电针对功能性消化不良肝郁脾虚型大鼠中枢及外周降钙素基因相关肽及受体活性修饰蛋白的影响

目的:观察电针对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)肝郁脾虚模型大鼠中枢及外周胃肠激素:降钙素基因相关肽(calcitonin generelated peptide,CGRP)及其相应受体-受体活性修饰蛋白质1(receptor activity modifying protein 1,RAMP1)的影响.方法:将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组16只.除正常组以外,剩余两组大鼠采用郭氏夹尾刺激法(14 d,2次/d)+不规则饮食法(逢单日禁食,饮水正常)+冰生理盐水灌胃法(-7℃0.9%NaCl注射液2 mL,2次/d)的多因素干预法造模.造模成功后进行电针治疗,治疗时间为28 d,1次/24 h.治疗结束后分别对3组大鼠进行灌胃处理,解剖取材,测定胃内残留率及小肠推进率;免疫印迹法(Western blot)分别测定各组下丘脑、胃、肠的CGRP、RAMP1含量.结果:与空白组相比,模型组大鼠胃内残留率明显升高,小肠推进率显著降低(P0.001),模型组大鼠胃窦、空肠的CGRP及其受体RAMP1的表达含量均明显升高(P0.05),模型组大鼠下丘脑CGRP及其受体RAMP1的表达含量明显升高(P0.01);与模型组相比,电针组胃内残留率显著降低(P0.001),小肠推进率明显升高(P0.01),电针组大鼠中枢与外周的CGRP及其受体RAMP1的含量显著降低,且均有显著性差异(P0.05).结论:电针能够显著地降低外周及其受体RAMP1的水平,从而达到降低胃肠道的敏感性的作用.同样,对中枢的CGRP及其受体的表达有着显著的影响,提示电针是通过脑-肠轴调节脑肠肽的分泌,从而调节胃肠道的活动,这可能是电针治疗FD的脑-肠轴机制.     

八脉交会穴之内关和公孙对功能性消化不良大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响

目的:观察八脉交会穴之内关、公孙穴配伍使用对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)模型大鼠下丘脑单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5-HT)的影响，探讨其治疗FD可能的作用机制。方法:将45只SD大鼠随机分为空白组10只和模型储备组35只，模型储备组按复合病因造模法连续造模3周，造模成功后将大鼠随机分为模型组，针刺组、西药组(各10只),电针组行电针内关和公孙穴治疗，西药组予以灌服氟哌噻吨美利曲辛、莫沙必利溶液治疗，1次/d,连续21 d后。分别于造模前后行旷场实验检测大鼠的抑郁样行为，治疗结束后行糖水消耗实验和胃排空实验；采用HPLC法检测下丘脑NE、DA、5-HT含量。结果:与造模前相比，造模后各组大鼠均表现为毛发枯乱发黄，活动减少，扎堆甚至倦卧，大便时干时稀，食欲减退，体重增长变慢；旷场实验示：大鼠站立、穿格、修饰次数明显减少，综上提示FD模型造模成功。与空白组相比，模型组大鼠的糖水消耗率降低明显，胃残留率明显增加，差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比，针刺组、西药组大鼠的糖水消耗率显著升高，胃残留率明显减少，...     

电针肝俞穴、梁丘穴对抑郁型胃溃疡大鼠SS及海马BDNFmRNA的影响

目的:研究电针肝俞穴、梁丘穴对抑郁型胃溃疡大鼠模型生长抑素(somatostatin,SS)及海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的影响,探讨电针肝俞穴、梁丘穴对抑郁型胃溃疡的治疗机制.方法:所有大鼠旷场试验后选择合格大鼠60只,按照随机数字表法分为4组:空白组(n=15)、模型组(n=15)、西药组(n=15)、电针组(n=15).除正常组外,剩下的3组建立慢性不可预见性刺激抑郁症合并醋酸烧灼胃溃疡大鼠模型.电针组采用电针肝俞穴、梁丘穴,西药组采用奥美拉唑灌胃4.2 mg/(kg?d).肝俞穴位直刺6 mm,梁丘穴直刺4-5 mm,电针治疗仪给予疏密波型,疏波4 Hz,密波20 Hz,强度以局部皮肤肌肉轻微颤动为度,留针20 min,1次/d,连续6 d,中间休息1 d,2 wk为1个疗程,共13 d.观察大鼠一般情况变化、旷场试验结果、溃疡指数结果,运用免疫组织化学法检测下丘脑、胃窦黏膜组织中SS的表达,RT-PCR法检测海马组织中BDNF的表达.结果:造模后和治疗后模型组旷场试验水平和垂直运动均较空白组明显降低(23.28±4.13 vs 38.35±6.65,9.89±3.31 vs 19.34±2.56;27.19±3.72 vs 38.87±4.89,10.58±2.47vs 20.68±3.54;均P0.01),而治疗后电针组和西药组水平和垂直运动较模型组显著增高(34.78±6.54 vs 27.19±3.72,33.24±4.54vs 27.19±3.72;17.78±2.09 vs 10.58±2.47,16.32±3.01 vs 10.58±2.47;均P0.01).电针组和西药组溃疡指数比模型组有显著降低(2.14±0.75 vs 4.75±0.46;2.10±0.32 vs 4.75±0.46;均P0.01).模型组胃黏膜和下丘脑中SS表达较空白组降低(0.09887±0.0073 vs0.16675±0.0046;0.09500±0.0063 vs 0.14462±0.0050;均P0.05),电针组和西药组SS表达较模型组均增高(0.12562±0.0031 vs 0.09887±0.0073,0.12538±0.0043 vs 0.09887±0.0073;0.11312±0.0054 vs 0.09500±0.0063,0.11900±0.0056 v s 0.09500±0.0063;均P0.05).模型组海马BDNF mRNA含量较空白组显著降低(0.2775±0.00712 vs 0.6899±0.03245;P0.01),电针组海马BDNF mRNA含量比模型组显著增高(0.6547±0.01907 vs0.2775±0.00712;P0.01),西药组与模型组比较含量增高(0.4162±0.0088 vs 0.2775±0.00712;P0.05).以上指标电针组与西药组比较除BDNF mRNA差异有统计学意义(0.6547±0.01907 vs 0.4162±0.0088;P0.01)外余者均无统计学意义(P0.05).结论:电针肝俞穴、梁丘穴可以通过调节脑肠肽SS及海马BDNF的表达水平,对抑郁型胃溃疡起到治疗作用.     

电针联合经颅磁刺激对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨电针联合经颅磁刺激对血管性痴呆(VaD)大鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,8周龄,体质量240～280 g,采用随机数字表法分为4组:假手术组(S组)、模型组(M组)、电针组(E组)和电针+磁刺激组(EM组),每组12只。采用四血管阻断法构建大鼠VaD模型,E组大鼠取"百会穴"和"大椎穴",电针30 min/次,1次/d,连续14 d; EM组大鼠在电针干预后,接受经颅磁刺激,100个磁脉冲/次,1次/d,连续14 d; S组和M组大鼠以相同的方式和时间固定于柔软性固定器中而不给予其他干预。采用Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力,脱氧核苷酸末端转移酶介导的2′-脱氧尿苷5′-三磷酸盐缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠海马CA1区细胞凋亡情况,Western blot法检测海马组织中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白相对含量,计算p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR的比值。结果与S组比较,M组、E组和EM组逃避潜伏期[(48.9±2.2)、(40.8±2.2)、(36.7±2.4)s比(33.6±1.6) s]和第1次跨越平台时间[(54.8±1.8)、(37.8±2.2)、(30.2±1.8) s比(24.5±1.8) s]均明显延长(均P0.05),而2 min内跨越原平台次数[(3.2±0.8)、(5.6±0.8)、(7.6±1.0)次比(10.2±0.8)次]明显减少(均P0.05),细胞凋亡指数明显升高(均P0.05),PI3K蛋白相对含量明显升高(均P0.05),而p-Akt/Akt值和p-mTOR/mTOR值明显降低(均P0.05);与M组比较,E组和EM组逃避潜伏期和第1次跨越平台时间均明显缩短(均P0.05),而2 min内跨越原平台次数明显增加(均P0.05),细胞凋亡指数明显降低(均P0.05),PI3K蛋白相对含量明显降低(均P0.05),而p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值明显升高(均P0.05);与E组比较,EM组逃避潜伏期和第1次跨越平台时间均明显缩短(均P0.05),而2 min内跨越原平台次数明显增加(P0.05),细胞凋亡指数明显降低(P0.05),PI3K蛋白相对含量明显降低(P0.05),而p-Akt/Akt值和p-mTOR/mTOR值均明显升高(均P0.05)。结论电针联合经颅磁刺激可改善VaD大鼠空间学习记忆能力,且其作用效果优于单独使用电针,其作用机制可能与促进PI3K/Akt/mTOR信号通路活化而抑制海马细胞凋亡有关。     

腺苷对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶9和闭锁连接蛋白1表达的影响

目的 观察腺苷预处理对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶9(MMP-9)和闭锁连接蛋白1(ZO-1)表达变化的影响。方法 108只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、腺苷组(n=36)。造模前腺苷组腹腔注射腺苷注射液，对照组和模型组大鼠在相同时间点腹腔注射2 ml生理盐水。采用改良的线栓法栓塞右侧大脑中动脉阻断血流2 h后，将线拔出形成再灌注。再灌注24 h后，伊文思蓝(EB)渗透法测定血脑屏障通透性，检测MMP-9和ZO-1表达。结果 模型组和腺苷组EB,脑含水量，MMP-9明显高于对照组，ZO-1明显低于对照组(P<0.01);模型组和腺苷组MMP-9/β肌动蛋白(β-actin)表达明显高于对照组(0.563±0.054和0.377±0.080 vs 0.242±0.021,P<0.01),ZO-1/β-actin表达明显低于对照组(0.186±0.042和0.393±0.075 vs 0.671±0.065,P<0.01)。腺苷组MMP-9/β-actin表达低于模型组，ZO-1/β-actin表达明显高于模型组(P<0.01)。结论 腺苷预处理可以通...     

回直肠吻合分流术对慢传输型便秘大鼠血浆SP及VIP的影响

目的:完成STC大鼠回肠直肠吻合分流手术,观察该术式对STC大鼠血浆SP、VIP的影响.方法:72只SD大鼠,随机取10只作为正常对照组,其余62只用大黄小剂量递增灌胃造模.造模过程中死亡5只,剩余57只,手术前处死12只作为模型对照组.剩余的45只大鼠,随机35只手术组,10只自然恢复组,测定并比较各组大鼠血浆中SP及VIP的含量.结果:SP水平:与正常对照组相比,模型组大鼠血浆SP水平显著降低(63.364±4.211vs81.032±4.237,P<0.01);恢复组对比模型组SP水平降低显著(50.138±5.283vs63.364±4.211,P<0.01);术后1mo,手术组对比恢复组数值增高(58.165±6.592vs50.138±5.283,P<0.05);但仍然低于模型组(58.165±6.592vs63.364±4.211,P<0.05).VIP水平:与正常对照组相比,模型组大鼠血浆VIP水平显著升高(32.152±6.204vs25.469±4.523,P<0.01);恢复组较模型组下降(25.217±3.517vs32.152±6.204,P<0.05),且与正常对照组无显著差异.手术组对比恢复组无显著差异.结论:回直肠吻合分流术明显改善STC大鼠的便秘症状,减轻结肠负担后能减轻结肠功能的进一步恶化,但能否促进大鼠结肠功能恢复尚待进一步研究.     

靶蛋白信号通路相关蛋白在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达

目的观察磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关蛋白Akt和mTOR在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况。方法选择SD大鼠72只,随机分为假手术组、血管性痴呆模型组(模型组)和PI3K抑制剂LY294002组(LY294002组),每组24只。每组又随机分为模型制备成功后1、2、4、8周4个时间点,每个时间点6只。采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备血管性痴呆大鼠模型。免疫组织化学法检测Akt、mTOR蛋白的表达情况。结果假手术组海马CA1区不同时间点可见少量Akt和mTOR蛋白阳性表达。与假手术组比较,模型组和LY294002组1、2、4、8周Akt、mTOR蛋白表达明显增高;与模型组比较,LY294002组1、2、4、8周Akt[(8.83±1.47)个/高倍视野vs(12.50±1.87)个/高倍视野,(12.83±2.32)个/高倍视野vs(20.67±4.23)个/高倍视野,(29.00±2.60)个/高倍视野vs(40.33±3.33)个/高倍视野,(24.33±4.32)个/高倍视野vs(35.00±4.15)个/高倍视野]、mTOR蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 Akt和mTOR蛋白在血管性痴呆大鼠海马CA1区过度表达,可能是血管性痴呆发生、发展的重要机制之一。     

补肾柔肝方对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化后CTGF mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF) mRNA的表达影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:♂ Wjstar大鼠40只,随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=15)及治疗组(n=15).模型组和治疗组以10 mg/kg的剂量腹腔注射DMN,每天1次,每周连续3 d,共4 wk_模型组在造模结束后给予生理盐水ig,而治疗组在造模结束后给补肾柔肝方ig进行治疗干预,用药4 wk第8周末处死全部大鼠,用放射免疫试剂盒方法检测血清胶原成分HA、LN及Ⅳ-C的含量;用HE和天狼猩红染色法观察肝组织的炎症及纤维增生情况.并采用RT-PCR半定量方法,探讨大鼠肝组织CTGFmRNA的表达水平.结果:治疗组大鼠一般状态明显好于模型组:正常组大鼠无死亡,模型组死亡率为40%,治疗组死亡率20%.模型组血清胶原成分HA、LN及Ⅳ-C的含量较正常组显著增高,治疗组较模型组显著下降(HA:319.75±63.23 pg/L vs 434.44±98.81 pg/L;LN:44.83±4.09 pg/L vs 70.67±6.32 pg/L:Ⅳ-C:52.79±5.71 pg/L vs 79.39±10.52 pg/L,均P<0.01).DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化,模型组肝组织CTGF mRNA表达明显增强,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱(CTGF/β-actin:0.76±0.10 vs1.08±0.17,P<0.01),而正常对照组表达较少.结论:CTGF mRNA的表达可能与肝纤维化的发生密切相关,中药复方补肾柔肝方具有较好的抗肝纤维化作用,可以显著抑制大鼠肝组织CTGF mRNA的表达.     

复方中药安胃汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠TGF-α、COX-2mRNA表达的影响

目的:探讨复方中药安胃汤对实验性慢性萎缩性胃炎大鼠模型TGF-α mRNA、COX-2mRNA表达的影响.方法:采用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)慢性萎缩性胃炎大鼠模型,36只清洁级健康雄性Wistar大鼠随机分为病理模型组、安胃汤组、胃复春对照组,共3组.实时定量PCR方法观察复方中药安胃汤对实验性慢性萎缩性胃炎大鼠模型胃黏膜TGF-α、COX-2 mRNA表达的影响,对后者进行图像分析及统计学处理.结果:与病理模型组相比,复方中药安胃汤组和胃复春对照组均显著提高TGF-α mRNA/β-actin值(A值:1.54±0.27 vs 0.78±0.08,1.30±0.15 vs 0.78±0.08,P<0.01),复方中药安胃汤组优于胃复春对照组(P<0.05).与病理模型组相比,复方中药安胃汤组和胃复春对照组均显著降低COX-2 mRNA/β-actin值(A值:0.36±0.04 vs 0.72±0.13.0.46±0.06 vs 0.72±0.13,P<0.01),安胃汤组优于胃复春对照组(P<0.05).结论:复方中药安胃汤可能通过增加胃黏膜TGF-α mRNA表达,降低胃黏膜COX-2 mRNA表达而起到治疗CAG作用.     

mTOR与JNK信号通路在人结肠癌HT-29细胞中的作用及相互关系

目的:探讨mTOR和JNK信号通路在结肠癌中作用及可能的相互作用关系.方法:免疫方法检测p-mTOR及p-JNK在结肠癌组织和正常结肠组织中的表达情况.体外培养人结肠癌细胞株HT-29细胞,转染mTOR siRNA抑制mTOR表达,使用JNK抑制剂SP600125抑制JNK表达.Western blot法分别检测抑制mTOR和JNK后HT-29细胞中p-JNK、p-mTOR蛋白的表达.结果:在人结肠癌组织中p-mTOR和p-JNK表达阳性率分别为60%和56%,且两者阳性表达相关性分析存在正相关性(r=0.480,P<0.01).HT-29细胞株中抑制mTOR信号通路后mTOR siRNA转染组和空白对照组、Control siRNA组比较增殖(A值)明显降低,差异具有统计学意义(0.275±0.033,0.460±0.376vs0.479±0.012,均P<0.01),mTOR siRNA转染组凋亡指数明显高于空白对照组和Control siRNA组,差异具有统计学意义(12.330±1.533,1.000±0.147vs1.667±0.577,均P<0.01).抑制JNK信号通路后可见随着SP600125...     

突触在胃起搏调控胃慢波活动中的作用

目的研究胃窦肌间神经丛中突触素（synaptophysin,Syn）分布及其mRNA和蛋白的表达,探讨突触素在胃起搏机制中的作用。方法通过手术建立Wistar大鼠胃起搏模型（近远端胃各缝制一对电极）,分为起搏组（GES组,n=10）和对照组（n=6）。应用免疫组化染色观察GES组和对照组胃窦间神经丛中突触素分布,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测GES和对照组胃窦肌间神经丛中Syn mRNA和蛋白的表达量,以恒定表达的β-actin作为内参照。分别计算Syn mRNA与β-actinmRNA、Syn蛋白与β-actin蛋白表达积分光密度值的比值（Syn/β-actin）,以反映组织中Syn mRNA和蛋白的相对表达量。结果与对照组相比,GES组肌间神经丛中Syn免疫反应阳性产物分布显著增多（806.421±342.135vs448.3±261.467,P〈0.05;0.019±0.008vs0.010±0.005,P〈0.05）。RT-PCR研究显示GES组Syn mRNA表达显著强于对照组,GES组syn/β-actin比值明显较对照组增加（0.146±0.0 28vs0.082±0.025,P〈0.05）;Western blot研究显示GES组Syn蛋白表达也较对照组明显增强,两组Syn/β-actin比值比较差异有统计学意义（0.502±0.098vs0.298±0.018,P〈0.05）。结论胃起搏后胃肌间神经丛内突触素分布增多,突触素mRNA和蛋白表达量明显增加,表明胃窦肌间神经丛内突触可能在胃起搏中发挥了重要作用。     

枳实消痞丸对大鼠上消化道CCK及CCK-A受体mRNA表达的影响

目的:探讨枳实消痞丸方对大鼠胃及十二指肠黏膜胆囊收缩素及其A受体基因表达的影响.方法:♂Wistar大鼠20只,分为对照及用药组,每组10只.分别以1.5mL生理盐水及枳实消痞丸方水煎制剂灌胃4wk.处死后取材,用RT-PCR法检测十二指肠黏膜CCKmRNA及胃底、胃窦肌肉组织CCK-A受体mRNA表达水平,并以同管所扩β-actin作为内参照进行半定量比较.结果:中药组大鼠十二指肠黏膜CCKmRNA及胃底CCK-A受体mRNA的表达水平明显较对照组降低(1.13±0.26vs0.67±0.10,P<0.001;7.30±2.61vs3.37±1.07,P<0.01),但胃窦部的CCK-A受体mRNA的表达水平明显增高(1.22±0.24vs3.25±1.11,P<0.001).结论:枳实消痞丸方可能通过对CCKmRNA及CCK-A受体mRNA表达水平的影响,从而起到对消化道动力的某些影响及临床上的一些治疗作用.     

健脾理气法对功能性消化不良大鼠的治疗作用及其机制的研究

[目的]观察健脾理气法对脾虚气滞型功能性消化不良(FD)大鼠的治疗作用及其分子生物学机制。[方法]60只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常组,治疗组,对照组,模型组。后3组采用夹尾刺激法制备FD模型,各组分别以0.85%氯化钠、健脾理气中药、0.85%氯化钠、安慰剂灌胃,1周后检测大鼠胃动力,胃窦及血清中钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的含量以及胃窦细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平。[结果]与正常组相比,模型组大鼠胃动力降低,血清及胃窦中CaMKⅡ含量降低,胃窦ERK1/2磷酸化水平降低;经健脾理气中药治疗后,大鼠胃动力明显改善,血清及胃窦中CaMKⅡ含量有所恢复。[结论]CaMKⅡ的表达及ERK1/2的活性与FD存在一定的关系,二者含量和活性的降低可能是FD发病的机制之一;健脾理气法不影响ERK1/2的活性,但可能通过增加CaMKⅡ表达,促进胃动力,达到治疗FD目的。     

电针脑缺血大鼠水沟穴调节微小RNA-328促进血管新生的机制研究

目的观察电针脑缺血大鼠水沟穴对缺血半暗带区血管新生及微小RNA(miR-328)、CD44mRNA和蛋白表达的影响,探讨电针脑缺血大鼠水沟穴调节miR-328促血管新生的机制。方法 SD雄性大鼠80只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组各5只。Longa法评估各组大鼠神经功能缺损,免疫组织化学染色法观察CD34变化,实时荧光定量PCR技术检测miR-328、CD44mRNA表达水平,Western blot技术检测CD44蛋白表达水平。结果假手术组与正常组大鼠在神经功能缺损、CD34为标记的血管新生、miR-328和CD44表达无差异(P0.05)。与假手术组比较,模型组神经功能缺损、血管新生、miR-328、CD44表达明显增加(P0.01);与模型组比较,电针刺组神经功能缺损程度改善[(2.6±0.6)分vs(3.4±0.6)分,P0.01],血管新生增加显著[(80.40±3.85)vs(67.60±2.79)分,P0.01],miR-328 1.22±0.37 vs 2.02±0.22和CD44mRNA 4.35±1.33 vs 7.16±1.83,CD44蛋白0.42±0.04 vs 0.55±0.06表达降低(P0.05,P0.01)。结论电针水沟穴可通过调节miR-328及靶基因CD44表达水平,促进缺血半暗带区的血管新生。     

甘草酸二铵对溃疡性结肠炎大鼠M30表达的影响

目的:观察甘草酸二铵(diammonium glycyrrhi-zinate,DG)对2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trin-itrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效及其对大鼠结肠组织M30及Fas/FasL蛋白表达的影响,继而从细胞凋亡方面探讨DG治疗大鼠UC可能的作用机制.方法:♀Wistar大鼠30只,随机分为正常对照组、模型组和DG组,每组10只.用TNBS/乙醇灌肠法复制大鼠UC模型,10d后收集结肠标本,观察大鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠大体形态损伤评分和组织学改变,用免疫组织化学法观察大鼠结肠黏膜中M30及Fas/FasL蛋白的表达.结果:与正常对照组相比,DG组、模型组DAI评分、结肠大体形态损伤评分和组织学损伤评分均显著增高(7.06±0.80vs0.32±0.14;6.03±0.61vs0.19±0.16;5.84±0.53vs0.22±0.11,P<0.01);而与模型组相比,DG治疗组能显著改善UC症状(3.33±0.27vs7.06±0.80;3.29±0.36vs6.03±0.61;2.98±0.24vs5.84±0.53,P<0.05).模型组大鼠M30及Fas/FasL蛋白表达水平明显高于正常组(5.76±0.66vs0.42±0.18;26.62±4.20vs10.81±2.20;17.11±3.12vs6.02±1.02,P<0.01);与模型组相比,DG治疗组M30及Fas/FasL蛋白表达显著降低(2.24±0.48vs5.76±0.66;17.23±3.20vs26.62±4.20;11.02±2.12vs17.11±3.12,P<0.05).结论:DG对TNBS诱导的大鼠UC有较好的疗效,DG通过下调Fas/FasL的表达抑制结肠上皮细胞的凋亡,这可能是其减轻结肠黏膜损伤的机制之一.     

大承气汤动物含药血清对Cajal间质细胞三磷酸肌醇受体表达的影响

目的:探讨大承气汤含药动物血清对大鼠胃肠Cajal间质细胞(ICC)三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的影响.方法:制备大承气汤含药动物血清,作用于Wistar大鼠空肠ICC细胞,然后RT-PCR检测空白培养液组、含药血清高浓度组(100%含药血清DMEM-F12培养液)及低浓度组(20%含药血清DMEM-F12培养液)IP3R受体表达变化.结果:大鼠空肠ICC细胞3型IP3R均有表达,含药动物血清组较正常血清组明显增加(均P<0.05),高浓度组较低浓度组有显著差异(IP3R1/β-actin:1.0124±0.129 vs 0.625±0.075;IP3R2/β-actin:0.813±0.098 Vs 0.476±0.031;IP3R3/β-actin:0.924±0.113 vs 0.583±0.046,均P<0.05).结论:大承气汤动物含药血清可显著增强大鼠小肠ICC IP3R表达,并存在量效依赖关系.     

电针对高脂喂养大鼠主动脉内皮细胞JNK蛋白的影响

目的观察电针对高脂喂养大鼠主动脉内皮细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组8只。空白组予普通饲料喂养,模型组与电针组予高脂饲料喂养。造模8 w后,空白组、模型组继续如前喂养不进行干预,电针组予针刺双侧内关、三阴交、足三里及肾俞,双侧足三里及三阴交加电。干预4 w后,用葡萄糖氧化酶法、ELISA及Western印迹检测并比较各组大鼠空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)、稳态模型评价的胰岛素抵抗(IR)指数(HOMA-IR)以及主动脉内皮细胞JNK蛋白的表达及其磷酸化水平。结果与模型组比较,电针组FPG、FINS、HOMA-IR均显著降低(P0.01),而与空白组比较差异不显著(P0.01);与模型组相比较,电针组的JNK蛋白表达及其磷酸化水平显著降低(P0.01),与空白组比较差异不显著(P0.01)。结论电针治疗能调节血管内皮细胞JNK蛋白表达及其磷酸化水平,使其降至正常水平,从而改善IR大鼠的IR状态,增强IR大鼠胰岛素的敏感性。     

线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制

目的探索线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito KATP)开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制。方法选取40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(不造模且不给予二氮嗪药物干预)、假手术组(仅切皮不进行造模手术)、模型组(制作冠心病大鼠模型,但不给予二氮嗪药物干预)和药物组(制作冠心病大鼠模型,给予二氮嗪药物3 mg/kg干预),每组10只。利用实时荧光定量聚合酶链式反应及Western blotting实验测定各组血管生成因子[成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)]m RNA及相关蛋白的表达量,同时比较各组大鼠细胞内的乳酸脱氢酶、线粒体膜电位(MMP)和细胞死亡率。采用SPSS 22.0软件进行数据处理。组间比较采用方差分析或者t检验。结果与模型组相比,药物组大鼠FGF-2[(100. 21±12. 33)×103vs (120. 43±10. 33)×103IU]与VEGF [(163. 31±9. 33)×10~3vs (181. 33±11. 13)×10~3IU]m RNA转录水平、FGF-2 [(0. 69±0. 33) vs (1. 32±0. 33)与VEGF [(0. 68±0. 33) vs (1. 20±0. 13)]表达水平、乳酸脱氢酶[(49. 32±3. 51) vs (156. 12±10. 18) U/L]表达均显著降低(P 0. 05)。与模型组相比,药物组细胞死亡率显著降低[(30. 32±3. 48)%vs (66. 12±3. 23)%],而荧光强度显著增加[(780. 12±9. 20) vs (220. 24±6. 15),P0. 05]。结论 mito KATP通道开放剂可通过促进冠心病大鼠血管FGF-2和VEGF增加,增强乳酸脱氢酶活性,降低MMP、细胞死亡率和冠心病大鼠心肌氧化应激损伤。     

急性胰腺炎大鼠肺组织中水通道蛋白-1的表达及功能

目的:研究水通道蛋白-1(AQP-1)在急性胰腺炎大鼠肺组织中的表达及其功能,探讨其表达与肺损伤的关系.方法:将Wistar大鼠分为假手术组(n=24)、肺损伤组(n=24)、地塞米松治疗组(n=24).采用逆行胰胆管注射15 g/L去氧胆酸诱发大鼠急性胰腺炎肺损伤模型,地塞米松组于造模后立即于尾静脉注射地塞米松2 mg/kg.每组分别于造模后4,8,12 h剖杀,取血及肺组织.通过检测血淀粉酶、血气、肺干/湿比值和肺组织病理切片判断胰腺炎及肺损伤的严重程度,放免法测血清TNF-α水平,RT-PCR检测肺组织AQP-1 mRNA的表达,免疫组化法检测肺组织AQP-1的表达.结果:与假手术组相比,胰腺炎肺损伤组血清淀粉酶、肺干/湿比值、TNF-α、肺组织病理损害程度明显升高,血氧、AQP-1mRNA(4 h:0.403±0.018 vs 0.794±0.015,P＜0.01;8 h:0.382±0.025 vs 0.812±0.032,P＜0.01;12 h:0.361±0.016 vs 198±5,P＜0.01)和AQP-1蛋白(4 h:104±4 vs 193±8,P＜0.01;8 h:96±5 vs 201±7,P＜0.01;12 h:94±3 vs198±5,P＜0.01)表达显著下调.与肺损伤组相比,地塞米松组血清淀粉酶、TNF-α、肺干/湿比值、肺组织病理损害程度明显降低,血氧、AQP-1 mRNA(4 h:0.681±0.031 vs 0.403±0.018,P＜0.05;8 h:0.763±0.013 vs 0.382±0.025,P＜0.05;12 h:0.784±0.032 vs 0.361±0.016,P＜0.05)和AQP-1的蛋白(4 h:145±6 vs104±4,P＜0.05;8 h:152±8 vs 96±5,P＜0.05;12 h:154±4 vs 94±3,P＜0.05)表达则明显升高,且与TNF-α的水平呈负相关性.结论:水通道蛋白-1表达与急性胰腺炎的肺损伤密切相关,其表达可能与TNF-α有关,地塞米松可上调其表达而减轻肺水肿.     

丹酚酸B对肝纤维化大鼠TGF-β1、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察丹酚酸B盐(salvianolic acid B,SA-B)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-β1 (TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响,并探讨SA-B抗肝纤维化的可能机制.方法:♂SD大鼠30只随机分为正常对照组、模型组和丹酚酸B治疗组,以5 mL/L的二甲基亚硝胺(DMN)建立肝纤维化模型,治疗组在造模4 wk后给予SA-B治疗4 wk.应用HE,Masson染色观察肝组织病理纤维化分级,全自动生化分析仪检测ALT、AST和Alb,放免法检测HA和LN,S-P免疫组织化学方法检测TGF-β1、MMP-2和TIMP-2蛋白质的表达.结果:与模型组相比,SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构,治疗组血清ALT、AST、HA和LN水平明显减低(87.0±28.7 U/L vs 190.4±27.4 U/L.85.6±25.3 U/L vs 178.2±15.9 U/L,179.7±32.8 mg/L vs 433.3±86.1 mg/L,135.6±21.1 mg/L vs 224.7±29.2 mg/L,均P<0.01),经SA-B干预后TGF-β1和TIMP-2表达明显下降,与模型组相比有显著性差异(18.53±2.54 vs 12.78±2.65,21.88±3.83 vs 14.69±4.51,均P<0.01),而MMP-2表达水平无明显变化.结论:SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构,可能通过抑制TGF-β1和TIMP-2表达而促进肝纤维化的逆转.