纳米粒靶向治疗肝癌的研究进展

纳米技术是继信息、生物技术后的主导技术之一。近年来，随着生物纳米技术、材料科学、电磁学等学科的飞速发展，纳米粒靶向治疗越来越引起广大学者的关注。纳米粒在今后肿瘤治疗中将有着广阔的应用前景。     

半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常大鼠体内的靶向性分布的研究

目的 观察半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒(Gal-MADM)在正常肝脏中的靶向性,并观察Gal-MADM在全身各脏器的分布特征。方法 使用放射示踪技术,用125I标记纳米粒。肝动脉注射,分别于注药后5、15、30、60、120min处死,立即取肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血作γ计数。用同样的方法进行白蛋白磁性阿霉素纳米粒(MADM)在大鼠体内分布实验。结果 Gal-MADM和MADM肝摄取分别在注射后5 min后最高,分别为15 054.4 CPM／g和6 186.7 CPM／g,各时相前者的肝摄取率均为同时刻后者的2-3倍。在肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血的分布两药差异有高度显著性(P<0.05)。结论Gal-MADM在正常肝组织中有明显的主动靶向性,Gal-MADM主要分布肝脏,其它的脏器含量少。     

磁性阿霉素纳米脂质体的研制及其磁靶向定位研究

阿霉素(DOX)是临床常用的抗肿瘤药物,心脏、肾脏毒性大,治疗指数低[1] 。我们将阿霉素研制成磁性阿霉素纳米脂质体(MDNL) ,观察其磁靶向定位效果。一、材料和方法1.材料:DOX(浙江海正药业股份有限公司) ;二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC ,Sigma公司) ;聚乙二醇 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG DSPE ,Sigma公司) ;胆固醇(Chol,上海化学试剂公司) ;四氧化三铁(Fe3 O4,自制,粒径10nm )。旋转蒸发仪(中国科学院上海有机化学研究所) ;纳米粒度测定仪(SantaBarbara公司) ;透射电子显微镜(Toshiba公司) ;紫外可见分光光度仪(Shimadzu公司) ;荧光分…     

表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒靶向治疗裸鼠移植性肝癌

目的 观察表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒(EPI-PBCA-MNPS)对裸鼠移植性肝癌的作用效果.方法 建立Bel-7402裸鼠人肝癌模型,当肿瘤体积长至20～30mm3时,将其随机分成5组:生理盐水组(NS组)、表阿霉素组(EPI组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒组(EPI-PBCA-NPS组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒组(EPI-PBCA-MNPS组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒组加磁场组(EPI-PBCA-MNPS+MF组),每组10只,除生理盐水组外,其余各组按照0.002mg/g体质量或相当于40 μg/只的表阿霉素静脉注射给药,治疗2周后处死裸鼠,准确测量肿瘤大小并称重,计算瘤体积抑制率及瘤重抑制率,所有肿瘤均编号病理切片,比较治疗前后各组肿瘤细胞坏死的程度.结果 治疗后肿瘤体积抑制率、瘤重抑制率除EPI-PBCA-NPS组与EPI-PBCA-MNPS组差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间差异有统计学意义(P<0.05),其中EPI-PBCA-MNP+MF组(94.26%、80.82%)显著高于其余组,差异有统计学意义(P<0.01).病理切片显示,EPI-PBCA-MNP+MF组肿瘤细胞坏死程度最重.结论 EPI-PBCA-MNPS具有良好的靶向性,在外加磁场作用下对裸鼠人肝癌模型有显著抑瘤作用.

Abstract：

Objective To observe the effect of epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles (EPI-PBCA-MNPS) on the transplanted hepatoma in nude mice.Methods Human hepatoma cell line Bel-7402 nude mice models were established and divided into 5 groups with each of 10 once gross tumor volume was up to 20-30 mm3:normal saline group (NS),epirubicin group (EPI),epirubicin polybutylcyanoacrylate nanoparticles group (EPI-PBCA-NPS),epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles group (EPI-PBCA-MNPS) and epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles+magnetic field group(EPI-PBCA-MNPS+MF).Except for NS group, the dosage of epirubicin was 0.002 mg/g body weight or 40 μg for intravenous injection.After two-weeks therapy,all nude mice models were executed and the tumor volume and weight were measured so as to calculate the volume inhibition ratio and the weight inhibition ratio.Every tumor specimen was made into pathological section and labelled with serial number for comparing neorobiosis degree in different groups before and after therapy.Results There were statistically difference among the other groups (P<0.05) in the volume inhibition ratio and the weight inhibition ratio after therapy except for EPI-PBCA-NPS and EPI-PBCA-MNPS group (P>0.05).The two ratios in the EPI-PBCA-MNP+MF group (94.26%,80.82%) were significantly more than those in other groups (P<0.01).The pathological sections demonstrated the most severe tumour neorobiosis in the EPI-PBCA-MNP+MF group.Conclusion With the additional magnetic field,EPI-PBCA-MNPS has significant anticancer effect on human hepatoma nude mice models due to its favourable magnetic targeting.     

半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒与阿霉素对大鼠的毒性比较

目的　比较研究半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒 (AGMAN)和阿霉素 (ADM )对大鼠的毒性作用。方法　将AGMAN和ADM分为几个不同的剂量组 ,观察静脉给药后的两种药物的急性LD5 0 ,同时将未死亡的动物进行肝肾功能 ,心肌酶学的检查 ,观察其改变。结果　半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒比阿霉素的LD5 0显著的提高。动物的肝肾功能损害明显减轻。结论　AGMAN具有很安全的用药范围 ,对动物的主要器官及全身的毒副作用相对ADM也有明显的减轻     

表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒治疗移植性肝癌

目的 观察表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒对移植性肝癌的治疗效果。方法 建立SD大鼠移植性肝癌动物模型，14d后，从中随机取12只，测定肿瘤的长短径，为治疗前的肿瘤体积。并将余下肿瘤模型大鼠随机分为4组，每组12只。除生理盐水组外，EPI组给表阿霉素每只1．67mg／kg体重，EPI—PACA—NP组给表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒每只相当于1．67mg／kg体重表阿霉素。PACA-NP组给空白纳米粒每只相当于EPI-PACA-NP组所给纳米粒不载药纳米粒的量。1周后记录肿瘤治疗后的生长率、肿瘤的坏死范围，存活天数，生命延长率。结果治疗后各组间肿瘤体积差异有统计学意义（P＜0．05），EPI—PACA—NP组的肿瘤体积和肿瘤生长率显著低于其他组（P＜0．01）。病理切片可见EPI—PACA—NP组可见肿块里有大面积无核结构，纤维组织替代，以重度坏死为主，无轻度坏死。与NS组和EPI组比较，EPI—PACA—NP组大鼠平均生存时间延长（P＜0．01）；且以EPI组作为对照组，则EPI—PACA—NP组大鼠的生命延长率增加80．95％。结论 尾静脉注射EPI—PACA—NP组肿瘤生长率明显降低、生命延长率显著提高（P＜0．01）。     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒体外杀伤肝癌细胞的实验研究

目的 研究半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(Gal-MADM-NP M)在体外对人肝癌细胞系HepG2的杀伤作用。方法应用光镜、电镜下的形态学观察,DNA电泳以及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测杀瘤活性。结果 形态出现明显改变,电镜证实出现细胞凋亡;白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合磁场(MADM-NP M)组和半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM-NP)组抑制率及半数抑制率剂量相似(P>0.05),Gal-MADM-NP M组抑制率明显提高,半数抑制剂量明显降低(P<0.01)。结论MADM-NP M、Gal-ADM-NP、Gal-MADM-NP都具有明显抑制体外培养肝癌细胞生长增殖的作用。Gal-MADM-NP M对人肝癌细胞杀伤作用较性MADM-NP及Gal-ADM-NP为强,作用机制可能与半乳糖配体的特异性介导和人肝癌细胞上半乳糖受体的识别内吞作用及联合外磁场有关。     

磁性阿霉素维拉帕米清蛋白纳米粒的制备及性能检测

目的 制备磁性阿霉素维拉帕米清蛋白纳米粒并检测其磁性、载药量、粒径大小等物理性能,为进一步进行动物实验和临床应用奠定基础.方法 先将市售棉籽油精制,再将盐酸阿霉素、盐酸维拉帕米、人血清蛋白及Fe3O4磁粉按一定比例混合,采用加热固化法制备磁性阿霉素维拉帕米清蛋白纳米粒.用透射电子显微镜检测颗粒形态和粒径大小.倒置显微镜下观察载药纳米粒的磁响应性和结构.绘制标准曲线,高效液相色谱仪检测纳米粒中维拉帕米的载药量,荧光分光光度仪检测阿霉素的载药量.结果 纳米粒大小均一,形态规则,呈圆球形,磁响应性好.平均粒径约0.5 μm,维拉帕米载药量为0.8%,阿霉素载药量为1.25%.结论 加热固化法可以制备出同时包载两种药物的纳米粒,物理性能良好,制备方法简便,实验条件容易控制.     

硬脂酸阿霉素纳米粒的制备及在抗肝癌中的应用

目的　合成硬脂酸聚乙二醇阿霉素纳米微粒(doxorubicin solid lipid nanoparticles polyethylene glycol, DOX SLNs PEG)并检测其相关参数,观察其对人肝癌细胞杀伤作用。方法　以“乳化蒸发 低温固化”法合成 DOX SLNs PEG 纳米粒,透射电镜计算粒径,分光光度法计算载药率,MTT法观察对肝癌细胞的体外杀伤作用。结果　DOX SLNs PEG 纳米粒平均粒径( 120±4 84) mm,包封率68 6%,体外释放实验提示,7 d可释放所载60%左右的药物;体内抑瘤实验表明:控释制剂间隔给药疗效已优于未包载药物每日给药的疗效,量效关系明显。结论　DOX SLNs PEG纳米粒可有效抑制肝癌细胞的生长。     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对肝癌细胞株HepG2侵袭力的影响

目的 研究半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-MADM)对肝癌细胞株HepG2侵袭力的影响。方法应用Gal-MADM于HepG2细胞,并设A组:RPMI 1640对照组、B组:普通盐酸阿霉素(ADM)组、C组:磁性白蛋白阿霉素纳米粒联合磁场(MADM M)组、D组:半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM)组、E组:Gal-MADM联合磁场(Gal-MADM M)组。药物作用后以β-actin基因作为参照,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织蛋白酶(C)B mRNA的表达差异,应用Transwell小室检测体外侵袭力的变化,并用裸鼠肝癌皮下转移模型检测对体内侵袭力的影响。结果Gal-MADM作用HepG2肝癌细胞后CB mRNA表达降低较其他各组更为明显且有显著性,侵过小室滤膜细胞数目减少于其他各组且差异有显著性(P<0.01),裸鼠肝癌生长明显受到抑制(P<0.01)。结论Gal-MADM抑制肝癌细胞株HepG2的侵袭力的作用较ADM、MADM和Gal-ADM为强。     

外加磁场对半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体内分布的影响

目的　观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝脏中的靶向性 ,并观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在全身各脏器的分布特征及外加磁场对其分布的影响。方法　大鼠正中开腹 ,肝动脉插管并固定 ,肝动脉注射12 5I半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 (相当于阿霉素0 .5mg/kg) ,左外叶加磁场 ,磁场应用 3 0min ,移去磁场后 ,动物立即处死 ;对照组 :肝动脉注射半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 ,左外叶不加磁场 ,3 0min后 ,移去磁场后 ,动物立即处死 ,立即取靶区肝、非靶区肝、肾、心、肺、小肠、脾及周围血作γ计数。肝组织作病理切片。结果　注入的纳米粒75 %～ 85 %分布于肝脏 ,其他脏器极少。病理切片显示磁区小动脉见大量纳米粒存在 ,对照组及非磁区肝中纳米粒很少见。结论　半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝组织中有明显的磁靶向性 ;在磁场作用下 ,半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒主要分布于肝脏 ,其他脏器含量很少 ;实验组肾、心、肺、小肠、脾及外周血与对照组的放射活性比较明显降低 ,表明磁性物质的存在使这些脏器的相对药物暴露明显减少     

磁性蛋白微球阿霉素的定性研究

目的　对采用改良方法自行制备抗肿瘤药物磁性白蛋白微球阿霉素进行定性研究和评价。方法　采用改良方法自行制备抗肿瘤药物磁性白蛋白微球阿霉素 ,并经细胞图像分析仪二值化处理 ,优选出符合静脉用药的最佳磁微球 (0 .91± 0 .3 3 ) μm ,并以小鼠和豚鼠为实验对象 ,对该复合物进行定性分析 ,观察 (长达 6周 )该复合药物的急性、亚急性等毒性实验 ,并作相应的病理学检查。同时 ,测定其LD50 值。结果　该复合药物对实验动物的组织细胞并没有毒性损伤 ,也没有在体内蓄积。其LD50 值为 2 3 .3mg/kg体重 ,高于单纯阿霉素静脉给药的LD50 值 (2 0 .0mg/kg体重 )。结论　该复合物毒性很小 ,具有可靠的安全性 ,并优于单纯阿霉素。     

阿霉素磁性蛋白微球的改良法制备

目的　采用改良方法自行制备抗肿瘤药物阿霉素磁性蛋白微球 ,为进一步的动物实验和临床应用奠定基础。方法　自行研制改良法 ,制备阿霉素磁性蛋白微球 ,即人体血清白蛋白1 4 0mg、阿霉素 30mg、化学合成磁粉 50mg经精制棉籽油乳化交联混合而成。 结果　改良方法可靠 ,制备的阿霉素磁性蛋白微球形态较理想 ,符合静脉用药。平均直径为 (1 .0 2 0 0± 0 .0 0 94) μm ;形状因子为 :0 .7780± 0 .0 32 2。结论　改良方法可行可靠 ,为阿霉素磁性蛋白微球在以后的动物实验和临床应用上奠定了良好的基础     

肝脏手术后病人白蛋白临床应用研究

目的总结和探讨不同肝脏疾病行不同范围肝切除手术后病人白蛋白的应用情况和疗效。方法收集北京协和医院2005年6月至2007年3月收治的132例肝切除手术病人的临床资料,根据肝功能和切除范围分为肝血管瘤组、肝癌1组和肝癌2组,就术后补充白蛋白情况及其对手术预后的影响进行统计分析。结果在术前肝功能正常的血管瘤组,补充白蛋白对术后病人血清白蛋白变化[(3.17±0.40)g/Lvs(3.15±0.23)g/L,P=0.37〗和其他肝功能指标改变无效果;在肝功能Child-PughA级、行2~3肝段切除肝癌病人中,术后补充白蛋白也未起到明确的效果[(3.17±0.40)g/Lvs(3.15±0.23)g/L,P=0.37];而对术前肝功能异常和(或)行半肝或以上肝切除病人,常规进行白蛋白的补充维持了较低的并发症发生率。结论对于术前肝功能正常的行中小肝脏手术的病人,可以缩小术后补充白蛋白指征;而对于术前有明确低白蛋白血症者,则提议在围手术期补充白蛋白,这可能对减少并发症、改善手术预后有益。     

磁共振检查在评估微波消融治疗肝癌中的应用

目的 探讨MRI检查在评估微波消融治疗肝癌中的价值.方法 回顾性分析2005年11月至2009年6月解放军总医院经肝穿刺活组织检查证实为肝癌行微波消融治疗的51例患者的临床资料,分析65个肿瘤灶微波消融治疗前后的MRI表现.结合血清学检查和肝穿刺活组织检查评估MRI检查结果.结果 消融后1个月内复查MRI,49例患者共63个肿瘤灶表现为T_1 WI高信号、T_2WI低信号的无强化区,周边伴有均匀的环状强化带,诊断为凝固坏死.患者同期的血清AFP水平由术前的333.83μg/L下降到37.68μg/L.其余2例患者共2个肿瘤灶表现为T_1WI低信号、T_2WI高信号,与T_1WI高信号、T_2WI低信号的消融区形成鲜明对比,诊断为肿瘤局部残留,肝穿刺活组织榆查证实为肝癌.51例患者微波消融治疗1个月后定期随访,5例患者肿瘤灶消融区周边新出现强化的T_1WI低信号、T_2WI高信号结节影,表现与肿瘤局部残留相似,结合肝穿刺活组织检查和AFP诊断为肿瘤局部复发.23例患者肝内出现新肿瘤灶,1例患者出现腹壁转移,这24例患者同期血清AFP水平均不同程度升高,平均为120.16μg/L.结论 MRI检查能够准确评估微波消融治疗肝癌的效果.     

阿霉素磁性蛋白微球靶向治疗鼠种植性胃肿瘤

目的 探讨阿霉素磁性蛋白微球联合外磁场体内外抑制肿瘤生长的机制。方法 Ｗｉｓｔａｒ大白鼠３２只,用ＭＴ法检测阿霉素磁性蛋白微球对Ｗａｌｋｅｒ－２５６细胞的抑制率及半数抑制剂量;观察其体仙靶向治疗敏感细胞鼠种植性胃肿瘤的疗效。结果 阿霉素磁性蛋白微球与游离阿霉素体外对肿瘤细胞的生长抑制率相似,联合外磁场后其抑制率作用明显增强。靶向组对种植瘤的抑制率达８２．５２％,荷瘤动物生成时间明显延长,延长率达２     

精准肝脏外科理念在原发性肝癌治疗中的临床价值

目的 探讨精准肝脏外科理念在原发性肝癌治疗中的临床价值.方法 回顾性分析2009年1月至201 1年10月解放军第八十一医院收治的141例原发性肝癌患者的临床资料.术前对患者行CT等检查收集二维影像学数据进行三维重建,根据患者情况选择性行肝脏储备功能评估,模拟手术操作以制订手术方案.术中结合彩色多普勒超声探查,选择性阻断肝血流,根据患者情况选择行解剖性肝切除术或非解剖性局部肝切除术.采用电话和门诊进行随访,随访时间截至2014年1月.采用Kaplan-Meier法计算生存率.结果 77例患者术前完成三维重建,39例患者行ICG R15检查,95例患者在术中行彩色多普勒超声探查.141例患者均成功完成手术,采用Pringle法行入肝血流全阻断4例、肝蒂部分阻断48例、未行肝门阻断89例.其中行解剖性肝切除术者占85.11％（120/141）.手术时间为（188±56）min,术中出血量为（230±100） mL,围手术期输血者12例,术后当日腹腔引流量为（147 ±58）mL.术后ALT、AST和TBil峰值分别为（219±121）U/L、（214±104） U/L和（32±14） μmol/L.术后8例患者发生胸腔积液、膈下感染、腹腔积液、胆汁漏等并发症,5例发生肺部感染、切口感染等,并发症发生率为9.22％（13/141）.所有并发症经对症治疗后痊愈,尢肝衰竭和围手术期死亡发生.术后住院时间为（11.0 ±2.6）d.术后病理检查结果示肝细胞癌130例、胆管细胞癌11例,切除肿瘤直径为（5.8 ±1.7）cm,其中1例患者切缘阳性.138例患者获得随访,随访时间为（40±10）个月,患者术后1、2、3年生存率分别为91.5％、75.9％和65.2％,生存时间为（43±5）个月.结论 精准肝脏外科理念运用于原发性肝癌的治疗,术后并发症少,近、远期疗效好.