杂交瘤细胞染色体制备及生物学意义初探

目的:改进杂交瘤细胞培养及染色体制备方法。方法:取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0常规融合,用不同的培养基制备杂交瘤细胞,并在制备杂交瘤染色体时改变秋水仙素作用的时间。结果:12孔板中加入DMEM培养液的杂交瘤细胞株生长良好,其中6孔板加秋水仙素培养1h,染色体形态最佳,数目稳定。结论:DMEM培养液更适合此种杂交瘤细胞的培养。制作染色体时缩短秋水仙素培养时间,使得杂交瘤细胞染色体形态更接近于两种亲本细胞。     

培养基对兔骨髓间充质干细胞体外扩增的影响

目的考察含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基(DMEM HG, 10％FBS)、10％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG,10％FBS)、15％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 15％FBS)、20％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 20％FBS)对兔骨髓间充质干细胞体外贴壁、扩增的影响。方法① 选2月龄的新西兰大白兔,股骨转子间区抽取骨髓利用密度梯度离心贴壁法分离纯化细胞,体外培养。选取传代第一代骨髓间充质干细胞 (passenger one, P1)分别用以上4种细胞培养基培养,测细胞扩增倍数;② 选取传代第二代骨髓间充质干细胞(passenger two, P2)分别将以上4种细胞培养基混悬液接种于24孔板中,观察细胞生长状态并测生长曲线;③ 选取4种培养基中培养效果最好的一组细胞,以密度0.5×104/mL接种于24孔板中,成骨诱导,茜素红染色测其矿化能力。结果DMEM LG(15％FBS) 组中细胞扩增倍数为(16.20±1.60)倍,细胞集落形成数为6.11±1.17,与其它组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,并矿化能力最强。结论DMEM LG (15%FBS)培养基较其他3种培养基更符合兔骨髓间充质干细胞体外扩增培养的条件,且更好的保持了细胞的正常形态和生物活性。     

杂交瘤细胞分泌抗体筛选方法的比较

本文比较筛选抗细胞膜抗原单克隆抗体的三种方法。将J_M细胞系免疫的鼠脾细胞与SPZ/O细胞融合,接种在4块24孔培养板中(共96孔),结果80孔有杂交瘤细胞生长,融合成功率达83%。14天后用三种方法检测特异性抗体。结果表明,固定细胞ELISA、间接免疫荧光染色利SPA花环法检出阳性     

影响家蝇胚胎细胞系建立的相关因素研究

目的 探讨家蝇胚胎细胞系建立的影响因素.方法 取不同发育时间的家蝇卵(胚胎),用不同培养基将细胞培养于玻璃培养瓶和塑料培养瓶中,观察细胞生长.结果 产出约6 h的家蝇胚胎细胞能生长增殖,并成功建立贴壁生长细胞.其它时间段产出卵的家蝇胚胎不能建立贴壁细胞;家蝇胚胎细胞在TC-199培养基中不能生长,在TC-199加酵母提取液和水解乳蛋白的培养基中,家蝇胚胎细胞生长缓慢.在M3培养基中迅速生长,其中在15%胎牛血清(FBS)、20?S的M3培养基中,细胞生长迅速并可传代.细胞在玻璃培养瓶中不能贴壁生长,而在塑料培养瓶中能迅速贴壁生长.结论 取产出后约6 h的家蝇胚胎细胞接种于含15%～20% FBS的M3培养基的塑料培养瓶中,家蝇胚胎细胞能贴壁生长,成功传代.     

长期无血清传代培养瘤细胞的某些生物学特性观察

本文对长期在无血清培养基内传代培养的亲本瘤和杂交瘤细胞的某些生物学特性进行了监测。结果显示,长期(三个月以上)在DMI传代的瘤细胞,贴壁能力明显减弱,个别瘤系完全呈悬浮型生长,但重新置回含血清常规培养基培养,贴壁能力大部分可恢复到原来状态:诱发BALB/c小鼠腹水和皮下实体瘤的能力保持不变;在HAT选择培养基中培养,瘤细胞的死亡时间在DMI和RPS15对照两种培养基内基本一致;4个亲本瘤系8-氮鸟嘌呤筛选结果与含血清培养的瘤细胞相似;经DMI长期传代的杂交瘤系分泌抗体的能力基本保持不变。     

化疗药物对培养状态下脊索瘤细胞生长的抑制作用

目的：采用细胞培养技术及ＭＴＴ法,观察培养状态２下脊索瘤细胞的生长特点及化疗药物对脊索瘤生长的抑制作用。方法：手术切除的新鲜脊索瘤标本,置入含１００ｍＬ／Ｌ小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基中,观察脊索瘤细胞生长特点;取对数生长期的细胞接种９６孔板,每孔细胞数１０＾４个,将质量浓度３,３０,７５ｍｇ／Ｌ顺铂;１５,１５０,３７５ｍｇ／Ｌ卡铂;１,１０,２５ｍｇ／Ｌ表阿霉素分别加入孔内,３７℃５０ｍＬ     

大鼠腺垂体细胞单层培养及其分泌功能的研究(摘要)

<正> 本文报道了大鼠腺垂体细胞单层培养的方法,经胰蛋白酶、DNA酶、胰蛋白酶抑制剂以及EDTA和神经氨酸酶先后处理的腺垂体细胞在24孔塑料培养板上生长良好,功能反应灵敏、稳定。LH分泌与细胞密度(0.25～2.0×10~6个/孔)呈高度相关。培养的细胞对GnRH(10~(-10)～10~(-6)mol/L)及下丘脑正中隆起提取物的反应良好,LH分泌量与刺激物浓度高度相关,最低有效刺激量分别为10~(-10)mol/L和0.00625“当量”。本法可作为下丘脑释放激素生理活性的检测系统,并可用于腺垂体机能调节的生理学,病理生理学和药理学研     

抗日本血吸虫碱性磷酸酶McAb研究

本研究从成虫体内提取碱性磷酸酶并将其免疫小鼠BALB/C纯种小鼠,然后取其脾淋巴细胞与同种小鼠骨髓瘤细胞NS-1杂交。以HAT培养基选择培养杂交瘤细胞。10天后用间接荧光抗体法测定杂交瘤细胞培养上清液。挑选阳性孔的杂交瘤细胞作2～3次克隆化,获得抗血吸虫单克隆杂交细胞株。单克隆杂交瘤细胞的培养液及用单克隆杂交瘤细胞接种同种小鼠所获得的腹水,经成虫冰冻切片荧光抗体反应、放射性同位素~(125)碘标记成虫碱性磷酸酶免疫沉淀试验及酶联免疫吸     

抗日本血吸虫碱性磷酸酶单克隆抗体的研究(简报)

日本血吸虫成虫具有明显的碱性磷酸酶活力。研究该酶在血吸虫生命过程中所起的作用将可能为寻找新药、防治血吸虫病提供线索。本研究从成虫体内分离提取了碱性磷酸酶,并用它免疫BALB/C小鼠,然后取免疫小鼠的脾淋巴细胞与缺陷型小鼠骨髓瘤细胞NSI进行杂交。以 HAT培养基选择培养杂交瘤细胞。10天后采用间接法免疫荧光抗体试验测定杂交瘤细胞培养上清。挑选阳性孔的杂交瘤细胞作2～3次克隆化培养,获得了抗血吸虫的单克隆杂交细胞株。单克隆杂交瘤细胞的培养液及单克隆杂交瘤细胞接种同种小鼠所取得的腹水,经成虫冰     

用小鼠腹水代替小牛血清培养杂交瘤细胞的方法

作者报道了用小鼠腹水代替小牛血清培养杂交瘤细胞。实验证明：杂交瘤细胞可以在含小鼠腹水的培养注保生长，增殖，而且生长状态良好。     

实验环境中野生型鼠疫噬菌体的生长表型特征

目的 观察野生型鼠疫噬菌体在不同实验培养环境中的生长表型特征，为后续噬菌体的生物学特性鉴定及其与宿主菌相互作用研究提供科学依据。方法 利用液体培养法、固体培养法和基于OmniLogTM微生物鉴定系统的微量液体培养法检测3株野生型鼠疫噬菌体的生长情况。结果 基于LB液体培养基的生长结果显示，鼠疫噬菌体476号经28℃和37℃作用20～24 h后生长状况优于37℃培养的鼠疫噬菌体087号和072204号，37℃培养的鼠疫噬菌体087号优于072204号。以鼠疫疫苗株EV76为宿主菌，鼠疫噬菌体476号在双层琼脂培养基上经28℃和37℃培养20～24 h后产生较为清晰的噬菌斑；鼠疫噬菌体087号和072204号经37℃培养20～24 h后在双层琼脂培养基上产生不透明的噬菌斑。基于OmniLog TM系统微量液体培养法的生长结果显示，3株鼠疫噬菌体经33℃裂解鼠疫疫苗株EV76时，通过96孔微量板曲线图显示第1列出现横线，且峰值不超过100，随着噬菌体数量的降低，稀释试验孔依次均出现与鼠疫疫苗株EV76相似的生长曲线，实验孔中四唑类染料颜色随着噬菌体数量的减少和宿主菌数量的增多而逐渐加深。由此...     

添加RGD短肽的新型培养基对细胞生长、融合及外源基因表达的影响

目的在普通培养基中添加RGD短肽制备新型培养基,观察新型培养基对细胞生长状态、杂交瘤细胞融合和外源基因表达的影响。方法以普通培养基为对照,在普通培养基中添加不同质量浓度的RGD制备新型培养基,通过观察人胰腺上皮细胞株HPDE6-C7的生长增殖情况确定RGD的最佳质量浓度,然后,在培养基中接种不同浓度（5×104、105、5×105 mL－1）的HPDE6-C7细胞,通过倒置显微镜观察细胞的形态、贴壁、长势和密度情况;再分别用普通培养基和添加RGD短肽的新型培养基进行杂交瘤细胞的融合,比较两种培养基融合后克隆形成率和克隆阳性率的差异;通过转染含绿色荧光蛋白(GFP)的质粒观察其荧光强度的方法和转染过表达KRAS质粒观察其蛋白表达的方法,观察添加RGD短肽的新型培养基相比普通培养基在转染外源基因表达水平方面的优势。结果RGD短肽使用的最佳质量浓度为10 ng/mL;添加RGD短肽的新型培养基所培养的细胞相比普通培养基形态更佳、贴壁更好、增殖更快。同时,添加RGD短肽的新型培养基应用于细胞融合所形成克隆的百分率和克隆阳性率均高于普通培养基（PGFP后荧光强度更高（PKRAS的蛋白水平也更高（P<0.05）。结论添加RGD短肽的新型培养基在细胞生长状态、杂交瘤细胞融合及外源基因表达方面有突出优势,RGD短肽应用于细胞培养可能具有广泛前景和潜在的价值。     

小牛血清质量的筛选方法

在杂交瘤技术中,小牛血清是合成培养基不可缺少的营养物质。血清质量的好坏直接影响细胞的生长,故须先经筛选,择优使用。我们采用 SP2/0骨髓瘤细胞和不同浓度的血清在微孔板上培养,用两种方法观察细胞生长情况,借以判断血清的质量,结果较为满意。材料与方法1、小牛血清:由福州近郊农村将当日或隔日出生的小牛送实验室,由颈动脉放血,室温放置3～4小时,4℃保存过夜,以     

PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究

目的：研究适宜PC12细胞的培养方法及其在神经生长因子（NGF）作用下的分化效果.方法：PC12细胞培养于F12K培养基中,传代时直接将细胞吹打下来,并用注射器吹散成单细胞悬液;PC12细胞接种于6孔培养板中,并用含NGF 50μg/L的无血清培养基进行诱导分化5d,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,Image J软件进行图像分析.结果：PC12细胞生长状态良好,且经NGF作用5d后,细胞体积显著增大,突起增多增长,细胞分化率达（72.60±3.61）％.结论：本实验中对PC12细胞培养的方法简单易行,适用于PC12细胞的培养;NGF能够诱导PC12细胞分化成神经元样细胞,可为神经退行性疾病的研究奠定基础.     

竹荪水提物对路易斯肺癌细胞的抑制效应研究

目的探讨竹荪水提物对肺癌细胞的抑制效应。方法选取路易斯肺癌细胞（LLC）为靶细胞,接种于48孔或96孔板,接种密度分别为2×10^4/孔和1×10^4/孔,加入不同浓度的竹荪水提物：0、1、2mg／mL,培养1～3d,分别采用镜下观察、细胞计数试剂盒（CCK-8）、流式细胞学和细胞实时分析系统（RTCA）检测细胞生长状态。结果镜下直接观察,与对照组比较,竹荪水提物处理组LLC细胞数量明显较少,高浓度组细胞生长状态不佳：CCK-8检测结果显示,高浓度组OD450为0．24,仅为对照组的一半（0．59）,细胞增殖受到明显抑制,抑制率为59％（P〈0．05）;流式细胞学检测显示,经竹荪水提物处理后,LLC早期凋亡比例由6％上升到48％,凋亡及死亡细胞比例由41％上升到68％;RTCA实时监测数据显示,竹荪水提物高浓度处理组LLC生长的电阻值为0,低浓度组为0．4,对照组为3．7,细胞贴壁生长状态呈剂量一效应关系。结论竹荪水提物可以抑制LLC生长。     

用小鼠腹水代替小牛血清培养杂交瘤细胞的方法

作者报道了用小鼠腹水代替小牛血清培养杂交瘤细胞。实验证明：杂交瘤细胞可以在含小鼠腹水的培养液中生长、增殖，而且生长状态良好     

人胚大脑皮层神经元细胞体外培养方法的建立

目的 建立人胚大脑皮层神经元的培养体系,研究神经元细胞的生长发育过程。方法 取妊娠30余周合法流产死亡4h以内的胎儿之大脑皮层额部组织,用胰蛋白酶消化为单细胞悬液。以2×10~6/ml密度接种于96孔培养板,24h后加入DNA抑制剂阿糖胞苷,培养1～12d,用相差显微镜观察神经元生长情况。并以尼氏体染色鉴定神经元,以台盼蓝拒染法细胞计数估算细胞的存活率。结果 神经细胞生长良好,胞体折光性强,神经突起明显,细胞形态清晰。第5天形成较稠密的网络联系;细胞存活率逐步下降,第3至第5天显著下降。由92.3％降至76.9％,以后趋于稳定。第7天为74.26％。尼氏小体染色第7天阳性率为88.25％。结论 体外培养3～5d的神经细胞属发育期;第5天细胞稳定生长;第6天神经细胞基本发育成熟。     

Isolation, culture and identification of spinal cord neurons from neonatal rats

目的 通过对新生大鼠脊髓神经元分离、培养过程中细节的探讨,建立一种高效、稳定的大鼠脊髓神经元培养方法,为研究脊髓损伤相关的病理生理及其治疗提供种子细胞.方法 取新生SD大鼠的脊髓组织,通过木瓜酶消化制成单细胞悬液,经差速贴壁后种于12孔细胞培养板内,用无血清培养基培养,倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫细胞化学对神经元β-ⅢTubulin行特异性荧光素染色,结合DAPI核染色鉴定神经细胞及其含量.结果 该方法培养的脊髓神经元生长状态良好、密度适中,纯度较高,约83％.结论 采用木瓜酶消化、差速贴壁及无血清培养的新生大鼠脊髓神经元符合体外实验的要求,为进一步进行相关实验提供目的细胞.     

兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养

目的 建立眼角膜、结膜细胞体外培养的方法。方法 采用组织块培养法培养兔眼角膜基质及结膜成纤维细胞。结果 结膜成纤维细胞在培养10天以后可以形成单层细胞。眼角膜成纤维细胞在培养瓶中培养2周后可形成单层；24孔板培养3d后细胞贴壁生长旺盛，10d形成单层。结论 眼角膜、结膜成纤维细胞组织块培养法是可行的，但在24孔培养板上眼角膜成纤维细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。     

深低温冰箱冻存待克隆杂交瘤细胞与瘤细胞

1 待克隆杂交瘤细胞的冻存杂交瘤技术中十分繁重费时的一个步骤是克隆化。如果要在一天内融合96孔8块板是比较困难的,一般要丢掉一部分。为了解决时间不足问题,作者采用了以下方法:先在显微镜下选好杂交瘤细胞,放入超净工作台,轻轻吸出上清液,加入3倍浓缩的细胞保护液,每孔2滴。培养板周围用酒精棉球擦净,封好。放入-10℃左右慢冻2h,然后放-70℃冰箱冻存。可在2～3天内随时取出进行挑选(3天后融合细胞死亡率升高)。用37℃温箱复苏或用常规方法均可。复苏后加入20％RPS营养液1滴,轻轻吸出1