活血化瘀注射液(HHI-Ⅰ)对TNF-α诱发大鼠肺微血管内皮细胞黏附分子mRNA表达的影响

[目的]从调节白细胞内皮细胞过度黏附角度研究活血化瘀中药的作用机制.[方法]体外培养肺微血管内皮细胞,RT-PCR方法观察活血化瘀注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱发的体外培养大鼠肺微血管内皮细胞E-选择素、P-选择素、细胞间黏附分子ICAM-1 mRNA表达的影响.[结果]肺微血管内皮细胞与含TNF-α培养基共同孵育后,可显著增加内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA表达,在培养基中加入活血化瘀注射液含药血清后,则内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA过度表达被明显抑制.[结论]抑制内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA过度表达是活血化瘀重要的作用机制之一.     

活血化瘀注射液(HHI-I)对TNF-α诱发大鼠肺微血管内皮细胞黏附分子mRNA表达的影响

[目的]从调节白细胞内皮细胞过度黏附角度研究活血化瘀中药的作用机制。[方法]体外培养肺微血管内皮细胞，RT-PCR方法观察活血化瘀注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱发的体外培养大鼠肺微血管内皮细胞E-选择素、P-选择素、细胞间黏附分子ICAM-1 mRNA表达的影响。[结果]肺微血管内皮细胞与含TNF-α培养基共同孵育后，可显著增加内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA表达，在培养基中加入活血化瘀注射液含药血清后，则内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA过度表达被明显抑制。[结论]抑制内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1 mRNA过度表达是活血化瘀重要的作用机制之一。     

原花青素对肿瘤坏死因子-α诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响

目的研究原花青素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡,荧光检测试剂盒测定caspase-8活性,Westernblot检测caspase-8酶原表达水平。结果原花青素(5、10、20mg/L)对重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α,100μg/L)诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对rhTNF-α(100μg/L)诱导的HeLa细胞caspase-8活化均有显著抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对HeLa细胞caspase-8酶原表达无明显影响。结论原花青素抑制TNF-α诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制caspase-8活化有关。     

洋参二醇皂苷对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护效应研究

目的探讨洋参二醇皂苷对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护效应及其机制。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,通过每24 h间替更换高糖型DMEM全培养基(葡萄糖浓度25 mmol/L)与低糖型DMEM全培养基(葡萄糖浓度5.56 mmol/L)构建人脐静脉内皮细胞血糖波动模型。实验分为5组,包括正常低糖组、稳定高糖组、波动高糖组(间替高糖/低糖)、洋参二醇皂苷低剂量组(0.04 mg/m L)、洋参二醇皂苷高剂量组(0.08 mg/m L)。细胞培养8 d,观察细胞形态学表现,MTT测定细胞成活率,取细胞培养上清液检测乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,细胞裂解液检测胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果洋参二醇皂苷低、高剂量组细胞形态均较波动高糖组明显好转,细胞活性和细胞中SOD活性均明显高于波动高糖组(P均<0.05),LDH漏出率和细胞中TNF-α、s ICAM-1、ET-1、NO、MDA含量均明显低于波动高糖组(P均<0.05)。结论洋参二醇皂苷对波动高糖诱导的人脐静脉内皮细胞具有显著保护效应,其保护效应与其能够显著减轻葡萄糖波动诱导的氧化应激、炎症反应及细胞黏附分子的过度表达密切相关。     

姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型MMP-9表达的抑制作用

目的探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的抑制作用。方法进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定。加入相同浓度TNF-α诱导半个小时后加入不同浓度的姜黄素处理细胞24h。采用免疫细胞化学染色和ELISA的方法测定细胞MMP-9的表达。结果经TNF-α诱导过的人脐静脉内皮细胞加入不同浓度的姜黄素（6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml）作用24h后均能明显抑制细胞MMP-9的表达,并且随着浓度的升高这种抑制作用明显增强。结论姜黄素能明显降低TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞MMP-9的表达。     

潜阳育阴颗粒含药血清对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞损伤NADPH氧化酶、AKT、TNF-α、IL-6的影响

目的研究潜阳育阴颗粒(鬼针草、山茱萸、何首乌、玄参、川牛膝和泽泻)含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞损伤NADPH氧化酶、蛋白激酶(AKT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的影响。方法 SD大鼠随机分为正常组、缬沙坦组、潜阳育阴颗粒组,制备含药血清。人脐静脉内皮细胞分为5组,除正常组外,其余组均采用10-6mol/L AngⅡ干预建立人脐静脉内皮细胞损伤模型。造模后,分别给与空白血清培养液、缬沙坦血清培养液、潜阳育阴颗粒血清培养液。TBA法检测MDA水平;ELISA法检测NADPH氧化酶、TNF-α、IL-6水平;Western-Blot检测磷酸化AKT1与AKT1蛋白表达。结果潜阳育阴颗粒显著降低AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞损伤后NADPH氧化酶的活性水平,降低p-AKT1蛋白表达,降低TNF-α、IL-6的释放。结论潜阳育阴颗粒可以抑制AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞损伤后的炎症反应,推测其机制与抑制NADPH氧化酶、AKT、TNF-α、和IL-6有关。     

参麦注射液对脂多糖诱导HUVECs细胞损伤的影响

目的研究参麦注射液对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响。方法将原代人脐静脉内皮细胞分成空白组、模型组、2%参麦注射液组、5%参麦注射液组。采用RT-PCR和Western blot检测细胞炎症因子和细胞黏附因子的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白组比较,LPS处理24 h后细胞炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)、黏附因子(ICAM-1、 VCAM-1)表达升高(P0.01);给予2%、5%参麦注射液组后,炎症因子与黏附因子均降低(P0.05,P0.01)。结论参麦注射液能有效抑制由LPS诱导的炎症因子及黏附因子表达。     

健心颗粒对血管内皮细胞KLF4表达的影响

目的观察健心颗粒对人脐静脉血管内皮细胞炎症损伤的干预作用。方法通过炎症因子TNF—α诱导人脐静脉内皮细胞建立内皮细胞损伤模型,随机分为正常组、健心颗粒组、TNF-α组、TNF-α加健心颗粒组,用RT—PCR、Western—Blot、免疫组化法检测脐静脉内皮细胞Kruppel因子4(KLF4)表达的变化。结果与正常组比较,TNF-α刺激后,KLF4表达水平明显升高;健心颗粒干预后,KLF4表达水平下降。结论健心颗粒能够抑制激活的人脐静脉血管内皮细胞中KLF4的表达。     

山姜素对肺微血管内皮细胞损伤保护机制

目的研究山姜素对急性人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)损伤的保护机制。方法应用不同浓度的LPS(0.01、0.1、1.0、10 mg/L)作用于HPMECs,确定造模最佳浓度。应用山姜素(40、80、160、320 mg/L)干预HPMECs损伤模型,另选择正常HPMECs为对照组,每组3个重复样本,观察各组HPMECs存活率,检测细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、TNF-α、水通道蛋白-1(APQ-1)蛋白及mRNA表达。结果与对照组比较,模型组ICAM-1及TNF-α蛋白表达升高,AQP-1蛋白及mRNA表达降低(P0.05)。与模型组比较,80、160 mg/L山姜素组细胞存活率升高,ICAM-1及TNF-α蛋白表达降低,AQP-1蛋白及mRNA表达升高(P0.05,P0.01)。结论山姜素通过下调ICAM-1、TNF-α蛋白表达并上调APQ-1蛋白及mRNA表达,从而对急性HPMECs损伤起保护作用。     

黄芩苷对E-选择素和一氧化氮的影响研究

目的:观察黄芩苷对肺炎衣原体和大肠杆菌脂多糖诱导的E-选择素和一氧化氮的影响.方法:在24孔板培养人脐静内皮细胞(ECV-304),待长成单层后加入肺炎衣原体(CPN)为衣原体组,加入CPN和黄芩苷0.48g/L为实验1组,加入大肠杆菌脂多糖(LPS)为LPS组,加入LPS和黄芩苷0.48g/L为实验2组,不加任何刺激物为正常组,每组设4个复孔,培养4d后,各组细胞消化后用流式细胞仪技术进行E-选择素检测,上清检测NO.结果:血管内皮细胞经CPN刺激后E-选择素表达增加,NO分泌没有改变;血管内皮细胞经LPS刺激后E-选择素表达增加,NO分泌也增加;黄芩苷可降低LPS诱导的E-选择素和NO.结论:CPN和大肠杆菌LPS对血管内皮细胞的刺激有不同的病理结果,中药黄芩苷有一定的抗炎作用.     

野蔷薇根总黄酮含药血清对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护作用研究

研究野蔷薇根总黄酮(total flavonoids from Rosa multiflora, TF-RM)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)损伤的影响。SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、辛伐他汀组(1.8 mg·kg~(-1)·d~(-1))、TF-RM组(2.5 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。灌胃给药7 d,腹主动脉取血,分离制备含药血清。采用ox-LDL诱导建立HUVEC损伤模型,分别加入15%辛伐他汀、5%TF-RM、10%TF-RM、15%TF-RM含药血清及空白血清。采用流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS),硝酸还原酶法检测上清液一氧化氮(nitric oxide, NO)含量,ELISA法检测上清液内皮素(endothelin, ET-1)、P-选择素、E-选择素、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)含量,Western blot法检测凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1, Lox-1)蛋白表达。与空白组比较,模型组HUVEC内ROS浓度及上清液ET-1、P-选择素、E-选择素、ICAM-1、VCAM-1、IL-1β含量显著升高(P0.05),上清液NO含量显著降低(P0.01),Lox-1蛋白表达显著增加(P0.05),TNF-α和IL-6有增加趋势。与模型组比较,TF-RM显著降低HUVEC内ROS浓度及上清液ET-1、P-选择素、E-选择素、ICAM-1、TNF-α、IL-1β含量(P0.05),显著升高上清液NO含量(P0.01),明显抑制Lox-1蛋白表达(P0.05),对上清液VCAM-1和IL-6含量有降低趋势。野蔷薇根总黄酮含药血清作用于凝集素样氧化低密度脂蛋白受体,通过减少细胞氧化损伤、调节血管活性物质、降低黏附分子及炎症级联反应发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及TNF-α表达的影响

目的探讨波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECS）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法以HUVECS为研究对象,实验分为3组：正常对照组（5.5mmol/L）、持续高糖组（25mmol/L）、波动高糖组（5.5/25mmol/L,白天3h高糖2h正常浓度葡萄糖波动3次,高糖过夜）。通过双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）检测细胞在各种糖浓度条件下24h、48h、72hICAM-1及TNF-α的表达。结果ICAM-1的浓度各个时间段波动组与高糖组和正常对照组相比均升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。TNF-α的浓度3个时间段波动组与高糖组、正常对照组相比显著升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。结论波动性高糖较持续性高糖更增强HUVECSICAM-1和TNF-α的表达。     

薯蓣皂苷元对白细胞的粘附与迁移及内皮细胞ICAM-1的表达和NF-κB活化的影响(英文)

目的:探讨薯蓣皂苷元的抗炎活性及其可能机制,为其临床应用提供药理学依据。方法:采用酵母多糖A诱导的小鼠腹膜腔白细胞游走模型,评价薯蓣皂苷元的体内抗炎活性;利用白细胞与肿瘤坏死因子(TNF-α)活化的内皮细胞粘附的实验,验证薯蓣皂苷元的抗炎活性;采用聚合酶链式反应和流式细胞术,考察内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达;蛋白印迹法测定细胞核中转录因子NF-κB/p65的表达及细胞裂解液中NF-κB/p65的磷酸化情况,以探讨薯蓣皂苷元抗炎的可能机制。结果:薯蓣皂苷元1,3mg·kg1灌胃给药1次,可显著减少酵母多糖A诱导的小鼠腹腔内白细胞数量;薯蓣皂苷元0.1,1μmol·L1体外加药5h,显著抑制人HL-60细胞与TNF-α活化的ECV304细胞的粘附,但对ECV304细胞活力无明显影响,也不影响HL-60细胞与静息状态ECV304细胞的粘附。同时,薯蓣皂苷元0.1,1μmol·L1明显抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1mRNA和蛋白的过量表达,1μmol·L1可抑制NF-κB/p65的核转移;薯蓣皂苷元明显减少TNF-α刺激10～30min诱导的NF-κB/p65的磷酸化,并呈一定浓度依赖性。结论:薯蓣皂苷元具有显著抑制白细胞的黏附迁移活性,其部分机制与抑制内皮细胞NF-κB活化,下调ICAM-1的表达有关。     

芍药苷对TNF-α诱导的内皮细胞TNFR1/NF-κB信号通路的抑制作用

目的研究芍药苷(paeoniflorin,PAE)对TNF-α诱导小鼠肾动脉内皮细胞TNFR1介导信号通路的抑制作用,试探讨其作用的分子机制。方法体外培养小鼠动脉内皮细胞。采用Western blot方法检测正常组(无血清培养基培养)、TNF-α组(无血清培养基培养2 h加TNF-α30ng/m L 6 h)、PAE低浓度组(PAE0.8μmol/L培养2 h加TNF-α30ng/m L 6 h)、PAE中浓度组(PAE 8μmol/L培养2 h加TNF-α30ng/m L 6h)及PAE高浓度组(PAE 80μmol/L培养2 h加TNF-α30ng/m L 6 h)细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)的蛋白表达;以免疫荧光法检测正常组(无血清培养基培养)、TNF-α组(无血清培养基培养2 h加TNF-α30ng/m L 45 min)、PAE高浓度组(PAE 80μmol/L培养2 h加TNF-α30ng/m L45 min)核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的核转位;以Western blot法检测正常组(无血清培养基培养)及PAE高浓度组(PAE 80μmol/L培养2 h)ph-ERK和ph-p38表达;Western blot法检测正常组(无血清培养基培养)、TNF-α组(无血清培养基培养2 h加TNF-α30ng/m L 30 min)、PAE高浓度组PAE 80μmol/L培养2 h加TNF-α30ng/m L 30 min)、p38抑制剂组(SB组,p38抑制剂SB238025 25μmol/L预处理30 min,PAE80μmol/L处理2 h,最后TNF-α30 ng/m L 30 min)及ERK抑制剂组(PD组,ERK抑制剂PD98059 50μmol/L处理30 min,PAE 80μmol/L处理2 h,最后TNF-α30 ng/m L 30 min)IκBα蛋白表达。结果与正常组比较,TNF-α组ICAM-1蛋白表达明显升高(P0.01);与TNF-α组比较,PAE高浓度组的ICAM-1表达受到显著抑制(P0.05)。PAE高浓度组ph-p38及ph-ERK蛋白表达水平明显较正常组升高(P0.05)。与正常组比较,TNF-α组IκBα表达水平下降(P0.01)。与TNF-α组比较,PAE高浓度组可显著抑制TNF-α诱导的IκBα蛋白降解(P0.01),SB组可显著阻断PAE对IκBα蛋白降解的抑制作用(P0.05)。正常组中NF-κB/p65信号主要位于胞浆中,TNF-α组在TNF-α刺激45 min可诱导NF-κB/p65由胞浆向细胞核转位,而PAE高浓度组可显著抑制TNF-α诱导的NF-κB/p65核转位。结论 PAE抑制TNF-α诱导的ICAM-1表达,其作用与抑制TNFR1/NF-κB信号通路有关,p38参与介导此作用。     

通心络对活化血小板诱导人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的研究通心络对活化血小板诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及白细胞分化抗原40配体(CD40L)在此损伤过程中的作用。方法取健康人新鲜血,离心获取血小板悬液,二磷酸腺苷(ADP)诱导活化,应用活细胞成像系统动态观察血小板形态变化、酶联免疫吸附试验(ELISA)测可溶性CD40L(s CD40L)表达;将静息血小板和活化血小板的上清液分别与人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)共培养12 h,同时设正常组、阴性对照组、CD40L单克隆抗体组、通心络组。采用四唑化合物电子耦联显色法(MTS法)检测HUVEC生存活性,ELISA法检测HUVEC炎性细胞因子细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)、E-选择素(E-selectin)、荧光检测法测HUVEC线粒体膜电位。结果 ADP诱导激活的血小板高表达可溶性CD40L,血小板形态由圆形变为不规则,并有胞浆内物质释放。活化血小板上清液诱导HUVEC生存活性下降,炎症因子s ICAM-1、E-selectin分泌显著升高,且HUVEC线粒体膜电位下降。通心络及CD40L单抗预处理HUVEC,与活化组比较,均能显著降低s ICAM-1、E-selectin的表达,升高HUVEC线粒体膜电位,改善HUVEC生存活性。结论体外活化的血小板能够启动血小板-内皮细胞炎症反应,诱导HUVEC功能障碍,其机制可能是通过CD40L-CD40起作用。通心络抑制活化血小板对HUVEC的损伤,对血小板、内皮细胞具有保护作用。     

导痰汤通过NF-κB信号通路抑制人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的研究

目的:研究导痰汤能否通过对核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节而干预ICAM-1的表达,以揭示导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法:通过PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对肿瘤坏因子-α(TNF-α)刺激脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和NF-κB表达的影响。结果:TNF-α诱导组ICAM-1和NF-κB显著高于空白对照组和导痰汤对照组(P<0.01);使用导痰汤含药血清或吡咯烷二硫氧基甲酸(PDTC)处理后,ICAM-1和NF-κB p65表达显著下降(P<0.05,P<0.01);NF-κB活性与ICAM-1 mRNA水平呈显著正相关(r=0.716,P<0.01)。结论:导痰汤可以调节NF-κB信号通路,从而有效抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达。     

疗癣卡西甫散提取物对肿瘤坏死因子-α诱导角质形成细胞增殖的影响

目的观察疗癣卡西甫散提取物(LE)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导角质形成细胞株HaCaT细胞增殖及白细胞介素-8(IL-8)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)m RNA表达的影响,探讨其作用机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常组、TNF-α组和LE低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组细胞均给予40 ng/m L TNF-α诱导,各给药组再分别给予8、40、200μg/m L LE作用48 h。MTT法检测HaCaT细胞增殖;ELISA检测HaCaT细胞IL-8和ICAM-1含量;PI和Hoechst33342荧光染色观察HaCaT细胞凋亡;半定量RT-PCR检测HaCaT细胞IL-8和ICAM-1的m RNA表达。结果与正常组比较,TNF-α组HaCaT细胞吸光度、IL-8和ICAM-1含量及其m RNA表达明显升高(P0.05,P0.01);与TNF-α组比较,LE各剂量组HaCaT细胞吸光度、IL-8和ICAM-1含量及其m RNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论 LE通过促进HaCaT细胞凋亡及抑制HaCaT细胞IL-8和ICAM-1基因表达,从而维持皮损处HaCaT细胞的正常水平。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ICAM-1的影响研究

目的：探讨溶栓颗粒对TNF-α损伤血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。方法：用TNF-α（40ng/mL）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达。结果：TNF-α可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降,皱缩、变形,分裂相细胞明显增加。受损细胞的ICAM-1表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少ICAM-1表达,减少细胞有丝分裂。结论：溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞ICAM-1表达,或许可以减缓动脉粥样硬化形成;溶栓颗粒减少血管内皮细胞分裂增殖,对稳定动脉粥样斑块稳定性或许有积极作用。     

导痰汤对人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1和p53表达的影响

目的:通过研究导痰汤干预细胞间黏附分子1(ICAM-1)与p53的表达,分析导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代培养1～3代用于实验。含药血清的制备为将导痰汤按照0.9 g.kg-1.d-1剂量给SD大鼠ig 10 d后,经腹主动脉采血,分离血清。实验共分7组:正常HUVEC为空白对照组,不含药血清处理HUVEC为空白血清对照组,肿瘤坏死因子α(TNF-α,200 U.mL-1)预处理HUVEC为TNF-α诱导组,先采用5%(0.015 g.mL-1),10%(0.03 g.mL-1),20%(0.06 g.mL-1)含药血清预处理HUVEC,再与TNF-α共培养为5%,10%,20%导痰汤组,使用p53特异性阻滞剂PFT-α(0.009 g.mL-1)处理HUVEC为PFT-α阻滞组。通过PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对TNF-α刺激脐静脉内皮细胞培养内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达和p53表达的影响。结果:①TNF-α诱导组ICAM-1 mRNA和p53 mRNA的表达显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01);使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1和p53 mRNA的表达显著下降(P<0.05);②TNF-α诱导组ICAM-与p53蛋白显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01)。使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1与p53表达显著下降(P<0.05);③p53 mRNA与ICAM-1 mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.981,P<0.01);p53活性与ICAM-1水平呈显著正相关(r=0.854,P<0.01)。结论:导痰汤可以通过调节p53表达而抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,故能起到治疗动脉粥样硬化的作用。     

Z-藁本内酯对人脐静脉内皮细胞保护作用及其机制研究

目的 通过观察Z-藁本内酯对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及核因子-κB (NF-κB)表达的影响,探讨其对炎性因子损伤内皮细胞的保护作用及其机制.方法 向体外培养的HUVEC中加入TNF-α10 ng/mL造成细胞损伤,同时加入不同浓度(5、10、20 μmol/L)的Z-藁本内酯,共同孵育24 h,MTT法检测各组细胞活力,ELISA法测定细胞培养液中 ICAM-1和VCAM-1的量,Westernblotting法检测各组细胞NF-κB蛋白表达.结果 与对照组比较,TNF-α可造成HUVEC明显损伤(P＜0.05、0.01),显著增加HUVEC中ICAM-1和VCAM-1的表达(P＜0.01).与模型组比较,Z-藁本内酯可以剂量相关地降低ICAM-1 (P＜0.01)和VCAM-1 (P＜0.05)的表达,显著减少细胞NF-κB蛋白 的表达(P＜0.05).结论 Z-藁本内酯可减轻TNF-α对HUVEC的损伤,其作用机制可能与通过抑制NF-κB的激活,进而减少ICAM-1和VCAM-1的表达有关.