超大剂量阿糖胞苷在小儿急性髓细胞白血病的治疗探讨

目的应用超大剂量阿糖胞苷(SHDAra-C)对急性髓细胞白血病(AML)患儿进行缓解后治疗,探讨其疗效及安全性。方法在患者取得骨髓缓解后应用SHDAra-C共五个疗程,第一疗程Ara-C总剂量达36 g/m2,其后每疗程Ara-C总剂量18 g/m2,累计Ara-C总剂量达108 g/m2。结果8例AML患儿有7例完成了5个疗程HDAra-C化疗(1例只完成4疗程),除1例骨髓复发放弃治疗外,余7例均获CCR至今,CCR时间6~76月,无一例化疗相关性死亡。结论SHDAra-C是小儿AML化疗获得长期无病生存的重要治疗方法,有效且相对安全,其治疗效果值得更大规模的临床病例观察,治疗机理有待更深入的实验研究。     

C反应蛋白在急性淋巴细胞白血病患儿化疗后发热原因鉴别中的意义

阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C) 替尼泊苷(鬼臼噻吩甙,tenoposide,VM26)是当前小儿急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的主要加强治疗方案之一。Ara-C有易致发热的副作用。故用该方案化疗后,患儿常会出现发热,这可能与Ara-C的药物热有关,也可能与骨髓抑制免疫力低下继发感染有关。本研究通过对经Ara-C化疗后发热的83例次ALL患儿C反应蛋白(CRP)水平与发热持续时间及临床治疗反应的观察,对发热的可能原因进行判断并指导合理使用抗生素。     

中剂量阿糖胞苷治疗小儿急性髓性白血病11例报告

为改变小儿急性髓性白血病(AML)的化疗效果及预后还不理想的状况,从1996年到1997年,我们采用中剂量阿糖胞苷治疗了11例小儿AML,取得了较好的疗效。随访时间:9例存活者中最长随访期为26个月,平均19个月,目前均生存良好。我们体会,中剂量Ara-C对于小儿急性髓性白血病确是一种有效的治疗方法,该方案虽然对骨髓有较强的毒性,但一般均能恢复,且其他脏器的毒性作用不明显。在目前小儿AML疗效不理想、而骨髓移植又不能普遍采用的情况下,超常剂量的Ara-C不失为一种有效手段,值得采用。     

大剂量阿糖胞苷治疗儿童急性白血病的现状和进展

<正>阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)是治疗恶性血液肿瘤的关键化疗药物之一。目前,Ara-C已作为多种联合方案的重要组成,被应用于急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)等长期化疗的诱导、巩固、强化和维持等各阶段治疗中。大剂量阿糖胞苷(high dosecytarabine,HD-AraC)由于在药物代谢与活化、剂量     

CCK-8法检测阿糖胞苷对白血病细胞株增殖抑制作用

目的探索阿糖胞苷(Ara-C)治疗急性白血病的剂量、时间与效应的相关性。方法采用CCK-8法,检测不同剂量梯度范围内(0.1～200μmol/L)、Ara-C作用不同时间(4～48 h),对白血病细胞株Jurkat(ALL)和NB4(AML)增殖抑制作用的差异与特征规律。结果 Jurkat细胞和NB4细胞在一定的Ara-C作用浓度范围内,均存在着随作用时间延长,增殖抑制逐渐提升的效应。在4 h和8 h 2个作用时间组中,随着Ara-C剂量递增,Jurkat细胞的增殖抑制率明显增加;而NB4细胞仅在0.5～50μmol/L浓度梯度范围内呈现剂量与效应的相关性。结论 Ara-C作为细胞周期特异性药物(CCSA),对肿瘤细胞的增殖抑制效应存在明显的时间-剂量相关性,Jurkat对Ara-C的敏感性高于NB4。[临床儿科杂志,2012,30(5):460-463]     

急性淋巴细胞白血病153例

目的观察不同化疗方案治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿的效果。方法ALL患儿153例按不同的治疗方案分为两组,甲组诱导采用VP、CVP、DVP或CDVP方案,预防髓外白血病主要是三联(MTX、Ara-C、DEX)鞘注。乙组诱导采用VDLP或CDVLP方案,预防髓外白血病采用HD-MTX和三联鞘注。结果坚持治疗的乙组人数较甲组明显增多(P<0.01),骨髓复发率甲组显著高于乙组(P<0.01),髓外白血病发生率甲组高于乙组(P<0.05),长期缓解率乙组明显高于甲组(P<0.01)。结论多药联合诱导治疗,尤其加入左旋门冬酰胺酶(L-asp),使骨髓复发率明显下降,长期存活率提高;HD-MTX能有效预防髓外白血病。     

阿糖胞苷耐药代谢酶及相关耐药基因研究进展

急性白血病是儿童时期最常见的恶性肿瘤,严重威胁患儿生命.阿糖胞苷（cytosine arabinoside,Ara-C）是目前治疗急性白血病的最主要的药物之一.阿糖胞苷是胞苷和脱氧胞昔类抗代谢药,其活性产物阿糖胞苷三磷酸核苷（Ara-CTP）可以抑制DNA多聚酶（DNA Polymerase）,也可直接以伪代谢物形式掺入DNA分子,终止核苷酸链的延长,从而达到治疗急性白血病的目的.     

替尼泊苷在儿童急性淋巴细胞白血病中的应用

替尼泊苷(VM26)为半合成的鬼臼毒素的糖基衍生物，在儿童多用于治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)。为探讨ALL在巩固、早期强化及维持加强化疗阶段应用VM26 Ara—C前后血常规变化规律，对155例次ALL患儿应用VM26 Ara-C治疗前、后血常规变化情况进行统计分析。结果：用药后白细胞、血小板于第11—13天降到最低值，于3周恢复正常。注射G—CSF对白细胞的恢复有作用。提示VM26对骨髓的抑制作用是其主要副作用，为保证化疗的顺利、安全进行，临床医师应了解其对骨髓的影响程度，从而有效地发挥其抗癌作用。减少毒副作用的有效措施即为给药剂量的个体化。     

中剂量阿糖胞苷致惊厥1例报告

患儿,女,8岁,体重30 kg,体表面积约10 m2。主因“急性淋巴细胞白血病2年强化治疗”于2012年9月25日入院。前期在外院经VMLP（长春新碱＋米托蒽醌＋左旋门冬酰胺酶＋泼尼松）方案诱导缓解,CAM（环磷酰胺＋阿糖胞苷＋6-巯基嘌呤）方案巩固治疗。后来我院按卫生部2010版“儿童急性淋巴细胞白血病临床路径”,以HD-MTX （大剂量甲氨蝶呤）,COAD （环磷酰胺＋长春新碱＋阿糖胞苷＋地塞米松）、CVDP （环磷酰胺＋长春新碱＋柔红霉素＋泼尼松）、COAP （环磷酰胺＋长春新碱＋阿糖胞苷＋泼尼松）、VDLD （长春新碱＋柔红霉素＋左旋门冬酰胺酶＋地塞米松）等方案序贯化疗,并按路径给予腰椎穿刺术联合鞘内化疗预防中枢神经系统白血病,过程顺利,无严重不良事件发生。2013年9月30日流式细胞术检测骨髓微小残留病（minimal residual disease,MRD）结果：获取20万个细胞,MDR 细胞占总有核细胞239％,提示 MRD阳性;10月2日予VDLP（长春新碱＋柔红霉素＋左旋门冬酰胺酶＋泼尼松）方案化疗,同时给予鞘内化疗（甲氨蝶呤125 mg＋阿糖胞苷35 mg ＋地塞米松5 mg）,测颅内压170 mmH2 O,脑脊液常规、生化未见异常。三周后外周血白细胞计数恢复至315×109／L,继予 CAM方案加强化疗：环磷酰胺（CTX）700 mg,d1;阿糖胞苷（Ara-C）600 mg ／次, q 12 h,d2-4;6-巯基嘌呤（6-MP）40 mg,d1-7。患儿化疗第三天（10月28日）晨起发热,体温398℃,查体未见明确感染灶,考虑不除外Ara-C所致药物热,予退热药物治疗后体温下降,继续化疗,第三次Ara-C 于10：00-13：00顺利输注,输注后3 h 45 min （16：45）患儿突然出现抽搐,持续约1 min,当时无发热,针刺人中并予地西泮5 mg 静推后停止抽搐,17：30行头颅CT检查结果未见明显异常,停用第四次Ara-C。患儿持续意识恍?     

RNA干扰联合小剂量阿糖胞苷对K562细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术沉默同源盒(HOX)A10基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞增殖、凋亡的影响,为白血病的基因治疗提供实验依据。方法设计合成针对HOXA10的特异性短发卡RNA寡核苷酸链,构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10真核表达载体并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,并转染K562细胞,结果显示该载体能有效降低HOXA10 mRNA表达水平,HOXA10/β-actin灰度比值(ODR)为(38.86±4.49)%;RNAi联合小剂量Ara-C作用于K562细胞后,细胞增殖能力明显下降,细胞增殖抑制率(IR)为(75.58±8.11)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜可见红色荧光凋亡细胞明显增加,凋亡率显著升高,可达(29.71±1.24)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向HOXA10的RNAi技术联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,有望成为白血病基因治疗的新方案。     

阿糖胞苷与地塞米松联合诱导Jurkat细胞凋亡的协同效应

目的 探讨阿糖胞苷(Ara-C)协同地塞米松(DEX)诱导糖皮质激素(GC)抵抗人类T淋巴细胞ALL细胞凋亡的效应及其临床意义.方法 将不同水平的Ara-C(30 nmol·L-1、100 nmol·L-1、300 nmol·L-1)分别与不同浓度的DEX (100 μmol·L-1、500 μmol·L-1)联用对GC抵抗型Jurkat细胞进行不同浓度联合药物暴露.通过流式细胞计数检测各组细胞24 h、48 h暴露后凋亡率;ELISA法检测暴露24 h后核因子-κB(NF-κB)p65亚基活性;反转录-PCR(RT-PCR)和Western blot法检测暴露24 h后Survivin表达和蛋白水平.结果 Ara-C(100 nmol·L-1、300 nmol·L-1)与DEX(100 μmol·L-1、500 μmol·L-1)联合暴露组,其24 h和 48 h 暴露后细胞凋亡率均显著高于同浓度DEX单药暴露组(Pa<0.001),且呈显著浓度依耐性;联合暴露组NF-κB p65活性和Survivin转录水平及蛋白水平较同浓度DEX单药暴露组均有显著下降(Pa<0.05).结论 Ara-C与DEX具有显著的浓度依赖协同诱导GC抵抗型Jurkat细胞凋亡的作用,且这种协同效应可能是由于二者对NF-κB活性及其下游Survivin表达的协同抑制所产生的.     

“三联药”鞘注加静滴HD-MTX防治小儿中枢神经系统白血病363例疗效观察

尽管化学治疗迅速发展,但许多化疗药物不易透过血脑屏障,使中枢神经系统(CNS)成为白血病细胞的第一庇护所,中枢神经系统白血病(CNSL)成为急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿复发的最重要原因。我们对1986～1996年收治的363例ALL患儿随访观察2年,结果表明:鞘注MTX、Ara-C、Dx加静滴HD-MTX可明显降低CNSL的发生率,对提高ALL患儿的持续完全缓解率(CCR)有着十分重要的意义;而且副作用少、安全可靠,适用于基层医疗单位开展。     

阿糖胞苷作用下白血病细胞膜人核苷转运体1基因表达变化研究

目的检测肿瘤细胞膜上人平衡型核苷转运体1(human equilibrative nucleoside trans-porter 1,hENT1)基因表达及其变化,探索影响阿糖胞苷(Ara-C)治疗急性白血病(AL)疗效的相关因素。方法根据目前临床采用的低剂量、中剂量和大剂量Ara-C(HD-AraC)治疗时所能达到的血浆药物浓度,分别采用0.5～100μmol/L中的6种不同剂量(0.5、1.0、5.0、15、50、100μmol/L)体外作用于白血病细胞株Jurkat和NB4,经4～48 h的5个时间段(4、8、12、24、48 h)作用后,采用定量RT-PCR方法测定hENT1 mRNA表达及其变化。结果 (1)Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA原始相对表达量(ΔCt值)分别为5.21±0.02和5.34±0.05,两者差异无显著性(P0.05)。(2)在较低剂量Ara-C(0.5～15μmol/L)作用下,hENT1 mRNA表达恒定,与阴性对照组差异无显著性(P0.05);但在高浓度Ara-C(50μmol/L和100μmol/L)作用48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1 mRNA表达明显增强,ΔCt分别为2.02±0.17和2.19±0.02,与对照组(5.21±0.02)比较差异均有显著性(P0.05)。(3)同一种细胞在50μmol/L和100μmol/L两个剂量组的hENT1mRNA表达增高程度,差异无显著性(P0.05);分别来源于ALL和AML的Jurkat和NB4细胞的表达量间差异亦无显著性(P0.05)。结论 HD-AraC处理48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA表达可明显提高,有利于药物进入细胞,以增强抗白血病效应,推测临床HD-AraC疗法采用48～72 h的疗程是必要的。     

急性单核细胞白血病细胞系THP-1侧群细胞的分选、鉴定与富集

目的 探讨人急性单核细胞白血病细胞系THP-1中是否存在侧群(SP)细胞,鉴定其是否具有白血病干细胞(LSCs)的生物学特性,并研究从THP-1细胞系中富集SP细胞的方法.方法 THP-1细胞用Hoechst33342荧光染料染色后,分别应用荧光显微镜和流式细胞术(FCM)检测是否存在SP细胞及SP细胞的形态和比例.分选SP和非侧群(NSP)细胞,FCM检测其表面抗原表达及细胞周期;实时荧光定量PCR检测耐药基因ABCG2、ABCB1和凋亡基因Bcl-2、Bax在两亚群细胞中的表达差异.将THP-1细胞用不同水平阿糖胞苷(Ara-C)处理24h,染色后检测SP细胞比例的变化.结果 1.荧光显微镜观察到在THP-1细胞中存在拒染的SP细胞,形态与NSP细胞无明显区别.FCM检测结果显示,试验管SP细胞比例为(1.81±0.99)％,对照管可被维拉帕米完全拮抗.2.FCM分选SP细胞的纯度达到(96.71±0.90)％;SP细胞大部分处于静止期,Go/G1期细胞比例达(84.04 ±4.98)％,而NSP细胞则处于增殖期,S/G2/M期细胞比例为(56.38±1.48)％;CD34+、CD34+ CD38-细胞在SP亚群中的比例要高于NSP亚群(P ＜0.05);SP细胞ABCG2及ABCB1表达水平显著高于NSP细胞(P均＜0.05).SP细胞Bcl-2表达水平(0.99±0.08)显著高于NSP细胞(0.29±0.13)(P＜0.05),而Bax表达值(0.68±0.05)与NSP细胞(0.85±0.09)表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),但Bcl-2/Bax比值显著高于NSP细胞亚群(P＜0.05).3.经与Ara-C共培养24h后,SP细胞的比例显著提高,且随着Ara-C水平增大,SP细胞比例也越高.结论 人急性单核细胞白血病细胞系THP-1中存在少量SP细胞,较之NSP细胞更具有干细胞的生物学活性.与一定水平Ara-C共培养可有效富集THP-1细胞系中的SP细胞,可作为LSCs研究的切入点,对进一步研究白血病有重要意义.     

急性白血病、恶性淋巴瘤患儿大剂量阿糖胞苷治疗的药代动力学及代谢关键酶基因表达研究

目的 探索大剂量阿糖胞苷(HD-AraC)治疗儿童恶性血液肿瘤的药代动力学,以及代谢关键酶基因表达与临床疗效的关系.方法 应用高效液相色谱法测定HD-AraC治疗时血液和脑脊液中药物浓度;采用RT-PCR法检测3种白血病细胞株和48例急性白血病(AL)患儿骨髓细胞中脱氧胞苷激酶(dCK)和胞苷脱氨酶(CDA)基因表达,通过分析不同类型AL患儿,以及初治和复发患儿dCK和CDA mRNA表达差异,探讨dCK和CDA mRNA表达与疗效的关系.结果 ①HD-AraC治疗时血浆药物浓度可达到常规剂量Ara-C的50倍,脑脊液中药物浓度达到血浆浓度的10%;②不同类型儿童AL,以及初治和复发患儿的dCK mRNA表达强度差异有统计学意义,与临床疗效明显相关;③体外实验发现经Ara-C不同剂量和时间作用后,白血病细胞株的dCK和CDA mRNA表达没有变化.结论 HD-AraC治疗可明显提高血浆和脑脊液中药物浓度,是治疗儿童AL的有效疗法.dCKmRNA表达强弱可能为儿童AL远期疗效的重要影响因素之一.     

PRDX6与阿糖胞苷联合作用于HL-60细胞的体外实验研究

目的研究过氧化氧化还原蛋白6(PRDX6)与阿糖胞苷(Ara-C)联合作用对HL-60细胞抑制率的影响,并进一步分析产生该影响的可能机制。方法以不同浓度Ara-C作用于HL-60细胞后,显微镜下观察细胞形态改变;与不同药物作用后,以MTT法检测各组细胞的生长抑制率,RT-PCR技术检测各组细胞PRDX 1～6 mRNA的表达。结果不同浓度Ara-C作用后各组细胞均发生明显的形态学变化,且随着Ara-C浓度的增加,HL-60细胞数目明显减少,细胞形态学变化愈加明显;与对照组比较,单用PRDX 6对HL-60细胞的抑制率为(2.6±0.005)%,差异无显著性(P>0.05),单用Ara-C及联合用药组对HL-60细胞的抑制率分别为(29.8±0.289)%、(33.7±0.222)%,差异有显著性(P<0.05);与单用Ara-C组比较,联合用药组对HL-60细胞的抑制率差异有显著性(P<0.05);与对照组比较,单用PRDX 6组PRDX 1～6 mRNA的表达量差异无显著性(P>0.05);与单用Ara-C组比较,联合用药组PRDX 1～2 mRNA、PRDX 4～5 mRNA表达量明显减少,差异有显著性(P<0.05);PRDX 3 mRNA与PRDX 6 mRNA在各组间的表达均无明显变化,差异无显著性(P>0.05)。结论 Ara-C对HL-60细胞的生长抑制作用具有浓度依赖性,联合应用PRDX 6可提高Ara-C对HL-60细胞的抑制率,其原因可能与PRDX 1～2 mRNA、PRDX4～5 mRNA表达量减少有关。     

急性白血病患儿脱氧胞苷激酶和胞苷脱氨酶基因表达

目的通过测定急性白血病(AL)患儿脱氧胞苷激酶(DCK)和胞苷脱氨酶(CDA)基因的表达,探讨其与阿糖胞苷(Ara-C)耐药及临床疗效间的关系。方法应用RT-PCR方法检测32例AL患儿DCK和CDA基因mRNA表达水平,采用ANO VA比较初治与复发及不同亚型白血病患儿间DCK和CDA基因表达的差异。结果ALL患儿DCK表达水平(1.914±0.127)明显高于AML患儿(0.838±0.093 P=0),初治患儿DCK基因表达水平(1.474±0.547)为复发患儿(0.778±0.059)的2倍。AL患儿CDA基因表达水平为0.518±0.107,初治与复发以及各亚型间无显著性差异(P>0.05)。初治患儿CDA/DCK比值(0.422±0.049)明显低于复发患者(0.640±0.031 P=0.001),经DA或HA方案治疗1、2疗程缓解的AML患儿CDA/DCK比值低于未缓解患儿(0.561±0.053vs0.728±0.066 P=0)。结论DCK基因表达水平、CDA/DCK比值可作为监测AL儿童对Ara-C治疗反应一个指标。     

rhG-CSF在小儿ANLL强烈化疗中的应用

为探讨rhG-CSF对小儿ANLL强烈化疗后粒细胞缺乏的疗效，采用AAE方案（ADM、Ara-C、VP(16)或VM(26)），化疗后当WBC＜1×109/L或ANC＜0．5×109/L时，给予rhG-CSF200μg/m2·d（5～10μg/kg·d），皮下注射，一般连续5～10天。本文15例ANLL，用rhG-CSF30例次。用rhG-CSF前，WBC平均0．78×109/L、ANC0．15×109/L。用rhG-CSF后，平均6．5天WBC升至＞3×109/L、ANC升至＞1×109/L。粒细胞恢复时间与对照组相比明显缩短（P＜0．01）。骨髓复查未见原始细胞增多或复发。rhG-CSF有促进强烈化疗所致骨髓抑制和粒细胞缺乏的恢复，但未见骨髓原始细胞增多和白血病复发。     

阿糖胞苷及蟾蜍灵对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的研究

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)及蟾蜍灵对人白血病细胞株HL-60的作用及影响机制,验证两种药物治疗血液肿瘤的优越性。方法在体外设定的浓度梯度和作用时间下应用Ara-C及蟾蜍灵,采用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,以流式细胞术分析细胞凋亡,以噻唑蓝抑制实验(MTT比色法)观察上述两种物质对细胞的抑制作用。结果(1)蟾蜍灵明显抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为0.03μmol/L,随蟾蜍灵浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(2)Ara-C抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为2.4μmol/L,随浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(3)蟾蜍灵联合Ara-C则抗增殖作用增强80%以上,凋亡率比单用Ara-C增加近30%。结论Ara-C对细胞的诱导凋亡作用主要作用于sub-G1期,在蟾蜍灵联合作用下其作用增强,可为临床治疗应用提供理论参考。     

儿童急性白血病预后影响因素

儿童急性白血病的基本治疗策略为按照预后的差别选择不同强度的治疗.儿童急性白血病主要的预后因素为初诊年龄、白细胞计数、白血病细胞的MIC类型、早期治疗反应,其中细胞遗传学和分子遗传学类型及早期治疗后微小残留病水平已成为更重要的预后因素.