活血除痹汤对硬皮病模型小鼠皮损组织活性氧的影响

目的研究活血除痹汤治疗硬皮病的可能作用机制。方法 30只小鼠分为空白组、模型组和中药高、中、低剂量组,每组6只。除空白组外其余各组小鼠皮内注射盐酸博来霉素400μg连续3周建立硬皮病小鼠模型。第4~7周,空白组、模型组予等量蒸馏水灌胃,中药高、中、低剂量组分别给予活血除痹汤44.8、22.4、11.2g/(kg·d)灌胃,每日1次。观察各组小鼠皮肤、肺组织病理学改变,比较皮肤厚度、胶原指数及皮损组织活性氧(ROS)水平。结果模型组小鼠真皮明显增厚,胶原纤维明显增粗,伴有炎性细胞浸润;肺组织出现肺泡间隔增厚伴大量单核细胞浸润,间隙有成纤维细胞增生。与模型组小鼠相比,中药各剂量组真皮胶原纤维增粗膨大程度及肺泡间隔增厚程度均有所减轻。模型组皮肤厚度、胶原指数、皮损ROS含量较空白组明显增加(P0.01);与模型组比较,中药高、中、低剂量组皮肤厚度、胶原指数均明显降低,中药高、中剂量组皮损ROS含量亦降低(P0.05或P0.01)。结论活血除痹汤可明显降低硬皮病模型小鼠皮肤厚度、胶原指数,其机制可能与降低皮损中ROS水平有关。     

温阳化浊通络方对系统性硬化症模型小鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨温阳化浊通络方治疗系统性硬化症(SSc)的可能作用机制。方法将60只C3H/He小鼠随机分为正常组、模型组、西药组和中药低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外其余各组给予皮下注射博莱霉素3周建立SSc小鼠模型。西药组小鼠灌服青霉胺片65 mg/(kg·d),中药低、中、高剂量组分别灌服温阳化浊通络方水煎剂11.75、23.50、47.00 g/(kg·d),模型组和正常组给予等体积的生理盐水,共干预8周。采用HE染色观察皮肤组织病理变化,采用RT-PCR法检测皮肤转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad7 mRNA表达,采用Western blot法检测皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)表达。结果模型组较正常组皮肤真皮变厚,胶原增加、变粗,真皮小血管周围炎症细胞浸润,西药组和中药低、中、高各剂量组与模型组比较真皮变薄、胶原含量减少,血管周围炎症细胞浸润减轻。与正常组比较,模型组TGF-β1、Smad2 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达升高,Smad7 mRNA表达降低(P0.01);与模型组比较,西药组和中药低、中、高剂量组TGF-β1、Smad2 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达减少,Smad7 mRNA表达增加(P0.05或P0.01);中药高剂量组TGF-β1、Smad2、Smad7 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达改善优于西药组和中药低剂量组(P0.05或P0.01)。结论温阳化浊通络方可拮抗SSc纤维化,可能与干预TGF-β1/Smad信号通路、降低皮肤胶原蛋白含量有关,且高剂量效果更佳。     

抗硬化复方对硬皮小鼠皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的：建立硬皮病小鼠模型,探讨抗硬化复方抗博莱霉素所致小鼠皮肤硬变的作用机理。方法：制作硬皮小鼠动物模型：博莱霉素（BLM）200μg/ml每日于C3H小鼠背部（剃毛后）皮下注射,连续3周。药物作用机理研究：运用免疫组织化学法测定硬皮小鼠模型皮肤中Ⅰ、Ⅲ型胶原和转化生长因子-β1（TGF-β1）等的表达,观察抗硬化复方对硬皮小鼠皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1表达的影响。53只C3H鼠分成6组。①空白对照组;②造模对照组;③早服中药组,造模同时服用中药;④中药组,造模成功后服中药;⑤西药组,造模成功后服青霉胺;⑥中西药合用组。比较研究上述指标在各组中的变化,采用SPSS11.0统计软件进行分析。结果：抗硬化复方能对抗博莱霉素所致的小鼠皮肤硬变,早服中药组、中药组、西药组及中、西药组小鼠皮肤COL-Ⅰ、COL-Ⅲ免疫组织化学指数均明显低于造模对照组小鼠,差异有非常显著意义（P〈0.01）。早服中药组及中西药合用组效果尤佳。早服中药组、中药组及中、西药合用组小鼠皮肤TGF-β1、COL-Ⅲ免疫组织化学指数又明显低于西药组小鼠,差异有非常显著意义（P〈0.01）。结论：抗硬化复方能有效抑制硬皮小鼠皮肤中Ⅰ型胶原、Ⅲ胶原的合成,有抗组织纤维化作用。     

红花水煎液内服对硬皮小鼠皮肤COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达的影响

目的观察红花对硬皮小鼠皮肤COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达的影响,探讨红花抗皮肤纤维化的作用机制。方法采用博来霉素诱导建立硬皮小鼠模型,分别采用生理盐水(模型组)、青霉胺、低中高不同剂量红花水煎液内服治疗硬皮小鼠,共28 d。对照组小鼠背部皮下注射磷酸盐缓冲液。HE染色观察皮肤病理改变并测量真皮厚度,免疫组化检测COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的含量表达。结果造模各组硬皮小鼠真皮厚度增厚,纤维增粗、膨大,数量增多,排列紊乱,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的含量表达降低,模型组尤为显著,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,青霉胺和红花水煎液各剂量组药物干预后真皮厚度及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的表达均有不同程度降低,差异显著(P0.05);与青霉胺组比较,红花水煎液中、高剂量组真皮厚度及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论红花水煎液内服可降低硬皮小鼠皮肤COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的表达,从而改善硬皮小鼠皮肤纤维化程度。     

基于“痹-虚”病机中药对肺纤维化大鼠TGF-β/Smads信号通路的影响

目的:研究通痹补肺方对肺纤维化大鼠的保护作用及可能的作用机制。方法:60只大鼠随机分为3组,空白组、模型组和中药组(通痹补肺方组),每组20只。除空白组外,其余各组用博来霉素气管内注射造成肺纤维化模型,造模28天后给药,中药组给予通痹补肺方12.4g/kg/d灌胃,空白组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续给药28天。首先测定大鼠肺功能(FVC、FEV0.3/FVC、PEF、MVV、Cdyn),继之处死大鼠行肺组织病理学观察,同时应用免疫组化及免疫印迹法测定大鼠肺组织中TGF-β、Smad3、Smad7及Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结果:光镜下显示,模型组大鼠正常肺泡结构破坏,多数肺泡壁增厚,可见纤维组织增生,伴有少许炎性细胞浸润,呈中重度纤维化样改变,中药组大鼠肺纤维化及肺泡炎性程度均较模型组明显减轻。各组大鼠肺功能比较,FVC、FEV0.3/FVC、PEF、MVV值各组之间比较均无差异(P0.05);与模型组比较,中药组及空白组Cdyn值明显升高(P0.05),中药组及空白组肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显降低(P0.05),TGF-β、Smad3含量明显下降(P0.05),Smad7含量明显上升(P0.05);与空白组比较,中药组及模型组Cdyn值明显降低(P0.05),中药组及模型组肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显降低(P0.05),TGF-β、Smad3含量明显下降(P0.05),Smad7含量明显上升(P0.05)。结论 :通痹补肺方能够通过抑制肺纤维化大鼠TGF-β及Smad3的异常增高,同时提高肺纤维化大鼠Smad7水平,达到抑制肺纤维化大鼠胶原异常增殖的作用。     

敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1及Ⅲ型胶原的影响

目的:研究敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞(LFB)产生转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)的影响,探讨敏咳清颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制。方法:将常规培养LFB分为空白组、模型组、对照组、敏咳清高剂量组、敏咳清低剂量组、养阴清肺糖浆高剂量组、养阴清肺糖浆低剂量组,加入肝素刺激后分别加入对应的含药血清,采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中TGF-β1、COL-Ⅲ的水平。结果:①敏咳清颗粒能明显减少TGF-β1的产生,高剂量组的作用明显强于低剂量组,高、低剂量相比有显著性意义(P<0.01);②敏咳清颗粒能明显抑制肺成纤维细胞表达COL-Ⅲ,高、低剂量组之间相比无显著意义。结论:敏咳清颗粒能显著降低经肝素刺激增殖的LFB对TGF-β1、COL-Ⅲ的表达,提示抑制TGF-β1、COL-Ⅲ的表达,可能是其治疗咳嗽变异型哮喘(CVA)的作用机制之一。     

壮骨止痛方对去势雌鼠转化生长因子β1mRNA及Ⅰ型胶原纤维mRNA表达的影响

目的:观察壮骨止痛方对去势雌鼠转化生长因子β1(Transforming growth factor-β,TGF-β1)m RNA及Ⅰ型胶原纤维mRNA表达的影响,并探究其治疗骨质疏松的具体机制。方法:将75只健康雌性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、壮骨止痛方组、无水乙醇提取A部位组,每组15只。除空白组、假手术组外,其余各组建立绝经后骨质疏松病理模型,假手术组去除卵巢周围相应体积脂肪。造模后5 d开始给药,13周后取股骨,原位杂交法检测分析骨组织中Ⅰ型胶原纤维mRNA和TGF-β_1mRNA的表达。结果:模型组TGF-β_1mRNA和Ⅰ型胶原mRNA表达明显低于空白组(P0.05),壮骨止痛方组、无水乙醇提取A部位组TGF-β_1m RNA和Ⅰ型胶原纤维mRNA表达明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:壮骨止痛方可能是通过提高TGF-β_1mRNA和Ⅰ型胶原纤维mRNA的表达,促进成骨细胞分化,发挥改善骨质疏松的效应。     

五痹胶囊抗硬皮病模型小鼠实验研究

目的:研究五痹胶囊对硬皮病小鼠模型的影响,并进一步探讨其抗硬皮病的作用机制。方法:用博来霉素皮下注射建立硬皮病小鼠模型,随机将小鼠分为正常对照组、模型对照组、五痹胶囊低、中、高剂量组及薄芝片组,灌胃给予不同剂量的药物,观察各组小鼠皮肤肺组织病理学改变、皮肤厚度、胶原含量的变化,并相互比较。结果:各治疗组小鼠皮肤硬化程度可得到一定的改善,皮肤厚度变薄,胶原含量减少。与模型组比较有显著性差异(P<0.01),其中尤以五痹胶囊高剂量组更为突出。结论:五痹胶囊对皮下注射博来霉素导致局部硬皮病小鼠皮肤的厚度、胶原纤维的增生有明显的改善作用,并随剂量的增大呈剂量—效应关系。五痹胶囊治疗系统性硬皮病与其抑制皮肤的胶原纤维增生、降低胶原含量有关。     

针刀干预对膝骨关节炎兔滑膜纤维化的影响

目的：探讨针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔滑膜纤维化的影响。方法：新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组、电针组,各8只。采用改良Videman左后肢伸直位固定法制动4周,制备模型。空白、模型组不干预,针刀、电针组各干预3周。测量被动活动范围(PROM)；天狼猩红染色观察滑膜胶原沉积的情况；Western Blot法检测膝关节滑膜组织TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ蛋白表达情况。结果：与模型组比较,针刀、电针组PROM明显增大(P＜0.01),针刀组大于电针组(P＜0.05)。与模型组比较,针刀、电针组滑膜组织胶原沉积减轻。模型组TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ蛋白表达显著高于正常组(P＜0.01)；针刀、电针组可明显抑制TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ的表达(P＜0.01)；与电针组比较,针刀组TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ蛋白表达明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。结论：针刀通过调控TGF-β1的表达,从而下调α-SMA和COL-Ⅰ的表达,减轻滑膜纤维化达到治疗KOA的目的。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β受体的影响

目的探讨姜黄素对经转化生长因子β(TGF-β)诱导后人胚肺成纤维细胞TGF-βⅠ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、RⅡ)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响,及其与特发性肺纤维化的关系。方法细胞分为正常组、姜黄素组、模型组、治疗组,采用RT-PCR、Western blotting法检测TGF-βRⅠ、RⅡ在人胚肺成纤维细胞的变化。结果模型组TGF-βRⅠ与RⅡ表达增强,治疗组与正常组、模型组相比,TGF-βRⅠ与RⅡ表达明显减弱。结论姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起一定作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-βRⅠ与RⅡ的表达而实现的。     

抗硬化复方对硬皮病小鼠模型影响的研究

目的探讨抗硬化复方与青霉胺对硬皮病小鼠模型的影响。方法 C_3H 雌性小鼠52只,皮下注射博莱霉素造模分组给药。以 HE、Masson 染色法观察硬皮病小鼠皮肤厚度及真皮纤维化程度,测定其皮肤羟脯氨酸含量进行皮肤胶原分析,对各组的测定值进行分析比较。结果与模型组比较,中药组、西药组和中西药结合组小鼠皮肤厚度明显变薄(P<0.01),胶原含量有不同程度减少,尤其中西药结合组显著减少(P<0.01)。早予中药组不仅皮肤厚度、胶原含量显著低于模型组(P<0.01),且较 PBS 对照组无明显差异(P>0.05)。结论抗硬化复方药物能明显抑制硬皮病小鼠皮肤胶原纤维增生,减少胶原等细胞外基质的沉积,越早应用,效果越好,中西药联合应用效果更佳。     

补肾益精法对硬皮病成纤维细胞SMAD3/FLI1平衡的影响

目的:初步研究补肾益精法中药复方对硬皮病成纤维细胞SMAD3/FLI1"平衡"的影响。方法:体外培养建立硬皮病组和正常对照组皮肤成纤维细胞系;使用补肾益精法中药复方含药血清与对照血清处理两组细胞;采用实时定量RT-PCR技术测定I型前胶原COLⅠ-α2与TGF-β途径中SMAD3、FLI1等因子的基因转录水平。结果:补肾益精法可不同程度地减少硬皮病成纤维细胞COLⅠ-α2、SMAD3表达,上调FLI1基因表达,使SMAD3/FLI1比值趋向健康对照组水平。结论:补肾益精法对硬皮病成纤维细胞表型的影响可能与TGF-β途径中SMAD3/FLI1"平衡"有关。     

凉血活血中药治疗放射性肺损伤的实验研究

目的研究凉血活血中药干预对大鼠放射性损伤肺内胶原纤维动态变化及肺组织白介素-6（IL-6）、转化生长因子-β（TGF—β）表达的影响,探讨其防治放射性肺损伤的作用及机制。方法160只Wistar雌性大鼠随机分为单纯照射组（模型组,40只）、照射加中药组（治疗组,40只）、单纯中药组（40只）和正常对照组（40只）。对模型组和治疗组大鼠右肺进行分次照射,各组分别灌胃给予相应药物或生理盐水,于照射开始后第3、5、8、12、26周5个时间点每组分别处死8只大鼠,行肺组织HE、天狼猩红染色、免疫组化染色,观察大鼠肺组织中Ⅰ型和Ⅲ胶原纤维的含量及分布的动态变化及IL-6和TGF-8的表达。结果首次照射后第3周模型组大鼠肺组织出现成纤维细胞增生,随着照射次数的增多和观察期的延长,Ⅰ型胶原明显增多,Ⅰ／Ⅲ型胶原比例明显升高,在各个观察点均明显高于治疗组（P〈0.01）。模型组大鼠肺组织IL-6和TGF-8的表达分别于照射第8周及第12周达到达高峰（P〈0、01）;治疗组大鼠各时相IL-6、TGF-8均明显低于模型组（P〈0、01）。结论早期应用凉血活血中药可抑制致炎因子和致纤维化因子的表达,抑制肺组织内胶原蛋白的合成,减轻Ⅰ／Ⅲ型胶原比例的失调,从而减轻早期放射性肺炎的炎症反应和后期放射性肺纤维化程度。     

温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad 信号通路的影响

目的探讨温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病(systemic sclerosis,SSc)皮肤成纤维细胞TGF-β_1/Srnad信号通路的影响。方法将36例SSc患者按随机数字表分为中药组、西药组和中西药纽,每组12例,中药组予口服温阳化浊通络方汤剂(每日1剂),西药组予口服青霉胺片(每次0.125 g,每日2次)和醋酸泼尼松片(每次20 mg,每日1次),中西医组予口服青霉胺片、醋酸泼尼松片及温阳化浊通络方汤剂,治疗1个月制备含药血清;另取10例未治疗的SSc患者血清作为对照组。健康皮肤成纤维细胞来源于2例女性整形外科患者上臂外侧健康皮肤组织。各组血清分别加入SSc患者和健康皮肤成纤维细胞培养体系中。Western blot法测定皮肤成纤维细胞转化生长因子-β_1Ⅰ型受体(transforming growth factorβ_1 receptor typeⅠ,TGF-β_1 RⅠ)、TGF-β_1Ⅱ型受体(TGF-β_1 RⅡ)、p-Smad2/3及Smad7蛋白表达,RT-PCR法检测SSc皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原(Col-Ⅰ、Col-Ⅱ)mRNA的表达,E LISA法测定SSc皮肤成纤维细胞培养上清液中MMP-9及TIMP-1含量。结果与对照组比较,西药组、中药组和中西药组SSc患者和健康皮肤成纤维细胞TGF-β_1 RⅠ、p-Smad2/3蛋白水平降低,Smad7蛋白水平升高(P0.05,P0.01),同时中西药组TGF-β_1RⅡ蛋白表达降低(P0.05,P0.01);与西药组比较,中药组和中西药组TGF-β_1 RⅠ、p-Smad2/3表达降低,中西药组Smad7蛋白表达升高(P0.01)。SSc患者皮肤成纤维细胞中,与对照组比较,西药组、中药组和中西药组Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA表达水平降低(P0.05,P0.01),且中西药组Col-ⅢmRNA表达水平明显低于西药组(P0.01)。与对照组比较,西药组、中药组和中西药组MMP-9水平及MMP-g/TIMP-1比值明显升高(P0.05,P0.01),而中药组和中西药组TIMP-1表达水平降低(P0.01);与西药组比较,中西药组MMP-g水平和MMP-9/TIMP-1比值升高,中药组和中西药组TIMP-1水平降低(均P0.01)。结论温阳化浊通络方含药血清可能通过调控SSc皮肤成纤维细胞TGF-β_1/Smad信号通路中关键分子TGF-β_1 RⅠ、pSmad2/3及Smad7的表达,抑制rGF-β_1/Smad信号通路传导,减少Col-Ⅰ、Col-Ⅲ表达。     

化瘀濡肺汤对肺纤维化大鼠肺组织中转化生长因子β_1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨化瘀濡肺汤对博来霉素A5所致大鼠肺纤维化的干预作用及其机理.方法:雄性Wistar大鼠60只,随机均分为正常对照组、模型组、中药高剂量治疗组、中药低剂量治疗组.大鼠气管内一次性注入博来霉素A5制成肺纤维化模型.模型制备后第 2天开始,分别给予相应处理,4组动物分别于第7、14、28天各处死5只,提取肺组织,应用免疫组化法检测肺组织内转化生长因子β1(TGF-β1)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达.结果:与模型组比较,中药低剂量、高剂量治疗组肺泡炎、肺纤维化的程度明显降低(P ＜0.01),肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的表达也明显减少(P<0.01).结论:化瘀濡肺汤可有效减轻大鼠肺纤维化,抑制转化生长因子β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原在肺组织中的表达是其可能的作用机制之一.     

加味阳和汤对硬皮病小鼠皮肤β-Catenin表达的影响

目的观察加味阳和汤抗硬皮病皮肤损伤的可能机制。方法雌性BALB/c小鼠40只,随机分为正常组、空白组各8只,造模组24只。正常组不注射,空白组予背部皮下注射生理盐水0.1 mL,造模组小鼠皮下注射浓度为500μg/mL的博莱霉素0.1 mL/d,连续4周,制备硬皮病模型。造模成功后随机分为模型组、阳和汤组、地塞米松组各8只。各组分别予生理盐水(空白组和模型组)、加味阳和汤(阳和汤组)、地塞米松(地塞米松组)灌胃,4周后取皮肤组织,行HE染色,PCR和Western blot分别检测小鼠皮肤β-Catenin的m RNA及蛋白表达量。结果治疗后,小鼠皮肤HE染色与正常组比较:空白组无明显差异;模型组真皮层增厚,排列紊乱,皮下脂肪层变薄;阳和汤组真皮层稍变薄,胶原纤维束排列较疏松,皮下脂肪层稍变薄。与正常组比较,模型组β-Catenin m RNA及蛋白表达水平上调,P-β-Catenin蛋白表达水平下调(P0.05);与模型组比较,阳和汤组和地塞米松组β-Catenin m RNA及蛋白表达水平下调,P-β-Catenin蛋白表达水平上调(P0.05)。结论加味阳和汤能降低硬皮病小鼠皮肤β-Catenin m RNA及蛋白表达,从而起到抗皮肤纤维化的治疗作用。     

肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5的影响及机制研究

目的基于Smad通路研究肺痹汤含药血清对白细胞介素17(IL-17)诱导的人胚肺成纤维细胞二倍体(MRC-5)的影响,探讨肺痹汤防治肺间质纤维化的机制。方法建立IL-17诱导的MRC-5模型,通过CCK-8法检测细胞增殖水平,ELISA法检测TGF-β1、Smad 3、Smad 7表达水平,q PCR法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白RNA表达水平,研究肺痹汤含药血清对MRC-5模型是否具有干预效果。结果以IL-17诱导MRC-5细胞能够成功建立肺纤维化模型,肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5细胞中Smad 3、Smad 7、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白RNA、Ⅲ型胶原蛋RNA表达水平有明显下调作用。结论肺痹汤含药血清可抑制成纤维细胞的增殖,减少TGF-β1的分泌,阻断TGF-β1/Smad信号通路,从而减少胶原的合成与分泌,减轻纤维组织增生,从而改善肺间质纤维化。     

人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用

目的:从心肌纤维化程度及心肌组织中胶原蛋白Ⅰ型(CollagenⅠ),胶原蛋白Ⅲ型(CollagenⅢ)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白表达,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用。方法:建立链脲佐菌素(STZ)联合高脂饲料诱导糖尿病小鼠模型,另设正常组,糖尿病小鼠按照随机数字表法分为模型组,GNC低、高剂量组(0. 819,1. 638 g·kg~(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg~(-1))。各组均灌胃给药,正常组给与等剂量的去离子水,1次/d,连续9周。胶原纤维染色(Masson三色染色法)观察小鼠心肌间质纤维化程度,并用Image-pro plus 6. 0分析软件计算胶原密度比值;免疫组化检测小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ及TGF-β_1蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心肌组织内CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1的蛋白表达电泳及灰度值水平。结果:Masson实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大、变形,心肌间质尤其是在微血管周围,有大量蓝染的胶原纤维沉积,相互连接交织成网状(P 0. 01);与模型组比较,GNC低、高剂量组和二甲双胍组小鼠心肌细胞排列紊乱明显改善,心肌间质蓝染的胶原纤维也较模型组明显减少(P 0. 05)。免疫组化和Western blot结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1阳性表达,蛋白表达含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,各给药组蛋白阳性表达均降低,蛋白表达含量趋于正常(P 0. 05,P 0. 01)。结论:STZ联合高脂饲料能够诱导糖尿病小鼠心肌纤维化,诱导CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1蛋白高表达。人参-三七-川芎提取物可通过调节CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1蛋白表达,改善糖尿病小鼠心肌纤维化。     

银甘汤对转化生长因子-β1重组腺病毒载体诱导肺纤维化小鼠的干预作用及机制研究

目的建立转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)重组腺病毒载体诱导的小鼠肺纤维化模型,探究银甘汤对模型小鼠的干预作用,从乳腺退化蛋白39(breast regression protein-39,BRP-39)、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)、白细胞介素13(interleukin-13,IL-13)等免疫炎性因子角度探讨银甘汤对肺纤维化小鼠的作用机制。方法通过气管滴注TGF-β1重组腺病毒载体建立肺纤维化小鼠模型,随机分为模型组和银甘汤组,另设空白组和空载体组作为对照。自造模第二天开始,银甘汤组予银甘汤灌胃,其余三组均予等体积的生理盐水灌胃,连续28天。28天后取材,分别留取血液、肺组织。分别利用HE染色和Masson染色检测各组肺组织炎症和胶原纤维增生程度;利用RT-qPCR检测肺组织TGF-β1 mRNA、BRP-39 mRNA、IL-17 mRNA水平;利用ELISA测定血清TGF-β1、BRP-39、IL-17、IL-13的表达水平。结果TGF-β1重组腺病毒载体诱导小鼠肺纤维化模型制备成功,空白组和空载体组小鼠肺组织结构正常;模型组肺泡间隔增宽,可见片状实变,间质较多炎性细胞浸润和胶原纤维增生;银甘汤组炎性细胞和胶原纤维增生程度较模型组减轻。与空白组和空载体组比较,模型组TGF-β1 mRNA和TGF-β1表达水平上调(P<0.01);与模型组比较,银甘汤组TGF-β1 mRNA和TGF-β1表达水平下降(P<0.01)。与空白组和空载体组比较,模型组IL-17 mRNA水平升高(P<0.01);模型组BRP-39、IL-17表达水平均升高(P<0.05);模型组BRP-39 mRNA和IL-13表达水平均有所升高,但无统计学差异(P>0.05)。与模型组比较,银甘汤组IL-17 mRNA水平降低(P<0.01);银甘汤组BRP-39、IL-17表达水平均降低(P<0.05);银甘汤组BRP-39 mRNA和IL-13表达水平亦有所降低,但无统计学差异(P>0.05)。结论利用气管滴注TGF-β1重组腺病毒载体成功制备小鼠肺纤维化模型,银甘汤在一定程度上可以下调TGF-β1重组腺病毒载体诱导的小鼠肺组织和血清BRP-39、IL-17、IL-13水平,从而抑制肺纤维化。     

白藜芦醇通过抑制TGF-β_1、COL-Ⅰ过表达治疗骨骼肌损伤的实验研究

目的观测骨骼肌急性钝挫伤修复过程中转移生长因子(TGF-β_1)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的表达规律,探讨白藜芦醇(Res)促进受损骨骼肌结构与功能恢复之作用机制。方法 33只新西兰兔随机分为3组:正常组(3只)、自然恢复组(15只)、Res组(15只)。除正常组外均制造骨骼肌钝挫伤模型,损伤后自然恢复组不予处理,Res组每天给予Res 15 mg/kg灌胃治疗。分别于伤后1、3、7、14、21天处死动物,采用免疫组织化学(IHC)、免疫印记法(Western Blot)检测骨骼肌中TGF-β_1、COL-Ⅰ蛋白表达。结果一般结果:损伤组损伤区肿胀,12 h至肿胀峰值,72 h后肿胀消退至实验前状态。HE显示:正常组兔肌纤维多边形、形态规则、排列紧密,肌核均匀分布于肌膜下,无增生与固缩,肌膜完整;各损伤组第1天见血细胞渗出,第3天炎症细胞开始浸润至7天达峰值,伤后第21天肌纤维形态基本恢复正常,Res组在炎症细胞浸润,修复时间上整体优于自然恢复组。Masson染色显示:正常肌细胞中胶原纤维含量极少,损伤后随着瘢痕组织形成,胶原纤维逐渐增加,并于14天达高峰,Res组胶原纤维含量低于自然恢复组。IHC显示:TGF-β_1、COL-Ⅰ主要为胞浆表达,其蛋白含量在损伤后呈现先升后降趋势,自然恢复组和Res组均于7 d达高峰,自然恢复组高于Res组,(P0.05)。Western Blot显示:TGF-β_1、COL-Ⅰ蛋白表达结果与IHC结果相似。结论 TGF-β_1和COL-Ⅰ蛋白在骨骼肌修复过程中呈现先升高后降低的变化规律,与骨骼肌修复一般规律相类;TGF-β_1和COL-Ⅰ蛋白表达量变化与瘢痕组织出现有联系,出现明显瘢痕组织时TGF-β_1和COL-Ⅰ蛋白含量也达最大值;Res能抑制TGF-β_1和COL-Ⅰ蛋白表达,促进骨骼肌损伤修复,但并不改变骨骼肌损伤修复过程中蛋白表达量的整体变化规律。