Apelin-13对大鼠缺血心室肌细胞瞬时钠电流的影响

 目的：观察apelin对正常和缺血心室肌细胞瞬时钠电流（INa）的影响以及其对室性心律失常和心脏功能的影响。方法：应用Landgendorff逆灌流系统酶解分离大鼠左室心肌细胞,采用全细胞膜片钳技术观察大鼠左室心肌细胞INa,通过改变电极外液的方法来模拟正常/缺血细胞状态,分正常组（N组）、正常apelin组（N+A组）、缺血组（I组）和缺血apelin组（I+A组）（各组n=10）,分别观察apelin-13对正常/模拟缺血心室肌细胞INa的影响;另建立Langendorff灌流离体缺血大鼠心脏模型分为4组（各组n=4）：N组、N+A组、I组、I+A组,观察apelin-13对各组大鼠离体灌流心脏模型心功能和室性心律失常的影响。结果：Apelin-13（100 nmol/L）在N+A 组和I+A组均能增加INa幅度,I-V曲线分析显示N+A组比N组INa幅度增大32%［（-86±13）pA/pF］,I+A组比I组INa幅度增大18% ［（-52±15）pA/pF］;然而I-V曲线分析Apelin-13并未改变最大传导速度,N、N＋A、I和I+A组分别为（3.2±0.2）pS/pF、（3.1±0.3）pS/pF、（2.9±0.1）pS/pF和（2.8±0.4）pS/pF（P＞0.05）;各组的半激活电压（V1/2）分别为（-21.9±0.6）mV、（-28.7±0.3）mV、（-30.5±0.7）mV和（-36.8±0.2）mV;Boltzmann曲线各组斜率分别为5.6±0.3、 5.1±0.4、 4.3±0.3和4.9±0.6（P＞0.05）;V1/2值N+A组比N组改变（-5.9±0.8）mV,I+A组V1/2比I组改变（-7.7±1.3）mV（P＜0.05）。室性心律失常开始时间、室性心动过速持续时间、心室颤动持续时间及心律失常评分情况,N+A组与N组比较、I+A组与I组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;N+A组LVEDP低于N组,LVDP高于N组,dp/dtmax和dp/dtmin高于N组;I+A组LVEDP低于I组,LVDP高于I组,dp/dtmax和dp/dtmin高于I组;以β-肌动蛋白（β-actin）作为内参照,4组β-actin表达水平差异无统计学意义,4组Na+通道蛋白Vα亚单位的表达灰度值分别为28.8±3.6、 29.4±4.1、 30.1±2.9和31.3±3.8,组间差异无统计学意义。结论：Apelin-13可能是通过改变Na+通道门控特性增加INa峰值,使正常和缺血组心室肌细胞Na+通道更容易开放。Apelin-13对缺血相关室性心律失常无影响,对正常和缺血心肌均有正性肌力作用。     

急性坏死性胰腺炎大鼠垂体功能和结构的变化

目的:观察大鼠垂体组织结构及功能在急性坏死性胰腺炎(ANP)时的变化情况。方法:雄性SD大鼠72只,随机分为正常对照组(N组),假手术(SO)1h、3h、6h、12h组,ANP1h、3h、6h、12h组,每组8只大鼠。ANP组大鼠采取逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠制备ANP模型,各组大鼠于造模后相应时间点通过下腔静脉采取血液,随后摘取胰腺和垂体组织。全自动生化仪检测大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)水平,放射免疫分析法测定血清生长激素(GH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)及促卵泡激素(FSH)水平,光镜下观察胰腺组织、垂体组织的病理学改变并比较组间差异。结果:N组与SO各组相比,除ACTH外,其余各指标差异均无统计学意义(P0.05);与N组和SO各组比较,ANP各组相应时间点血清AMY、LIP水平明显升高(P0.05);血清GH水平差异无统计学意义(P0.05);6h和12h组ACTH、TSH水平明显降低(P0.05),1h和3h组ACTH、TSH水平无统计学差异(P0.05);1h、6h和12h组FSH水平明显降低(P0.05),3h组FSH水平差异无统计学意义(P0.05)。光镜下,ANP 12h组胰腺病理损伤较SO 12h组明显加重(P0.05),且ANP 12h组垂体组织充血情况较SO 12h组明显加重(P0.05)。结论:ANP时,除胰腺外,大鼠垂体组织亦出现损伤及功能改变。     

生长抑素对猕猴急性坏死性胰腺炎的影响

急性胰腺炎 (ＡＰ)根据其病理改变可分为水肿型和出血坏死型 (ＡＮＰ)两类 ,前者预后良好 ,多可治愈 ,死亡率为 0 %～ 3% ,后者病情险恶 ,全身并发症多 ,死亡率可高达 40 %～80 %。在ＡＮＰ的早期能有效的控制病情的发展 ,可以降低该病的并发症发生率和死亡率。本实验采用猕猴 ,制成ＡＮＰ模型后 ,观察生长抑素的治疗作用。1　材料与方法1 1　动物及实验材料 :实验动物为成年雄性猕猴 12只年龄在 6～ 10岁 ,平均体重 6± 1 5ｋｇ。胰蛋白酶为 1∶2 5 0实验用 ,生理盐水配成 5 %溶液。自体胆汁 :4或 5号细针穿刺胆囊抽取。生长抑素 :Ｓｔａｌ…     

缺氧对急性心肌梗死后3周大鼠心室肌细胞持续性钠电流的影响

目的：研究缺氧对急性心肌梗死（AMI）大鼠心室肌细胞持续性钠电流的影响，以期更进一步探讨急性心肌梗死后心律失常的发生机制。 方法： 采用结扎大鼠冠状动脉左前降支建立AMI动物模型,应用膜片钳全细胞记录方法,观察AMI 3周心室肌外膜梗死区细胞持续性电流（INap）的变化。 结果： 常氧条件下，假手术组（n=9）的INap电流密度为0.144±0.022（pA/pF）,心梗组（n=9）的INap电流密度为0.121±0.013（pA/pF）,明显低于假手术组(P<0.01), 以上两组的INap 均可被河豚毒素（TTX）阻断。缺氧条件下，假手术组和心梗组的INap均随着缺氧时间的延续而增大，但假手术组INap的增大明显大于心梗组，两组的INap均可被谷胱甘肽（1 mmol/L）所阻断。 结论： 急性心肌梗死后，无论是在常氧或是再次缺氧情况下，心肌梗死区与非梗死区细胞INap的大小均存在差异，造成心肌复极离散度增大，可能是导致AMI后出现折返性室性心律失常的原因之一。     

心肌肽素对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的： 研究心肌肽素对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响，探讨心肌肽素在离子通道水平的作用机制。 方法： 用急性酶解分离法获得豚鼠心室肌细胞，标准全细胞膜片钳技术记录钠电流(I_Na)。 结果： 心肌肽素1、5、10、50、100、500 mg/L使豚鼠心室肌细胞I_Na分别减少(0±1)%、(6±2)%、(10±2)%、(15±1)%、(22±9)%、(30±6)%，呈浓度依赖性抑制I_Na。心肌肽素50 mg/L使I_Na激活时间(TTP)从(2.8±0.7) ms延长至(3.0±0.8) ms (P<0.05)；使I_Na电流密度-电压曲线上移，但不改变激活电位、峰电位、反转电位和I-V曲线的形状；不影响稳态激活曲线、稳态失活曲线和稳态失活后恢复曲线。 结论： 心肌肽素浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞I_Na，可能是其抗心律失常作用的机制之一。     

应用护理程序对急性出血性坏死性胰腺炎的护理

急性出血性坏死性胰腺炎是高危的急腹症。由于病情变化快、并发症多、预后差,常因病情严重而威胁着病人的生命安全。及时恰当的护理可挽救病人的生命和改善病情。现将应用护理程序对急性出血性坏死性胰腺炎6例病人实施护理体会介绍如下。 一、临床资料 6例病人均被我科从1998年2月～2000年1月收住,男5例,女1例:年龄21～69岁之间。手术方式:4例行驶     

基层医院对急性坏死性胰腺炎的外科治疗

急性坏死性胰腺炎(ANP)是一种高危急腹症，本病起病急、发展快、病情重、预后差，其死亡率仍在30％．40％左右。本文将我院从1989年9月～1998年1月期间收治12例患者的疗效和方法报道如下：     

兔内、中、外层心室肌细胞的快钠电流

目的探讨兔心室肌快钠通道的跨壁异质性。方法以酶解法分离兔心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察内、中、外3层心室肌细胞快钠电流(INa)的活性及动力学差异。结果3层细胞的INa电压依赖性相似,但峰电流值不同,中层细胞最大,其次为内、外层细胞。分别为(pA/pF)31·46±13·72、15·89±6·64、12·16±2·26,中层细胞与内、外2层细胞相比差异显著(P<0·05),内外两层细胞无显著差异。内、中、外3层细胞失活半电压分别为(mV)-93·82±4·64(n=16cells),-103·00±8·67(n=15cells),-97·38±5·42(n=14cells),中层细胞与内层细胞相比差异显著;中层细胞与外层细胞及内层细胞与外层细胞相比无显著差异。3层细胞的INa灭活后恢复曲线无明显差异。中层细胞与内、外2层细胞的INa活性存在明显差异。结论以上结果可能是构成心律失常发生的解剖学基础,也可能是I类抗心律失常药在3层细胞作用不同的原因。     

G-CSF对豚鼠单个缺血心房肌细胞钙、钠、钾电流的影响

目的:采用膜片钳全细胞记录方法,观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)急性干预对分离的豚鼠单个缺血心房肌细胞钙、钠、钾电流的影响。方法:使用酶解方法获得豚鼠单个心房肌细胞,在缺血缺氧条件下,采用全细胞膜片钳技术观察记录不同浓度G-CSF急性干预对钙通道电流-电压曲线、激活曲线、失活曲线,钠通道电流-电压曲线、激活曲线、失活曲线、静态失活曲线,延迟整流钾通道及其快成分、慢成分电流-电压曲线的影响。结果:随G-CSF浓度的增加,缺血心房肌细胞膜L型钙通道电流较缺血对照组有明显增大。当G-CSF浓度超过100μg/kg后,L型钙通道电流的增强维持于同一水平。当给予G-CSF浓度为300μg/kg时最大激活电压发生改变,较前有所增加。激活曲线与失活曲线未见明显改变。不同浓度G-CSF对缺血心房肌细胞膜钠离子通道电流无明显影响。G-CSF干预缺血心房肌细胞膜延迟整流钾电流未见明显改变,但延迟整流钾电流快成分在G-CSF 100μg/kg干预后明显增加,而延迟整流钾电流慢成分未见明显改变。结论:G-CSF对于缺血心房肌细胞部分通道的作用影响基本为非电压依赖性,但具有浓度依赖性,可能减少缺血心房心律失常的发生率。     

A one-stage model of experimental acute necrotizing pancreatitis in rats

AIM: To establish a one-stage model of experimental acute necrotizing pancreatitis (ANP) in rats characterized by the simplicity of performance and a high degree of repeatability. METHODS: ANP modeling in rats was performed based on modification of the ligation model as follows: synthetic material ligature using an atraumatic needle was performed to capture pancreatic gland ducts and marginal duodenum vessels. Ligature tips were exteriorized to the abdominal wall, and the ligature was skinned over to avoid catching intestine loops. Pancreatic macroscopic appearance and histological changes were observed. Blood biochemical and hemostatic indicators were also determined. RESULTS: Laboratory analysis of rats with experimental ANP showed a pattern of disturbances similar to that observed during pancreatic necrosis in humans as soon as the first day. General blood analysis revealed enhanced leukocytosis and alterations in leukogram characteristics, indicating acute inflammation. Serum levels of amylase, aspartate aminotransferase and creatinine significantly increased (P<0.05). Hemostatic indicators showed alterations indicating formation of disseminated intravascular coagulation, and signs of endotoxicosis were observed. These typical pancreatic necrosis patterns of disturbances were validated by the results of histological investigation. CONCLUSION: Histological changes and laboratory indicators confirm the development of a suitable model of ANP.     

黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞钙通道及钠钙交换载体的效应

目的与方法；以柯萨奇Ｂ３病毒感染急性分离的成年大鼠心肌细胞，利用膜片和记录技术了解黄芪对感染柯萨奇病毒后心肌细胞Ｌ型钙通道及钠钙交换载体的影响，以探讨黄芪用于心肌炎治疗的作用机制，结果：黄芪不影响正常心肌细胞Ｌ型钙通道电流的幅度，但可缓缓Ｌ型钙通道电流的衰减。黄芪也不影响内向ＮＣＥ电流，但使外向ＮＣＥ电流增加，从而使动作电位期间由ＮＣＥ转运人细胞内的钙离子增加。病毒感洒增加心肌细胞Ｌ型钙通道电流的     

急性胰腺炎患者的PTH-M、CT、Ca2+水平及其相互关系

目的:研究轻型急性胰腺炎(MAP)和重症急性胰腺炎(SAP)患者的甲状旁腺激素、降钙素(CT)、血钙的变化及其相互关系。方法: 应用放射免疫法测定所选病例的血清甲状旁腺激素中间片段(PTH-M)、降钙素;用全自动生化分析仪测定所选病例的血清钙离子浓度。结果:①MAP和SAP患者的急性期和恢复期血清PTH-M与正常对照组比较差异无显著(P＞0.05); MAP和SAP患者的急性期血清CT显著高于正常对照组(P＜0.01), 而MAP和SAP患者的恢复期血清CT与正常对照组比较差异无显著(P＞0.05)。②SAP患者的急性期血清CT与血钙之间存在直线负相关关系(r=-0.453,P＜0.05)。结论: 重症急性胰腺炎患者,低血钙的发生是由于降钙素分泌显著增加所致,而此时血中甲状旁腺素水平仍保持正常水平。     

多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞内钙的影响

目的：观察外源性低浓度多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞钙超载的影响。 方法: 酶解分离大鼠心室肌细胞，用正常氧合Tyrode液灌流8 min, 换为缺氧液灌流32 min, 再转换为正常氧合Tyrode液灌流8 min,复制心肌缺氧-复氧模型。分别在缺氧前给予精胺，缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺。应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化。 结果: 精胺（1 mol/L）对正常静息状态下大鼠心室肌［Ca2+］i无影响。缺氧前给予精胺，可取消复氧引起的心肌［Ca2+］i增高；缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺对缺氧-复氧引起［Ca2+］i升高也有不同程度的降低作用，其中以精胺的作用最强。复氧后给予精胺降低缺氧-复氧［Ca2+］i 升高的作用小于缺氧前给予。 结论: 缺氧前给予精胺可拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载发生；复氧后给予精胺可使缺氧-复氧心肌细胞钙超载减轻，但其作用力度不如缺氧前给药。多胺拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载的作用以精胺＞精脒＞腐胺的顺序递减。     

心肌肽素抗心律失常作用及对钙和钾离子通道的影响

目的：观察心肌肽素对室速、室颤发生率及心室肌细胞钙、钾电流的影响。方法：建立整体动物心肌缺血－再灌流损伤模型。以膜片钳技术记录单个心室肌细胞内向钙电流及电流－电压曲线、内向整流钾电流及延迟整流钾电流。结果：心肌肽素可降低低室速、室颤发生率,在一定浓度下对心肌细胞内向钙向电流有明显的抑制作用,且该作用具有一定的电压依赖性,而对内向整流钾电流及延迟整流钾电流均无作用。结论：心肌肽素能降低缺血－再灌流损     

大蒜素对心室肌细胞膜钠通道电流的影响

目的: 研究大蒜素对心室肌细胞膜钠通道电流(I_Na)的影响,探讨大蒜素在离子通道水平的药理作用机制。方法: 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,观察不同浓度的大蒜素对钠通道的影响。结果: (1)快钠通道电流:大蒜素对豚鼠心室肌细胞I_Na呈电压依赖性和浓度依赖的抑制作用。(2)大蒜素对I_Na电流密度-电压关系(I-V)曲线的影响:给药前I_Na电流密度在膜电位-40 mV达到最大峰值为(-13.41±6.95)pA/pF;在500 μmol/L灌流法给药后,电流密度最大峰值为(-8.53±3.70)pA/pF,给药后电流密度减少约48%。给药前后电流密度变化有显著差异(P<0.01)。(3)大蒜素对I_Na激活-失活曲线的影响:在大蒜素500 μmol/L灌流法给药后,激活曲线显示给药前后半数激活电压为(-44.72±15.61) mV vs (-45.66±17.86)mV,斜率因子为-2.7±0.8 vs -2.2±0.7,给药前后变化无显著差异。失活曲线显示大蒜素使失活曲线向负电位方向变化,差异显著;半数失活电压为(-88.61±9.60) mV vs(-103.03±8.90) mV(P<0.01),斜率因子为-7.85±0.88 vs -7.55±2.75(P>0.05)。结论: 大蒜素可浓度依赖性和电压依赖性地抑制心肌细胞膜钠通道电流;给药后I-V曲线上移,显著减少电流密度;其对失活曲线有明显影响,提示大蒜素主要作用于钠通道的失活态。     

钙离子与牛磺酸两者跨心肌细胞膜内流的相互影响

目的和方法：取新生ＳＤ大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞，采用放射性同位素４５Ｃａ２＋及３Ｈ－牛磺酸示踪技术，观察钙离子与牛磺酸跨心肌细胞膜内流的相互影响。结果：（１）牛磺酸内流在低胞外Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｏ，０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高［Ｃａ２＋］ｏ（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）均比正常［Ｃａ２＋］ｏ（１５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高［Ｃａ２＋］ｏ（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）时增加，尤以低［Ｃａ２＋］。时明显；异搏定（１０μｍｏｌ／Ｌ）能促进牛磺酸的内流；（２）１０～２０ｍｍｏｌ／Ｌ牛磺酸对不同［Ｃａ２＋］。（０５、１５和４０ｍｍｏｌ／Ｌ）下的Ｃａ２＋内流均有抑制作用，而１ｍｍｏｌ／Ｌ牛磺酸只抑制高［Ｃａ２＋］ｏ时Ｃａ２＋内流，对低［Ｃａ２＋］ｏ和正常［Ｃａ２＋］ｏ时Ｃａ２＋内流无明显作用；１～２０ｍｍｏｌ／Ｌβ－丙氨酸对Ｃａ２＋内流无明显影响。结论：胞外Ｃａ２＋浓度的变化可直接影响牛磺酸内流，而牛磺酸能抑制Ｃａ２＋的内流，两者相互影响，从而发挥牛碘酸调节细胞内Ｃａ２＋浓度的作用     

同型半胱氨酸对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取及其影响机制的研究

目的：观察同型半胱氨酸（ＨＣＹ） 对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取的影响及其影响机制。方法：应用［３ Ｈ］－ 牛磺酸同位素检测技术,测定ＨＣＹ 不同浓度或在ＨＣＹ 作用下牛磺酸作用不同时间对牛磺酸摄取量的影响,以及应用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ） 抑制剂Ｈ７ 和多粘菌素（ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ Ｂ, ＰＢ） 观察大鼠心肌细胞在ＨＣＹ 作用下对牛磺酸摄取量的影响。结果：ＨＣＹ 呈浓度依赖性刺激大鼠心肌细胞对牛磺酸的摄取,１０ ～１００ μｍｏｌ／Ｌ 浓度组分别较阴性对照组牛磺酸摄取量增加３３ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） ～６７ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） ;ＨＣＹ 刺激心肌细胞摄取牛磺酸量呈时间依赖性,牛磺酸作用时间２ 、５ 和１０ ｍｉｎ时分别较作用１ ｍｉｎ 时增加４８ ％ 、２４５ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 和３０６ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） ;ＨＣＹ 刺激摄取牛磺酸量分别为Ｈ７ 和ＰＢ 作用减少３５ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 和４３ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 。结论：ＨＣＹ 促进大鼠心肌细胞摄取牛磺酸的作用可能与ＰＫＣ 所介导的蛋白磷酸化过程有关