天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃。采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10%含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP+共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性。结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加。与模型组比较,10%的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10%的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关。     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞凋亡的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法 H2O2诱导PC12细胞凋亡,构建氧化损伤神经细胞凋亡模型。实验分为正常对照组、模型组及中药低、中、高剂量组,中药各组给予不同剂量当归红芪超滤膜提取物。流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位变化,Western blot检测Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达。结果与模型组比较,中药各剂量组细胞凋亡率明显降低,线粒体膜电位升高,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达均减弱,Bcl-2表达增强,Bcl-2/Bax比值升高(P0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物具有抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡的作用。     

丹酚酸B对谷氨酸诱导的 PC12 细胞兴奋毒保护作用的研究

目的:研究丹酚酸B对谷氨酸诱导PC12细胞兴奋毒的保护及作用机制。方法:以谷氨酸损伤PC12细胞24 h为模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率;LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率;AO/EB双染法荧光显微镜和PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:丹酚酸B可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞的损伤,阻止细胞LDH的释放,在50～200μmol.L-1剂量呈一定的量效关系;同时,丹酚酸B明显降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,抑制谷氨酸引起的ROS的累积,降低PC12细胞的凋亡率,在50～200μmol.L-1剂量呈量效相关性。结论:在一定剂量范围内,丹酚酸B对谷氨酸损伤的PC12细胞有保护作用,其保护的机制可能与丹酚酸B减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的凋亡相关。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度;增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的。结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

桂枝茯苓汤对乳腺癌细胞株线粒体凋亡途径相关蛋白和细胞周期的影响

目的:观察桂枝茯苓汤对乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡相关蛋白和细胞周期的影响。方法:将浓度为300μg/m L、900μg/m L的桂枝茯苓汤分别作用MCF-7细胞24 h、48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞仪方法检测MCF-7细胞周期各时向DNA含量的变化,细胞免疫化学方法检测线粒体凋亡通路相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3/9和Bid的表达情况。结果:与空白对照组比较,桂枝茯苓汤各浓度组细胞抑制率明显升高(P0.05),其中G0/G1期细胞DNA含量明显升高(P0.05),桂枝茯苓汤可以降低Bcl-2蛋白的表达,同时可以促进Bax、Caspase-3/9和Bid蛋白的表达。结论:桂枝茯苓汤能体外诱导乳腺癌细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡通路有关。     

银杏叶聚戊烯醇抗Aβ_(25-35)介导dPC12细胞损伤的保护机制

目的:研究银杏叶聚戊烯醇(GP)抗Aβ_(25-35)诱导dPC12细胞损伤的保护机制。方法:以鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆细胞系(PC12细胞)为研究对象,通过LDH比色法检测GP对Aβ_(25-35)处理后dPC12细胞存活率的影响;流式细胞术检测不同浓度GP对dPC12细胞凋亡的影响;应用活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)试剂盒检测Aβ_(25-35)对dPC12细胞的氧化损伤,并研究GP的抗氧化作用及其机制;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3在mRNA水平的表达,并采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3及Cleaved Caspase-3等凋亡相关因子在蛋白水平的表达。结果:GP可显著降低LDH漏出率以及细胞内ROS水平和MDA含量,对dPC12细胞有显著的抗氧化作用,具有显著的量效关系;GP对Aβ_(25-35)引起的dPC12细胞凋亡有一定的抑制作用,以高剂量组作用显著;GP能显著下调Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax mRNA水平,并上调Bcl-2 mRNA水平,Bax/Bcl-2 mRNA比值降低,抑制细胞凋亡;GP能降低Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax/Bcl-2比值,抑制凋亡执行因子Caspase-3活化,从而抑制细胞凋亡。结论:GP可减少Aβ_(25-35)致损伤dPC12细胞的凋亡,其作用可能与其抗氧化作用和抑制细胞凋亡途径激活有关。     

奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用研究

目的探究奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。方法采用谷氨酸损伤PC12细胞建立模型,用MTS法考察奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞存活率的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化。结果谷氨酸造模浓度为12.5 mmol/L,奇壬醇组细胞的存活率高于模型组(P 0.01)。模型组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),奇壬醇组细胞的凋亡率显著低于模型组(P 0.01)。与对照组相比较,模型组caspase-3和Bax蛋白的表达显著升高,Bcl-2蛋白的表达显著降低,而与模型组相比较,奇壬醇组caspase-3和Bax蛋白的表达量显著降低,Bcl-2蛋白的表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。结论谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,而奇壬醇通过抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,发挥其对PC12的保护作用。     

黄芩苷对鱼藤酮致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨黄芩苷对鱼藤酮致PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法:建立鱼藤酮损伤PC12细胞模型,采用终浓度分别为0.1,1,10μmol·L-1的黄芩苷进行药物干预;四氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,并用显微镜观察细胞形态;应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;采用荧光探针二氯荧光素-双乙酸盐(DCF-DA)测定细胞内氧自由基(ROS);采用蛋白免疫印记法检测凋亡信号蛋白Bcl-2,Bax及Caspase-3表达。结果:PC12细胞经1.5μmol·L-1鱼藤酮孵育24 h后细胞活力显著降低,黄芩苷对鱼藤酮所致的细胞损伤呈现剂量依赖性的保护作用;流式细胞术分析表明黄芩苷可明显减少鱼藤酮致PC12细胞凋亡比例;荧光显微镜观察发现黄芩苷能明显减少鱼藤酮损伤PC12细胞ROS含量,免疫印迹实验表明黄芩苷可上调模型细胞Bcl-2及下调Bax表达并减少活化Caspase-3含量。结论:黄芩苷对鱼藤酮诱导的PC12损伤具有保护作用活性,其机制可能与黄芩苷减少鱼藤酮诱导PC12细胞ROS含量,抑制线粒体凋亡通路有关。     

桂枝茯苓胶囊及其主要成分组合物抗子宫肌瘤细胞作用及其机制研究

目的:研究桂枝茯苓胶囊及活性成分组合物(15个成分)对子宫肌瘤细胞抑制作用及其机制。方法:对子宫肌瘤细胞进行原代、传代培养及细胞鉴定。CCK-8法分析桂枝茯苓胶囊及活性成分组合物对人子宫肌瘤细胞抑制作用;检测细胞凋亡、线粒体膜电位、caspase-3活性,采用Western Blot法检测Bcl-2蛋白表达情况。结果:桂枝茯苓胶囊(212μg/ml)及活性成分组合物(48、24μg/ml)对子宫肌瘤细胞增殖有抑制作用。桂枝茯苓胶囊及组合物可诱导人子宫肌瘤细胞凋亡、引起人子宫肌瘤细胞线粒体膜电位的下降、子宫肌瘤细胞中Caspase-3活性明显升高,诱导人子宫肌瘤细胞中Bcl-2下调、Bax上调,Bcl-2/Bax比例下降。结论:桂枝茯苓胶囊及活性成分组合物对子宫肌瘤细胞有明显的抑制作用,其作用机制与诱导人子宫肌瘤细胞凋亡有关,该凋亡诱导作用与线粒体信号通路(膜电位下降、Bcl-2/Bax比率降低、Caspase-3活性增强)有关。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的发生机制。方法分别以1、2、4、8、16μmol/LAs2O3诱导K562细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine123染色流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)变化,ELISA法检测胞浆细胞色素C(CYTC)水平,分光光度法检测Caspase-3活性,流式细胞术检测Bcl-2和Bax表达。结果MTT结果显示As2O3能抑制K562细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4~16μmol/L的As2O3作用24h均可诱导K562细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内CYTC蛋白浓度及Caspase-3活性增高,胞浆Bcl-2/Bax值下降,且均呈剂量依赖性。结论As2O3诱导K562细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax值下降可能与其有关。     

天泰1号对Aβ_(1-40)诱导PC12神经毒性的保护作用及其机制研究

目的:运用血清药理学方法探讨天泰1号含药血清对Aβ_(1-40)诱导PC12 AD细胞模型神经毒性的保护作用及其机制。方法:采用Aβ_(1-40)诱导PC12制备AD细胞模型,给予不同剂量的天泰1号含药血清进行孵育,镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞SOD活力及MDA含量,免疫荧光染色法观察细胞微管相关蛋白2(MAP-2)的表达,RT-PCR检测促凋亡基因Caspase-12 m RNA表达,Westernblot检测Caspase-12蛋白表达。结果:天泰1号3个不同剂量含药血清(2.5 g/kg/d剂量组、5.0 g/kg/d剂量组和10.0 g/kg/d,剂量组)均显著提高Aβ_(1-40)诱导PC12细胞的存活率,增加SOD活性,减少MDA的释放,下调Caspase-12 m RNA和蛋白的表达。结论:天泰1号通过拮抗氧化应激、促进微管生长、抑制细胞凋亡,保护神经细胞,发挥多靶点多途径抗AD作用。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

银杏叶内酯N对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨银杏内酯N抗谷氨酸诱导大鼠PC12细胞损伤的影响及机制。方法:使用谷氨酸建立PC12细胞损伤模型,给予不同浓度银杏内酯N,并以银杏内酯B为阳性对照。采用MTT比色法测定细胞存活率;采用吖啶橙(AO)染色检测银杏内酯N对PC12凋亡的作用;采用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)、线粒体膜电位的影响,采用Western blot检测Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果:银杏内酯N在2~8μmol/L剂量时,可抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡及ROS的升高,稳定受损PC12细胞的膜电位,降低Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:银杏内酯N能拮抗谷氨酸导致的PC12细胞损伤,其机理与减少ROS的生成,稳定细胞膜电位,抑制Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

羟基红花黄色素A对内皮细胞EA.hy926缺氧复氧后凋亡的抑制作用研究

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对缺氧复氧诱导的人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测不同缺氧(8、12 h)、复氧(4、8、12 h)时间对细胞活力的影响以及不同浓度HSYA(0.1、1、10、100μmol/L)对缺氧12 h、复氧8 h后细胞活力的影响。Western blotting法检测HSYA对缺氧12 h,复氧8 h后EA.hy926细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9蛋白表达的影响。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞中Bax、Bcl-2m RNA表达的影响。Hoechest染色、流式细胞术检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞凋亡的影响。结果与对照组比较,缺氧8、12 h,复氧4、8、12 h后EA.hy926细胞活力均显著下降,其中缺氧12 h、复氧8 h后细胞活力下降最为显著(P0.001),且Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著上升、Bcl-2蛋白表达水平显著下降。与模型组比较,HSYA 10μmol/L能够明显提高缺氧复氧后细胞活力(P0.01),并显著上调Bcl-2蛋白表达水平,下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结论 HSYA能有效抑制缺氧复氧导致的EA.hy926凋亡,其机制可能与下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达有关。     

桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探究桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组及桂郁金醇提物高(10 g/kg)、中(5 g/kg)、低(1 g/kg)剂量组,灌胃给药2次/d,连续3 d,最后一次给药1 h后,用10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,制备含药血清。使用不同浓度的H_2O_2诱导HUVEC细胞3 h,建立细胞氧化应激模型,采用CCK-8试剂检测细胞存活率,明确H_2O_2的最适造模浓度为800μmol/L;利用CCK-8试剂进行含药血清对HUVEC细胞及H_2O_2损伤的HUVEC细胞存活率的影响;利用试剂盒检测细胞培养上清液中SOD、GSH-Px、MDA、LDH、NO、t-PA、PAI-1、IL-6、TNF-α水平;采用Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;利用RT-PCR技术检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结果:与模型组比较,各剂量含药血清均能升高细胞存活率,高剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平,降低LDH、MDA、t-PA、IL-6、TNF-α水平及Caspase-3、Bax mRNA表达,升高Bcl-2/Bax比值;中剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平及Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比值,降低LDH、t-PA水平及Caspase-3 mRNA表达;低剂量能升高NO水平,降低t-RA水平及Caspase-3 mRNA表达。结论:桂郁金醇提物含药血清对H_2O_2诱导的HUVEC细胞具有保护作用,其机制可能与升高SOD、GSH-Px活性,降低LDH、MDA含量,升高扩血管因子NO,调节纤溶系统,减少炎症因子含量,减少细胞凋亡,调控Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达有关。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的观察银杏内酯B(GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为5组:对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、GB(50、100和200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。经药物干预16 h后,采用MTT法检测细胞存活率;测定培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞中AKT mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达,计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析,比色法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9活性。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高(P0.01),培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低(P0.05或P0.01),细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);GB干预组细胞凋亡状况明显好转,其中GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞凋亡率显著降低(P0.01),AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01),Bax mRNA表达显著下调(P0.01),Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P0.01),细胞中NF-k B蛋白表达量和Caspase-3、Caspase-9活性显著降低(P0.05或P0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞凋亡具有抑制作用;其作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤,下调NF-κB蛋白表达,上调抗凋亡基因AKT和bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值,降低Caspase-3、Caspase-9活性有关。     

丹参水溶性成分丹参素对A β 25-35损伤的PC12细胞保护作用

目的:研究丹参水溶性成分丹参素对抗Aβ25-35而对PC12细胞的保护作用及其相关作用机制。方法:体外培养PC 12细胞,通过不同剂量Aβ25-35对于PC 12细胞的损伤,CCK8法检测细胞活性,得出20μmol/LAβ25-35作用于PC12细胞24h后作为建立细胞损伤模型,采用40、80、160μmol/L的丹参素对损伤细胞进行干预治疗。分为对照组、模型组、丹参素高、中、低剂量五个组。对LDH、Caspase3、Bcl-2、Bax、TNF-a、NF-κB这几个指标检测。结果:丹参素可以降低LDH、Caspase3、Bax、TNF-a、NF-κB表达,升高Bcl-2表达。结论:丹参素对PC12受Aβ25-35而产生的损伤发挥保护作用,其可能通过抗凋亡途径保护细胞。     

黄芪桂枝五物汤对H_2O_2诱导人脐静脉细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨黄芪桂枝五物汤对H_2O_2诱导人脐静脉细胞(HUVECs)损伤的保护作用及机制。方法 HUVECs分为正常组,模型组,阳性药组(卡维地洛),黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组,各组水提醇沉液培养24 h后加入H_2O_2溶液使终浓度达到400μmol/L)。MTT法检测细胞存活率;检测细胞上清LDH(乳酸脱氢酶)活性,细胞内T-SOD(总超氧化物歧化酶)、NO、GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)、ET-1(内皮素-1)水平;Real-time PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞存活率减低(P0.01);与模型组比较,黄芪桂枝五物汤各组存活率升高(P0.01);LDH活性降低、NO水平升高、T-SOD活力增强、GSH-Px水平升高、ET-1水平降低(P0.05)。Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达增加(P0.05);Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达增加(P0.05)。结论黄芪桂枝五物汤对H_2O_2损伤HUVECs有保护作用,其机制可能与提高内皮细胞T-SOD活性、促进细胞NO分泌、提高细胞内GSH-Px水平,降低细胞内ET-1水平以拮抗氧化应激造成的细胞损伤,调控凋亡相关基因及蛋白Bax、Bcl-2,抑制线粒体凋亡途径有关。     

肿节风总黄酮促进白血病K562细胞凋亡的效应及机制研究

目的:研究肿节风总黄酮促进人白血病K562细胞凋亡的效应及分子机制。方法:用系列浓度的肿节风总黄酮干预K562细胞24、48、72 h后,化学发光法检测细胞活力计算IC_(50),并依此将细胞分为空白对照组、肿节风总黄酮25、50、100μg/mL剂量组进行实验。AO-EB染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:肿节风总黄酮能够明显降低K562细胞存活率,且呈时间和剂量依赖关系,24、48、72 h的IC_(50)分别为(64.90±5.16)μg/mL、(50.60±4.00)μg/mL、(34.90±2.46)μg/mL。与空白对照组相比,50、100μg/mL的肿节风总黄酮明显促进K562细胞凋亡。Western blot实验显示,与空白对照组相比,肿节风总黄酮100μg/mL剂量组Caspase-3蛋白表达显著下调;肿节风总黄酮50和100μg/mL剂量组Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调,Bcl-2的蛋白表达显著下调;Bcl-2/Bax比值明显减小,Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值明显增大。结论:肿节风总黄酮能有效促进K562细胞凋亡,其机制可能与其下调Bcl-2、Caspase-3蛋白,上调Cleaved Caspase-3蛋白的表达有关。