低氧诱导因子及其低氧调节机制

低氧诱导因子(hypoxiainduciblefactor,HIF)是介导哺乳动物细胞适应低氧状况的核转录因子,由α和β亚基组成的异二聚体,其中α亚基受氧调节,是调节HIF活性的功能亚单位。目前已知HIF-1α的氧调节途径主要包括两种:常氧下VHL蛋白与氧依赖降解结构域羟化的Pro-564结合,介导HIF-1α的常氧下的泛素降解;常氧下天冬胺酰羟化酶使HIF-1αAsp-803羟基化,抑制其募集共刺激因子p300/CBP的作用,从而抑制其转录活性。此外,还包括PAS结构蛋白抑制因子等低氧调节途径。深入研究HIF的低氧调节机制,有利于认识缺血缺氧性疾病的发病机制。     

低氧诱导因子及其低氧调节机制

低氧诱导因子(hypoxis inducible factor，HIF)是介导哺乳动物细胞适应低氧状况的核转录因子，由α和β亚基组成的异二聚体，其中α亚基受氧调节，是调节HIF活性的功能亚单位。目前已知HIF-1α的氧调节途径主要包括两种：常氧下VHL蛋白与氧依赖降解结构域羟化的Pro-564．结合，介导HIF-1α的常氧下的泛素降解；常氧下天冬胺酰羟化酶使酶使HIF-1αAsp-803羟基化，抑制其募集共刺激因子p300／CBP的作用。从而抑制其转录活性。此外，还包括PAS结构蛋白抑制因子等低氧调节途径。深入研究HIF的低氧调节机制，有利于认识缺血缺氧性疾病的发病机制。     

哇巴因诱导白血病细胞增殖的信号通路研究

本研究通过检测哇巴因与特异性信号通路抑制剂联用对多种白血病细胞株生长的影响,探讨哇巴因诱导白血病细胞增殖及凋亡的信号传导途径。采用MTT法检测哇巴因与特异性信号通路抑制剂对多种白血病细胞株存活率的影响,用RT-PCR与Western blot检测白血病细胞株钠钾ATP酶α1亚单位表达水平的变化。结果显示：在低浓度的哇巴因（10nmol/L）作用下,Jhhan和M07e细胞株存活率均呈上升趋势,细胞株中钠钾ATP酶α1亚单位表达升高,PP2、PD98059能不同程度地抑制哇巴因对白血病细胞株的促增殖作用。结论：钠钾ATP酶具有重要的信号传导功能,它能通过特异性结合哇巴因激活多种信号通路调节白血病细胞的生长。哇巴因对白血病细胞的促增殖效应与Src激酶、ERK1／2等信号通路活化有关。     

氯化锂抑制K562白血病细胞增殖及诱导凋亡机理的研究

本研究旨在探讨氯化锂(LiCl)在体外抑制K562白血病细胞增殖和诱导凋亡的机制。在细胞培养体系中加入LiCl(30mmol/L)进行培养;以流式细胞术分析细胞周期;用半定量RTPCR检测bcr/abl融合基因mRNA的表达;用原子吸收光谱仪检测不同时间点细胞内Li 浓度及Na 、K 通道阻断剂TTX、FSK分别对细胞内Li 浓度的影响,并观察了Na 、K 通道阻断剂对LiCl抑制细胞生长的作用。结果显示:LiCl(30mmol/L)导致K562白血病细胞出现G2/M期阻滞,bcr/ablmRNA表达下降,细胞内Li 的浓度从30分钟开始增加,在2小时达高峰,以后逐渐下降,4小时达到平衡;Na 、K 通道阻断剂TTX(3.4×10-7mol/L)与FSK(5×10-5mol/L)分别阻断Na 、K 通道后可升高细胞内Li 的浓度,并增加LiCl对K562白血病细胞增殖的抑制作用。结论:LiCl诱导K562细胞增殖抑制和凋亡的机制可能与K562细胞G2/M期阻滞、下调bcr/ablmRNA的表达及Na 、K 通道被阻断后Li 通道的状态有关。     

急性白血病患者糖代谢异常的研究

目的：探讨急性白血病患者糖代谢异常的机制及其对预后的影响。方法：分别于急性白血病患者化疗前后抽取空腹静脉血，用生物化学和ELASA法检测空腹血糖、葡萄糖耐量、血清真胰岛素(RI)、超敏C肽水平等。结果：14例化疗前空腹血糖升高，OGTT试验呈糖尿病曲线，RI、超敏C肽水平下降，其中有3例在患急性白血病前即确诊为2型糖尿病，余11例中7例化疗后恢复正常；5例化疗前空腹血糖正常，OGTT试验呈糖耐量减低，RI、超敏C肽水平下降，化疗后均恢复正常；5例化疗前空腹血糖等均正常，于化疗后出现糖耐量减低、RI和超敏C肽水平下降；16例化疗前后各指标均正常。结论：急性白血病患者发生糖代谢异常的原因有胰岛浸润或血管淤滞、医源性、原有糖尿病。血糖升高时化疗缓解率低。     

低氧和长时间游泳运动对小鼠骨骼肌低氧诱导因子1α和糖代谢酶活性的影响

目的:模拟“高住低训”条件,观察低氧和长时间游泳运动对小鼠骨骼肌低氧诱导因子1α及乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶活性的影响。方法:实验于2004-06/08在华东师范大学生物化学实验室完成。选择雄性成年昆明小鼠18只,适应性训练1周后,按随机数字表法分为3组,即低氧对照组、低氧训练组和常氧对照组,每组6只。制备模拟低氧设备,低氧对照组进行8周的低氧适应,8h/次,5次/周,氧浓度控制在156～161mL/L。低氧训练组进行8周的低氧适应和常氧游泳训练,每次先进行8h的低氧适应后再进行1h的常氧游泳训练,5次/周。常氧对照组按常规饲养。8周后,3组小鼠均在一次性力竭运动后立即麻醉断头处死,取股外侧肌,分为两块,一块测定乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶活性;另一块测定细胞中低氧诱导因子1α蛋白含量(免疫组织化学法)。结果:饲养过程中常氧对照组脱失1只,进入结果分析低氧对照组、低氧训练组和常氧对照组分别为6,6,5只小鼠。①常氧对照组小鼠骨骼肌细胞内低氧诱导因子1α蛋白几乎无表达,而低氧训练组和低氧对照组小鼠骨骼肌细胞内低氧诱导因子1α蛋白含量较高,两组均有6个以上目标蛋白。②低氧对照组、低氧训练组小鼠骨骼肌乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶的活性均有显著高于常氧对照组[(128.49±11.83,145.37±14.33,93.65±15.32)μkat/g;(223.21±51.01,252.05±48.18,99.02±32.67)nkat/g(P<0.01)],其中低氧训练组显著高于低氧对照组(P<0.01)。结论:在模拟“高住低训”条件下,低氧加长时间大负荷运动能够促进低氧诱导因子1α蛋白的表达,提高骨骼肌糖的有氧代谢酶的活性,有利于增强机体运动功能。而且骨骼肌低氧诱导因子1α蛋白含量与乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶活性可能存在着一定的关系。     

低氧和长时间游泳运动对小鼠骨骼肌低氧诱导因子1α和糖代谢酶活性的影响

目的：模拟“高住低训”条件，观察低氧和长时间游泳运动对小鼠骨骼肌低氧诱导因子1α及乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶活性的影响。 方法：实验于2004-06／08在华东师范大学生物化学实验室完成。选择雄性成年昆明小鼠18只，适应性训练1周后，按随机数字表法分为3组，即低氧对照组、低氧训练组和常氧对照组，每组6只。制备模拟低氧设备，低氧对照组进行8周的低氧适应，8h／次，5次／周，氧浓度控制在156—161mL／L。低氧训练组进行8周的低氧适应和常氧游泳训练，每次先进行8h的低氧适应后再进行1h的常氧游泳训练，5次／周。常氧对照组按常规饲养。8周后，3组小鼠均在一次性力竭运动后立即麻醉断头处死，取股外侧肌，分为两块，一块测定乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶活性；另一块测定细胞中低氧诱导因子ld蛋白含量（免疫组织化学法）。 结果：饲养过程中常氧对照组脱失1只，进入结果分析低氧对照组、低氧训练组和常氧对照组分别为6，6，5只小鼠。①常氧对照组小鼠骨骼肌细胞内低氧诱导因子1d蛋白几乎无表达，而低氧训练组和低氧对照组小鼠骨骼肌细胞内低氧诱导因子1d蛋白含量较高，两组均有6个以上目标蛋白。②低氧对照组、低氧训练组小鼠骨骼肌乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶的活性均有显著高于常氧对照组[（128．49&;#177;11．83，145．37&;#177;14．33，93.65&;#177;15．32）μkat／g；（223．21&;#177;51．01，252．05&;#177;48．18，99．02&;#177;32．67）nkat／g（P〈0．01）]，其中低氧训练组显著高于低氧对照组（P〈0．01）。 结论：在模拟“高住低训”条件下，低氧加长时间大负荷运动能够促进低氧诱导因子1d蛋白的表达，提高骨骼肌糖的有氧代谢酶的活性，有利于增强机体运动功能。而且骨骼肌低氧诱导因子1d蛋白含量与乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶活性可能存在着一定的关系。     

低氧对人白血病细胞株K562细胞增殖及HIF-1α表达的影响

目的:探讨在模拟低氧环境下人白血病细胞株K562细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)表达的变化。方法:将白血病细胞株分为低氧处理组和常规对照组。对常规对照组细胞株进行常氧培养;对低氧处理组用二氯化钴(CoCl_2)50、200、400、800μmol/L进行处理;在24、48和72 h后收集两组细胞,并在倒置相差显微下观察细胞的形态变化,应用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,实时荧光定量PCR检测HIF-1α在转录水平的表达。结果:K562细胞形态在模拟低氧环境下随CoCl_2的浓度的增高和处理时间的延长而发生变形甚至细胞破裂等变化。MTT实验结果显示,细胞增殖在低氧环境下受到抑制,并且抑制作用随CoCl_2的浓度增加和作用时间的延长而增强(r浓度=0.8712,r时间=0.6785)。荧光定量PCR检测结果显示,细胞株的HIF-1αmRNA表达水平在CoCl_2模拟低氧环境中均有上调,并且对低氧时间和浓度呈依赖性,与CoCl_2的处理浓度及处理时间呈正相关(r=0.954,r=0.895)。结论:低氧环境可抑制白血病K562细胞的增殖并且使细胞中的低氧诱导因子HIF-1α的表达上调,但未导致细胞发生诱导分化。     

低氧诱导因子抑制剂对白血病细胞株HIF-1α和VEGF表达及诱导细胞凋亡作用的研究

本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人急性白血病病细胞低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节及诱导细胞凋亡作用。应用DAPI染色检查凋亡细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测K562、U937、Jurkat白血病细胞株hif-1α和vegf mRNA表达以及YC-1对U937细胞hif-1α、vegf mRNA表达影响;Western blot检测YC-1对U937细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达,以及BAX、BCL-2、caspase-3蛋白变化,分析YC-1诱导U937细胞凋亡的可能机制。结果表明:在3种白血病细胞株均可见hif-1α和vegf mRNA表达。4μmol/L YC-1处理U937细胞(0、8、16和24小时)后,可见凋亡细胞出现的典型凋亡形态特征;流式细胞术检测的细胞0、8、16和24小时凋亡率分别为(4.87±0.70)%、(27.27±2.00)%、(51.53±2.81)%及(60.5±3.20)%;vegf mRNA表达下调,而hif-1αmRNA表达无明显变化;HIF-1α蛋白、VEGF蛋白和BCL-2蛋白表达下调,而BAX和caspase-3蛋白表达上调,BAX/BCL-2比率升高并呈时间依赖性(r=0.973,p0.01)。结论:3种白血病细胞株均显示hif-1α和vegf mRNA表达,YC-1可以抑制白血病细胞HIF-1α蛋白表达,进而下调VEGF,并通过上调BAX/BCL-2比率、caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

低氧诱导因子在低氧应答及运动时的表达

目的：低氧诱导因子1是细胞在缺氧条件产生的核蛋白，它与靶基因结合，促进靶基因的转录，使机体产生一系列缺氧适应反应。对低氧诱导因子1的结构作用途径以及低氧诱导因子在低氧应答以及在运动时骨骼肌中的表达作一综述，以能够找到提高训练质量乃至运动水平的方法。资料来源：应用计算机检索Pub Med1996-01／2003—06的相关章，同时根据相关的参考献检索了部分章，检索词“hypoxia inducible factor-1，sport，hypoxia，skeletal muscle”，限定语言种类为English。同时计算机检索http：／／www．cnki．net／index．htm1994／2003的相关章，限定章种类为中，检索词“低氧诱导因子，运动，低氧，骨骼肌”。另外参考了2003香山科学会议——低氧与健康研究应受生物学和医学界关注(要汇编)。资料选择：对资料进行初审，选取实验包括低氧运动模型中关于低氧诱导因子在骨骼肌中的表达、作用及其含量的变化方面的献，查找相关献的全，判断是否确实是相关研究。纳入条件：①随机对照实验研究。②实验包括对照组与干预组。排除条件：①综述献。②重复的同一研究。资料提炼：共查找到26篇相关研究章，18篇符合纳入标准。排除的8篇系为同一研究和综述献。资料综合：通过18个实验对低氧运动模型中关于低氧诱导因子在骨骼肌中的表达、作用及其含量的变化方面作了相关的研究。结论：低氧诱导因子在低氧应答以及运动的骨骼肌中起着承上启下的作用，通过干预因素诱导／影响低氧因子的合成，乃至加强／减弱其链的作用。     

低氧诱导因子在低氧应答及运动时的表达

目的:低氧诱导因子1是细胞在缺氧条件产生的核蛋白,它与靶基因结合,促进靶基因的转录,使机体产生一系列缺氧适应反应。对低氧诱导因子1的结构作用途径以及低氧诱导因子在低氧应答以及在运动时骨骼肌中的表达作一综述,以能够找到提高训练质量乃至运动水平的方法。资料来源:应用计算机检索PubMed1996-01/2003-06的相关文章,同时根据相关的参考文献检索了部分文章,检索词“hypoxiainduciblefactor-1,sport,hypoxia,skeletalmuscle”,限定语言种类为English。同时计算机检索http://www.cnki.net/index.htm1994/2003的相关文章,限定文章种类为中文,检索词“低氧诱导因子,运动,低氧,骨骼肌”。另外参考了2003香山科学会议———低氧与健康研究应受生物学和医学界关注(摘要汇编)。资料选择:对资料进行初审,选取实验包括低氧运动模型中关于低氧诱导因子在骨骼肌中的表达、作用及其含量的变化方面的文献,查找相关文献的全文,判断是否确实是相关研究。纳入条件:①随机对照实验研究。②实验包括对照组与干预组。排除条件:①综述文献。②重复的同一研究。资料提炼:共查找到26篇相关研究文章,18篇符合纳入标准。排除的8篇系为同一研究和综述文献。资料综合:通过18个实验对低氧运动模型中关于低氧诱导因子在骨骼肌中的表达、作用及其含量的变化方面作了相关的研究。结论:低氧诱导因子在低氧应答以及运动的骨骼肌中起着承上启下的作用,通过干预因素诱导/影响低氧因子的合成,乃至加强/减弱其链的作用。     

低氧适应对糖代谢的影响及其机制

学术背景:低氧应激状态下精作为首当其充的能源物质优先被动用,长期低氧应激机体糖代谢过程发生深刻影响,包括糖的摄取、利用、氧化等.因此研究低氧适应对糖代谢的影响及其机制尤为必要.目的:探讨低氧适应对糖代谢的影响及具可能机制,为低氧应用研究提供理论参考.检索策略:应用计算机检索PubMed数据库和中国期刊全文数据库1990-01/2007-07的有关文献,检索词为"低氧(缺氧),代谢酶,胰岛素,GLUT,HIF-1,AMPK",限定文章语言分别为英语和中文.共检索到338篇相关文献,其中中文文献215篇,英文文献123篇,对文献进行筛选,纳入标准:①选取针对性强,相关度高的文献.②对同一领域的文献选择近期发表或权威杂志的文献:排除重复研究和Meta分析类文章.最后40篇被选用.文献评价:选用40篇文献,其中8篇为综述、其余均为临床与实验研究.资料综合:伴随着低氧适应,机体糖磷酸化酶与糖原合成酶含量升高、活性增强,葡萄糖转运能力增强,可能是低氧诱导因子1上调了糖代谢有关的低氧基因表达;AMPK的激活通过一条未知的途径调节糖代谢过程.结论:糖代谢能力增强是低氧适应的重要标志之一;低氧适应糖代谢能力增强,在高原训练、预防和改善胰岛素抵抗方面有着广泛的应用前景.     

白细胞介素-4诱导成人T细胞白血病细胞增殖

本文研究11例成人T细胞白血病(ATL)细胞对白细胞介素-4(IL-4)的增殖反应,并与IL-2比较,发现正常外周血单个核细胞(PBMC)对各种浓度的IL-4均无增殖反应,对高浓度IL-2的反应微弱,而PHA刺激的PBMC对IL-2和IL-4有反应:当IL-2浓度为33.3U/ml时,其[~3H]-TdR掺入率最大值为28138±680cpm,IL-4浓度为11.1U/ml时,最大值为8021±212cpm.10/11例ATL细胞在     

辣椒碱对缺氧培养的HaCaT细胞增殖及低氧诱导因子-1α蛋白表达的研究

目的研究辣椒碱对HaCaT细胞增殖以及缺氧培养的HaCaT细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达的影响,探讨其对银屑病的作用机制。方法不同浓度的辣椒碱作用于HaCaT细胞后,观察其对细胞增殖的影响。辣椒碱作用于缺氧培养的HaCaT细胞后,免疫荧光检测其对HIF-1α蛋白表达的影响。结果辣椒碱对HaCaT细胞的生长具有明显的抑制作用,辣椒碱作用于缺氧培养的HaCaT细胞后HIF-1α蛋白表达减弱。结论辣椒碱抑制HaCaT细胞增殖及缺氧培养的HaCaT细胞HIF-1α蛋白的表达。     

低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响及其作用机制的初步研究

【目的】初步探讨低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响和作用机制。【方法】将培养的细胞分为常氧对照组、低氧8h组、低氧12h组、低氧24h组。MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western-blot方法分别检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)在mRNA和蛋白水平的表达、激光共聚焦显微镜观察HIF-1α核转位现象。【结果】①相对于对照组,低氧8h组、低氧12h组和低氧24h组细胞存活率明显下降(P<0.01),并且随着低氧时间的延长存活率逐渐下降,各组之间的差异有显著性(P<0.01);②HIF-1α mRNA和蛋白在对照组有少量的表达,随着低氧时间的延长,其表达增加(P<0.05);③相对于对照组,低氧组细胞内HIF-1α的表达增加,并且向核内转移,随着低氧时间的延长核内HIF-1α逐渐增多。【结论】低氧可通过影响HIF-1α的表达和调节其活性而达到抑制U937细胞株增殖的作用。HIF-1α介导的信号传导通路在白血病细胞的发生和增殖过程中可能起到关键的调控作用。     

氯氧甲苯咪唑诱导白血病细胞凋亡的实验研究

为了研究氯氧甲苯咪唑(econazole)诱导鼠粒单核白血病细胞WEHI-3凋亡的机制，利用Annexin-V／PI双染实验测定细胞凋亡，Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度([Ca^2 ]i)，并抽取WEHI-3细胞内质网部分蛋白，利用Western blot测定caspase-7、caspase-12的蛋白表达。结果显示ieconazole作用后WEHI-3出现典型的凋亡改变，细胞内游离[Ca^2 ]i较对照明显升高，caspase-12和caspase-7表达随着细胞内钙离子浓度的提高而逐渐增加。结论：econazole能诱导WEHI-3细胞凋亡，caspase-12在此过程中起重要作用。     

低氧诱导因子-1与低氧预处理诱导的脑缺血耐受

1990年．日本学者发现．短暂的、轻微的脑缺血可对1—7d后的再次严重的脑缺血产生部分保护作用，此现象被称为脑缺血耐受（cerebral ischemic tolerance，CIT）现象，而提前给予的短暂性缺血则称为缺血预处理。近年来的研究表明，不单是缺血预处理，其他多种预处理方式均可诱导脑缺血耐受。低氧预处理（hypoxia preconditioning，HP）作为一种干预措施，已被证实能使脑组织产生缺血耐受。[第一段]     

冬凌草甲素对白血病细胞增殖抑制及机制的研究

目的:探讨伊马替尼耐药的K562细胞(K562-R)的可能耐药机制及冬凌草甲素(oridonin,OR)对伊马替尼敏感的K562细胞(K562-S)和K562-R细胞的生长抑制作用及其可能机制。方法:Western blot法检测K562-S和K562-R细胞内p-Lyn的表达;采用改良的四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测OR对K562-S和K562-R细胞的增殖抑制作用,光学显微镜观察OR作用24 h后K562-S和K562-R细胞的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测OR对K562-S和K562-R细胞内BCL-2的表达和蛋白激酶p-Lyn、Akt/mTOR信号通路的变化。结果:在K562-R细胞中,p-Lyn表达增高。OR对K562-S和K562-R细胞的生长具有抑制作用,且呈时间和浓度依赖性,OR作用72 h的半抑制浓度(IC50)值分别为4.23±1.30和4.97±2.23μmol/L。OR作用24 h后,K562-S和K562-R细胞破坏明显,部分细胞裂解成碎片。流式细胞仪检测发现,OR使K562-S和K562-R凋亡细胞明显增多。Western blot结果提示,OR使细胞内蛋白激酶p-Lyn表达下降,Akt/mTOR信号通路关键点蛋白磷酸化水平明显减低,凋亡抑制蛋白BCL-2表达下调。结论:p-Lyn高表达可能参与K562-R细胞的耐药。OR通过下调p-Lyn,抑制Akt/mTOR信号通路和下调BCL-2表达,促进细胞凋亡,抑制白血病细胞株K562-S和K562-R的生长。     

低氧诱导因子在调节椎间盘髓核细胞功能中的研究进展

椎间盘退变性疾病引起的颈、肩、腰、腿痛已经严重影响人类日常生活,给社会造成了严重的经济负担,但目前治疗效果不佳。既往研究结果表明,髓核细胞代谢活动、低氧诱导因子含量的变化均能影响椎间盘退变。现在人们已经开始从组织工程学上来探讨椎间盘退变性疾病的治疗,希望找到有效方法来阻止椎间盘退变甚至能够逆转椎间盘退变的方法。椎间盘的一个显著特点就是氧含量低,而低氧诱导因子能够使机体很好地适应低氧环境。目前研究表明,低氧诱导因子能够调节髓核细胞的生物学功能,并且可能成为阻止椎间盘退变进展甚至逆转椎间盘退变的关键因素。本文就低氧诱导因子对髓核细胞代谢、细胞外基质表达、细胞凋亡、细胞自噬的调控作一综述。