母婴分离联合束缚应激幼鼠IBS-D模型的建立及评价

[目的]采用母婴分离联合束缚应激法建立腹泻型肠易激综合征大鼠模型,并对其进行初步评价。[方法]刚出生1d的SD幼鼠随机分为4组:对照组(NH),母婴分离组(NMS),束缚应激组(RS),母婴分离联合束缚应激组(NMS+RS)。造模结束后,分别观察其体重变化、排便情况及腹壁回撤反射(AWR)。[结果]模型组大鼠体重均较NH组低(P0.01),且二因素组(NMS+RS组)较单因素组(NMS组,RS组)更低,差异均有统计学意义(P0.05)。大鼠粪便Bristol分级评分及粪便含水量,模型组均较NH组高,结果有统计学意义(P0.05);二因素组较单因素组高,差异有统计学意义(P0.01)。在10mmHg及20mmHg时,4组之间腹壁回撤反射(AWR)评分结果近似,差异无统计学意义(P0.05);40~80mmHg时,NMS组,NMS+RS组AWR评分均较NH组高,差异有统计学意义(P0.05);60mmHg及80mmHg时,NMS+RS组AWR评分较RS组高,二者结果差异有统计学意义(P0.05)。[结论]母婴分离法、束缚应激法均能在一定程度上模拟腹泻型肠易激综合征的临床症状及(或)内脏高敏感性,采用二者相结合(母婴分离联合束缚应激)的方法建立的大鼠模型与任何单一方法比较,更加符合腹泻型肠易激综合征的症状及内脏高敏感性的特征。     

高盐促大鼠血管平滑肌细胞增殖的时效量效关系及相关机制

目的比较不同Na~+浓度及其作用时间促大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的差异,探讨高盐诱导VSMC增殖的可能机制。方法组织贴壁法培养原代VSMC,传至第四代去血清同步化1d,分别用139、141、144、147、150、153、156、159、162和165mmol/L的Na~+干预1、2、3和4d后,MTT比色法和细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测VSMC增殖情况。选取促增殖最显著的盐浓度和作用时间,以Na~+139mmol/L为对照进行后续实验。CCK-8法检测渗透压对VSMC增殖的影响;流式细胞仪分析VSMC增殖周期;免疫荧光染色和Western blot检测VSMC增殖细胞核抗原(PCNA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_1R)的表达情况;实时荧光定量PCR检测VSMC中血管紧张素原(AGT)、AT_1R mRNA的表达。结果MTT和CCK-8结果显示,Na~+153~165mmol/L作用2、3d可促进VSMC增殖(Na~+159mmol/L作用3d最明显);CCK-8检测渗透压对VSMC增殖结果显示,与Na~+139mmol/L组比较,Na~+159mmol/L细胞明显增殖[(1.21±0.16)%比(1.00±0.25)%,P0.05],而甘露醇组与Na~+139 mmol/L组比较差异无统计学意义;流式细胞仪分析VSMC增殖周期结果显示,Na~+159mmol/L组G_0/G_1期细胞比例降低,S期细胞比例增多(均P0.05);PCNA免疫荧光染色可见Na~+159mmol/L组VSMC中PCNA阳性细胞核增加,Western blot结果显示Na~+159mmol/L组PCNA蛋白表达明显增加(均P0.05);实时荧光定量PCR显示,与Na~+139mmol/L组相比,Na~+159mmol/L组中AGT、AT_1R mRNA表达增加(均P0.05);Western blot显示,与Na~+139 mmol/L组相比,Na~+159 mmol/L组中AngⅡ、AT_1R蛋白表达增多(均P0.05)。结论高Na~+(153~165 mmol/L)作用2~3d能诱导VSMC增殖,且Na~+159mmol/L作用3d增殖效应最为显著;作用机制可能与高Na~+促进AngⅡ和AT_1R表达有关。     

慢性束缚应激对健康大鼠血糖及血脂的影响

目的 观察慢性束缚应激模型大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇及血糖的变化规律.方法 健康雄性Wistar大鼠120只,随机分为束缚应激组及对照组,各60只,两组分别于1周、2周、4周、6周、8周时检测血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、葡萄糖水平.结果 束缚应激组1周时,大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白.胆固醇、血糖水平与对照组相比均显著升高(P<0.05).束缚应激组大鼠除血糖与对照组相比表现为持续升高趋势外,甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白一胆固醇水平在慢性束缚应激第4周后均出现下降趋势,甚至低于对照组(P>0.05).结论 慢性束缚应激所引起的血清脂质水平改变呈各自不同的变化趋势,不同于急性应激.     

阿托伐他汀对大鼠胰岛功能影响的量效和时效关系

目的 观察阿托伐他汀对Wistar大鼠胰岛功能及糖耐量的影响,研究其效应与剂量、时间的相关性.方法 将60只8周龄正常Wistar大鼠采用随机数字表法分为正常对照组(生理盐水2 ml/d,n=10)、低剂量阿托伐他汀组(阿托伐他汀5 mg· kg-1·d-1,n=1O)、中剂量阿托伐他汀组(阿托伐他汀25 mg·kg-1·d-1,n=10)和高剂量阿托伐他汀组(阿托伐他汀50 mg·kg-1·d-1,n=30).于干预第0、4、8周分别行口服葡萄糖耐量试验(OGTr),测定血糖、血清胰岛素,计算稳态模型评估-β细胞功能指数(HOMA-β)、第一时相胰岛素分泌指数(△I30/△G30)、稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素曲线下面积(AUCi)、葡萄糖曲线下面积(AUCg)和处置指数.然后将高剂量阿托伐他汀组部分大鼠采用随机数字表法分为两组,继续给药组仍给予高剂量阿托伐他汀灌胃,洗脱组改为生理盐水灌胃,4周后再次行OGTT检测.并取血行甘油三酯、总胆固醇检测.结果 干预8周后高剂量阿托伐他汀组OGTT 0、15、30、60、120 min的胰岛素水平及HOMA-β、△I30/△G30、AUCi、AUCg、HOMA-IR均低于正常对照组(F=4.168 ～ 306.493,P均＜0.05);干预4周时各组及干预8周时中、低剂量阿托伐他汀组均未见相似效应(P均＞0.05).经4周药物洗脱期后,洗脱组的OGTT0、15、30、60、120 min胰岛素水平(F=4.64 ～ 15.58,P均＜0.05)及上述指标均高于继续给药组(t=29.044、4.433、4.429、2.964,P均＜0.05).但各剂量阿托伐他汀组间血糖和处置指数均未见明显影响(P均＞0.05).HOMA-β、△I30/△G30、AUCi随阿托伐他汀剂量的增加和时间的延长,均逐渐降低,具有剂量及时间依赖关系(F=213.970、63.839、18.222,P均＜0.01).HOMA-IR、AUCg随阿托伐他汀剂量的增加逐渐降低,随着时间的延长逐渐升高,也呈剂量及时间依赖关系(F=214.437,P ＜O.01;F=9.33,P ＜O.05).结论 阿托伐他汀可抑制大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌,改善胰岛素敏感性,并与给药剂量和时间有关,但对血糖影响不明显.     

急性和慢性束缚应激对大鼠内脏敏感性的影响

目的了解急性和慢性求缚应激对大鼠内脏敏感性的影响和持续时间。方法成年SD大鼠随机分为3组：对照组（没有束缚应激），急性部分束缚应激组（单次2h的束缚应激）和慢性部分束缚应激组（连续束缚应激3天，每天2h），通过腹壁回撤反应（AWR）评分评估应激前后不同时间点大鼠对结直肠扩张（CRD）的内脏敏感性。结果①在扩张压力20mmHg和40mmHg时，急慢性束缚应激组的AWR评分均显著高于应激前基础水平（Od）（P〈0．05），但在60，80mmHg压力时各组的AWR评分均无显著差异；②急性束缚组在应激后24h和应激后第7天，AWR评分显著下降（P〈0．05）；③慢性束缚组在末次应激后24h，AWR评分仍维持增高水平，但在第7天时AWR评分回到基础水平。结论急性和慢性束缚应激郜可以导致大鼠内脏敏感性增高，但其作用可能是短暂的。     

慢性愤怒应激加速脑老化大鼠模型建立及行为学评价

目的 建立慢性愤怒应激加速脑老化的大鼠模型并进行行为学评价.方法 采用夹尾间接激怒法诱导模型大鼠产生愤怒应激,观察慢性愤怒应激对D-半乳糖脑老化大鼠脑组织形态学、空间学习记忆能力及旷场行为的影响.结果 愤怒D-gal组较D-gal脑老化组大鼠大脑皮质和海马呈现更为严重的老化病理改变、Morris水迷宫寻台时间显著延长(P＜0.05)、旷场实验水平得分和总分显著增加(P＜0.01),中央格停留时间显著延长 (P＜0.05).结论 愤怒应激可加重D-gal脑老化大鼠海马组织退行性改变,降低空间学习记忆和认知能力,该模型是相对理想的慢性愤怒应激加速脑老化模型.     

乙酸灌肠加束缚应激致大鼠肠易激综合征模型的建立及其评价

目的: 探讨腹泻型肠易激综合征(D-IBS)动物方法: ♂Wistar大鼠40只, 随机分为IBS1组、IBS2组、灌肠对照组及正常对照组, 每组10只, 采用乙酸灌肠加束缚应激和Williams方法制造IBS动物模型, 用腹壁撤退反射(AWR)评分和腹外斜肌放电活动检测对其内脏敏感性,同时行组织学检查对肠黏膜的组织学改变进结果: 两模型组大鼠AWR评分和腹外斜肌收缩次数在不同扩张容量(1.0、1.5、2.0 mL)下均较对照组明显增加( F = 6.318, 3.978, 7.810,均P<0.05;F = 6.318, 3.978, 7.810, 均P<0.05).组织学分析显示各组大鼠均无明显的炎症性表现.结论: 乙酸灌肠加束缚应激和Williams方法制成的IBS动物模型均符合IBS的内脏敏感性机制, 可用于IBS的实验研究.     

慢性束缚水浸应激对大鼠胃窦Cajal间质细胞超微结构的损伤

目的:研究不同时程慢性束缚水浸应激对大鼠胃窦Cajal间质细胞(ICC)超微结构的损伤,量化分析细胞内不同超微结构的损伤程度.方法:48只雄性SD大鼠随机分为6组,即实验3d、7 d、28 d组和对照3 d、7 d、28 d组,每组8只.实验组每日给予束缚水浸1 h,对照组自由摄食饮水;禁食12 h后分别于第4、8、29天晨脱颈处死,每组中的3只大鼠被各取胃窦组织2块放入3%戊二醛中固定并送电镜室镜检.将损伤的严重程度分成0-3级并以此标准计分并计算.结果:不同应激时间组大鼠胃窦ICC的核周间隙、基膜、内质网的损伤严重程度无明显差别.缝隙连接和线粒体的损伤积分有明显差异,胞质溶解、粗面内质网减少、核异常程度积分有极显著性差异:量化分析显示:随着应激时间的延长,超微结构受损呈现逐渐加重的趋势,主要表现在缝隙连接、线粒体、胞质和粗面内质网等方面.结论:慢性应激可以导致大鼠胃窦ICC超微结构的损伤,不同细胞超微结构的损伤随应激的延长有所差别;量化分析可以显示不同细胞器受损伤的程度.     

盾叶薯蓣杀湖北钉螺的量效与时效关系

实验研究表明，盾叶薯蓣制剂具有良好的杀螺效果，其１５ｍｇ／Ｌ剂量浸泡７２ｈ钉螺死亡率达１００％，杀螺剂量效应和时间效应关系可分别由Ｙ＝１．２２０２＋４．０６０４Ｘ和Ｙ＝３．００３＋０．０６３９Ｔ式表达，进而估算出相应ＬＤ９０为１７．６ｍｇ／Ｌ浸泡时间５１．３１ｈ以此指导现场合理施用该杀螺剂具有重要意义。     

长期慢性束缚水浸应激对大鼠胃窦Cajal间质细胞数量的影响

目的:研究不同时程低强度束缚水浸应激对大鼠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)数量的影响,探讨慢性应激导致胃动力改变与ICC的相关性.方法:雄性SPF级SD大鼠48只被随机分为6组,即实验3 d、7 d、28 d组和对照3 d、7 d、28 d组,每组8只.实验组23℃水域箱内束缚水浸1h/d,对照组自由摄食饮水.4 d、8d、29d晨序贯脱颈处死.取膜胃小弯侧(ICC-1)、腺胃小弯侧(ICC-3)、腺胃大弯侧上1/3处(ICC-5)、腺胃幽门旁0.5 cm处(ICC-7)组织各一块放入固定液中,制成石蜡切片:抗c-kit免疫组织化学染色,观察不同层次ICC计数.结果:正常大鼠胃内ICC主要分布在肌内(ICC-MY)和肌间(ICC-IM),而黏膜下(ICC-SM)和深肌丛(ICC-DMP)较少.实验3 d组的各层ICC数量与对照组相比无明显差异,实验7 d和28 d组大鼠不同部位、不同层次及同一部位不同层次ICC数量明显异于同期对照组.应激时间长短对不同部位不同层次及同一部位不同层次ICC总数有明显影响,其大致规律是先正常后增加再减少,即先升高后降低.应激主要引起ICC-MY及ICC-IM数量发生变化,而本来较少的ICC-SM和ICC-DMP受影响较轻.结论:长时间低强度的慢性束缚水浸应激可以使大鼠胃窦ICC数量发生变化.     

盾叶薯蓣杀湖北钉螺的量效与时效关系

实验研究表明,盾叶薯蓣制剂具有良好的杀螺效果,其１５ｍｇ／Ｌ剂量浸泡７２ｈ钉螺死亡率达１００％,杀螺剂量效应和时间效应关系可分别由Ｙ＝１．２２０２＋４．０６０４Ｘ和Ｙ＝３．００３＋０．０６３９Ｔ式表达,进而估算出相应ＬＤ９０为１７．６ｍｇ／Ｌ,浸泡时间为５１．３１ｈ,以此指导现场合理施用该杀螺剂具有重要意义。     

大鼠应激性心肌病模型及其复发模型的制备

目的探索应用去甲肾上腺素(norepinephrine,NA)制备大鼠应激性心肌病(stress--induced cardiomyopathy,SIC)模型的方法,并探讨应用其制备SIC复发模型的可能性。方法 65只雄性SD大鼠(300~350 g)用于本研究。首先取30只按随机数字表法随机分成5个组,分别接受NA 1、2、3、4、5 mg/kg腹腔注射用于探索最适剂量。给药90 min后采用超声心动图观察室壁运动,以出现左心室功能障碍,心尖节段(典型)或非心尖节段(非典型)室壁运动失活判定成功造模。确定NA造模最适剂量后,另取30只接受单一该剂量NA腹腔注射进行造模及1周后复发造模,5只用于正常对照。结果 NA剂量≥2 mg/kg可诱发出节段性室壁运动异常的SIC模型,且1周内可自行恢复正常;其中4 mg/kg组成功率高达66.67%,为最适剂量。30只最适剂量NA造模大鼠中,造模成功率为53.3%(典型SIC 3只,非典型SIC13只),1周后其中10只非典型SIC大鼠复发模型诱导成功率为30.0%,且转变为典型SICo结论应用NA腹腔注射可成功制备初发、复发SIC模型,制备方法简单精确,重复性好,模型符合SIC患者的临床特征,支持儿茶酚胺毒性效应为SIC的发病机制。     

不同时程慢性束缚水浸应激对大鼠胃窦Cajal间质细胞超微结构的影响

目的:研究不同时程慢性束缚水浸应激大鼠胃窦Cajal间质细胞(ICC)的超微结构改变.方法:♂ SD大鼠48只随机分为6组、即实验3、7、28 d组和对照3、7、28 d组,每组8只.实验组每日束缚水浸1 h,对照组自由摄食饮水;于实验第4、8、29天晨禁食12 h后脱颈处死.取胃窦组织2块放入3%戊二醛中固定并电镜下观察ICC超微结构.结果:所有对照组ICC的超微结构均无异常改变,试验3、7、28 d各组ICC的超微结构与同期对照组比较均有明显的损害,主要表现为ICC的缝隙连接减少、细胞器减少等,以肌内ICC(ICC-MY)和肌间ICC(ICC-IM)为主:随着应激时间的延长,ICC的超微结构受损逐渐加重.结论:慢性束缚水浸应激可以损伤大鼠胃窦ICC的超微结构.     

急性和慢性束缚应激对大鼠内脏敏感性和神经内分泌的影响

目的了解急性和慢性部分束缚应激对大鼠内脏敏感性以及神经内分泌反应的影响特点和持续时间。方法成年SD大鼠分为对照组(无束缚应激)、急性组和慢性组,通过腹壁回撤反射(AWR)评分评估应激前后大鼠内脏对结直肠扩张(CRD)的敏感性;并通过放免法检测应激前后不同时间点大鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)以及皮质酮(CORT)水平。结果①20和40 mm Hg压力扩张时,急、慢性组的AWR评分均显著高于基础水平(0 d),P<0.05;但在应激后第7天AWR评分显著下降,P<0.05。②急性组血浆ACTH和CORT水平显著高于对照组[(25.35±6.03)ng/ml比(7.24±2.97)ng/ml,(312.47±50.76)pg/ml比(97.00±23.33)pg/ml],但束缚应激7 d后,激素浓度[(11.81±5.03)ng/ml和(113.73±24.58)pg/ml]下降至基础水平。③慢性组血浆ACTH和CORT水平[(20.84±2.19)ng/ml和(200.41±78.10)pg/ml]显著高于对照组,且激素水平在束缚7 d后[(19.95±5.31)ng/ml和(162.51±47.08)pg/ml)]仍维持在高水平。结论急性和慢性束缚应激都可导致大鼠内脏敏感性增高,但作用可能是短暂的。急性束缚应激短暂显著提高血浆ACTH和CORT水平,而慢性束缚应激可能长期提高激素水平。     

慢性束缚及夹尾刺激致大鼠肠易激综合征模型的建立及其内脏敏感性评价

[目的]探讨建立肠易激综合征（IBS）动物模型的方法，并评价其内脏敏感性变化。[方法]采用慢性束缚、夹尾刺激作为应激原诱导IBS大鼠模型，检测其肠道运动（结肠排便时间、排便颗粒）和感觉（腹壁收缩反射、腹壁肌电活动），并以逍遥散及匹维溴胺进行药物反证。[结果]与正常对照（对照）组比较，慢性束缚、夹尾刺激诱导IBS大鼠结肠转运效应明显增高（P〈0．01），在1．0、1．5、2．0ml不同扩张容量下腹壁收缩反射评分及腹壁肌电活动明显增高（P〈0．05，〈0．01）。而经药物治疗后，可明显降低大鼠结肠转运功能及内脏高敏感性（P〈0．05，〈0．01）。[结论]慢性束缚、夹尾刺激可以引起大鼠肠道运动增强，内脏敏感性增高，而肠黏膜未见异常病理改变，符合IBS的基本特征，可用于实验研究。     

束缚加悬吊应激模型大鼠不同脑区组织单胺类神经递质的变化

目的研究束缚加悬吊应激对大鼠不同脑区组织单胺类神经递质的影响。方法束缚加悬吊应激6h后,荧光法测定不同脑区单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量。结果与正常组比较,小脑、间脑5-HT、5-HIAA含量明显下降(均P<0.01)),间脑NE含量明显升高(P<0.01);而大脑、脑干NE、DA、5-HT、5-HIAA无明显变化。结论不同脑区对束缚加悬吊应激的反应性不同,间脑5-HT的下降可能与抑郁症有关。     

负性情绪应激大鼠模型的建立与评价

目的建立并评价负性情绪应激大鼠模型。方法采用改进的不可预知性心理应激诱导方法建立负性情绪应激模型,观察负性情绪应激对大鼠旷场行为活动、糖水消耗量、24 h摄食量的影响,采用ELISA法检测血浆单胺类神经递质水平。结果应激组较空白对照组大鼠的旷场实验水平得分、垂直得分及总得分下降,中央格停留时间增加;糖水消耗量减少,24 h摄食量减少(P0.05),血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)、去甲肾上腺素(NE)水平升高、5-羟色胺(HT)水平下降(P0.05)。结论负性情绪应激大鼠模型较好地模拟了人群遭遇多种应激事件产生的负性情绪状态,造模方法成熟可靠。     

Wistar大鼠慢性心力衰竭模型的制备及指标判定

目的使用阿霉素(ADR)制备Wistar大鼠慢性心衰模型,并对心功能指标进行检测,为研究心衰发病机制和探寻有效治疗方法提供理想的动物模型。方法将实验动物分为两组,一组是正常对照组,注射等体积生理盐水;另一组是实验组,采用阿霉素大鼠尾静脉注射法制备心衰模型,每周1次,共6 w。观察大鼠行为特征,末次注药2 w后称量大鼠终末体重(BW),心室重(VW),计算心体比(VW/BW),并进行心功能检测,包括心率(HR)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室最大压力上升及下降速度(±dp/dtmax),并对心肌组织进行病理学检测。结果与正常对照组相比,实验组大鼠VW/BW明显增加,LVSP明显降低,LVEDP明显升高,±dp/dtmax则显著减小(P<0.05),病理学检测结果表明心肌出现典型慢性心衰样病理改变。结论连续多次尾静脉注射ADR可显著损伤心脏的舒缩功能,是建立大鼠心肌病及慢性充血性心力衰竭模型的一种简便可靠的方法。     

慢性应激抑郁模型的感觉和动力评价

[目的]对大鼠慢性轻度不可预见性的应激(CUMS)模型进行胃肠感觉和动力等方面的评估。[方法]将模型大鼠分为CUMS组和对照组,分别于实验前后检测2组大鼠动力(排便颗粒、排便时间)、感觉(自发性腹外斜肌收缩)和行为/心理(糖水摄取量、体质量)等指标改变。[结果]1CUMS组大鼠实验后出现糖水摄取量明显下降、体质量增长缓慢现象,与对照组比较均差异有统计学意义(P0.01);2气囊容量在0.8 ml和1.2 ml时,CUMS组腹部收缩次数增加,与对照组比较均差异有统计学意义(P0.01);3CUMS组大鼠的直肠传输时间与对照组无明显差别(P0.05)。[结论]CUMS抑郁模型可作为研究心理行为障碍与内脏感觉异常相关性机制的平台,尤其针对那些胃肠动力无明显改变者。