p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征早期诊断及预后评估中的价值

目的:探讨p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征(MDS)早期诊断与预后评估中的价值。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)对67例MDS患者骨髓进行上述4种基因甲基化检测,分析4个基因联检在MDS患者早期诊断及预后评估中的价值。结果:67例MDS患者p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4个基因甲基化率分别为37.3%、35.8%、47.8%和52.2%,较对照组显著增高(P0.05),4个基因单检诊断MDS的阳性符合率分别为37.3%、35.8%、47.8%和52.2%,而4个基因联合检测诊断MDS的阳性符合率为82.1%,较单一基因检查阳性符合率明显增高(P0.001);相对高危组中≥2个基因甲基化共表达明显高于相对低危组(P0.05)。MDS患者中位生存时间18(13.3,22.7)个月,相对低危组患者中位生存时间明显长于相对高危组[27(20.3,33.7)vs 9(5.9,12.1)个月](P0.05)。在不同危险度患者中,随着表达基因数的增多,患者的生存时间呈明显缩短趋势(P0.05)。结论:p15、DAPK、SOCS1和FHIT 4种基因联合检测有利于提高MDS患者的早期诊断和预后判断。     

实时定量PCR检测骨髓增生异常综合征患者多个基因甲基化水平

目的 了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者p15、CDH1、DAPK和HICI基因的甲基化情况,探讨其与临床特征的关系.方法 通过实时荧光定量PCR方法检测52例MDS、38例初诊AML患者和46名正常人骨髓或外周血4种基因的甲基化水平,并分析MDS患者基因的甲基化水平与其临床和实验室特征的关系.结果 MDS患者骨髓p15、CDH1、DAPK和HICI基因的甲基化水平分别为16.23±21.69、6.59±9.39、0.14±0.11和7.81±9.70,外周血为14.96±20.16、6.00±9.26、0.12±0.14和6.74±9.72,骨髓与外周血4种基因甲基化水平差异无统计学意义(P值均＞0.05).MDS-RAEB Ⅰ/Ⅱ患者骨髓或外周血p15及CDH1基因的甲基化水平(分别为14.70±18.17和6.61±8.79)较MDS-RCUD/RARS/5q-(分别为1.99±1.59,1.23±1.14)、MDS-RCMD(分别为3.02±3.42和1.53±2.06)和正常对照组(分别为1.69±1.82和1.01±1.12)显著升高(P值均＜0.05);各分型之间DAPK基因甲基化水平差异均无统计学意义;而HIC1基因甲基化水平仅在RAEB Ⅰ/Ⅱ(9.16±11.95)与对照组(2.49±2.26)差异有统计学意义(P=0.042).不同分型组间骨髓样本4种基因(p15、CDH1、DAPK和HICI)甲基化水平差异有统计学意义(P值分别为0.001、0.003、0.039、0.023);不同分型组间外周血样本p15及DAPK基因的甲基化水平差异有统计学意义(P值分别为0.013、0.006).p15基因甲基化水平与IPSS分型、原始细胞百分数、血小板计数有相关性;CDH1基因甲基化水平与IPSS分型、原始细胞百分数有相关性;DAPK基因甲基化水平仅与年龄有相关性;HIC1基因甲基化水平与各项指标均无相关性.结论 p15和CDH1基因是MDS中较为特征性出现的高度甲基化基因,HIC1甲基化水平从低危至高危组有升高趋势,DAPK基因虽然在各分型中均能检测到甲基化,但水平较低,而四种基因的甲基化水平与MDS疗效或预后的关系有待于进一步研究.

Abstract：

Objective To analyze the promoter methylation levels of p15、 CDH1、 DAPK and HICI genes of patients with myelodysplastic syndrome (MDS) and explore the relationship between the level of methylation and clinical features. Methods DNA methylation levels of p15、CDH1 、DAPK and HICI in peripheral blood (PB) or bone marrow (BM) samples from 52 MDS patients were detected by real-time quantitative PCR. The correlation of the methylation level with clinical features and hematological findings was analyzed. 38 de novo AML patients and 46 normal individuals served as controls. Results The methylation levels of p15 、CDH1 、DAPK and HICI were 16.23 ± 21.69,6.59 ±9.39,0. 14 ±0. 11 and 7.81 ± 9.70 in BM,and 14.96 ± 20.16,6.00 ± 9.26,0.12 ± 0. 14 and 6.74 ± 9.72 in PB, respectively from 18 MDS patients,and the difference between BM and PB was not statistically significant (P ＞0.05). The methylation levels of p15 (14.70 ± 18.17) and CDH1 (6.61 ±8.79) genes in high risk (RAEB Ⅰ / Ⅱ) MDS were significantly higher than in low risk (RCMD/RARS/5q -, p15: 1.99 ± 1.59, CDH1: 1.23 ± 1.14 and RCMD, p15:3.02 ±3.42, CDH1:1.53 ±2.06) MDS or control (p15:1.69 ± 1.82, CDH1: 1.01 ± 1.12) (P ＜0.05).The methylation levels of DAPK gene had no difference among subtypes of MDS, and that of HIC1 gene only differed between RAEB Ⅰ / Ⅱ (9.16 ± 11.95) and control (2.49 ± 2.26) (P = 0. 042). The difference of methylation levels of p15 、CDH1 、DAPK and HICI in BM was statistically significant among subtypes of MDS (P=0. 001, 0. 003 ,0. 039,0. 023 , respectively). And so did of p15 and DAPK in PB (P=0. 013, 0.006,respectively). The methylation level of p15 and CDH1 was significantly correlated with IPSS classification and blasts percentage in BM. Conclusions p15 and CDH1 genes are special hepermethylation genes in MDS.Methylation level of HIC1 gene showed an upward tendency from low risk to high risk MDS.     

骨髓增生异常综合征患者p73基因启动子区域异常甲基化的研究

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者抑癌基因p73启动子区域甲基化情况及其在预后中的意义.方法 收集135例初诊MDS患者及13名正常志愿者骨髓细胞,用甲基化特异性PCR (MS-PCR)方法检测p73基因启动子CpG岛甲基化发生情况,并利用亚硫酸盐测序法验证MS-PCR结果;荧光定量PCR法检测p73 mRNA表达情况;利用地西他滨处理MDS患者原代细胞,观察p73基因去甲基化及p73 mRNA表达情况;结合临床资料分析p73基因异常高甲基化在MDS中的作用.结果 37.0％的MDS患者p73基因启动子呈高甲基化状态,而且高危组MDS患者(RAEB-1、RAEB-2)甲基化发生率明显高于低危组(58.8％对29.7％,P=0.002);甲基化组患者p73 mRNA表达水平显著低于非甲基化组(P=0.032);用地西他滨处理后,可见MDS原代细胞p73去甲基化,且p73mRNA表达水平增高;p73高甲基化患者无白血病生存时间(DFS)及总体生存时间(OS)低于p73非甲基化患者(P值均＜0.01).在COX模型中,p73基因甲基化状况和骨髓原始细胞水平为影响患者DFS及OS的独立预后因素.结论 p73基因启动子高甲基化在MDS患者中较常见,且提示预后不良,可能为地西他滨治疗的靶点.     

p15INK4B甲基化与骨髓增生异常综合征患者预后及地西他滨疗效的关系

目的 通过检测初诊骨髓增生异常综合征(MDS)患者p15INK4B甲基化水平,观察地西他滨治疗前、后p15INK4B甲基化状态变化,探讨p15INK4B甲基化水平与预后的关系及其对地西他滨疗效的影响.方法 261例初诊MDS患者,其中男143例,女118例,中位年龄52(32 ～78)岁.低危组172例(低危104例、中危-1 68例),高危组89例(中危-2 52例、高危37例).收集患者骨髓单个核细胞,采用甲基化特异性PCR (MSP)检测p15INK4B甲基化水平,按p15INK4B甲基化程度对患者进行生存分析.采用MSP方法分别检测58例MDS患者地西他滨治疗前及治疗2个疗程后骨髓p15INK4B甲基化水平,分析p15INK4B甲基化对地西他滨疗效的影响.结果 低危组患者p15INK4B甲基化水平明显低于高危组患者(117.22对157.63,P＜0.05).p15INK4B甲基化阳性患者2年预期生存(OS)率低于阴性患者(69.8％对91.8％,P＜0.05);在低危组,p15INK4B甲基化阳性患者2年预期OS率低于阴性患者(78.2％对92.0％,P＜0.05);在高危组,p15INK4B甲基化阳性患者OS率及中位OS时间与阴性患者比较差异无统计学意义[35.6％对38.5％,(17.0±9.3)个月对(18.0±5.7)个月,P＞0.05].COX分析结果显示p15INK4B甲基化水平是OS时间的独立预后因素.治疗前p15INK4B甲基化阳性组患者地西他滨治疗的总反应率及完全缓解率与阴性组比较差异无统计学意义(65.9％对76.5％,22.0％对29.4％,P＞0.05).地西他滨治疗有效组p15INK4B甲基化水平在治疗前、后差异无统计学意义(P＞0.05).结论 初诊时p15INK4B甲基化水平高的MDS患者生存时间更短,但p15INK4B甲基化水平对地西他滨疗效无明显影响.     

骨髓增生异常综合征患者血浆DNA中FHIT基因启动子区甲基化状态及地西他滨的去甲基化作用

本研究旨在检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者血浆DNA中FHIT基因启动子区域甲基化状况及地西他滨对其甲基化的影响。采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测1例初治的MDS患者、3例MDS转化而来的AML患者在地西他滨序贯半量CAG方案化疗前后血浆DNA中FHIT基因启动子区域CPG岛甲基化情况,并分析其临床疗效。结果表明,3例患者治疗前有FHIT基因甲基化。治疗1个疗程后其中2例患者FHIT基因甲基化得到逆转,4例患者中有2例获得临床缓解,2例无效。结论:MDS的发生可能与FHIT基因甲基化相关,地西他滨对MDS患者血浆DNA中FHIT基因高甲基化具有明显的去甲基化作用。血浆DNA的FHIT基因甲基化检测可能成为MDS辅助诊断和预后判断的分子标记。     

Shh信号通路在骨髓增生异常综合征和转白血病患者骨髓CD34~+细胞中的表达及临床意义

目的:研究Shh信号通路相关基因Shh、Ptch1、Smo和Gli1在骨髓增生异常综合征(MDS)和MDS转白血病(AML-MRC)患者骨髓CD34~+细胞中的表达及其对预后的影响。方法:对53例MDS和30例AML-MRC患者采用流式细胞术检测骨髓CD34~+细胞数,磁珠分选CD34~+细胞,采用荧光实时定量PCR法检测CD34~+细胞上Shh、Ptch1、Smo和Gli1基因的表达,比较4种基因在MDS和AML-MRC患者中的表达及对预后的影响,并以25例缺铁性贫血患者作为对照。结果:Shh、Smo和Gli1在MDS组和AML-MRC组患者中的表达水平均显著高于对照组(P0.05),且表达水平随疾病进展呈递增趋势(P 0.05); Ptch1表达在3组间差异无统计学意义(P 0.05)。与相对低危组比较,Smo和Gli1在相对高危组和AML-MRC组中的表达水平均明显增高(P 0.05)。MDS组和AMLMRC组患者中位生存时间分别为12(7.5,16.5)和6(3.0,9.0)个月(P=0.000)。生存分析显示,MDS和AMLMRC组中Smo和Gli1高表达患者的中位生存时间明显短于低表达患者(P 0.05)。结论:MDS肿瘤干细胞中存在Shh信号通路的活化,其参与了MDS疾病进展并影响患者预后。     

骨髓增生异常综合征患者SHP-1基因启动子甲基化状态及相关机制的探讨

目的　探讨SHP-1基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)发生、发展中的作用和相关机制.方法　将63例MDS患者根据IPSS积分系统分为较低危和较高危组.采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)对MDS细胞系SKK-1细胞和MDS患者骨髓细胞进行SHP-1基因启动子甲基化状态的检测;用Western blot方法检测正常对照者和患者骨髓单个核细胞和SKK-1细胞磷酸化信号传导和转录激活因子3( p-STAT3)蛋白的表达.结果　SKK-1细胞存在SHP-1基因启动子部分甲基化,正常对照者骨髓细胞均为非甲基化,较高危组MDS患者SHP-1启动子甲基化率显著高于较低危组(63.3％对24.2％)(P＜0.05);按WHO分型中染色体核型和骨髓原始细胞比例分组,SHP-1启动子甲基化率在RAEB-Ⅱ、核型差组和骨髓原始细胞占0.11 ～0.19组显著增高(P＜ 0.05);SKK-1细胞中存在p-STAT3蛋白的表达,较高危组MDS患者p-STAT3蛋白的表达显著高于较低危组(66.7％对18.2％);相关分析显示SHP-1启动子甲基化的出现与p-STAT3蛋白的表达有相关性.结论　SHP-1基因启动子的异常甲基化在MDS的发病和疾病进展中发挥作用,其机制可能涉及STAT3信号通路的激活,检测MDS患者SHP-1启动子甲基化状态有助于对疾病预后的判断.     

miR-99a-5p在MDS患者骨髓中的表达及功能分析

目的:检测miR-99a-5p在骨髓增生异常综合症(MDS)患者中的表达,利用生物信息学预测其靶基因并进行功能分析,探讨miR-99a-5p在MDS的发生发展中可能的作用。方法:利用qRT-PCR技术检测miR-99a-5p在初治MDS患者骨髓中的表达量,分析其与MDS临床病理参数的相关性;运用靶基因在线预测软件Targetscan、Miranda和Microcosm预测其可能的靶基因,取预测结果的交集作为miR-99a-5p在MDS中的潜在靶基因。结果:与正常对照组相比,MDS患者骨髓中miR-99a-5p表达升高(P0.001)。按IPSS的预后评分,将MDS患者分为相对低危组(包括低危险组和中危1组)和相对高危组(包括中危2组和高危组)发现,在相对低危组中miR-99a-5p的表达量是正常对照组的2.40倍(P0.001),相对高危组中miR-99a-5p的表达量是对照组的6.66倍(P0.001),相对高危组中miR-99a-5p表达量是相对低危组的2.80倍(P0.001);转白血病组(t-MDS)中miR-99a-5p的表达量是对照组的6.35倍(P0.001)。相关分析显示,患者骨髓miR-99a-5p表达量与原始细胞比例呈显著正相关(P0.001);而与染色体核型、外周血血象无明显相关。利用靶基因在线预测软件预测mi R-99a-5p的可能靶基因,并结合文献,得出ST5可能是mi R-99a-5p在MDS中的潜在靶基因。结论:mi R-99a-5p在MDS患者中表达明显上调,且随着危险度的增加其表达呈上升趋势,并可能通过负性调控靶基因ST5参与MDS的发病。     

骨髓增生异常综合征相关基因的研究进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是造血干细胞的异质性疾病,至今病因尚未完全清楚.近年来随着分子生物学技术的发展,对MDS相关基因的研究越来越多.研究证实,在MDS患者中存在一系列异常,包括基因甲基化、转录因子的突变和激酶突变等.本文就与MDS发病机制相关的P15~(INK4b)、RUNX1和FHIT等基因的研究进展作一综述.     

ZO-1基因甲基化在MDS进展中的意义

目的:探讨ZO-1基因甲基化在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)向急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化中的临床意义,为MDS患者的预后评估进一步提供理论依据。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测ZO-1基因在正常对照者骨髓标本(normal control,NC)、MDS、AML患者骨髓标本中的甲基化状态。运用亚硫酸氢盐侧序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法检测1例MDS系列标本ZO-1基因在其MDS-RA、MDS-RAEB、AML阶段的甲基化状态。结果:ZO-1基因在NC、MDS、AML患者标本中的甲基化阳性率存在明显差异(P=0.000),在NC组未发现甲基化阳性,在AM L组阳性率最高(65.0%)。MDS/AML患者ZO-1基因甲基化阳性组髓系原始细胞比例更高(P=0.000)。1例MDS患者系列标本显示,随着疾病进展,在MDS-RA、MDS-RAEB、AML阶段中,甲基化位点阳性频率存在明显差异(P=0.000),在AML阶段阳性频率最高(64.65%)。结论:ZO-1基因启动子区高甲基化发生于MDS/AML患者中,随着恶性克隆增生,ZO-1基因甲基化阳性率及甲基化位点阳性频率越来越高,在一定程度上预示着MDS疾病进展,进一步提示ZO-1基因甲基化水平可成为监测MDS患者急性白血病转化的新指标。     

骨髓增生异常综合征患者ZO-1基因甲基化状态检测的临床意义

本研究探讨紧密连接蛋白（zonula occludens-1,ZO-1）基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征（MDS）诊断中基因标志作用的临床意义。采用甲基化特异性-PCR（MS-PCR）方法分析30例健康人骨髓标本及85例MDS患者骨髓标本的ZO-1基因启动子区甲基化状况。结果显示：ZO-1基因在30例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MDS患者骨髓中ZO-1基因甲基化阳性率（56.5%）明显高于健康人,二者差异有统计学意义（p〈0.05）。MDS各亚型病人骨髓ZO-1基因启动子区甲基化阳性率均高于健康人,其差异也具有统计学意义（p〈0.05）。MDS亚型RA、RAS、RAEB、RCMD间ZO-1基因甲基化阳性率差别无统计学意义（p〉0.05）。结论：与健康人相比,MDS病人骨髓中ZO-1基因启动子区呈高甲基化状态并具有特异性。MDS是一种常见的克隆增殖性血液系统疾病,在临床诊断中有时很难与其他疾病相鉴别,而ZO-1基因甲基化模式的改变与MDS的发生密切相关,因此ZO-1基因作为有价值的诊断标志具有重要的临床意义,它可能是一个潜在的血液系统恶性疾病的相关基因。     

SOCS超甲基化与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤的研究

目的 探讨细胞因子信号转导抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling,SOCS)基因超甲基化在经典型骨髓增殖性肿瘤(MPD)中的临床作用及其机制.方法 采用甲基化特异性PCR方法检测SOCS1、2、3基因CpG岛甲基化发生情况,直接测序法检测100例MPD患者JAK2V617F突变情况,用实时定量PCR方法检测SOCS1、2、3的mRNA表达情况.结果 100例MPD患者中有27例(27％)存在SOCS1基因超甲基化,9例(9％)存在SOCS2基因超甲基化,34例(34％)存在SOCS3基因超甲基化.在100例MPN患者中,64例(64％) JAK2V617F突变阳性.MPD患者中SOCS1和SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比,其SOCSl和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05);SOCS1和SOCS3基因JAK2V617F突变组与野生型组相比,其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05).结论 MPD患者中存在JAK2V617F突变及SOCS基因超甲基化,且JAK2V617F突变和SOCS基因甲基化导致SOCS mRNA表达水平降低,SOCS超甲基化和JAK2V617F突变可改变JAK-STAT信号通路等的转录活性而最终影响疾病的发展,这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向.     

恶性血液病中的P_(15)~(INK4B)基因甲基化

目的　探索特定基因操纵区CpG岛高甲基化对人类造血系统恶性肿瘤的作用。方法　利用甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP)的方法 ,用亚硫酸氢钠修饰后的DNA为模板进行甲基化特异性聚合酶链反应 (PCR) ,测定了 2 5例急性髓系白血病 (AML) ,15例慢性粒细胞白血病 (CML) ,16例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 12例多发性骨髓瘤 (MM)患者P1 5INK4B基因在操纵区 5′ CpG岛异常甲基化的发生率。结果　P1 5INK4B基因异常甲基化的发生率 :AML为 84% ,CML为 0 ,MDS为 5 0 % ,MM为 75 %。高危型的MDS较低危型更易发生甲基化。在MM中 ,P1 5INK4B甲基化一般发生在早期 ,与骨髓象的幼稚程度关系密切。结论　调节细胞生长和分化的P1 5INK4B基因高甲基化是使P1 5INK4B 基因失活的主要原因之一 ,CpG岛高甲基化与恶性血液病的发生密切相关。     

骨髓增生异常综合征中CD34(+)细胞自噬活性及临床意义

目的:研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中CD34(+)细胞自噬活性,并探讨其临床意义。方法:收集2012年10月至2014年3月我院收治的20例MDS、20例非恶性病贫血和5例急性髓系白血病(AML)患者骨髓液单个核细胞(BMMNC),采用流式细胞术检测这些标本中CD34(+)细胞自噬活性。结果:低危组MDS及非恶性病贫血组CD34(+)细胞自噬活性高于高危组MDS及AML组(P0.05),且MDS患者中CD34(+)细胞自噬活性与WHO分型预后积分系统(WPSS)呈负相关(r=-0.887)。结论:MDS患者CD34(+)细胞自噬活性较AM L患者明显增高,同时M DS患者骨髓CD34(+)细胞自噬活性与M DS患者WPSS评分呈负相关,提示自噬活性的降低有可能促进MDS疾病的演进,同时与MDS的预后相关。     

OTC4基因在骨髓增生异常综合征患者中的表达水平及临床意义

目的:探讨OTC4基因在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中表达特征及临床价值。方法:选自2017年6月-2018年4月在本院诊治的65例MDS患者,同时选择39例在本院体检健康者作为对照组,通过无菌穿刺收集受试者的骨髓后分离单个核细胞,RT-PCR实验检测MDS患者OTC4基因水平,Western blot实验检测MDS患者OTC4蛋白水平,Kaplan-Meier法绘制MDS患者生存曲线。Cox多因素分析患者独立的预后因素。结果:OTC4基因在MDS患者中的相对表达量显著高于对照组(P0.05)。MDS患者中OTC4蛋白表达水平高于对照组(P0.05)。OTC4基因表达与MDS患者的白细胞计数、血红蛋白和乳酸脱氢酶水平及血小板计数密切相关(P0.05)。OTC4基因低表达组MDS患者CR率为54.8%,明显高于OTC4基因高表达组(P0.021),而OTC4基因低表达组MDS患者HI、SD及PD率分别为9.7%、12.9%、6.5%,均明显低于OTC4基因高表达组患者(P0.05)。OTC4基因低表达患者组的OS和DFS均优于OTC4基因高表达的患者(P0.05)。白细胞计数及OTC4基因表达水平是OS独立影响因素(P0.05);血小板水平及OTC4基因表达水平是DFS独立影响因素(P0.05)。结论:OTC4基因与MDS的疾病程度密切相关,OTC4基因表达水平较低的MDS患者预后较好。本研究结果对评估MDS患者预后有较高的临床价值。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞成骨分化功能的研究

目的:研究骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM M SC)成骨分化功能及其在M DS发病机制中的作用。方法:分离培养M DS患者及正常人的BMMSC,并在体外诱导其向成骨细胞分化;荧光定量PCR法检测BMMSC成骨分化转录因子Runt相关转录因子2(RUNX2)和Osterix的mRNA表达水平,以及成骨诱导分化第7、14、21天成骨相关基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(Bone sialoprotein,BSP)、骨桥素(Osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA表达情况;碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测成骨诱导第3、7、10天ALP活性;茜素红染色观察诱导分化第21天钙结节形成情况。结果:低危MDS组BMMSC成骨分化转录因子RUNX2和Osterix mRNA表达水平较正常对照组均明显降低(P0.05),成骨诱导分化第3天低危MDS组ALP活性水平明显低于正常对照组(P0.05),成骨诱导分化第21天茜素红染色显示,低危MDS组钙结节含量也明显少于正常对照组(P0.05)。在成骨诱导分化不同时间点成骨早期标志ALP、BSP和后期标志OPN、OCN在低危MDS组中的mRNA表达水平也显著降低(P0.05),而高危MDS组在一系列成骨分化检测指标上与正常对照组之间没有统计学差异。结论:低危MDS组BM MSC成骨分化能力明显减弱,而高危M DS组相对正常。异常的成骨分化功能可能是造成低危组M DS骨髓支持造血能力减弱的重要原因。     

DAPK1基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系

目的:研究乳腺癌组织中死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase 1,DAPK1)启动子甲基化状态及其与临床病理特征之间的关系,并探讨该甲基化状态与DAPK1 mRNA表达的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR法检测人乳腺癌组织和相应癌旁正常乳腺组织中DAPK1启动子甲基化状态,分析其与患者临床病理特征的关系,并结合半定量RT-PCR法的检测结果加以分析。结果:43例乳腺癌标本中DAPK1启动子甲基化阳性率为44.1%(20/43),DAPK1启动子甲基化状态与年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、ER状态、PR状态、Her2状态无关(P0.05),而与有无淋巴结转移、P53是否阳性有关(P0.05)。DAPK1启动子甲基化标本中的DAPK1mRNA表达水平低于未甲基化标本,两者差异具有统计学意义(P0.05)。结论:乳腺癌中DAPK1基因启动子区高甲基化与其mRNA失表达有关,在乳腺癌发生、发展中可能起重要作用,有可能作为乳腺癌诊断和预后分析的检测指标之一。     

去甲基化药物治疗骨髓增生异常综合征的临床研究进展

<正>骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome, MDS)是起源于造血干细胞的异质性髓系克隆性疾病,主要特点为髓系细胞发育异常,表现为造血功能衰竭、难治性血细胞减少、病态造血、无效造血等,转化为急性髓系白血病几率高达30%[1～2]。MDS患者自然病程差异极大,总体预后差且生存期短,需个体化治疗。根据预后情况将MDS分为相对高危组和相对低危组。相对高危组治疗包括化疗、去甲基化药物(Hypometh-ylating Agents, HMAs)、异基因造血干细胞抑制等,以达到延缓疾病进展、治愈