miR-130b在食管鳞癌中的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的:检测微小RNA-130b(miR-130b)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达并探讨其对ESCC细胞增殖、迁移的影响.方法:microRNA(miRNA)芯片筛选ESCC组织中异常表达的miRNAs,TaqMan MGB探针法定量PCR检测19例ESCC组织及配对癌旁组织标本中miR-130b的表达;通过脂质体转染模拟物miR-130b mimics(miR-130bm)促进ESCC细胞Eca109中miR-130b的表达,转染抑制物miR-130b inhibitor(miR-130bi)抑制Eca109细胞中miR-130b的表达;进一步采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测ESCC细胞增殖、迁移的变化;生物学信息预测miR-130b的靶基因,双荧光素酶报告基因验证其靶向作用;采用SYBR Green定量PCR和Western blot检测靶基因mRNA和蛋白表达.结果:miR-130b在ESCC组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01);转染miR-130bm可有效增加ESCC细胞Eca109中miR-130b的表达,进而促进Eca109细胞的增殖和迁移,平均迁移细胞数明显多于对照(112.9±2.4vs54.3±1.8,P<0.01);转染miR-130bi则降低细胞中miR-130b的表达;进而抑制细胞的增殖和迁移,平均迁移细胞数较对照明显减少(33.9±2.3vs56.2±1.9,P<0.01).miR-130b可作用于PTEN3’非翻译区抑制其表达.miR-130b可负向调控PTEN蛋白表达,并促进Akt磷酸化,但对PTENmRNA表达无明显影响.结论:miR-130b在ESCC组织中表达上调,增加其表达促进ESCC细胞Eca109增殖和迁移,降低其表达则抑制Eca109细胞增殖和迁移;miR-130b可在转录后水平负向调控PTEN的表达并促进Akt磷酸化.提示miR-130b有望成为ESCC治疗的新靶点.     

槲皮素对食管癌Eca109细胞迁移侵袭及血管生成的影响

目的研究槲皮素(Que)对人食管癌Eca109细胞迁移侵袭及血管生成的影响。方法分别用5μg/mL、10μg/mL Que处理Eca109细胞,通过平板克隆形成实验、创伤愈合实验及Transwell实验观察其克隆形成能力以及迁移和侵袭能力的改变。制备Eca109肿瘤条件培养基,诱导人脐静脉内皮细胞CRL-1730迁移及成管,观察Que对其的影响。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定Que对Eca109细胞的血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达的影响。结果 10μg/mL Que可显著抑制Eca109细胞的单细胞克隆形成能力(P0.05),而5μg/mL Que则不影响Eca109细胞的单细胞克隆形成能力(P0.05)。10μg/mL Que可抑制Eca109细胞的迁移和侵袭(P0.05),5μg/mL Que仅抑制Eca109细胞的侵袭(P0.05),但并不明显影响其迁移(P0.05)。5μg/mL、10μg/mL Que均可抑制Eca109肿瘤条件培养基诱导的CRL-1730细胞迁移和管腔形成(P均0.05),且10μg/mL Que的效果更明显。10μg/mL Que可明显降低VEGF-A、MMP2和MMP9的表达(P均0.05),5μg/mL Que仅降低MMP2的表达(P0.05)。结论 Que可以抑制Eca109细胞的迁移、侵袭及血管新生,并呈剂量依赖性。     

siRNA干扰PDCD4表达对人食管鳞状细胞癌细胞株Eca109的影响

背景:研究发现PDCD4是一种新的肿瘤抑制基因,其表达与多种肿瘤的恶性转化相关。然而,PDCD4在食管鳞状细胞癌中的作用尚未完全明确。目的:探讨沉默PDCD4表达对食管鳞状细胞癌细胞株Eca109体外增殖、迁移、凋亡能力的影响。方法:选择未转染的Eca109细胞(空白对照组)、转染无义序列的Eca109细胞(阴性对照组)和转染PDCD4 siRNA的Eca109细胞(si-PDCD4组),采用蛋白质印迹法检测PDCD4蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,平板单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,si-PDCD4组细胞中PDCD4蛋白表达降低(P0.05),细胞增殖能力增强(P0.05),细胞克隆形成数目增多(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),细胞迁移能力增强(P0.05)。结论:PDCD4 siRNA可在体外促进食管鳞状细胞癌Eca109细胞的增殖、迁移,并抑制细胞凋亡,为食管鳞状细胞癌的诊治提供了新的实验依据。     

miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为miR-34b转染组、阴性对照组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测老年鼻咽癌及对照组组织中miR-34b表达以及不同转染组细胞中miR-34b表达,MTT比色法检测不同转染组细胞增殖能力,检测细胞黏附能力,Transwell法检测不同转染组细胞侵袭能力。结果老年鼻咽癌组织中miR-34b相对表达量为(0.64±0.09),显著低于对照组的(0.94±0.12),差异有统计学意义(t=14.410,P<0.001);miR-34b在老年鼻咽癌组织中相对表达量与临床分期、T分期、N分期和淋巴结转移有关(P<0.001);miR-34b转染组细胞中miR-34b相对表达量为(0.85±0.10),显著高于阴性对照组和空白对照组,分别为(0.52±0.08)和(0.50±0.07),差异有统计学意义(F=243.329,P<0.001);与阴性对照组和空白对照组相比,miR-34b转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.05);miR-34b转染组黏附细胞数显著高于阴性对照组和空白对照组,而侵袭细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.001)。结论 miR-34b在老年鼻咽癌组织中呈低表达,上调miR-34b表达可减少细胞增殖,增加细胞黏附能力,抑制细胞侵袭能力,有望成为提高鼻咽癌对放射治疗敏感性的目的基因。     

miR-1180在胃癌中的表达及其对胃癌增殖、凋亡的影响

目的研究miR-1180在胃腺癌组织及胃癌细胞系中的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,探讨miR-1180在胃癌中可能的作用机制。方法应用qRT-PCR检测58例胃腺癌及20例癌旁正常组织中miR-1180的表达,分析其表达与胃腺癌临床病理特征的关系。检测miR-1180在胃癌细胞系中的表达,慢病毒干扰技术下调SGC-7901中miR-1180的表达,检测下调后对SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果与癌旁正常组织比较,58例胃腺癌组织中miR-1180的表达明显增加(t=16.463,P=0.000),miR-1180的表达与患者的肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移有关(P均<0.05)。miR-1180在胃癌细胞系中表达升高(P=0.000),下调SGC-7901中miR-1180的表达,可见细胞增殖减少(3113±74 vs 1673±51,P=0.000),凋亡增加(4.313±0.220 vs 7.717±0.125,P=0.000);细胞周期G 1期细胞明显增加(45.89±0.33 vs 60.44±0.390,P=0.000),S期细胞明显减少(35.523±0.354 vs 21.953±0.444,P=0.000),G 2期细胞变化不大(18.587±0.672 vs 17.603±0.731,P=0.162)。结论miR-1180的表达促进胃癌的进展,胃癌中miR-1180的高表达与预后不良有关。     

食管鳞癌组织中PLK1表达变化及其对食管癌细胞侵袭迁移的影响

目的观察食管鳞癌组织中Polo样激酶1(PLK1)的表达变化,及其对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法采用免疫组化SP法检测80例食管鳞癌及癌旁组织中的PLK1,分析其与食管鳞癌临床病理参数及患者生存期的关系。将对数生长期的人食管癌EC9706细胞分为两组,观察组转染PLK1 siRNA,对照组转染ScrambledsiRNA;用Transwell小室观察两组食管癌细胞侵袭及迁移能力,Western blot法检测两组食管癌细胞中的PLK1、MMP-2、MMP-9。结果食管鳞癌组织中PLK1阳性表达53例(66.3%),癌旁组织中PLK1阳性表达27例(33.7%);两者比较,P<0.05。PLK1表达与食管鳞癌淋巴结转移及临床分期有关(P均<0.05)。PLK1阴性者5年生存率为62%,高于PLK1阳性者的39%(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,临床分期、淋巴结转移、病理分级、PLK1表达均为食管癌预后的独立危险因素。观察组EC9706侵袭迁移个数分别为(120±6)、(269±8)个/HP,对照组分别为(468±11)、(780±12)个/HP;两组比较,P均<0.05。观察组EC9706中PLK1、MMP-2、MMP-9灰度比值分别为0.1±0.03、0.40±0.02、0.87±0.05,对照组分别为0.96±0.05、0.98±0.07、0.89±0.06;两组PLK1、MMP-2灰度比值比较,P均<0.05。结论食管鳞癌组织中PLK1表达增加,其在食管鳞癌的发生发展中起重要作用;敲降PLK1表达可降低食管癌细胞的侵袭迁移能力,该作用与MMP-2的表达下调有关。     

Smad4、MMP-2在食管鳞癌中的表达及其与侵袭转移的关系

目的 旨在探讨Smad4与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在食管癌中的表达及其与侵袭转移的关系.方法 采用SP免疫组化法分别检测80例食管癌组织中Smad4和MMP-2的表达,分析其与肿瘤侵袭、淋巴结转移的关系,同时分析食管鳞癌中Smad4与MMP-2的相关性.结果 Smad4在食管癌组织中的表达显著低于癌旁正常食管组织(P＜0.01),MMP-2在食管癌组织中的表达显著高于癌旁正常食管组织(P＜0.01);食管癌组织中Smad4的表达缺失及MMP-2蛋白高表达均与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及临床分期密切相关(P＜0.05),Smad4和MMP-2在食管癌组织中表达呈负相关(P＜0.05).结论 Smad4蛋白表达缺失和MMP-2蛋白过表达在食管癌的发展及侵袭转移中具有重要作用,Smad4蛋白和MMP-2蛋白在食管癌的发生发展过程中具有协同作用,联合检测食管癌中Smad4蛋白和MMP-2蛋白的表达,比单一检测一种蛋白对评估食管癌的发生、发展及预后更具有意义,也为临床治疗食管癌提供了一条新的思路.     

谷丙转氨酶2在食管鳞癌组织中表达变化及对癌细胞增殖迁移侵袭能力影响

目的 观察谷丙转氨酶2(GPT2)在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达变化,分析GPT2与患者临床病理特征、预后的关系以及对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以探讨其与ESCC进展的关系。方法 选取80例ESCC患者癌组织及癌旁正常组织,将其中3例份样本通过转录组测序筛选出差异表达基因GPT2,并在TCGA数据库中进行验证。采用Western blotting及免疫组化法检测ESCC组织中GPT2蛋白,分析癌组织中GPT2表达与患者临床病理特征的关系。采用多因素Cox比例风险分析影响ESCC患者生存的风险因素,Kaplan-Meier法对GPT2高、低表达的ESCC患者进行生存分析。构建p IRES2/GPT2(GPT2过表达)质粒,然后将空载质粒（p IRES2）及p IRES2/GPT2转染至人食管鳞癌细胞系KYSE150、KYSE30（转染的细胞分别命名为p IRES2、p IRES2/GPT2组）,培养48 h后,采用CCK-8及Transwell实验观察ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 转录组测序结果及基于TCGA数据库数据分析结果显示,与癌旁正常组织相比,ESC...     

miR-138在肝细胞癌中的表达及其对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力的影响

目的 观察miR-138在肝细胞癌(HCC)组织、细胞中的表达变化,并探讨miR-138对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用qRT-PCR检测HCC组织及癌旁组织、MHCC97H、MHCC97L、HepG2及正常肝细胞系L02细胞中的miR-138.转染miR-138 mimic...     

miR-503在结直肠癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨microRNA-503(miR-503)在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测54例结直肠癌组织及4种结直肠癌细胞(SW480、Lovo、LS174T和HT-29)中的miR-503水平,分析结直肠癌组织miR-503表达与常见临床病理参数的关系,采用脂质体转染miR-503模拟物(mimics)至miR-503水平最低的细胞,采用MTT法、流式细胞仪及Transwell法检测过表达miR-503对细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭的影响。结果 54例结直肠癌组织的miR-503相对表达量为(0.257±0.011),低于癌旁组织(P0.05),且miR-503水平与TNM分期、分化情况、肿瘤大小和术前癌胚抗原均有关(P0.05);与人正常结肠细胞系CCD-18Co相比,4种不同恶性程度结直肠癌细胞SW480、Lovo、LS174T和HT-29的miR-503相对表达量依次为(0.342±0.072)、(0.161±0.054)、(0.260±0.041)和(0.415±0.086),差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,转染miR-503 mimics后的细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例均降低,穿膜细胞数减少(P0.05)。结论 miR-503在结直肠癌组织和细胞中低表达,且与结直肠癌的临床病理参数有关,上调miR-503水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

PCNA在食管鳞癌中的表达及其意义

我们应用免疫组织化学方法研究增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在食管鳞癌中的表达．探讨ＰＣＮＡ表达与病理分级,临床分期及淋巴结转移的关系．１材料和方法１．１材料我院１９９０／１９９６间经手术切除病理证实的食管鳞癌病理标本８０例．男４８例,女３２例,平均年龄５...     

c-IAP1在食管鳞癌中的表达及其对化疗敏感性的影响

目的:探讨食管鳞癌细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)表达与化疗敏感性的相关性.方法:食管鳞癌组织芯片免疫组织化学染色,分析食管鳞癌组织及其配对癌旁食管上皮中c-IAP1的表达和定位及其与肿瘤,临床分级的关系.免疫印迹分析食管癌细胞C-IAP1和Smac表达,用RNA干扰技术敲降Smac表达,MTT法检测细胞对化疗药物敏...     

SBF2-AS1在食管鳞癌中的表达变化及其对肿瘤细胞KYSE410增殖、放疗敏感性的影响

目的 观察长链非编码RNA SBF2-AS1在食管鳞癌中的表达变化及其对食管鳞癌细胞增殖、放疗敏感性的影响,并探索可能的机制.方法 采用qRT-PCR法检测食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞KYSE410中的SBF2-AS1,分析食管鳞癌组织中SBF2-AS1表达与肿瘤临床病理参数的关系.培养KYSE410细胞并分为siRNA...     

miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染EC9706细胞为miR-451组,同时设立无关序列(Scramble-miR)对照组、脂质体对照组和空白对照组.转染后48h,荧光定量RT-PCR检测miR-451表达量的变化,Westernblot检测Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;MTT法检测转染后l、2、3、4、5、6d各组细胞增殖率.结果:miR-451组的miR-451表达水平显著上调(P<0.01,F=69.26),为空白对照组的15.84倍;miR-451组细胞Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05,F=5.83);miR-451组细胞凋亡率为12.07%±1.12%,与3个对照组比较显著升高(P<0.01,F=26.72);miR-451组平均侵袭细胞数为47.4±7.4,与3个对照组比较显著降低(P<0.01,F=34.55).miR-451组细胞的生长在转染后2d出现显著抑制(P<0.05,F=5.95),并且随时间的延长而日益显著.结论:上调miR-451表达可抑制食管癌EC9706细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡.     

PAX-5在Barrett食管、食管腺癌中的表达及其对食管腺癌细胞侵袭和转移的影响

目的检测配对盒基因-5(paired box,PAX-5)在Barrett食管、食管腺癌组织和食管腺癌细胞系中的相对表达,及其对食管腺癌细胞转移的作用和机制。方法以食管腺癌细胞、正常食管组织、Barrett食管和食管腺癌组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PAX-5 mRNA在食管腺癌细胞系中表达;qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证PAX-5 mRNA和蛋白在组织中的相对表达。采用表达最低的OE33为研究对象,分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-PAX-5质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至OE33细胞系,利用Transwell迁移和侵袭实验检测PAX-5的迁移和侵袭的影响,并用qRT-PCR和免疫蛋白印迹验证PAX-5基因迁移和侵袭的分子机制。结果食管腺癌中PAX-5 mRNA和蛋白的表达显著低于Barrett食管和正常食管组织(P0.001),PAX-5 mRNA在食管腺癌细胞系中表达下调(P0.001);Transwell实验研究显示:与对照组相比,实验组迁移和侵袭能力明显受到抑制;过表达PAX-5抑制上皮-间质转化(EMT)相关基因的表达(P0.001)。结论 PAX-5在食管腺癌中表达下调,可能作为潜在的抑癌基因参与食管腺癌的进程。     

环状RNA Circ-RANBP1在胰腺癌组织中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

背景:大量研究表明,环状RNA(circRNA)异常表达与多种肿瘤的发生、发展、预后等密切相关,是理想的诊断指标和治疗靶点。但circRNA在胰腺癌发生、发展中的作用尚需进一步探究。目的:探讨circ-RANBP1在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:以原位杂交法检测circ-RANBP1在胰腺癌组织和相应癌旁正常组织中的表达。常规培养MIA Pa Ca-2细胞和SW 1990细胞,分别转染circ-RANBP1敲低寡聚物和过表达质粒,并设立相应对照组。qRT-PCR法检测circ-RANBP1在胰腺癌细胞中的表达。Ed U实验检测circRANBP1对细胞增殖能力的影响。Transwell实验检测circ-RANBP1对细胞迁移、侵袭能力的影响。蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测circ-RANBP1对细胞上皮-间质转化(EMT)进程的影响。血管形成实验评估circ-RANBP1表达对血管形成能力的影响。结果:Circ-RANBP1在胰腺癌组织中表达增高,且与患者的不良预后密切相关。CircRANBP1下调能抑制MIA Pa Ca-2细胞增殖,而circ-RANBP1过表达可促进SW 1990细胞增殖。与对照组相比,敲低circ-RANBP1能抑制MIA Pa Ca-2细胞迁移和侵袭,而过表达circ-RANBP1可促进SW 1990细胞迁移和侵袭。敲低circ-RANBP1可抑制EMT,过表达circ-RANBP1可促进EMT。抑制circ-RANBP1表达可明显降低血管形成能力,过表达则可明显促进血管形成。结论:Circ-RANBP1在胰腺癌组织中高表达,并可促进胰腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT和血管形成。     

PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca 109中的功能

目的:探讨PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca109中的作用.方法:用脂质体介导siRNA瞬时转染Ecal09细胞,转染细胞分为3组:空白对照组(正常培养的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列的siRNA)及实验组(转染PIK3CA-siRNA).运用Western blot技术检测PIK3CA基因干扰后蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和细胞划痕实验检测PIK3CA干扰后Eca109细胞增殖和迁移能力的改变;流式细胞仪检测PIK3CA干扰后细胞周期和凋亡率的变化.结果:干扰PIK3CA基因表达后,其蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组显著性降低(P0.05).MTT实验和划痕实验显示干扰PIK3CA的表达后,Eca109细胞增殖受到显著性抑制(P0.05),迁移能力显著性降低(P0.05).流式细胞仪检测下调P I K3C A的表达后细胞周期阻滞在细胞分裂的S期(P0.05),且使细胞凋亡率显著性增加(P0.05).结论:PIK3CA基因能够促进Eca109细胞的增殖和迁移能力,并具有抗凋亡作用.PIK3CA基因有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点.     

miR-143在食管鳞癌和上皮内瘤变组织中的表达及其临床意义

背景:研究发现microRNA在肿瘤的发生、发展过程中起癌基因或抑癌基因的作用。然而,microRNA-143(miR-143)在食管鳞癌中的作用需进一步研究。目的:探讨食管鳞癌组织中miR-143表达及其临床意义。方法:选取2013年1月—2013年12月南京医科大学第一附属医院63例食管鳞癌及其癌旁正常组织以及40例食管上皮内瘤变及其相应正常组织,应用实时定量PCR法检测miR-143表达,并分析其与临床病理特征的相关性。结果:与对照组相比,食管鳞癌和上皮内瘤变组织中miR-143表达均明显下调(P0.05)。miR-143表达与患者的病理类型有关(P0.001),而与性别和年龄无关(P0.05)。miR-143表达与食管鳞癌患者病理分级、淋巴结转移、TNM分期有关(P0.05),与肿瘤浸润深度无关(P0.05)。结论:miR-143在食管鳞癌、食管上皮内瘤变组织中的表达均下调,可能与食管鳞癌发生、发展密切相关,有望成为诊断食管鳞癌的新靶点。