培养不予以干预。利用脂质体将siRNA转染进入U251细胞,在细胞内形成双链siRNA,识别并降解PDGF-B mRNA。通过RT-PCR检测U251细胞中PDGF-B基因mRNA的表达水平,Western blot检测PDGF-B的蛋白表达,MTT法检测U251细胞的增殖情况,流式细胞学对比检测3组细胞的凋亡情况。结果利用脂质体将靶向PDGF-B基因siRNA转染进入U251细胞,48 h后利用RT-PCR检测PDGF-B基因mRNA的表达,结果显示与阴性对照组和空白对照组对比,转染组PDGF-B基因mRNA表达水平明显下降;转染72 h后,Western blot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达明显抑制(抑制率60%);MTT结果显示siRNA转染组U25细胞增殖较对照组明显降低;流式细胞学检测显示,与阴性对照组和空对照组相比,转染siRNA的细胞的实验组中,G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,提示降低PDGF-B在胶质瘤细胞的表达,能够使细胞周期阻滞在G1期,从而抑制胶质瘤细胞的增殖,并促进细胞的凋亡。结论构建靶向胶质瘤细胞PDGF-B的RNA干扰质粒并转染人胶质瘤U251细胞株后,通过体外试验观察可明显抑制U251细胞株PDGF的表达,其所产生的RNA干扰效应对人胶质瘤U251细胞株有明显的生长的抑制和促进凋亡作用。     

OTUB1基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞凋亡及STAT3信号通路的影响研究

目的探讨卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞活力、凋亡及STAT3信号通路的影响。方法 Western blotting检测OTUB1在人脑恶性胶质瘤U251、U87、BT325和M17细胞中的蛋白表达;U87细胞分为空白组(不做任何处理)、NC组(转染Control siRNA)和si-OTUB1组(转染OTUB1 siRNA),参照Lip2000转染试剂盒说明转染siRNA。Western blotting检测转染OTUB1-siRNA后OTUB1的蛋白表达,并选择抑制效果好的siRNA作为研究对象;MTT检测OTUB1-siRNA转染后的24~72 h细胞活力;流式细胞仪检测OTUB1-siRNA转染的48 h细胞凋亡率;Western blotting检测STAT3、磷酸化的STAT3及STAT3信号通路下游相关基因cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达。结果 OTUB1在U251、U87、BT325和M17细胞中均呈现出阳性表达,在U87细胞中呈现出较高水平表达;OTUB1-siRNA转染后的U87细胞OTUB1的蛋白表达显著低于空白组和NC组(P0.05);与NC组比较,si-OTUB1转染U87细胞24-72h的细胞活力均显著降低,转染48 h的细胞凋亡率显著升高,p-STAT3、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达均显著降低(P0.05),而三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 OTUB1在人脑恶性胶质瘤细胞高表达,抑制OTUB1表达后可明显降低脑胶质瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能是通过下调STAT3信号通路实现的。     

NOB1影响胶质瘤细胞增殖、凋亡的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1基因的表达,探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响.方法 构建NOB1基因的短发卡（shRNA）慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251和U87-MG细胞,采用实时定量聚合酶链反应检测NOB1在恶性胶质瘤细胞系中的表达.采用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况;同时利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察NOB1基因对U251和U87-MG细胞增殖、凋亡的影响.结果 NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达.NOB1-shRNA慢病毒能有效感染胶质瘤细胞,实验结果显示感染后U251和U87-MG细胞的增殖能力明显下降;U251克隆形成能力明显受到抑制;细胞周期在G0/G1停滞,而且细胞出现显著性凋亡;上述差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达;降低NOB1基因的表达,可以显著降低胶质瘤细胞的增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡;NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用.     

重组腺病毒p53 上调凋亡调控因子通过凋亡通路增强胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的体外研究

目的 探讨转染p53 上调凋亡调控因子(PUMA)的人脑胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性增强的作用机制.方法 将人脑胶质瘤细胞U87MG 分为正常对照组、空载体组和实验组进行培养,分别将感染复数(MOI) ＝50 的空载体腺病毒(Ad-△ BH3)和携带PUMA 的重组腺病毒(Ad-PUMA)转染U87MG 细胞,转染后用MTT 比色法测定各组细胞的存活率并计算替莫唑胺(TMZ)IC50,流式细胞仪检测细胞周期的变化,应用TUNEL 法检测细胞的凋亡情况.Western blot 检测凋亡相关蛋白p53、Bax 的表达.结果 外源性PUMA 基因在Ad-PUMA 转染U87MG 48 h 后,随着时间延长,PUMA 表达使U87MG 细胞的增殖能力降低并诱导凋亡,转染24 h、48 h、72 h 的生长抑制率分别为17.3%、35.6%、43.3%,凋亡率分别为20.3%、31.4%、45.4%.正常对照组、Ad-PUMA、Ad-△BH3 组细胞的TMZ IC50分别为(15.0 ±1.9)μmol/L、(2.3 ±0.1)μmol/L 和(14.4 ±1.6)μmol/L.PUMA 表达的U87MG 细胞DNA 合成受到抑制,周期阻滞在G2 期;Western blot 检测显示p53 表达在各组中差异无统计学意义(P ＞0.05)、PUMA 和Bax 在实验组中表达较对照组强,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 Ad-PU-MA 转染可有效增强人脑胶质瘤细胞U87MG 对TMZ 的敏感性,抑制人脑胶质瘤细胞U87MG 的增殖,通过诱导细胞G2 期阻滞促进其凋亡,促凋亡机制不依赖于p53.     

靶向c-myc基因的siRNA基因干扰对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响

目的 阐述靶向c-myc基因的siRNA基因转染干扰对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响作用. 方法 将靶向c-myc基因的siRNA片段转染入大肠癌Lovo细胞,特异沉默c-myc基因,通过实时荧光定量PCR法检测c-myc mRNA表达水平,原位末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferasedUTP nick end labeling,TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况及噻唑蓝法[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]检测细胞的增殖能力. 结果 经过转染的Lovo细胞组与未转染的对照组c-myc mRNA表达量比率为0.22:1,c-myc mRNA表达量比例有统计学差异(P＜0.05).经过转染的Lovo细胞与未转染的对照组的凋亡指数分别为32.4％与65.4％,具有显著性统计学差异(P＜0.01).MTT检测经过转染的Lovo细胞与未转染的对照组的细胞增值率,分别为79.28％与38.32％,具有极其显著性统计学差异(P＜0.001). 结论 将靶向c-myc基因的siRNA片段转染入大肠癌Lovo细胞,特异沉默c-myc基因,从而证实c-myc抑制大肠癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,从而为大肠癌的基因治疗寻求更多的治疗靶点.     

色素上皮细胞衍生因子对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 本研究试图通过检测人脑胶质瘤U87细胞中色素上皮细胞衍生因子(PEDF)以及凋亡相关蛋白的表达,探讨其表达在胶质瘤的增殖和细胞凋亡调控中的作用.方法 将100μg/ml的PEDF加入U87细胞中(PEDF处理组),同时以未加PEDF蛋白的胶质瘤细胞作对照组(U87con),采用四甲基偶氮唑蓝法榆测PEDF对胶质瘤细胞U87增殖率的影响;流式细胞术检测胶质瘤细胞是否凋亡;Western-blot(免疫印迹)检测PEDF处理组凋亡相关蛋白p16的变化.结果 实验数据显示:与对照组相比,当PEDF浓度为100μg/ml时,对U87的抑制率为(54.29±0.62)%,PEDF处理组胶质瘤细胞的增殖明显减慢(t=2.63,P＜0.05);PEDF处理过的凋亡细胞产生明显增多,annexin V+和PI-的细胞为(21.84±0.36)%,提示胶质瘤细胞处于凋亡早期(t=2.86,P＜0.05);PEDF诱导的发生凋亡的胶质瘤细胞中,p16蛋白的表达量明显增加(0.82±0.09),与对照组相比(0.43±0.03),差异具有统计学意义.结论 PEDF与p16协同作用,可能在胶质瘤细胞凋亡的调控中起着重要的作用,从而抑制胶质瘤细胞增殖.     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

心力衰竭病人延续性护理现状调查

[目的]了解心力衰竭病人延续性护理实施现状,探讨心力衰竭病人延续性护理方法及发展方向。[方法]用自行设计的调查问卷对114例心力衰竭病人的一般资料、自我护理状况及生活质量进行调查。[结果]不同文化程度、性别、职业、婚姻状态的病人生活质量得分不同,差异有统计学意义(P0.01),病人出院后的延续性护理以家人照顾为主,自我护理状况不理想。[结论]延续性护理模式在我国尚属初步实施阶段,临床医护工作者应积极倡导实施,鼓励家属参与及进行社区护理干预提高病人自我护理能力,提高生活质量。     

Evaluation of the aesthetics of physical methods of euthanasia of anesthetized rats

Dissection of living brain tissue for in vitro experiments requires the use of a rapid euthanasia method. However, the method must not subject animals to unnecessary pain and must be aesthetically acceptable to experimenters. The purposes of the current study were to assess the aesthetics of 6 euthanasia methods, measure the procedure duration, and evaluate brain for pathology after each procedure. We digitally recorded euthanasia of isoflurane-anesthetized rats by 6 physical methods: anesthetic overdose, cardiac exsanguination, decapitation, closed intrathoracic transection of the great vessels and heart, thoracic percussion, and thoracotomy with rupture of great vessels. Volunteer researchers and animal caretakers watched the video and completed an associated questionnaire. Anesthetic overdose and cardiac exsanguinations were rated most aesthetically pleasing, although these procedures took the longest to complete. In contrast, decapitation and thoracic percussion were the least aesthetically pleasing, but these methods were the quickest. No demographic factor was identified that could predict whether a given euthanasia procedure would be favored for aesthetic reasons, and participants provided a wide variety of rationales for the aesthetic ratings they assigned. Although all of these euthanasia methods meet the criteria of approved methods of euthanasia of anesthetized rats as defined by the AVMA, aesthetic features and the scientific need for rapid euthanasia are both considerations in selecting a method.