急性髓系白血病患者白血病干细胞WT1基因表达水平及其临床意义

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者WT1基因高表达是否发生在白血病干细胞(LSC)阶段及其意义.方法 采用流式细胞术分选AML患者CD34~+ CD38~- CD123~+细胞,实时荧光定量RT-PCR方法 检测其总WT1、+17AA、+KTS异构体的表达,计算出WT1(+/+)、wT1(+/-)、WT1(-/+)、WT1(-/-)四种异构体的比例,并与来源于正常人和AML患者骨髓的CD34~+ CD38~- CD123~-干细胞比较;同时分析AML患者LSC WT1表达水平与缓解率、生存期的关系.结果 AML患者骨髓CD34~+CD38~-CD123~+细胞WT1相对表达水平最高(0.034±0.034),AML患者骨髓CD34~+CD38~-CD123~-细胞群表达次之,来源于正常人的骨髓CD34~+ CD38~- CD123~- 细胞表达最低,三组之间比较差异有统计学意义(P<0.05);三群细胞中均以+17AA为主,组间比较差异无统计学意义.+KTS异构体比例在正常干细胞中最高,为0.57±0.04,在AML患者CD34~+ CD38~- CD123~- 细胞群中所占比例最低,为0.50±0.12,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种细胞群中四种异构体的表达比例各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05),均以WT1(+/+)为主,WT1(-/-)最少.CD34~+ CD38~- CD123~+ LSC中WT1表达水平与患者性别、年龄、FAB分型及骨髓中原始细胞比例无明显相关性,但AML患者WT1高表达组原始细胞群CD34~+ 细胞比例明显高于WT1低表达组(P<0.01).WT1高表达组患者CR率为21.1%,低表达组CR率为59.1%,差异有统计学意义(P<0.05).对41例患者跟踪随访118(3-290)d,WT1 mRNA高表达组中位生存时间77[95%可信区间(CI)45-108]d,较低表达组中位生存时间158(95% CI 100-215)d短,差异有统计学意义(P= 0.041).结论 AML患者WT1高表达发生于LSC阶段,其异构体比例与正常干细胞比较差异无统计学意义.干细胞阶段WT1高表达常导致患者缓解率低、生存期短.     

CD96和CD123表达与骨髓增生异常综合征患者预后的关系

目的:探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)中CD96和CD123的表达及其与预后的关系。方法:选取经骨髓穿刺和外周血检查确诊为MDS的患者89例作为MDS组,另选取无血液系统疾病者20例作为对照组,对所有受试者进行骨髓穿刺,并提取骨髓中的单个核细胞,对CD34~+CD38~-CD123~+细胞和CD34~+CD38~-CD96~+细胞进行计数。将MDS组患者按照危险度分组,并给予相应治疗措施,观察治疗效果。结果:MDS组患者骨髓单个核细胞中CD34~+细胞和CD34~+CD38~-细胞所占比例显著高于对照组(P0.05),CD34~+CD38~-CD123~+细胞和CD34~+CD38~-CD96~+细胞在CD34~+CD38~-中所占比例显著高于对照组(P0.05),且危险度越高,比例越高;低危-中危1亚组中,CD123~-和CD96~-患者的完全缓解(CR)和缓解率(RR)均显著高于CD123~+和CD96~+患者;中危2-高危亚组中,CD123~-患者的RR显著高于CD123~+患者(P0.05),CD96~-患者的CR显著高于CD96~+患者。结论:MDS患者骨髓单个核细胞内CD34~+细胞分化存在异常,且存在有CD123和CD96高表达的情况,这可能是MDS患者出现造血干细胞恶性克隆的原因。     

WT1高表达及CD34~+和Auer~+与急性髓细胞性白血病患者预后的关系

目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓WT1表达水平的临床意义,了解CD34~+和Auer~+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测92例初诊AML(non-M3)患者骨髓WT1表达水平,分析初次诱导缓解率(CR1)与总生存率(OS)的关系。比较CD34~+和CD34~-以及Auer~+和Auer~-AM L患者在CR1和OS方面的区别。结果:初诊时WT1高表达的AML具有较低的CR1(P0.05)。CD34~+患者的CR1较CD34~-者低(P0.05),Auer~+的AML患者CR1较Auer~-AM L患者高(P0.05)。WT1高表达组的OS低于低表达组,具有显著性差异(P0.05)。CD34~+组的OS低于CD34~-组,且具有显著差异(P0.05),Auer~+组与Auer~-组的OS没有明显差异。结论:AML患者骨髓WT1高表达及CD34~+提示患者的预后不良,Auer小体阳性仅与CR1相关,而与OS无关。     

慢性牙周炎患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞表达

目的探讨外周血单个核细胞CD4~+CD25~+调节性T细胞(Tregulatory, Treg)在慢性牙周炎患者中的表达。方法慢性牙周炎患者40例,其中轻中度组22例和重度组18例;同期31例牙周健康者为对照组。采用流式细胞术检测3组CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg、CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg表达;采用ELISA法测定3组血浆转化生长因子-β(transforming grow factor-β, TGF-β)水平;Pearson法分析CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg与CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg,CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg、CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg与牙周袋探诊深度的相关性。结果轻中度组、重度组CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg[(2.88±1.50)%、(2.52±1.03)%]、CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg表达[(4.42±1.49)%、(3.85±1.02)%]、血浆TGF-β水平[(1 054.18±370.35)、(1 003.78±398.76)ng/L]低于对照组[(3.57±1.11)%、(6.27±1.67)%、(1 296.60±303.17)ng/L](P0.05),轻中度组与重度组比较差异无统计学意义(P0.05);Pearson线性相关分析结果显示,CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg与CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg表达呈正相关(r=0.776,P0.001),CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg、CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg均与牙周袋探诊深度呈负相关(r=-0.333,P=0.005;r=-0.551,P0.001)。结论慢性牙周炎CD4~+CD25~+Treg介导的免疫应答减弱,可能促进疾病的发生、发展。     

t(8;21)急性髓系白血病CD34~-白血病干细胞的确认和特征的体外研究

目的:通过体外实验初步确定t(8;21)急性髓系白血病(AML)中CD34~-白血病干细胞(LSC)的存在。方法:检测初诊t(8;21)AML骨髓样本,在荧光抗体标记后利用流式细胞仪分选出3个细胞群:Lin~-CD34~+CD38~-(简称为CD34~+CD38~-)、Lin~-CD34~+CD38~+(简称为CD34~+CD38~+)及Lin~-CD34~-CD38~-CD45~(dim)SSC~(low)(简称为CD34~-"LSC")。通过Hochest 33342和派洛宁Y(PY)双染色及乙醛脱氢酶(ALDH)活性检测实验比较各细胞群G_0期细胞和ALDH~(br)细胞比例。分选各细胞群后采用实时定量PCR技术检测AML1-ETO和WT1 mRNA水平。结果:检测3例患者的G0期细胞比例均为CD34~-"LSC"CD34~+ CD38~-CD34~+ CD38~+。配对t检验显示,53例检测的患者CD34~-"LSC"及CD34~+CD38~-中ALDH~(br)细胞比例均显著高于CD34~+ CD38~+中(P=0.0004,P0.0001),并且CD34~-"LSC"中ALDH~(br)细胞比例显著高于CD34~+ CD38~-(P=0.003)。3例分选的患者的3群细胞之间AML1-ETO mRNA水平相似,而CD34~-"LSC"的WT1 mRNA水平均明显高于另2个细胞群。结论:t(8;21)AML骨髓CD34~-细胞群可能含有LSC,并且可能比CD34~+ CD38~-更原始。     

初诊急性髓系白血病骨髓CD34+CD38-细胞群比例是初次诱导缓解率的预后因素

为了研究非M3急性髓系白血病(AML non-M3) CD34+ CD38 -细胞群及其G0期比例与临床和实验室特征的关系,使用流式细胞仪检测40例初治AML non-M3骨髓单个核细胞CD34和CD38的表达,测定各群细胞的细胞周期,并分析CD34+ CD38 -细胞群及其G0期比例与临床实验室特征及初次诱导缓解率的关系.结果显示,CD34+ CD38 -细胞群及其G0期的比例与染色体核型、初诊WBC计数及FLT3/ITD阳性均无明显相关性,但与诱导治疗后骨髓中幼稚细胞比例相关.诱导停疗第7天骨髓中有幼稚细胞患者CD34+ CD38-细胞比例为(12.47±26.26)％,诱导停疗第7天无幼稚细胞患者CD34+ CD38 -细胞比例为(2.62±7.20)％ (p =0.031).诱导停疗第1天骨髓中可见幼稚细胞患者CD34+细胞群比例为(17.40±21.20)％,而诱导停疗第1天无幼稚细胞患者该比例为(5.64±6.96)％(p=0.00l).CR组患者治疗前CD34+ CD38 -细胞群的比例为(2.51±9.72)％,明显低于非CR组患者(24.92 +27.04％) (p =0.001).而在AMI non-M2b患者中,CR组患者治疗前CD34+ CD38 -细胞群的比例为(1.60±4.82)％,较非CR组患者更为降低(p ＜0.001).单因素分析显示,诱导化疗后是否取得CR与年龄(p=0.022)、CD34+ CD38 -细胞群比例(p=0.008)、诱导停疗第7天骨髓幼稚细胞比例(p=0.011)相关.多因素分析显示,仅有CD34+ CD38 -细胞群的比例与是否获得CR有相关趋势(p =0.052).结论:初治AML患者CD34+CD38 -细胞群的比例是AML初次诱导缓解率的预后因素.     

c-MPL在急性髓系白血病患者白血病干细胞中的表达

本研究通过检测c-MPL在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的表达,探讨c-MPL表达与CD34、CD38的相关性,以确定c-MPL在白血病干细胞的表达。通过流式细胞术检测29例初诊AML患者的c-MPL和CD34、CD38阳性细胞比例;比较患者c-MPL表达水平与正常对照的差别及与临床指标的关系;分析患者的c-MPL表达水平与CD34、CD38各部分细胞分群的关系及它们之间的相关性。结果表明:AML患者骨髓细胞中c-MPL表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);c-MPL的表达与患者的年龄、性别、白细胞计数、AML1-ETO融合基因、化疗后缓解情况无关;c-MPL在M2和M5分型中的表达显著高于正常对照组(P<0.05)。CD34阳性AML患者组的c-MPL表达水平显著高于CD34阴性AML患者组(P<0.01)。AML患者c-MPL在CD34+细胞中的表达显著高于CD34-细胞(P<0.001);AML患者中c-MPL在CD34+CD38+和CD34+CD38-两群细胞中的表达无显著性差异(P>0.05);c-MPL和CD34的表达呈正相关(r=0.380,P=0.042)。结论:c-MPL在AML患者中高表达,且与CD34的表达水平具有一定的正相关性,c-MPL表达于白血病干细胞。     

骨髓增生异常综合征CD34~+髓系前体细胞免疫表型定量分析及与临床特征的相关性研究

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34~+髓系前体细胞免疫标志的定量表达情况及其与临床特征的相关性,了解CD7和CD117的定量表达对低危MDS患者预后的影响。方法:采用多参数流式细胞术(MFC)检测79例初诊MDS患者骨髓CD34~+髓系前体细胞各抗原的比例及平均荧光强度(MFI),比较各免疫标志的表达水平与临床特征的相关性,探讨CD7和CD117的定量表达对低危MDS患者总体生存率的影响。结果:高危MDS患者骨髓原始细胞比例(P 0.01)、红细胞数(P 0.01)和血红蛋白水平(P 0.05)均明显高于低危MDS患者,而促红细胞生成素水平低于低危MDS患者(P 0.05)。高危MDS患者CD34~+原始细胞比例(P 0.01)、CD34~+髓系前体细胞表面CD117的比例(P 0.05)以及CD7的MFI(P 0.05)较低危MDS患者明显升高,而CD123的MFI较低危MDS患者明显降低(P 0.05)。高危MDS患者CD15/CD34(MFI)和CD19/CD34(MFI)与总T细胞比例呈正相关(r=0.458; r=0.505),CD19/CD34 (%)和CD19/CD34 (MFI)与白细胞水平呈负相关(r=-0.469; r=-0.503)。低危MDS患者CD34~+(%)分别与骨髓红细胞比例、外周血血小板(PLT)水平以及中性粒细胞水平呈正相关(r=0.426; r=0.486; r=0.495),但与乳酸脱氢酶水平呈负相关(r=-0.421); CD10/CD34(%)、CD10/CD34(MFI)和CD117/CD34(MFI)与WT1表达量呈正相关(r=0.745; r=0.800; r=0.434),而CD11b/CD34(%)与WT1表达量呈负相关(r=-0.457); CD19/CD34 (%)和CD71/CD34 (MFI)与NK细胞比例呈负相关(r=-0.786; r=-0.514); CD10/CD34(%)与Th/Ts呈正相关(r=0.738),CD7/CD34(MFI)与Th细胞比例呈负相关(r=-0.513); HLADR/CD34(%)和HLADR/CD34(MFI)与PLT水平均呈负相关(r=-0.461; r=-0.445),但HLADR/CD34(MFI)与骨髓中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)分数呈正相关(r=0.552)。CD7和CD117的定量表达对低危MDS患者总体生存率无显著影响。结论:MDS患者不同风险组CD34~+髓系前体细胞免疫表型的表达与临床特征相关,综合骨髓细胞形态学、临床及实验室特征、免疫表型等指标将会对MDS患者的诊断、临床分型及预后评估有重要意义。     

CD7和(或)CD56阳性急性髓系白血病患者干细胞表型分析及在微量残留病检测中的意义

目的 探讨CD7和(或)CD56阳性急性髓系白血病(AML)干细胞免疫表型特点及微量残留病(MRD)与白血病干细胞LSC的关系.方法 采用四色流式细胞术,以4～6组四色抗体组合检测51例CD7+和(或)CD56+及CD34+CD38+初治AML患者(除外M3)白血病细胞免疫表型,并检测CD34+CD38-Lin-LSC中CD123、CD90、CD117、CD7和CD56的表达.以28名正常人骨髓作为对照,以CD34+CD38+细胞同时表达CD7和CD56作为白血病细胞标志,对26例CD7+和(或)CD56+AML患者的53份标本进行MRD监测.结果 CD7+和(或)CD56+初治AML患者CD34+CD38+细胞和CD34+CD38-Lin-干细胞中,CD7+细胞相对比例分别为(77.39±20.71)%,(44.57±22.70)%,CD56+细胞分别为(56.71±32.56)%,(33.51±29.64)%,均明显高于正常对照(P＜0.01和P＜0.05).CD34+CD38-Lin-干细胞中低表达CD90(P＜0.01),高表达CD123(P＜0.01);CD117的表达和正常对照相比差异无统计学意义(P＞0.05).在随访的CD7+和(或)CD56+患者中,MRD阳性组CD34+CD38-Lin-亚群中CD7和(或)CD56表达的相对比例和实际比例增高的患者比例明显高于MRD阴性组,CD7+细胞实际比例增高的患者分别为71%(21例中15例)与16%(25例中4例)(P=0.001),相对比例增高的患者分别为81%(21例中17例)与24%(25例中6例)(P=0.000).CD56+细胞实际比例增高的患者分别为100%(4例)与12%(25例中3例)(P=0.001),相对比例增高的患者分别为75%(4例中3例)与20%(25例中5例)(P=0.031).CD7+AML患者中初治时CD7+CD34+CD38-Lin-细胞亚群实际比例高的患者治疗后较易出现MRD(P＜0.05).结论 CD7和CD56在AML患者的异常表达发生在AML细胞分化的早期阶段,治疗后CD34+CD38-Lin-干细胞中CD7+和CD56+细胞比例高的患者易出现MRD.     

急性髓系白血病患者131例免疫表型与预后的相关性分析

目的 探讨急性髓系白血病(AML)免疫表型与预后的相关性.方法 采用多色流式细胞术对131例AML患者进行检测,分析其免疫表型与患者年龄、初诊时WBC、PLT和Hb的关系,及其对完全缓解率(CR)的影响.结果 AML患者中髓系抗原表达阳性率最高的是CD13、CD33和髓过氧化物酶(MPO),急性早幼粒细胞白血病(M3)亚型中CD34和HLA-DR表达率较低,淋巴细胞抗原CD19和CD7表达最常见,阳性率分别为15.4%和14.6%.CD7阳性组患者的年龄明显高于阴性组患者年龄(t=-2.27,P＜0.05),CD14阳性组患者的初诊WBC计数明显高于阴性组(Z=-2.284,P＜0.05).131例AML患者的总CR率为56.5%,CD34阳性组(82例)的CR率为45.1%,CD34阴性组(49例)的CR率为75.6%,两组间差异有统计学意义(x2=11.524,P＜0.05).CD34和HLA-DR双阳性组(74例)的CR率为41.9%,单阳性组(38例)CR率为78.9%,双阴性组(19例)CR率为68.4%,3组问差异有统计学意义(Z=-3.492,P＜0.01).CD7、CD19、CD13、CD33、CD38、CD15、CD64、CD14及MPO等抗原表达阳性组和阴性组间CR率的差异无统计学意义(P均＞0.05).多因素回归分析显示,患者年龄大于60岁、初诊时WBC大于50×109/L、PLT大于30×109/L、Hb小于60 g/L以及CD34阳性是低CR率的独立风险因素.结论 AML患者年龄,初诊时WBC、PLT和Hb计数以及CD34表达与CR率有关,免疫表型的检测对于判断AML预后有一定价值,有助于指导临床治疗和判断预后.     

CD8~+CD28~- Ts细胞在急性白血病外周血表达研究

目的探讨CD8+CD28-Ts细胞在急性白血病患者化疗前、后外周血表达变化。方法急性白血病初诊患者40例为初诊组,化疗后完全缓解患者30例为缓解组,体检健康者30例为对照组。采用流式细胞术检测各组外周血CD8+CD28-Ts细胞的表达情况。结果缓解组外周血CD8+CD28-Ts细胞表达率((35.65±17.04)%)高于初诊组((23.71±7.51)%)和对照组((17.82±3.57)%)(P0.01),初诊组高于对照组(P0.01);初诊组CD8+CD28-Ts细胞与CD8+T细胞呈正相关(r=0.785,P=0.000)。结论 CD8+CD28-Ts细胞在急性白血病初诊患者和化疗后完全缓解患者的外周血中表达明显偏高,有免疫抑制作用。     

CD19、CD56在急性髓系白血病RUNX1-RUNX1T1~+突变患者中的表达及其临床意义

目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓RUNX1-RUNX1T1表达水平的临床意义,了解表达淋系抗原CD19、CD56的RUNX1-RUNX1T1~+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测200例初诊AML(non-M3)患者骨髓RUNX1-RUNX1T1表达水平,用流式细胞术检测AML的淋系抗原表达水平,分析初次诱导缓解率(CR1)和总生存率(OS)的关系;对照分析RUNX1-RUNX1T1~+患者中CD56~+和CD56~-以及CD19~+和CD19~-患者在CR1和OS的区别。结果:在RUNX1-RUNX1T1~+的AML患者中,初诊时CD56~+患者具有较低的CR1(P0.05)。CD19~+患者CR1较CD19~-患者高(P0.05)。CD56~+患者的OS率显著低于CD56~-患者(P0.05)。CD19~+患者的OS与CD19~-患者的OS率无显著差异。结论:RUNX1-RUNX1T1~+的AML患者中骨髓CD56~+提示预后不良,CD19~+仅与CR1相关,与OS无关。     

急性髓样白血病患者骨髓干细胞CD200的表达及与临床疗效的关系

目的研究急性髓样白血病(AML)患者骨髓中CD200的表达情况及与临床疗效关系的相关研究。方法将51例急性髓样白血病患者根据初发时白细胞计数分为高白细胞组(18例)与非高白细胞组(33例),根据化疗效果分为完全缓解组(31例)和未缓解组(20例),同期选取51例缺铁性贫血或巨幼细胞贫血患者为对照组。采用流式细胞术检测AML患者化疗前后CD200、Foxp3~+/CD4~+的表达,酶联免疫吸附试验检测AML患者及对照组患者外周血白细胞介素17(IL-17)、IL-4和干扰素γ的水平。同时,采用Pearson线性相关分析研究AML患者中CD200表达水平与化疗前后血清IL-17、IL-4、干扰素γ水平及骨髓中Foxp3~+/CD4~+水平的关系。结果高白细胞组患者CD200阳性表达率明显高于非高白细胞组患者[(4.8±2.8)%vs.(3.7±2.2)%,t=4.961,P0.001]。未缓解组患者较完全缓解组患者明显偏高[(4.8±2.6)%vs.(3.1±1.6)%,t=5.716,P0.001]。对照组患者与AML患者化疗前比较,IL-17及干扰素γ水平均明显升高(t=26.970,P0.001;t=4.370,P0.001),IL-4水平及Foxp3~+/CD4~+细胞均明显降低(t=9.965,P0.001;t=7.346,P0.001)。而对照组患者与AML患者化疗后比较,仅IL-17及IL-4水平比较,差异有统计学意义(t=8.897,P0.001;t=3.965,P0.001)。与AML患者化疗前比较,化疗后IL-17[(147±42)ng/L vs.(332±68)ng/L,t=15.920,P0.001]及干扰素γ[(24±8)μg/L vs.(31±12)μg/L,t=3.576,P0.001]水平均明显升高,IL-4水平[(142±54)μg/L vs.(84±31)μg/L,t=6.644,P0.001]及Foxp3~+/CD4~+细胞[(7.5±2.4)%vs.(5.2±2.4)%,t=5.330,P0.001]均明显降低。Pearson线性相关分析发现,CD200表达水平仅与化疗后骨髓中Foxp3~+/CD4~+水平呈正相关(r=0.347,P=0.012)。结论 CD200可能通过抑制免疫相关因子影响AML患者临床疗效。     

急性髓系白血病治疗前后白血病干细胞的变化

目的:观察急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中是否存在白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)及其与白血病细胞在流式细胞图中的相对位置,分析白血病微小残留病(minimal residual diseases,MRD)与LSC水平的相关性,探讨白血病化疗过程中LSC的变化与白血病的疗效及预后的关系。方法:采集50例AML(除外M3)患者骨髓标本85份,其中初治患者标本50份,未缓解AML患者标本7份,完全缓解期AML患者标本28份。所有标本均应用流式细胞术检测免疫表型为CD34~+/CD38~-/CD123~+的LSC,同时对初治患者标本行白血病肿瘤细胞免疫表型检测,对非初治患者标本根据初治免疫表型获得的白血病相关免疫表型(leukemia associated immune phenotype,LAIP)进行白血病微小残留病检测。结果:AML中存在CD34~+/CD38~-/CD123~+的LSC,其与白血病细胞在流式细胞图中的相对位置是一致的。化疗后骨髓完全缓解组LSC含量(0.096‰)比初治AML组LSC含量(0.541‰)明显降低,两组比较,其差异具有显著性(P0.01);初治AML组与化疗后未缓解组之间的LSC含量的差异无显著性(P0.05)。对同时进行LSC和MRD检测的28例完全缓解AML患者中的LSC含量和MRD水平进行相关性分析发现,2者存在显著正相关性(r=0.680,P0.01)。结论:AML中确实存在LSC,其与白血病细胞在流式细胞图中的相对位置是一致的,推测其形态上同白血病细胞相似,大小相仿,具有弱表达CD45等一些白血病细胞的特征。化疗后LSC的比例较化疗前下降,在白血病治疗过程中检测和追踪LSC的变化,联合微小残留病(MRD)的检测技术,可以更好地判断白血病的疗效和预后。     

CD7在CEBPA野生型和突变型急性髓系白血病患者中的表达及其预后意义

目的分析CD7在初治急性髓系白血病(AML)患者中的表达和预后价值,进一步探讨CD7表达情况与CEBPA突变的相关性,明确其在CEBPA野生型和突变型AML患者中与预后的关系。方法回顾性分析2010年1月至2016年12月收治的298例初治AML患者(除外M3亚型)的临床资料,在全部患者以及CEBPA野生型和突变型组中,分别比较CD7阳性(CD7+)和CD7阴性(CD7-)患者的临床特征及预后差异,并联合CD7表达情况和CEBPA突变状态初步建立新的危险分层模型。结果在CD7+组中,CEBPA单位点和双位点突变的发生率分别为10.1%和33.9%,显著高于CD7-组(5.3%和4.2%),差异具有统计学意义(P=0.000)。在CEBPA野生型患者中,CD7+组患者相较CD7-组患者完全缓解率低(P=0.001)、复发率高(P=0.023),而两组总生存(OS)期和无病生存(DFS)期差异无统计学意义(P值均>0.05);在CEBPA突变患者中,CD7+组显示有更长的OS期(P=0.019)和DFS期(P=0.010)。根据CD7表达和CEBPA突变与否将AML患者分为三个亚组:CD7+伴CEBPA突变组、CD7-组和CD7+伴CEBPA野生型组。三组患者的3年OS率分别为80.2%、48.0%和30.6%(P<0.001),3年的DFS率分别为74.1%、37.4%和22.2%(P<0.001)。结论CD7+组中CEBPA突变率显著高于CD7-组,CD7+在CEBPA野生型组和突变组AML中存在截然相反的预后意义。根据CD7表达情况和CEBPA突变与否建立新的危险分层模型,有助于指导临床个体化治疗。     

68例急性髓细胞白血病患者淋巴细胞亚群的变化分析

目的分析68例急性髓细胞白血病(AML)患者淋巴细胞亚群的变化情况。方法通过流式细胞仪检测68例AML患者与68例健康者外周血中淋巴细胞,应用相应的单克隆抗体检测CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、CD19~+、CD16~+/CD56~+细胞百分比,另外分别测定各CD分子的表达率,分析不同高表达CD分子相关性。结果与对照组相比,观察组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8、CD16~+~+CD56~+水平明显较低,而CD8~+、CD19~+淋巴细胞百分比较高,差异有统计学意义(P0.05);将表达百分比60.0%的患者作为高表达患者,Cyt-MPO(69.1%)、CD38(70.6%)、CD33(73.5%)均属于高阳性表达。结论 AML患者免疫系统会出现改变,其中外周血淋巴细胞亚群中Cyt-MPO、CD38、CD33的表达高。     

急性髓性白血病患者淋巴细胞中CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例与预后的相关性

目的探讨急性髓性白血病(AML)患者淋巴细胞中CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例与预后的相关性。方法选取AML患者157例(AML组),并将其按AML 5种亚型分为AML-M1、AML-M2、AML-M3、AML-M4和AML-M55个亚组,以41名体检健康者作为正常对照组。采用流式细胞术检测所有对象外周血CD39~+CD4~+CD25~+T细胞和~+CD4~+CD25~+T细胞占淋巴细胞的比例。分别根据CD39~+CD4~+CD25~+T细胞或CD4~+CD25~+T细胞占淋巴细胞的比例将AML患者分为低、中、高水平组。结果 AML组及各亚组CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例均明显高于正常对照组(P0.05)。AML组与正常对照组之间CD4~+CD25~+T细胞比例差异无统计学意义(P0.05),但AML-M1组明显低于正常对照组(P0.05)、AML-M2组明显高于正常对照组(P0.05)。CD39~+CD4~+CD25~+T细胞低水平组、中水平组和高水平组髓外浸润比例及骨髓原始细胞CD34、CD7阳性率依次升高,各组间差异有统计学意义(P0.05)。CD4~+CD25~+T细胞低水平组、中水平组和高水平组之间髓外浸润及CD34、CD7阳性率差异均无统计学意义(P0.05)。与CD39~+CD4~+CD25~+T细胞低水平组比较,中水平组和高水平组的下次治疗时间(TTT)较短(P0.05);而CD4~+CD25~+T细胞低水平组、中水平组和高水平组之间TTT差异无统计学意义(P0.05)。结论 CD39~+CD4~+CD25~+T细胞比例升高与AML预后较差有关。CD39或可作为AML疾病发展的标志物。     

去甲氧柔红霉素和硼替佐米对急性髓系白血病细胞凋亡及钙网蛋白表达的影响

目的研究去甲氧柔红霉素(idarubicin,IDA)、硼替佐米(bortezomibin,BOR)及联合用药对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)不同免疫表型细胞群细胞凋亡及钙网蛋白表达的影响,为寻找有效杀伤白血病细胞的治疗方法提供部分实验依据。方法收集20例初治AML患者外周血,利用淋巴细胞分离液及密度梯度离心法分离出单个核细胞,通过流式细胞术检测CD34+CD38+细胞群、CD34~+CD38~-细胞群。用去甲氧柔红霉素和硼替佐米,以指定浓度和时间分别单独或联合作用于初发AML患者外周血单个核细胞,应用流式细胞术检测CD34~+CD38~-细胞、CD34~+CD38~+细胞的凋亡率及细胞表面钙网蛋白的表达,分析两种药物对凋亡率及免疫原性(钙网蛋白表达率)的影响。结果单药处理组间各细胞群凋亡率和钙网蛋白表达率无明显差别,明显低于联合处理组,高于空白组。去甲氧柔红霉素单药组、蛋白酶体抑制剂单药组及两药联合各处理组内CD34~+CD38~+细胞凋亡率均高于CD34~+CD38~-细胞凋亡率[(45.97±7.85)%对(20.81±1.87)%,P=0.007;(44.16±6.83)%对(21.93±4.74)%,P=0.010;(65.63±7.92)%对(41.69±3.85)%,P=0.009],钙网蛋白表达率也有同样表现[(25.31±2.73)%对(4.40±1.17)%,P0.001;(24.27±4.20)%对(4.27±0.49)%,P=0.010;(42.13±6.06)%对(22.06±2.13)%,P=0.006]。结论去甲氧柔红霉素、蛋白酶体抑制剂均能诱导白血病细胞凋亡和凋亡细胞表面钙网蛋白表达,联合用药有协同作用。CD34+CD38+细胞比CD34+CD38-细胞更易诱导凋亡及表达钙网蛋白。     

B淋巴细胞白血病骨髓B细胞CD34+CD38+和CD34+CD38low/-细胞亚群的临床意义

本研究比较发病时免疫表型为CD34+CD38+和CD34+CD38low/-两组B淋巴细胞白血病(B-ALL)的生物学特性,并探讨其临床意义。选取54例初发B-ALL并经多参数流式细胞术检测为CD34+的B-ALL患者,根据CD38表达不同将其分为CD34+CD38+组(n=35)和CD34+CD38low/-组(n=19)。利用实时定量PCR的方法分别进行BCR-ABL,TEL-AML1和WT1基因的检测。随访标本利用7色流式细胞术检测微量残留病(MRD),平均随访时间12个月(1-28个月),平均随访间隔2个月(1-5个月)。结果表明,两组患者发病时WBC,血小板和血红蛋白水平及BCR-ABL,TEL-AML1和WT1基因阳性表达的比例均无统计学差异(P>0.05)。在诱导缓解后,CD34+CD38+组微量残留病阳性(MRD+)为28.57%(10/35),CD38low/-组MRD+为68.42%(13/19),CD34+CD38low/-组MRD+的检出率明显高于CD34+CD38+组(P<0.01)。在复发率上,CD34+CD38+组有2例,分别在第94天和第245天复发,复发率为5.71%(2/35)。CD34+CD38low/-组有7例复发,复发率为36.84%(7/19),中位复发时间263 d(46-468 d),两组间具有明显统计学差异(P<0.01)。本研究以16岁为年龄分界点,CD34+CD38+组16岁以上患者为8人(8/35),CD34+CD38low/-组16岁以上患者为10人(10/19),两组间有统计学差异(P<0.05)。结论:CD34+CD38low/-患者在成人中比例较高,且CD34+CD38low/-组在治疗后更易出现MRD+和复发。     

肿瘤微环境中CD4~+Foxp3~+Treg对鼻咽癌患者预后影响

目的探讨肿瘤微环境中CD4~+Foxp3~+Treg对鼻咽癌患者的预后影响。方法选取2011年2月-2013年2月于我院收治的127例鼻咽癌患者为研究对象,应用流式细胞仪检测两组血清CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+以及Th17在CD4~+T细胞比例等指标,依据CD4~+/CD8~+值分为正常组以及异常组,并应用免疫组化法检测患者癌组织CD4、Foxp3以及IL-17,另依据CD4~+Foxp3~+Treg表达水平划分为低表达组与高表达组,应用Kaplan-Meier法比较生存情况并进行预后的多因素分析。结果异常组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+、Th17在CD4~+T细胞比例显著低于正常组,CD8~+显著高于正常组(P0.05);CD4~+Foxp3~+Treg与患者无瘤生存时间呈显著正相关(P0.05),与总体生存时间呈正相关,但无统计学意义(P0.05);CD4~+/CD8~+异常患者的5年总生存率67.95%显著低于正常患者5年总生存率89.80%(P0.05);T分期、CD4~+/CD8~+表达水平以及Th17是影响鼻咽癌预后的独立影响因素(P0.05);CD4~+Foxp3~+Treg与肿瘤转移复发密切相关(P0.05)。结论鼻咽癌患者CD4~+/CD8~+、Th17水平明显降低,其水平异常表达可严重影响患者预后,肿瘤间质中CD4~+Foxp3~+Treg细胞数量增多与预后呈正相关,并与肿瘤转移复发密切相关。