PCR方法检测HBV—DNA与ELISA检测HBV—M的对比分析

用PCR技术检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV－DNA）的结果已有报道［‘］，部分乙肝标志物阴性或抗一HBe”者血清HBV－DNA呈阳性。HBV－DNA与HBV血清学标志物（HBV－M）的相互关系是目前广泛研究的课题。本文对1248例患者同时检测五项乙肝标志物与HBV－DNA并将其结果进行分析     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

乙型肝炎表面抗原阳性血清经不同方法消毒后用PCR法对HBV—DNA…

经用ＰＣＲ法技术检测，以辐照度值〉１０５μＷ／ｃｍ＾２的紫外线对ＨＢｓＡｇ阳性血清照射８小时，对ＨＢＶ－ＤＮＡ有一定灭活作用。煮沸１０分钟，或者以７５％乙醇作用１小时，对ＨＢＶ－ＤＮＡ灭活能力较差。     

实时荧光定量PCR检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎中的价值

目的：分析实时荧光定量PCR（Real Time PCR）检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法：分别用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测389份临床病人血清，并用t检验分析比较HBV—DNA阳性结果。结果：在血清学标志物组合模式中，多种组合都可检测出HBV—DNA含量，尤其是在传统认为没有HBV感染的血清中也可检测到一定程度的HBV—DNA含量。结论：实时荧光定量PCR检测HBV—DNA是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

415例HBV感染的不同血清学指标组合的HBV—DNA的检测

目的 了解HBV感染的不同血清学指标组合的HBV－DNA阳性情况。方法 对415份血清同时行ELISA方法测定HBV－M及普通PCR法检测HBV－DNA。结果 HBsAg( )组HBV－DNA阳性率为77．8％（270，347），HBsAg(-)组HBV－DNA阳性率19．1％（13／68），二者差别显著（P＜0．001）。其中153例HBsAg( )HBeAg( )抗HBc( )血清，HBV－DNA全部阳性，阳性率为100％，HBsAg（ ）抗HBe( ）抗HBc( )组血清HBV－DNA阳性率为66．9％（79／118），HBsAg( )抗HBc( )组血清HBV－DNA阳性率为50％（38／76），抗HBs( )组为18％（9／50），9例抗HBs( )抗HBe（＋）抗HBc( )血清中2例HBV－DNA阳性，2例抗HBs( )抗HBc( ）血清中1例HBV－DNA阳性，4例单一抗HBc( )血清中1例HBV－DNA阳性。结论 单凭HBsAg或HBeAg是否阳性来判断肝脏中HBV复制及有无传染性是不够的，易造成部分慢性乙型病毒性肝炎的漏诊，对HBsAg阴性无论抗HBs是否阳性，只要有HBV感染后的任何血清学依据，都应进一步检测血清HBV－DNA作为诊断乙型肝炎的第二步筛选，有条件时肝活检加以证实。     

荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

PCR检测HBV—DNA的意义

近年来,随着检测技术的进展,对乙肝血清学标志(HBV-Marker,HBV-M)临床意义认识已在逐渐深入和不断更新,我们应用聚合酶链式反应技术(PCR)和酶联免疫试验(ELISA)同时检测852例肝病患者HBV-DNA和HBV-M,以探讨两者的关     

荧光定量PCR检测HBV DNA与ELISA检测乙肝病毒血清标志物结果的关系探析

采用荧光定量PCR法来检测320例疑似乙肝患者血清的HBV DNA,并用ELISA检测乙肝病毒血清标志物,对结果进行比较分析。 HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性组（大三阳组）患者的HBV DNA阳性率与HBV DNA载量分别为95.7%与6.86±1.52 lgcopies/ml,均高于 HBsAg、HBeAb 和 HBcAb 阳性组（小三阳组）的51.2%与4.82±0.73 lgcopies/ml;HBsAg 和 HBcAb 阳性组 HBV DNA 阳性率与 HBV DNA 载量分别为53.32%,5.23±1.67 lgcopies/ml;HBsAb、HBeAb和HBcAb阳性组HBV DNA阳性率与HBV DNA载量分别为16.7%,3.25±0.96 lgcopies/ml;HBeAb和HBcAb阳性组HBV DNA阳性率与HBV DNA载量分别为10.0%,3.08±0.78 lgcopies/ml。HBV DNA含量与乙肝免疫学检测结果具有相关性,临床上应两者联合应用。     

Detection of hepatitis B virus DNA using the polymerase chain reaction technique

The polymerase chain reaction (PCR) technique has been utilized for the detection of hepatitis B virus (HBV) DNA, and several factors related to the selection of primer pairs for the PCR amplification have been demonstrated. The sensitivity of the PCR assay was compared with that of slot-blot hybridization for detecting HBV-DNA. Analysis by the PCR technique with Southern blot hybridization provided a greater than 10(4)-fold increase in sensitivity over the slot-blot hybridization analysis. Also, a rapid and sensitive PCR method for the detection of serum HBV-DNA was developed: HBV-DNA is released from virions by incubating serum with NaOH followed by neutralization with HCl. HBV-DNA sequences are then detected by agarose gel electrophoresis and ethidium bromide staining after PCR amplification with successive sets of primer pairs. In testing serial samples from chimpanzees experimentally infected with HBV, HBV-DNA was detected 2-3 wk before the appearance of hepatitis surface antigen (HBsAg) and continued to be detectable for a short period after the production of antibody to HBsAg. Results from testing of human serum demonstrated that the majority of patients with HBsAg in serum had HBV-DNA as well and that some patients had HBV-DNA in serum in the absence of HBsAg.     

PCR测定乙型肝炎病毒DNA弱阳性质控血清的适用性研究

为确定目前国内PCR测定乙型肝炎病毒 (HBV)DNA弱阳性质控血清的浓度水平 ,将已知浓度的 10倍系列稀释的 5份质控血清寄发给全国 91个临床和试剂生产厂家实验室 ,让其以室内常规方法检测 ,回报测定结果由我处统计分析。结果表明 ,目前全国PCR测定HBVDNA灵敏度不高 ,当样品HBVDNA含量低于 5× 10 5拷贝 /ml时 ,大部分实验室 (5 6 0 % )测不出来 ,不同厂家试剂对上述样品的检出差异较大。因此 ,目前国内PCR测定HBVDNA弱阳性质控血清的浓度以 10 5拷贝 /ml为宜     

儿童乙型病毒性肝炎病毒携带者血清新蝶呤水平分析

目的研究儿童乙型病毒性肝炎病毒(HBV)携带者血清新蝶呤水平变化及其与HBV复制的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量PCR法分别检测150例儿童HBV携带者和60名健康儿童的血清新蝶呤水平、HBV DNA载量。结果慢性HBV携带者血清新蝶呤水平明显高于非活动性HBsAg携带者和健康儿童,差异有统计学意义(均P0.05);非活动性HBsAg携带者和健康儿童的血清新蝶呤水平差异无统计学意义(P0.05);血清新蝶呤水平与HBV DNA载量在统计学上无显著相关性(r=0.131,P0.05)。结论在儿童HBV携带者中,慢性HBV携带者比非活动性HBsAg携带者体内更容易引起细胞免疫激活,慢性HBV携带者在随访监测中更应被关注,其血清新蝶呤水平升高能提示病毒复制,但不反映病毒复制活跃程度。     

Detection and identification of Candida spp. in human serum by LightCycler real-time polymerase chain reaction

The aim of this work was to develop LightCycler real-time polymerase chain reaction method to allow rapid detection and identification of Candida spp. in human serum with panfungal primers (internal transcribed spacer [ITS] and L18). Melting-curve analysis of the ITS sequences showed that each amplicon presented a specific melting point and enabled identification of 5 Candida spp. After parameters optimization, 58 sera were preliminary analyzed from 23 patients. For L18 primers, the LightCycler system enabled detection of DNA in 92% of patients with positive blood culture. These primers were not able to differentiate between species of Candida. By using ITS primers, the LightCycler system enabled detection of DNA in sera from 76.9% of patients with positive blood culture. With ITS primers, the species responsible for the infection was identified for 11 patients. These data revealed the LightCycler as a potential tool for early detection and identification of Candida.     

乙肝患者血清HBV外膜大蛋白与HBV DNA的关系

目的:通过对乙型肝炎(乙肝)患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)和HBV DNA的检测,探讨二者在判断乙肝病情和HBV复制情况时的相关性及其在临床上的意义。方法:采用荧光定量PCR方法对238份乙肝患者血清的HBV DNA进行检测,采用酶联免疫吸附试验,对上述标本进行HBV-LP和HBV血清免疫学标志物(HBV-M)模式的检测。结果:HBV-LP检出率与HBV DNA的检出率差异有显著性(P<0.05),不同HBV-M模式的HBV DNA与HBV-LP的检出结果差异有显著性(P<0.05),HBV DNA拷贝数与HBV-LP的表达有相关性(r=0.677,P<0.001)。结论:血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性,但HBV-LP尚不能完全代替HBV DNA的检测来反映HBV复制情况。     

乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR的建立与应用

目的　建立血浆 (血清 )HBVDNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值。方法　用PUCm T载体和PCR纯化产物连接 ,转染DH5α菌 ,筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,制作外标准品 ;在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针 ,严格优化反应物的组成和扩增条件 ,并对该方法进行评价。结果　建立的HBVDNA荧光定量PCR最低可检出 80 0拷贝 /ml;批内误差为 1 8%～ 6 5% ,批间误差为 2 6 %～ 9 1 % ;在 1 0 4 ～ 1 0 11拷贝 /ml之间与Ct值具有很好的线性 (Ct =- 1 .391 1ln(X) 4 1 .6 5,r =- 0 .9958) ;外周血HBVDNA临床定量检测发现 ,HBeAg阳性的 1 30例中 ,HBVDNA阳性率为 1 0 0 % ,含量为1 0 6 89± 1.6 9拷贝 /ml,抗HBe阳性的 96例中HBVDNA阳性率为 55 2 % ( 53/ 96 ) ,含量为 1 0 4 .0 9± 1.19拷贝 /ml;6 2例献血员未检出HBVDNA。乙肝临床治疗监测发现 ,外周血中HBVDNA含量检测可有效反映治疗效果 ,指导临床用药。结论　荧光定量PCR检测方法是一种相对准确、灵敏度高、特异性较强和较简便的HBVDNA定量检测技术 ,对乙肝诊断、指导临床用药和治疗监测方面具有实用价值     

Detection of hepatitis C virus ribonucleic acid in the serum by amplification with polymerase chain reaction.

Hepatitis C virus (HCV) RNA was detected in the sera of patients with non-A, non-B chronic liver disease by polymerase chain reaction (PCR). RNA was extracted from the serum, reverse transcribed to cDNA, and amplified by PCR. With this method, 30 patients with non-A, non-B chronic liver disease and 10 healthy subjects were tested. HCV RNA was detected in 13 of 16 (81%) anti-HCV-positive patients and also in 7 of 14 (50%) anti-HCV-negative patients, but in none of 10 anti-HCV-negative healthy subjects. Specificity of this method was confirmed by direct sequencing of amplified cDNA segment. The nucleotide sequences (37 nucleotides) obtained from 15 patients showed only 68-78% homology compared with the prototype HCV nucleotide sequence. In addition, of 15 nucleotide sequences, there were 12 different types. But the translated amino acid sequences (12 amino acids) showed 83-100% homology compared with the prototype HCV amino acid sequence. These data suggest the majority of anti-HCV-positive patients are carriers of HCV. But to detect all the viremic patients, the anti-HCV antibody testing may be insufficient. Direct detection of HCV RNA may be useful in the study of virus replication and its association with various liver diseases.     

乙肝病毒外膜大蛋白临床应用价值研究

目的检测乙肝患者血清中乙肝病毒外膜大蛋白（LHBs）,并与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）和乙肝病毒前S1抗原（PreS1Ag）相比较,探讨LHBs的临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测140例乙肝患者血清中LHBs,乙肝病毒标志物（HBV—M）、HBV PreS1Ag,同时采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）方法对血清HBV DNA进行检测,并进行统计分析。结果在所研究的各种模式中,LHBs与HBV DNA的检出率差异均无统计学意义（P均〉0．05）并且LHBs的总阳性率（76．43％）高于PreSiAg阳性率（44．29％）和乙肝e抗原（HBeAg）的阳性率（29．29％）,差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论乙肝病毒外膜大蛋白在一定程度可以反映HBV感染者体内病毒复制情况。其作为HBV复制指标,灵敏度高于PreS1Ag和HBeAg,可作为判断HBV感染者体内乙肝病毒复制情况新的血清学指标,尤其是针对HBeAg阴性患者。