角质形成细胞对胞内金黄色葡萄球菌抗菌作用研究

目的:观察金黄色葡萄球菌在人角质形成细胞株HaCaT中生存的动态变化,了解金黄色葡萄球菌与皮肤角质形成细胞之间的相互关系。方法:用金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923侵袭HaCaT细胞,分别于细菌进入细胞后的4、24、48、72h裂解细胞,释放出细胞内的活细菌,用平板菌落计数法计数胞内活菌。结果:金黄色葡萄球菌ATCC25923株在进入HaCaT细胞的24h有一定生长,但实验48h细胞内活菌数量明显减少。蛋白激酶C激活剂PMA和腺苷酸环化酶激活剂FSK可以促进HaCaT细胞清除胞内细菌。结论:皮肤角质形成细胞清除进入细胞内的金黄色葡萄球菌,可能是皮肤天然免疫的一种防御机制,而PMA和FSK增强细胞的抗菌作用,提示角质形成细胞抗菌活性与NADPH氧化酶相关。     

TiN涂覆的Ti-6Al-4V注入Cu2+后的抑菌性与细胞相容性研究

在TiN 涂覆的 Ti-6Al-4V表面分别注入一定剂量的Cu²⁺或Ag⁺,研究并对比所注入表面的抑菌性和细胞相容性。将L929细胞分别接种于4种材料上:空白对照组——Ti-6Al-4V(钛合金组),阴性对照组——TiN涂覆的Ti-6Al-4V(TiN组),阳性对照组——TiN涂覆的Ti-6Al-4V表面注Ag(注Ag组),实验组——TiN涂覆的Ti-6Al-4V表面注Cu(注Cu组)。通过激光共聚焦观察细胞的骨架形态,通过扫描电镜观察细胞铺展黏附,通过CCK-8检测细胞增殖。将金黄色葡萄球菌液滴到各组样品表面,24 h后通过活菌铺板计数法观察材料表面活菌的菌落数目,用激光共聚焦、扫描电镜观察细菌黏附、形态。接触角检测材料亲水性,XPS检测材料表面元素组成,ICP-MS检测材料目标元素离子析出量。激光共聚焦和扫描电镜:注Ag组和注Cu组细胞较为密集,黏附、铺展充分,可见板状伪足与丝状伪足。CCK-8:接种1、3、5天后,注Ag组和注Cu组细胞与钛合金组以及TiN组相比增殖明显,证明这两组材料没有明显毒性。活菌铺板计数:注Cu组和注Ag组菌落少,抑菌率分别为91％±2％和87％±2％。激光共聚焦和扫描电镜:注Cu组和注Ag组的细菌比钛合金组和TiN组的金黄色葡萄球菌黏附少。细胞壁完整性被破坏,部分细菌破碎。研究表明,TiN涂覆Ti-6Al-4V表面注Cu和注Ag均具有较好的细胞相容性和抑菌性。     

RNA干扰端粒酶活性对HeLa细胞生物学行为的影响

目的 观察RNA干扰(RNAi)体外培养的HeLa细胞端粒酶催化亚单位(hTERT)对HeLa细胞生物学行为的影响,进一步探讨端粒酶活性与肿瘤细胞恶性生物学行为的相关性.方法 体外转录法设计合成4条针对hTERT基因的shRNA,脂质体转染HeLa细胞后经免疫荧光染色和端粒重复序列扩增-酶联免疫法(TRAP-ELISA)测定端粒酶活性,筛选出端粒酶沉默效果最佳片段即B链shRNA.以B链shRNA转染HeLa细胞为实验组,转染无关siRNA的HeLa细胞为对照组,显微镜下观察细胞在纤维黏连蛋白(FN)上的铺展;CCK-8细胞计数试剂盒检测细胞在FN上黏附;划痕实验评价细胞迁移;Boyden小室侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 铺展实验显示细胞接种到FN上30 min时,对照组铺展细胞的比率为(31.3±7.9)%,而实验组铺展细胞的比率仅为(5.6±2.3)%,两组差异有统计学意义(P<0.01);2 h后对照组和实验组铺展细胞的比率分别为(79.4±4.8)%和(26.3±6.1)%,两组差异仍有统计学意义(P<0.01);24 h后两组所有细胞几乎均呈铺展状态.细胞黏附实验显示细胞在FN上黏附30 min时对照组细胞黏附率为(83.7±5.4)%,而实验组的细胞黏附率为(67.2±2.8)%,明显低于对照组(P<0.05).划痕实验检测细胞的迁移能力显示实验组细胞24 h迁移率为(27.1±6.2)%,明显低于对照组(58.7±15.0)%.Boyden小室侵袭实验显示在Matrigel胶上培养4 h后,实验组和对照组侵袭的细胞数分别为75.7±14.5和165.1±11.0,差异有统计学意义(P<0.05).结论 降低体外培养HeLa细胞的端粒酶活性使细胞的生物学特性发生改变,表现为减低了HeLa细胞的恶性生物学行为.     

端粒酶抑制剂对葡萄膜黑色素瘤细胞生长的抑制作用

目的 研究两种端粒酶抑制剂干扰素α 2b(IFN-α 2b)和顺铂(CDDP)对人葡萄膜黑色素瘤细胞生长抑制作用,为临床化疗人葡萄膜黑色素瘤提供更多依据.方法 用不同浓度及不同作用时间的IFN-α2b和CDDP作用于体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞.倒置显微镜、电子显微镜观察其形态学变化,并用MTT法检测干扰剂对细胞生长的抑制作用.结果 随着IFN-α 2b和CDDP浓度的增加及作用时间的延长,细胞出现生长抑制的形态学变化,电子显微镜显示细胞出现凋亡;作用72 h,IFN-α 2b和CDDP浓度分别大于500IU/ml及1.00mg/L时细胞出现抑制状态,并在浓度分别达到5000IU/ml及10.00 mg/L时其细胞抑制率(66.1±4.7)%及(74.0±3.3)%开始与对照组出现差异有统计学意义(P<0.001);IFN-α 2b(5000 IU/ml)和CDDP(10.00 mg/L)浓度同定,作用时间达到48 h后细胞出现抑制状态,72 h后抑制率(67.9±8.1)%及(76.5±1.6)%开始与对照组出现差异有统计学意义(P<0.001);即随着两者浓度升高及作用时间增长,葡萄膜黑色素瘤细胞受到的抑制作用逐渐增强(P<0.01).结论 端粒酶抑制剂IFN-α2b和CDDP可有效抑制体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞的生长,且随着两者浓度升高及作用时间延长抑制作用加强,可造成细胞凋亡.     

抗角蛋白16单克隆抗体对角质形成细胞增殖活性的影响

目的研究抗角蛋白单克隆抗体(mAb)对体外培养的角质形成细胞增殖活性与细胞周期的影响.方法以无血清培养基体外原代培养角质形成细胞.应用3H-TdR掺入DNA合成测定法,观察抗角蛋白16mAb(anti-K16mAb)对角质形成细胞代谢增殖的影响.用流式细胞仪分析anti-K16mAb作用后角质形成细胞的细胞周期变化.结果mAb作用后,角质形成细胞样品的cpm降低,并呈抗体剂量依赖方式.流式细胞仪分析表明,处于S期的细胞比例由27%上升至42.2%,同时处于G1期与G2期的细胞比例分别相应下降.结论anti-K16mAb可抑制体外培养的角质形成细胞的增殖活性,且将细胞阻滞于S期,无法进入G2期与M期分裂增殖.     

胞外聚合物葡聚糖和DNA对粪肠球菌根管生物膜形成的影响

目的 研究胞外多糖和胞外DNA对粪肠球菌在人牙本质片上黏附并形成生物膜过程中的作用.方法 制备牙本质片,分成葡聚糖酶(Dextranase)组、DNA酶(DNaseI)组和对照组,体外培养获得粪肠球菌的牙本质生物膜标本.采用活菌菌落计数法、激光共聚焦扫描显微镜结合COMSTAT软件分析胞外聚合物对牙本质黏附菌量和生物膜三维结构的影响.结果 相同生物膜膜龄,Dextranase组和DNaseI组粪肠球菌牙本质黏附菌量均少于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05),其中1 h黏附菌量分别下降至对照组的15.61%、18.39%.激光共聚焦显微镜观察到Dextranase和DNaseI对粪肠球菌牙本质生物膜的形成有影响,处理后生物膜结构松散,生物量、底层覆盖率及平均厚度均下降,具有统计学意义(P＜0.0167),其中生物量由(3.95±0.09)μm3/μm2下降至(0.36±0.08)μm3/μm2、(1.05±0.06)μm3/μm2.DNaseI对成熟牙本质生物膜产生显著降解作用,而Dextranase对成熟牙本质生物膜作用不明显.结论 胞外多糖和胞外DNA是粪肠球菌生物膜的重要成分,对其初始黏附和生物膜三维结构起重要作用.     

二氧化钛纳米颗粒对人角质形成细胞超微结构的影响及毒性效应

目的:观察无机二氧化钛(TiO2,20～35 nm)纳米颗粒进入人角质形成细胞(HaCaT)后的超微结构变化及毒性效应的影响.方法:将TiO2纳米颗粒与HaCaT细胞共孵育4 h后,收集细胞.采用透射电镜观察TiO2纳米颗粒引起细胞超微结构,变化及在细胞内的分布;采用激光共聚焦扫描显微镜观察TiO2纳米颗粒进入细胞后引起的细胞凋亡和坏死;采用噻唑蓝比色法测定TiO2纳米颗粒对细胞存活的影响.结果:TiO2纳米颗粒通过吞噬方式进入细胞.实验组里TiO2纳米颗粒呈簇状存在于HaCaT细胞内,并使细胞有较大损伤;细胞质有溶解现象,内质网肿胀,线粒体嵴结构紊乱,并肿胀崩解;核周间隙扩大、核固缩.结论:TiO2纳米颗粒具有的毒性效应能够损伤HaCaT细胞超微结构并且抑制细胞的生长.     

人气管上皮细胞对绿脓杆菌抗菌作用观察

目的：探讨呼吸道上皮细胞与呼吸道致病菌之间的相互关系,观察呼吸道上皮细胞对绿脓杆菌的抗菌作用。方法：（1）贴壁生长的人呼吸道上皮细胞株HBE-16与绿脓杆菌标准株ATCC27853共孵育,庆大霉素杀死胞外菌,动态观察上皮细胞内活细菌数;（2）HBE-16细胞与绿脓杆菌共同悬浮于细胞培养基,在不同孵育时间点用平板菌落计数法计数活菌数。结果：绿脓杆菌不能在HBE-16细胞内生长,并被细胞逐渐清楚。悬浮状态下的HBE-16细胞对绿脓杆菌有一定杀菌作用。结论：呼吸道上皮细胞对胞内外绿脓杆菌的抗菌作用,可能是呼吸道抵抗细菌感染的一种天然免疫防御机制。     

载体介导RNAi技术对HL-60细胞hTERT基因和细胞生长影响

目的探究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的核糖核酸干扰(RNAi)对白血病HL-60细胞生长及hTERT基因的作用。方法用已经构建好的表达针对pSilencer1.0-U6/hTERT siRNA质粒载体,经RNAi-Mate转染试剂转染HL-60细胞。将转染细胞分为对照组(3亚组)和实验组(3亚组),即pSilencer1.0-U6空质粒组、RNAi-Mate转染试剂组及生理盐水空白对照组为3个对照组,pSilencer1.0-U6/hTERT质粒转染后24 h组、pSilencer1.0-U6/hTERT质粒转染后72 h组、pSilencer1.0-U6/hTERT质粒转染后120 h组为3个实验组。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞hTERT基因mRNA的表达,Western blot法检测细胞hTERT蛋白的表达,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪双染法检测细胞凋亡情况,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率。结果实验组(3亚组)HL-60细胞hTERT蛋白表达水平(0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08)、mRNA(0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06)低于对照组(3亚组)(0.73±0.14、0.76±0.15、0.75±0.11,0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19);实验组(3亚组)细胞增殖抑制率[(23.7±4.0)%、(35.1±5.9)%、(29.6±3.8)%]及凋亡率[(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%]均高于对照组(3亚组)(P0.05),但实验组各亚组间、对照组各亚组间差异无统计学意义(P0.05)。结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术在体外能抑制HL-60细胞hTERT蛋白和基因的表达,能抑制细胞增殖,增加细胞凋亡。     

CIK细胞的生物学特性及荷瘤鼠体内分布特点研究

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)在荷瘤鼠体内的分布规律。方法:用MTT比色法测定CIK细胞对Hela-luc细胞的杀伤作用。以人宫颈癌细胞Hela-luc接种BALB/c裸鼠建立动物模型。体外培养CIK细胞后以荧光染料CFSE标记,经不同途径注射入荷瘤鼠体内。用激光共聚焦显微镜和流式细胞技术检测方法分析CIK细胞在各器官的分布情况。结果:CIK细胞在体外培养14～18天时,细胞数量生长达高峰,此时CD3+CD56+T细胞的数量也达最高值。以10∶1、20∶1、40∶1的比例将效、靶细胞作用48小时后,CIK细胞对Hela-luc细胞的杀伤率分别为(24.08±3.18)%、(51.16±2.64)%、(72.14±4.21)%。CIK细胞经腹腔注射,肿瘤组织24小时达到最高(20.56%),瘤旁注射,肿瘤组织3小时达到最高(25.75%)。结论:CIK细胞在体外对宫颈癌Hela-luc细胞有较强的杀伤作用。CIK细胞在体内分布于肺、肝、肿瘤部位,其分布在各脏器中浓度规律与不同的输注途径有一定关系。针对不同解剖部位的肿瘤可以选择不同的CIK细胞输注途径以最大限度地提高疗效。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.