混合系白血病全长基因在AML-M4/M5患者中的突变检测

急性髓系白血病(AML)-M4、M5常有11号染色体异常,定位于11q23的混合系白血病(MLL)基因异常所形成的MLL-PTD和MLL融合基因在该病的发病机理中具有重要作用。但在该类白血病绝大多数未能检测出染色体水平异常,是否存在MLL基因的其他突变?本研究对MLL全长基因的外显子进行了测序分析。选取25例初发核型正常的AML M4、M5患者(排除MLL融合基因和MLL-PTD及M4eo),进行了MLL全长基因的外显子PCR扩增直接测序分析,对发现的突变在基因组DNA水平进行验证。利用Mass Array方法在正常对照样本和AML扩大样本中对发现的点突变进行检测。结果发现,在MLL的RD、PHD、TAD和SET功能域中存在着高频的缺失、插入及多个点突变;同时对照研究正常样本,发现也存在上述的变异,且突变频率无统计学差别(P>0.05)。结论:检测到的MLL基因发生在mRNA水平的缺失、插入和多个点突变,分别是MLL在转录水平的选择性剪接和MLL的单核苷酸多态性,它们共同构成了MLL的遗传多态性;这些MLL基因遗传多态性可能与AML M4、M5的发病不直接相关,对于治疗、预后及其他生物学表型的意义还有待进一步探讨。     

淋巴瘤比较基因组杂交研究

目的评价比较基因组杂交(CGH)技术在淋巴瘤研究中的应用价值。方法采用CGH技术检测20例淋巴瘤患者核型异常,部分病例与核型分析比较。结果20例淋巴瘤患者CGH核型异常检出率为60%。8例进行常规核型分析的患者,CGH检测出4例常规核型分析未发现的异常。8例弥漫大B细胞淋巴瘤5例发现染色体拷贝数改变,其中3例发现13号染色体长臂扩增。5例滤泡性淋巴瘤中3例分别检测出7q11-21和15q11-14扩增和18号三体。4例小淋巴细胞淋巴瘤中1例6q16-25缺失,1例发现复杂核型异常:1p21-23扩增伴有2p12-ter,9p13-ter,10p13-ter缺失。结论淋巴瘤患者存在多种染色体异常,CGH是一有用的分析淋巴瘤核型异常的分子细胞遗传学工具。     

染色体3q21q26畸变的特征分析

为了探讨inv（3q）（q21q26）和t（3;3）（q21;q26）畸变的细胞遗传学特征和临床特征及预后,收集临床病例并将患者的骨髓细胞24小时培养,常规方法制备染色体,G显带进行核型分析。结果表明：单纯inv（3q）和t（3;3）畸变少见,它们常合并-7/7q-、t（9;22）等其它染色体异常。涉及的疾病有骨髓增生异常综合征、急性髓系白血病以及慢性髓系白血病急变期。2例急性髓系白血病M5患者经多疗程化疗未获完全缓解,2例异基因造血干细胞移植患者均复发。结论：3q21q26畸变常合并预后差的染色体异常单体7/7q-,对这些患者常规治疗效果差,移植效果差,具有inv（3q）和t（3;3）畸变的患者预后不良,生存时间短。     

淋巴瘤比较基因组杂交研究

目的评价比较基因组杂交（CGH）技术在淋巴瘤研究中的应用价值。方法采用CGH技术检测20例淋巴瘤患者核型异常，部分病例与核型分析比较。结果20例淋巴瘤患者CGH核型异常检出率为60％。8例进行常规核型分析的患者，CGH检测出4例常规核型分析未发现的异常。8例弥漫大B细胞淋巴瘤5例发现染色体拷贝数改变，其中3例发现13号染色体长臂扩增。5例滤泡性淋巴瘤中3例分别检测出7q11-21和15c11-14扩增和18号三体。4例小淋巴细胞淋巴瘤中1例6q16—25缺失，1例发现复杂核型异常：1p21—23扩增伴有2p12-ter，9p13-ter，10p13-ter缺失。结论淋巴瘤患者存在多种染色体异常，CGH是一有用的分析淋巴瘤核型异常的分子细胞遗传学工具.     

AML/MDS中复杂异常核型的研究进展

复杂异常核型AML/MDS因其较高的发生率和恶劣的预后越来越引起人们的重视.应用多色荧光原位杂交/光谱核型分析和比较基因组杂交等分子遗传学技术揭示了其细胞遗传学特征:在各种染色体异常中,不平衡易位较平衡易位多见,结构异常较数目异常多见,尤以不平衡易位导致染色体物质的缺失为主,增加次之.5q、7q和17p为最常涉及的缺失区域,其次为18q、12p和16q的缺失.11q、1p、8q和21q等为最常见的增加区域.数目异常中染色体三体较单体多见.分子水平研究表明,复杂异常核型AML有着独特的基因表达谱,并受基因剂量的影响.因此,该类白血病有着独特的生物学特性,已成为白血病中的一个特殊亚群.本文就近年来AML/MDS中复杂异常核型的研究进展作一综述.     

53例多发性骨髓瘤细胞遗传学研究

为了探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)及部分分子细胞遗传学特点,应用常规R显带方法,对53例MM患者进行染色体核型分析,并对其中20例患者采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术进行分子细胞遗传学分析。结果显示:53例MM患者染色体异常检出率为32.1%,其中涉及3种及3种以上染色体异常的占82.4%,染色体众数从44到90条不等。染色体核型异常涉及所有24条染色体,其中涉及1q21扩增、13q14缺失,17p13缺失及14q32易位中至少1种染色体异常的占70.6%,同时发现t(11;16)(p11;p13)等一些不常见的结构异常;还有一些在急慢性白血病中经常见到的异常。FISH检测结果显示:12例染色体核型正常的MM患者中有3例FISH检测阳性;8例染色体核型异常的患者中有5例FISH检测阳性。结论:大部分MM患者染色体异常核型比较复杂,具有明显的异质性;FISH分析可提高异常的检出率,但有局限性;常规细胞遗传学检测与FISH技术相结合可提高染色体异常的识别能力,有助于进一步认识和掌握MM细胞遗传学的特点,为临床诊断及治疗MM提供帮助。     

联合间期和中期荧光原位杂交确定成人急性白血病患者11q23/MLL异常

目的 探讨快速、敏感、有效揭示11q23／MLL基因重排的方法，确定11q23／MLL异常存成人急性白血病（AL）中的发生情况及其临床特征，指导AL风险治疗。方法112例成人AL患者骨髓细胞经24h短期培养按常规方法制备染色体标本，R显带行核型分析；LSIMLL双色分离信号DNA探针行间期荧光原位杂交（FISH）筛选异常信号，有异常信号者行中期FISH确定11q23／MLL基因重排。结果 112例AL患者FISH揭示9例11q23／MLL易位（检出率8．0％），其中常规细胞遗传学分析（CCA）只检出4例（检出率3．6％）。3例CCA示del（11）（q23）者FISH揭示2例为11q23／MLL易位，1例为11号染色体长臂末端缺失。在1例正常核型、1例11q＋和1例无11q23明显异常者，FISH揭示为11q23／MLL易位。除9例易何外，FISH揭示8例存在MLL基因扩增，包括多倍体、均匀染色区（hsr）和双微染色体（dmin）。AL伴11q23／MLL异常者多诊断为B系祖细胞急性淋巴细胞白血病（pro-B ALL）、急性单核细胞白血病（AMoL）或急性双表型白血病（BAL）。结论 使用MLL双色分离信号DNA探针行FISH确定11q23／MLL异常是快速敏感的方法，其检出率高于CCA，有效揭示11q23／MLL易位和扩增。临床诊断pro-B ALL、AMoL或BAL，尤其正常核型者应行FISH以确定11q23／MLL异常。     

间期荧光原位杂交技术检测恶性血液病的11q23/MLL基因重排

目的分析伴有11q23／MLL基因重排的恶性血液病的细胞遗传学特点，探讨荧光原位杂交技术（FISH）在诊断及鉴定恶性血液病11q23／MLL基因重排中的价值。方法用间期FISH分析11q23／MLL基因易位细胞的30例恶性血液病患者的核型特征，用MLL双色分离探针绿色标记在（5′MLL，光谱绿）和（3′MLL，光谱桔红）。结果应用常规细胞遗传学及间期FISH分析白血病患者30例，结果显示11q23＋／MLL＋患者9例（30．0％），12q23-／MLL＋患者4例（13．3％），11q23＋／MLL-患者2例（6．7％），11q23-／MLL-患者15例，检测到部分病例染色体核型分析与间期FISH方法检测11q23异常与MLL基因重排不一致。结论FISH在检测11q23／MLL基因重排方面与传统的常规细胞遗传学相比具有检出率高的优势，能更有效、直观地分析恶性血液病的染色体异常，对于恶性血液病的诊断以及异常染色体的检出具有广泛的应用前景。     

混合谱系白血病基因部分串联重复在急性髓细胞白血病中的研究进展

混合谱系白血病(MLL)基因位于第11号染色体长臂2区3带(11q23),其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复(MLL-PTD)为MLL基因重排中最为常见的形式之一,主要存在于核型正常及具有第11号染色体三体的急性髓细胞白血病(AML)中.作者拟就MLL基因结构、功能、MLL-PTD在AML发生、发展中的作用机制,及其可作为AML潜在治疗靶点等方面进行综述.     

荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常

目的 :探讨荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)诊断和预后评估中的价值。方法 :采用RB1(13q14.1)、D13S25(13q14.3)、p53(17p13.1)、ATM(11q22.3)及CSP12 5组探针对93例初诊CLL患者进行检测,同期进行常规染色体核型(conventional cytogenetics, CC)分析。分析FISH检测出的遗传学异常与患者的临床Binet分期、Rai分期及其他检测指标的相关性。结果 :93例初诊CLL患者分子遗传学异常检出率为79.6%(74/93),其中13q缺失(13q-)阳性率最高,占45.2%;其次为12号染色体三体(+12)占26.9%、p53缺失(17p-)占19.4%、ATM缺失(11p-)占17.2%。同时伴有2种及2种以上染色体异常患者27例(29.0%),其中13q-伴17p-者8例, 13q-伴11q-者5例, 13q-伴+12者4例。CC检测结果相比较, FISH检测结果中患者的阳性率非常显著高于CC检测结果(χ2=32.127, P0.01)。FISH检测结果与Rai分期没有显著相关性(P0.05),伴17p-的CLL患者Binet分期更晚(P=0.012)。各分子遗传学异常与患者年龄、外周血淋巴细胞计数绝对值和CD38表达水平之间均无显著相关性(P0.05)。女性患者13q-的发生率(65.4%)显著高于男性患者(37.3%)(P=0.015);17p-患者IGHV未突变(U-IGHV)的比例显著高于17p-阴性患者(P=0.013);29.0%的患者表达CD38,且与临床分期及U-IGHV呈显著相关(P值分别为0.027及0.006)。结论 :FISH技术能够大大地提高CLL患者分子遗传学异常的检出率,是常规细胞遗传学有力的补充,对CLL患者的临床分期及预后判断均有重要的应用价值。     

AML-MRC患者遗传特征及预后特点分析

目的:探讨急性髓系白血病伴骨髓增生异常相关改变(AML-MRC)患者的遗传特征及其预后特点。方法:选取近5年到宁波市第一医院就诊的非M3 AML患者230例,其中58例初发AML-MRC患者,对其进行随访并用SPSS 25.0软件进行相关统计分析。结果:共有49例患者进行了染色体检测,29例(59.2%)染色体异常,其中7q-8例(16.3%),5q-6例(12.2%),17p异常5例(10.2%),高度异常的复杂核型(CK)(≥5个无关染色体异常)13例(26.5%),CK中包含有+8、5q-等染色体异常,单体核型(MK)12例(24.5%)。37例患者进行了基因检测,24例(64.9%)存在基因突变,其中ASXL1突变8例(21.6%),TET2突变6例(16.2%)。Kaplan-Meier分析显示,伴有高度CK(P=0.012)、5q-(P=0.038)以及TP53突变(P=0.008)的AML-MRC患者总体生存率更差。结论:AML-MRC具有独特遗传学特征,高度CK、5q-及TP53突变是影响患者预后的不良因素。     

利用微阵列比较基因组杂交技术检测多发性骨髓瘤的遗传学异常

目的:利用微阵列比较基因组杂交技术分析初诊多发性骨髓瘤(MM)患者的遗传学异常,探讨其在MM遗传学异常检测中的应用价值。方法:对20例初发MM患者,利用CytoScan 750K芯片对其骨髓细胞进行全基因组拷贝数变异分析;另外通过骨髓细胞染色体核型分析及利用多个荧光探针(D13S319、RB1、p53、1q21、IgH、IgH/CCND1、IgH/FGFR3、IgH/MAF、IgH/MAFB)FISH检测骨髓细胞的染色体异常。结果:20例MM患者中,染色体核型异常者3例(15%);FISH检测染色体异常13例(65%),而芯片检出18例(90%)患者具有染色体拷贝数异常(CNV),包括拷贝数增加(106个)、拷贝数缺失(156个)以及单亲二倍体(23个),除了5号、9号、18号、21号以及Y染色体未发现CNV外,其余染色体上均包含不同数量的拷贝数增加和/或缺失。FISH和芯片检测比较显示,13号染色体缺失(D13S319、RB1)发生率分别为35%(7/20)和40%(8/20);1q21扩增分别为40%(8/20)和50%(10/20);P53缺失均为15%(3/20);FISH检出IgH重排阳性8例,芯片检出4例11q13(CCND1基因)扩增,3例16q23(MAF基因)扩增,1例4p16(FGFR3基因)扩增,2例20q12(MAFB基因)扩增。另外,芯片还可以发现了新的如7号、8号、12号、X等染色体异常。结论:半数以上MM患者都存在染色体改变,而且大部分均为复杂异常,利用微阵列芯片可以提高染色体异常的检出率,为MM预后判断提供更多的分子遗传学信息。     

一例伴有t(6;11)(q27;q23)的急性单核细胞白血病患者的遗传学研究

涉及 11q2 3的染色体易位是急性白血病患者最常见的核型改变之一 ,该类易位达 5 4种以上。t(6 ;11) (q2 7;q2 3)是其中较为常见的一种 ,但由于易位片段过小 ,往往难以被常规核型检测所发现或仅表现为 11q2 3的缺失。近来我们发现 1例携带该异常染色体的急性单核细胞白血病 (M5)患者 ,虽然化疗后骨髓获得完全缓解 (CR) ,但迅速复发 ,出现17号染色体短臂部分缺失 (17p - )的核型演变 ,荧光原位杂交 (FISH)证实有 p5 3基因缺失。接受异基因骨髓移植后获得CR2 ,但不久即死于再次复发。病例和方法1　病例患者 ,男 ,37岁 ,因发热、乏力 1个月…     

不典型慢性粒细胞白血病8例的形态学及细胞遗传学特征分析

目的：探讨不典型慢性粒细胞白血病细胞形态及染色体特征。方法：对8例不典型慢性粒细胞白血病患者的骨髓细胞形态学及细胞遗传学资料进行回顾性分析。结果：本组患者粒系病态造血明显,3例有多系发育异常。异常核型检出率50％,累及的染色体异常有＋8、inv（3）（p26q23）以及12p、20q、9q和13q的缺失。结论：不典型慢性粒细胞白血病细胞形态谱广,无复杂和特异性的染色体异常。     

荧光原位杂交技术检测骨髓增生异常综合征患者5、7、8号染色体异常及临床意义

目的用荧光原位杂交（FISH）技术分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者的染色体改变及预后。方法用常规细胞遗传学分析和FISH法分析37例MDS患者8、5、7号染色体的异常变化。用SPSS11．5统计软件，对患者的遗传学异常与疾病转归、预后之间关系进行相关性检验。结果检出染色体异常21例（56．8％），其中复杂异常6例（16．2％），8号染色体异常9例（24．3％），-5／5q-异常2例（5．4％），-7／7q-异常2例（5．4％）。平均随访12个月，1例失访，22例存活，14例死亡，12例转变为急性白血病。复杂核型与MDS的急性白血病转化及死亡密切相关；8号染色体三体和-7／7q-与死亡相关。结论FISH能敏感地检测出小克隆的异常，应用多种探针并结合染色体检测能较准确判断MDS患者的预后，异常核型比例高提示预后差。     

染色体核型分析在骨髓增生异常综合征中的应用

目的 探讨染色体核型分析在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断、预后评估中的价值.方法 对112例MDS患者的染色体核型情况进行回顾性分析.结果 112例MDS中,染色体核型异常者57例,占50.9%,主要累及 8,-7/7q-,-5/5q-,-y,20q-及其它涉及数量或结构异常的各种核型改变,其中-7/7q-和复杂核型异常的MDS易发生克隆转化,易进展为急性白血病;5例初诊为良性血细胞减少的患者经染色体核型分析,发现有克隆性细胞遗传学异常,最终确诊为MDS.结论 染色体核型分析在MDS诊断、预后评估方面具有重要价值,特别在原始细胞比例不高、病态造血不明显的MDS-RA或MDS-RCMD时,核型分析对疾病的诊断及预后估计起决定作用.     

多重RT-PCR技术联合染色体核型分析在儿童急性淋巴细胞白血病诊断分型中的应用

目的　研究多重逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术联合染色体核型分析在急性淋巴细胞白血病 (ALL)诊断分型中的价值。方法　采用多重RT PCR技术 ,染色体R或G显带技术对 5 0例儿童ALL进行分析。结果　 5 0例ALL患儿中 18例 (36 .0 % )分别具有 11种融合基因 ,包括E2A/PBX1、TEL/AML1、TLS/ERG、MLL/AF4、MLL/AF9、MLL/AF10、MLL/AFX、MLL/AF6、MLL/ELL、TAL1D、HOX11。在接受染色体检查的 4 8例ALL患儿中 ,染色体异常有 2 4例 (5 7.1% ) ,其中染色体数目和缺失异常为 18例 ,染色体易位 6例。多重RT PCR和核型分析联合使ALL的遗传学异常检出率增至 70 % (5 0例中 35例 )。结论　多重RT PCR和染色体核型分析两种方法相结合 ,可以相互补充 ,从而提高了ALL患儿遗传学异常的检出率 ,为儿童ALL的诊断、分型和预后判断提供可靠依据。     

伴骨髓侵犯弥漫大B细胞淋巴瘤的细胞遗传学异常及其与预后的关系

目的:探讨伴有骨髓侵犯的弥慢大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的常见细胞遗传学异常,以及这些遗传学异常对患者预后的影响。方法:回顾性分析本院具有完整细胞遗传学资料的47例伴骨髓侵犯DLBCL患者的骨髓染色体核型结果,分析其特征以及与预后的关系。结果:47例患者中25例检测出核型异常(53%),以复杂核型异常(≥3种异常)为主(19例,占40%)。异常核型最常累及的染色体为1和18号染色体(均为26%),其次分别为3号染色体(23%),6号染色体(19%),7、8和14号染色体(3者均为13%)。染色体异常的类型方面,最常见的数量异常为+3(13%),其次为+5、+7、+12、+18和-21(均6%),最常见的结构异常为1q+(17%),其次为1p+、2p21-p23异常、6q-、8q+、14q+、18p+和18q+(均6%)。预后影响分析发现IPI≥3分(P=0.03)和染色体核型异常(P=0.005)对无进展生存(PFS)有显著不利影响,IPI≥3分(P=0.024)、LDH高于3倍正常上限(P=0.027)和染色体核型异常(P=0.001)对总生存(OS)有显著不利影响。多因素分析显示,仅染色体核型异常是PFS(P=0.037,HR 2.323)和OS(P=0.015,HR 2.833)的独立不良预后因素。进一步分析核型异常的类型对预后的影响结果发现,1q+,8q+,+12,12q+,18p+和2p21-23异常对PFS有显著不良影响,1q+,+3,+5,+7,8q+,+12,12q+和2p21-23异常对OS有显著不利影响。综合临床特征及上述核型异常类型进行多因素分析结果表明,8q+(P=0.022,HR 2.701)和IPI≥3分(P=0.043,HR 2.949)对PFS有显著不利影响,1q+(P=0.032,HR 2.973)对OS有显著不利影响。结论:骨髓受累的DLBCL患者中,合并细胞遗传学异常的患者生存期更短,是其独立的不良预后因素,其中8q+和1q+分别是PFS和OS的独立不良预后因素。     

伴有t（2；21；8）（p12；q22；q22）急性髓系白血病M2的MICM特征与诊断的探讨

本研究应用形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学（MICM）分型技术联合检测伴有复杂变异核型t（2;21;8）（p12;q22;q22）的急性髓系白血病（AML—M2）,并探讨其特征及诊断意义。取患者骨髓涂片行瑞氏-姬姆萨染色和细胞化学染色进行骨髓细胞形态学FAB分型;流式细胞术（FCM）检测白血病细胞免疫表型;新鲜骨髓细胞短期培养法常规制备染色体标本,RHG显带技术进行核型分析,采用双色双融合AML／ETO探针及全染色体涂染（CP）探针检测有丝分裂中期荧光原位杂交（FISH）信号,并与常规R显带细胞遗传学检测结果进行比较分析,巢式RT—PCR检测AML1-ETO融合转录本。结果表明：病例1原始粒细胞伴嗜酸粒细胞及单核细胞比例增高;病例2符合以异常中幼粒细胞增高为主的AML—M2b;染色体核型分析结合FISH检测证实两例患者均存在t（2;21;8）（p12;q22;q22）复杂核型;AMLL／ETO融合基因转录本阳性,免疫表型显示CD34和HLA—DR共表达,伴CD19和cD56表达。结论：应用WHO提出的细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学技术（MICM）联合检测的实验室诊断方法对准确诊断复杂变异核型t（2;21;8）（p12;q22;q22）AML的分型具有重要意义。     

儿童急性髓系白血病基因拷贝数变异的临床研究

目的:研究儿童急性髓系白血病(AML)中基因拷贝数变异的发生率及其与临床特征及预后的相关性。方法:回顾性分析130例AML患儿临床资料,包括临床特征、FAB分型及细胞遗传学改变等。收集130例AML患儿和38例健康志愿儿童的骨髓或外周血,常规提取基因组DNA。应用多重连接探针扩增法(MLPA)检测多个基因拷贝数变异的情况。利用SPSS16.0软件进行统计学分析。结果:在130例患儿中,超过10%的拷贝数变异涉及的染色体区段为2p24.3(MYCN)、10q23(PTEN)和13q14(RB1,MIR15A,DLEU);在49例(37.7%)患者中检测到基因探针的扩增和缺失,涉及改变的基因探针个数的中位数为4个。TP53探针发生缺失/扩增的患儿复发率高。各探针发生缺失/扩增对EFS、DFS及OS均无影响。12%的患儿存在基因组异常,用常规染色体核型的方法不能检出。结论:MLPA技术可作为染色体核型检测的补充。TP53拷贝数异常的儿童AML患者易发生复发。