新型酸性银染技术在微量核酸检测中的应用

一种新型酸性银染技术在制备小分子寡聚核苷酸随机引物和用SSCP技术筛查基因突变体等微量核酸检测中可以代替同位素放射自显影方法，精确的将薄层聚丙烯酰胺凝胶中0．3～1pg/mm2的核酸显色。其优点是分辨率极高，且简便、快速、实验材料成本低。一、材料和方法1．制备随机引物：DNaseI（Promega公司）与5mg小牛胸腺DNA（华美生物工程公司）按SU／μg反应比在500μ1酶反应缓冲液中充分溶解，37℃水浴1小时，用终浓度为20mmol／L的EDTA（pH8．0）终止，常规盐饱和酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）提取二次后加入1／3体积乙醚混匀，4℃静…     

20cm与8cm SDS-PAGE检测钙ATP酶同工异构体分子量比较

目的 比较在蛋白质组学中使用的20 cm SDS-PAGE和传统的8 cm SDS-PAGE在细胞膜钙ATP酶(PMCA)同工异构体表观相对分子质量测量的差异.方法 人晶状体上皮细胞(HLE B-3细胞)经培养至90%融合后,收集其膜蛋白.部分样品行20 cm SDS-PAGE,条件为16 mA/gel,然后改为24 mA/gel,共4～5 h.另一部分样品行8 cm SDS-PAGE,条件为200V 45 min.在同一胶上同时电泳已知相对分子质量的蛋白质标记物.分离厚的蛋白转移到PVDF膜上,用针对细胞膜钙ATP酶(PMCA)同工异构体PMCA1、PMCA2和PMCA4的特舁性抗体进行Western印迹检测.通过电泳移行距离与对数相对分子质量的线性关系计算各个同工异构体的表观相对分子质量.结果 从电泳条带的形态上看,8 cm胶中蛋白条带较细而浓集,而20 cm胶中较宽而扩散.在8 cm胶208 000和126 000条带之间的距离为6.1 mm,而在20 cm胶此距离为32.8 mm.在8 cm胶126 000和97 000条带之间的距离为5.2 mm,而在20 cm胶为20.2mm.20 cm胶中各蛋白条带的移行距离较8 cm胶增加.但是在8 cm胶中蛋白质条带的浓集性较好.在8 cm胶中PMCA 1、2、4的表观相对分子质量分别为153 800、153 500和152 900;在20 cm胶中,则分别为153 1130、125 500和147 400.结论 首次证实20cm和8cm SDS-PAGE均能成功榆测HLE B-3细胞中PMCA 1、2、4的存在,但是检测出的表观相对分子质量有所不同.PMCA 1、2、4的相对分子质量在8 cm胶中分别为153 800,153 500和152 900,而在20 cm胶中分别为153 100,125 500和147 400.PMCA2很可能在20 cm胶长时间的电泳过程中发生了蛋白水解现象.     

2种嗜银染色改进法的应用

在以往的嗜银染色中由于染色时间长、操作较为复杂,制约了这种技术的广泛应用。我们经复习文献发现２种改进法既可保证染色结果又能缩短染色时间。为了更好地了解和掌握这２种方法,我们作了应用染色实验,并根据条件对原方法稍作修改,现报道如下。１　材料和方法１１　材料　选择已确诊的１０例肿瘤,其中肺类癌３例,甲状腺髓样癌４例,嗜铬细胞瘤３例。标本经常规处理后切片,厚４μｍ。切片经Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ方法证实有嗜银细胞存在,然后应用下列方法进行实验。１２　方法１２１　Ｓｔａｐｌｅｓ煮沸法　用煮沸的双蒸馏水…     

一种显示肾组织结构的新染色法——酸性复红银染法

对肾小球和其他肾脏疾病的诊断,主要依赖于对活检标本的光镜、电镜观察,或利用免疫细胞化学技术进行诊断,但电镜及免疫组化方法并非在所有病理实验室都可施行,大部分诊断仍需依赖常规福尔马林固定、石蜡包埋组织进行普通染色和一系列特殊染色.如过碘酸雪夫氏反应,Masson染色法、地衣红弹性蛋白染色和银染法等.许多肾小球的异常取决于光镜的鉴别,因此,肾组织各种结构的清晰显示与分辨至关重要,我们将常规染色与一些特殊染色相结合,建立一种显示肾组织各种结构的染色方法.     

双色银染原位杂交与荧光原位杂交检测胃癌患者HER2基因状态

目的 比较双色银染原位杂交(DSISH)与荧光原位杂交(FISH)两种技术在胃癌HER2检测中的优缺点,评价DSISH用于胃癌患者HER2基因扩增状态检测的可行性.方法 收集2009年1月至3月在四川大学华西医院行根治性手术的原发性胃或胃食管交界处腺癌80例,行全自动免疫组织化学(IHC)染色检测HER2蛋白表达,所有标本行FISH和全自动DSISH检测HER2基因状态,比较不同检测方法之间的符合率.结果 DSISH和FISH初检均有5例失败,经重复检测后结果满意.IHC检测3+的13例中DSISH检测12例、FISH检测11例为HEB2基因扩增;IHC检测2+的6例中DSISH、FISH检测均有1例为基因扩增;IHC检测1+的18例中DSISH、FISH检测均有2例为基因扩增;IHC检测为0的43例中DSISH、FISH检测均无基因扩增.80例原位杂交病例中,仅1例检测结果不一致(DSISH有基因扩增而FISH无基因扩增),两种方法的总体符合率为98.8%(79/80,κ=0.958,P＜0.01).结论 DSISH技术用于胃癌HER2基因检测结果与FISH符合率高.DSISH与FISH检测各有优缺点,DSISH更具有可行性和实际应用价值.

Abstract：

Objective To investigate the advantages and disadvantages of dual-color silverenhanced in-situ hybridization(DSISH)and fluorescence in-situ hybridization(FISH)for determination of HER2 gene status in gastric carcinoma and to evaluate tlle feasibility of DSISH.Methods Eighty cases of primary gastric or gastroesophageal junction adenecarcinomag diagnosed and treated surgically from January to March.2009 at the West China Hospital were enrolled in the study.Automated immunohistochemistry (IHC)staining,FISH and automated DSISH were carried out to detect the HER2 status,respectively,and the concordance ofthe three techniques was then evaluated.Results DSISH and FISH failed initially,but repeated detection Was successful in 5 eases.Gene amplification was detected in 12/13 IHC 3+ cases in DSISH and in 11/13 IHC 3+ cases in FISH.In 6 IHC 2+cages, the amplification rate was both 1/6;in 18 IHC 1+cases.the amplifieation rate was both 2/18.No amplification Was observed in 43 IHC 0 cases.Only one of the 80 cases showed discrepancy.and tIlerefore the overall concordance between FISH and DSISH Wag 98.8%(κ=0.958,P＜0.01).Conclusions DSISH represents a novel approach for the determination of HER2 status in gastric carcinoma, and the overall concordance between DSISH and FISH is excellent.Despite their advantages and disadvantages.DSISH is more feasible and practical for routine application in surgical pathology.     

Gordon-Sweets银氨染色和Masson三色套染技术在肝穿刺病理诊断中的应用

正肝穿刺活体组织检查(简称肝穿刺活检)是一种在B超、CT的定位和引导下经皮肤穿刺获取少量肝脏标本,经过处理后行病理组织学、免疫组化、特殊染色等,在镜下观察肝脏组织和细胞形态的一门技术[1]。在肝穿刺病理诊断工作时,为了解肝脏的炎症和纤维化程度,常用的特殊染色方法     

双色银染原位杂交与荧光原位杂交检测胃癌患者HER2基因状态

Objective To investigate the advantages and disadvantages of dual-color silverenhanced in-situ hybridization(DSISH)and fluorescence in-situ hybridization(FISH)for determination of HER2 gene status in gastric carcinoma and to evaluate tlle feasibility of DSISH.Methods Eighty cases of primary gastric or gastroesophageal junction adenecarcinomag diagnosed and treated surgically from January to March.2009 at the West China Hospital were enrolled in the study.Automated immunohistochemistry (IHC)staining,FISH and automated DSISH were carried out to detect the HER2 status,respectively,and the concordance ofthe three techniques was then evaluated.Results DSISH and FISH failed initially,but repeated detection Was successful in 5 eases.Gene amplification was detected in 12/13 IHC 3+ cases in DSISH and in 11/13 IHC 3+ cases in FISH.In 6 IHC 2+cages, the amplification rate was both 1/6;in 18 IHC 1+cases.the amplifieation rate was both 2/18.No amplification Was observed in 43 IHC 0 cases.Only one of the 80 cases showed discrepancy.and tIlerefore the overall concordance between FISH and DSISH Wag 98.8%(κ=0.958,P＜0.01).Conclusions DSISH represents a novel approach for the determination of HER2 status in gastric carcinoma, and the overall concordance between DSISH and FISH is excellent.Despite their advantages and disadvantages.DSISH is more feasible and practical for routine application in surgical pathology.     

避免Golgi银染标本表层产生铬银沉淀的一个方法

Golgi镀银染色法自从问世以来一直是研究神经组织形态学的重要手段。经典的Golgi染色法是先将神经组织用重铬酸钾进行铬化处理，然后浸染硝酸银。后来，在其基础上又衍生出很多方法，主要分为Cox升汞法和Bielschowsky还原银法两大类，丰富了神经组织的银染技术。但是，通过实践，我们认为经典的Golgi染色能同时清晰显示神经元和胶质细胞的整体形态，     

改良Warthin-Starry染色技术的新用途

我们用改良Ｗａｒｔｈｉｎ Ｓｔａｒｒｙ(Ｗ Ｓ)染色方法检查一些病原体取得较好效果 ,现将我们的工作体会介绍给同行。1　材料和方法1.1　材料　实验材料均取自外检组织 ,包括梅毒螺旋体感染的皮肤粘膜组织、鼻硬结症之鼻腔粘膜 ,侵袭性霉菌病之上颌窦粘膜组织、胃炎粘膜组织及淋病炎性渗出物涂片。组织均经常规处理、石蜡包埋 ,每份切成数张 6 μｍ厚的切片备用。涂片常规固定 1ｍｉｎ后漂洗吹干备用。1.2　染色液的配制和染色程序1.2 .1　 染色液的配制　①明胶原液 :明胶 5 ｇ ,蒸馏水 10 0ｍｌ,加热溶解。②显色剂 :明胶原液 8ｍｌ、2 …     

毛细管电泳分析核酸的方法及应用

毛细管电泳是一门速发展的分离技术。根据分离同制不同,毛细管电泳分离核酸的方法有:胶束电动力学毛细管色谱(MEKC)、毛细管区带电泳(CZE)和毛细管凝胶电泳(CGE)。毛细管电泳主要用于核酸纯度的鉴定、定量分析、测序,片段大小多态性分析、构象多态性分析和蛋白与核酸相互作用的研究。     

血清免疫固定电泳、血清蛋白电泳及免疫球蛋白定量对 多发性骨髓瘤的临床诊断价值

目的 分析血清免疫固定电泳、血清蛋白电泳、免疫球蛋白定量对多发性骨髓瘤（MM）的临床诊断。方法 选取2017年5月~2018年5月在我院门诊或住院部收治的多发性骨髓瘤患者100例作为案例。所有患者均接受血清免疫固定电泳、血清蛋白电泳、免疫球蛋白定量检查。分析MM患者血清总蛋白、免疫球蛋白、血清蛋白电泳以及免疫固定电泳的异常发生率以及IgG、IgA、IgM的K、入型检查结果。结果 100例多发性骨髓瘤患者中72例患者异常,其中42例患者属于血清总蛋白量提升,30例患者属于球蛋白含量提升、白蛋白含量下降,总蛋白含量正常。血清免疫球蛋白定量检测中36例IgG含量提升,19例患者IgA含量提升,4例单纯轻链性免疫球蛋白IgG、IgA以及IgM正常或稍微下降。100例患者当中63例患者的血清蛋白电泳图谱中存在M蛋白。结论 血清免疫固定电泳、血清蛋白电泳、免疫球蛋白定量对多发性骨髓瘤的临床诊断价值较高,多发性骨髓瘤可以先用血清蛋白电泳与免疫球蛋白定量实现初步筛查,之后采用免疫固定电泳实现临床诊断与鉴别,整体诊断效果理想。     

鬼臼毒素DPPC脂质体凝胶剂的制备方法及检测

目的：制备一种含有鬼臼毒素DPPC脂质体凝胶剂，用于治疗和预防尖锐湿疣的复发。材料和方法：用逆向蒸发法制备药物，光镜和电镜观察其形态。用凝胶渗透色层技术测得脂质体的包封率。结果：鬼臼毒素DPPC脂质体光镜下可见球形脂质体．其平均粒径为187nm；电镜下DPPC脂质体的结构是多层多室脂质体。包封率为73．8％。结论：使用逆向蒸发法制备脂质体使其分布较均匀，方法简便易行，其包封率较高。     

网状纤维染色中氨银溶液配制的再认识

传统组织病理学技术理论中,用于病理切片组织网状纤维染色的氨银溶液有多种配制方法,本文基于相关化学原理对其进行比较优选. 1 传统氨银溶液配制方法的比较分析 1.1 James法、Lillie法和Lillie-Fullmer法的异同 Lillie法和Lillie-Fullmer法氨银溶液几乎是一样的,James法氨银溶液虽配制工艺不同,但试剂成分也是相同的,3种方法都只用硝酸银水溶液与氨水直接反应制得氨银溶液,而且都认为溶液略有混浊为好.3种方法的试剂用量较大.     

聚丙烯酰胺凝胶的快速脱色及干胶的简易制作

目的建立一种聚丙烯酰胺凝胶快速脱色的方法及干胶的简易制作。方法将滤纸条置于自来水中并加热作为脱色液,脱色完全后,用培养皿作为支持物制得干胶。结果与结论本法所用脱色液脱色彻底?快速,所制干胶光滑平整,保存时间长。     

大鼠小肠嗜银、亲银细胞的分布及形态学观察

本文用肠卷石蜡切片的嗜银反应(黄荫乔法)、亲银反应(Singh法),对11只大鼠小肠的嗜银、亲银细胞的分布及形态学作了初步观察,结果如下。 1.大鼠小肠的嗜银、亲银细胞的密度,在十二指肠最高,从空肠到回肠逐渐减少。 2.嗜银、亲银细胞在肠腺基底部着色较浅,在腺上部着色加深,在绒毛顶端为深染。嗜银细胞基底部有突起,穿过基膜到达固有层。在固有层内,于突起附近有嗜银颗粒和突起相延续。嗜银颗粒到达细胞顶端较为多见,有时可见到嗜银颗粒释放到腺腔内。因此我们认为,嗜银、亲银细胞兼有内、外分泌双重功能。 3.在小肠固有层的结缔组织内,发现有嗜银细胞,细胞形状不规则,有突起,胞质和突起都充满嗜银颗粒,有时可见嗜银颗粒到达细胞外。颗粒的形态、致密度及染色特点,与上皮细胞之间的嗜银细胞相同,故这些细胞可能属于内分泌细胞。     

一种改良的蛋白质电泳考马斯亮蓝G-250染色方法

目的建立一种简便、低毒的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法。方法电泳后的凝胶经短暂固定后,用含氨基磺酸的考马斯亮蓝G-250溶液染色,无需脱色。结果该方法灵敏度高于经典考马斯亮蓝R-250染色方法,并去除了常规染色和脱色液中有毒的甲醇等溶剂。结论改良方法具有灵敏度高、染色背景浅、节省染料、直接显色无需脱色及配方安全低毒等优点。     

老化及年青红细胞电介质电泳的研究

本文介绍我们实验室自己试制的电介质电泳装置及测量方法,并用电介质电泳测定老化及年青红细胞的电介质电泳收集率(DCR)、细胞膜镶嵌蛋白分子水平扩散运动特征频率(Fc)及细胞在交流电场作用下的变形程度。并从测量结果分析老化及年青红细胞变形性及膜导电性、流动性、韧性、脆性等流变学性质。其中细胞变形性测定结果与衍射法进行了比较。     

抗FMOC—苯丙氨酰氨基己酸的单克隆抗体的制备

为了建立新的非放射性基因标记和检测体系，用化学方法合成了Ｆｍｏｃ－苯丙氨酰氨基己酸。然后将其作为半抗原，与载体蛋白偶联（通过ＥＤＣ），用于免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出一株阳性克隆，分泌专一性抗Ｆｍｏｃ－苯丙氨酰氨基己酸的抗体。用双抗体夹心法测得其亚类为ＩｇＧ１。用间接ＥＬＩＳＡ法测得腹水效价为１．６×１０－５。用竞争性ＥＬＩＳＡ法测得亲和常数为３．６×１０６Ｍ－１。     

大肠癌相关抗原CA-Hb3的提取、亲和层析纯化及其生物学特性

方法：应用ＴｒｉｔｏｎＸ１００和正丁醇分别提取了大肠癌组织粗提抗原和大肠癌细胞株ＨＲＴ－１８的ＣＢＥ（正丁醇提取物），二者均有抗原活性。抗原经抗大肠癌单抗Ｈｂ３－亲和层析进一步纯化，获得纯大肠癌相关抗原ＣＡ－Ｈｂ３。结果：经鉴定，ＣＡ－Ｈｂ３为糖蛋白，其抗原活性与糖链有关。其分子量随变性程度而异，变性完全（１００℃巯基乙醇作用５ｍｉｎ）时为５０ｋＤ，而变性不完全（１００℃３ｍｉｎ）约２７ｋＤ，故推测该抗原是由两个亚基（约２７ｋＤ）组成的同源二聚体。结论：在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定蛋白质分子量时，使用不同变性时间处理样品可研究其亚基组成     

增强免疫过氧化物酶染色反应的银浸技术

增强免疫过氧化物酶染色反应的银浸技术杨红，李科，徐钢在日常工作中，某些病理组织，或因自身抗原含量少，或因标本在组织处理过程中抗原丢失多，而致免疫组化反应弱，给病理诊断带来一定的困难。为增强该类组织的免疫过氧化物酶反应，使结果在光镜下更易辩认，我们采用...