PM2.5致大鼠肺损伤及桔梗总皂苷干预作用的研究

目的观察PM2.5致大鼠肺损伤及桔梗总皂苷(PGS)对其的干预作用,探讨PGS对PM2.5致肺损伤修复的机制。方法采用气管滴注法染毒制作PM2.5致大鼠肺损伤模型。实验大鼠随机分为空白组、模型组和PGS高、中、低剂量组,每组10只。给药14 d后,收集肺泡灌洗液(BALF),采集大鼠左肺及右肺组织中叶,HE染色观察肺组织病理改变,ELISA检测BALF肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-13的含量;RT-PCR检测肺组织转化生长因子-β(TGF-β)m RNA的表达,免疫印迹法检测肺组织TGF-β的蛋白表达。结果与模型组比较,PGS高、中剂量组BALF TNF-α、IL-6显著降低,IL-10、IL-13显著升高,PGS各剂量组大鼠肺组织炎细胞浸润减少,肺间质水肿和纤维增生减轻,肺组织TGF-βm RNA和蛋白表达降低。结论 PGS可能通过调节炎性细胞因子的平衡减轻PM2.5引起的肺组织炎症,并通过下调TGF-β的表达抑制肺纤维化进程,从而对PM2.5致大鼠肺损伤具有一定的保护及修复作用。     

芪参汤对肝纤维化大鼠肝组织辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的观察芪参汤对肝纤维化大鼠肝组织辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响,探讨其抗肝纤维化作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、芪参汤组及秋水仙碱组,每组10只。采用四氯化碳腹腔注射法制备肝纤维化大鼠模型。造模期间芪参汤组及秋水仙碱组分别给予芪参汤(2 g/mL)及秋水仙碱混悬液(20 mg/L)灌胃,空白组、模型组予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续8周。全自动生化分析仪检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及总胆红素(TBil)水平;ELISA检测肝组织白细胞介素(IL)-17A和IL-10含量;免疫组化检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测肝组织Th17和Treg比例;Westernblot和RT-PCR分别检测肝组织维甲酸相关孤儿受体γt(ROR-γt)、叉头状转录因子p3(Foxp3)蛋白和m RNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠肝纤维化评分、胶原染色面积明显增加(P0.05),血清AST、ALT、TBil水平明显升高(P0.05),IL-17A含量明显增加、IL-10含量明显减少(P0.05),肝组织TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显升高(P0.05),Th17比例增加、Treg比例减少,Th17/Treg比值明显增加(P0.05),肝组织ROR-γt蛋白和m RNA表达明显升高,Foxp3蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,芪参汤组和秋水仙碱组肝纤维化评分、胶原染色面积明显减少(P0.05),血清AST、ALT、TBil水平明显降低(P0.05),IL-17A含量明显减少,IL-10含量明显增加(P0.05),肝组织TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显降低(P0.05),Th17比例减少,Treg比例增加,Th17/Treg比值明显降低(P0.05),肝组织ROR-γt蛋白和m RNA表达明显降低,Foxp3蛋白表达明显升高(P0.05)。结论芪参汤可抑制大鼠肝纤维化,其作用机制可能与减少胶原纤维增生、改善大鼠肝功能、降低炎症因子水平、恢复Th17/Treg平衡有关。     

中药补肺活血胶囊对PM2.5模型小鼠肺炎性损伤的影响

目的观察补肺活血胶囊对PM2.5致小鼠肺组织炎性损伤的影响。方法采用鼻腔滴注PM2.5悬液的方法建立PM2.5小鼠肺损伤修复模型,分为空白对照组,低、中、高剂量染毒组,低、中、高剂量染毒中药组,每组10只。运用免疫组化法、ELISA法检测各组小鼠肺组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的蛋白表达,及IL-1β、IL-10等炎性因子的含量。结果鼻腔滴注PM2.5悬液可以成功建立肺损伤模型,肺组织炎性损伤程度随染毒剂量的增加而加重;中药补肺活血胶囊干预后,小鼠肺间质HMGB1蛋白表达降低(P0.05),肺组织IL-1β、IL-10等炎性因子的含量降低(P0.05)。结论补肺活血胶囊可以减少肺组织中炎性因子的分泌,改善肺炎性损伤程度。     

PM2.5对哮喘大鼠IL-17/IL-23炎症介质的影响及人参皂苷Rg1干预研究

目的：基于气道IL-17/IL-23炎症介质轴,探讨人参皂苷Rg1对PM2.5哮喘大鼠肺损伤保护机制。方法：采集并分离交通相关大气细颗粒物PM2.5,利用卵白蛋白致敏和激发建立幼龄哮喘大鼠模型,再给予PM2.5气管滴注建立PM2.5哮喘肺损伤模型,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1含量,RT-PCR检测RORγt mRNA表达,并行肺组织病理和电镜分析。结果：成功建立PM2.5气管滴注哮喘大鼠模型;哮喘大鼠模型血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1表达量增大（P<0.01）,肺组织RORγt mRNA表达量增加（P<0.01）;经PM2.5气管滴注后,模型组大鼠血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1含量进一步增加,RORγt mRNA表达量进一步上升（P<0.01）;经皂苷Rg1干预后,呈现剂量依赖性下调血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1水平,下调RORγt mRNA表达量。结论：人参皂苷Rg1呈剂量依赖性改善PM2.5致哮喘大鼠肺气道炎症反应、改善肺损伤。     

玉屏风散对过敏性鼻炎小鼠GATA3，Foxp3表达的影响

目的:研究玉屏风散对卵清蛋白(OVA)诱导的过敏性鼻炎(AR)小鼠肺组织中GATA结合蛋白(GATA3)和叉头转录因子3(Foxp3)蛋白表达水平的影响,初步探讨玉屏风散治疗AR的作用机制。方法:采用OVA+Al(OH)_3腹腔注射致敏,然后OVA滴鼻激发的方法建立过敏性鼻炎小鼠模型,将小鼠分为正常组、模型组、氯雷他定组(3 mg·kg~(-1))和玉屏风散组(6.5 g·kg~(-1))。灌胃给药3周后,苏木素-伊红(HE)染色观察鼻黏膜组织中的肥大细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎性细胞的浸润情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组小鼠外周血中OVA特异性免疫球蛋白(Ig)E及白细胞介素-4(IL-4),IL-5,γ-干扰素(INF-γ)等细胞因子水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织中GATA3和Foxp3蛋白的表达。结果:AR模型小鼠出现挠鼻、喷嚏、流涕等症状;鼻黏膜切片HE染色可见AR小鼠鼻黏膜纤毛大量脱落,组织间质水肿明显,小血管扩张,大量嗜酸性细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润。而玉屏风散灌胃给药可明显改善过敏性鼻炎小鼠的鼻部症状;鼻黏膜上皮结构完整,排列均匀,未见明显组织间隙水肿和血管扩张,炎性细胞浸润情况明显减轻。与正常组比较,AR模型组小鼠外周血中OVA特异性Ig E以及IL-4,IL-5等细胞因子水平显著升高(P0.01),而INF-γ水平显著降低(P0.01);与模型组比较,氯雷他定和玉屏风散灌胃给药能显著降低AR小鼠外周血中OVA特异性Ig E以及IL-4,IL-5等细胞因子水平(P0.05),同时上调INF-γ水平(P0.05,P0.01);Western blot结果显示,与正常组比较,AR模型组小鼠肺组织中GATA3蛋白的表达显著增加,而Foxp3蛋白的表达明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,玉屏风散能显著降低GATA3蛋白的表达,并显著升高Foxp3蛋白的表达(P0.01)。结论:玉屏风散对OVA诱导的过敏性鼻炎具有改善作用;玉屏风散可能通过调节Th2/Treg平衡等机制调节机体的免疫反应。     

三子养亲汤通过抑制miR-155-5p调控Th17/Treg平衡失调对支气管哮喘的机制研究

目的:探讨三子养亲汤对与Th17/Treg细胞关联密切的miR-155表达是否产生调控作用。方法:建立培养原代大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),利用噻唑蓝比色法(MTT)检测大鼠气道平滑肌细胞的增殖情况,Real-time PCR检测miR-155-5p的mRNA表达,Werstern blot检测IL-17、IL-10、Foxp3、RORΥt蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组支气管平滑肌细胞增殖率明显增高,IL-10、Foxp3蛋白表达量明显下调,RORγt、IL-17蛋白表达显著上调(P0.01);与模型对照组比较,三子养亲汤5%、10%、15%、20%含药血清6 g/kg组能有效抑制支气管平滑肌细胞的过度增殖,三子养亲汤6 g/kg 20%含药血清能够下调miR-155-5p的表达,三子养亲汤含药血清各组IL-10、Foxp3蛋白表达量上调,RORΥt、IL-17蛋白表达量下调(P0.05),6 g/kg三子养亲汤20%含药血清+miR155-5抑制剂组Foxp3、IL-10蛋白表达量上调,IL-17、RORΥt蛋白表达量下调。结论:三子养亲汤通过下调miR-155的表达,进而调节Th17/Treg平衡失调,这可能是其抗支气管哮喘的作用机制。     

从Th17/Treg失衡探讨肝纤维化“主客交浑”机制

目的:从Th17/Treg失衡探讨肝纤维化"主客交浑"机制。方法:选取健康雄性大鼠16只,随机分成正常组和模型组。采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型,造模结束后检测两组大鼠肝纤维化指标、Th17细胞和Treg细胞的相关指标,了解Th17/Treg平衡的变化情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化指标LN、Ⅳ-C、PCⅢ、HA明显升高,差异有统计学意义(P0.01);模型组大鼠RORγt、Foxp3、IL-6、IL-17、IL-10、RORγt/Foxp3、IL-6/IL-10、IL-17/IL-10均较正常组显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:肝纤维化大鼠出现了以Th17细胞占优势的Th17/Treg失衡,失衡的Th17/Treg可能是肝纤维化"主客交浑"的机制之一。     

清肠温中方通过miR-675-5p/VDR信号通路调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的机制研究

目的研究清肠温中方调控DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的作用机制。方法 24只SPF级雄性SD大鼠,按体质量依照随机数字表将其随机分为空白组、模型组、清肠温中方组。空白组自由饮用去离子水,同时予去离子水灌胃;模型组和清肠温中方组自由饮用4.5%DSS溶液制备UC模型,同时模型组给予去离子水,清肠温中方组予清肠温中方灌胃。7 d后麻醉大鼠后取血及结肠组织,应用Real time-PCR法检测结肠miR-675-5p、VDR m RNA、RORγt mRNA、Foxp3 m RNA的表达,ELISA法检测血清IL-10、IL-17的表达,免疫组织化学法检测ZO-1、Occludin的蛋白表达及分布。结果与空白组比较,DSS诱导的UC大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA及血清IL-17的表达较空白组明显升高(P 0.05或P 0.01),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较空白组明显降低(P 0.05或P 0.01);清肠温中方干预后,大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA、血清IL-17的表达较模型组明显降低(P 0.05),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较模型组明显升高(P 0.05或P 0.01)。结论清肠温中方可能通过降低mi R-675-5p的表达,靶向调控VDR信号通路,从而调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡、修复肠黏膜屏障损伤,达到治疗UC的目的。     

三子养亲汤对支气管哮喘模型大鼠Th17/Treg比例失衡的影响

目的:探讨三子养亲汤对支气管哮喘模型大鼠Th17/Treg比例失衡的影响。方法:大鼠分为正常对照组、模型组、地塞米松0.075 mg/kg组、三子养亲汤1.5 g/kg、3 g/kg和6 g/kg剂量组,采用卵清白蛋白(OVA)致敏,并雾化吸入卵清白蛋白激发复制大鼠支气管哮喘模型,给予不同剂量三子养亲汤进行干预,各组大鼠经末次激发24 h后,取肺组织进行HE染色观察病理变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠BALF中的IL-10、TGF-β和IL-17、IL-6的含量;采用免疫组化法检测肺组织中IL-10和IL-17蛋白的表达。结果:与模型组相比,三子养亲汤各组和地塞米松组明显减少大鼠BALF中IL-17含量、下调肺组织中IL-17蛋白表达,三子养亲汤3 g/kg、6 g/kg组和地塞米松组可降低哮喘大鼠BALF中IL-6含量,升高IL-10、TGF-β含量,上调肝组织IL-10蛋白的表达。结论:三子养亲汤能够抑制哮喘大鼠的气道炎症,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡失调有关。     

青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制研究

目的探讨青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制。方法将24只健康的SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组与青黛组。模型组和青黛组大鼠自由饮用4.5%DSS溶液以制备结肠炎模型,空白组自由饮用去离子水作为对照,同时青黛组大鼠给予青黛(600 mg/kg)灌胃,模型组、空白组大鼠给予去离子水处理,每天观察大鼠一般情况,记录体质量、粪便性状,检测粪便潜血,计算疾病活动指数,干预7 d,麻醉后处死大鼠,取血及结肠组织。RT-qPCR法检测结肠RORγt mRNA、Foxp3mRNA的表达;Western Blotting法检测结肠GPR41、GPR43、RORγt、Foxp3蛋白的含量,ELISA法检测血清IL-10、IL-17水平。结果与空白组相比,DSS诱导的结肠炎大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3,血清IL-10的表达明显降低(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、血清IL-17表达明显升高(P <0.05或P <0.01);青黛干预后,大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3、FOXP3 m RNA,血清IL-10的表达较模型组明显升高(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、RORγt mRNA、血清IL-17表达较模型组明显降低(P <0.05)。结论青黛能够上调GPR41、GPR43的表达,进而调节Treg/Th17免疫平衡治疗溃疡性结肠炎。     

加味小青龙汤影响Treg/Th17细胞失衡改善小鼠哮喘的机制研究

目的 研究加味小青龙汤对实验性哮喘小鼠Treg/Th17细胞失衡的影响,探讨其改善哮喘的疗效和机制。方法 将Balb/c小鼠随机分为4组：对照组、模型组、小青龙汤组、加味小青龙汤组。除对照组,其余组采用卵清蛋白(OVA)致敏、激发制备小鼠哮喘模型,小青龙汤和加味小青龙汤组分别灌胃小青龙汤和加味小青龙进行治疗。末次致敏24 h后,HE染色观察肺组织炎性细胞浸润,PAS染色观察支气管杯状细胞增生,ELISA法检测血清IgE和BALF中IL-6、IL-17A、IL-10水平变化,Giemsa染色统计支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞种类,流式细胞术分析脾组织中CD4+ROR-γt+和CD4+Foxp3+细胞百分比。Real-time PCR检测肺组织中ROR-γt、FoxP3 mRNA的表达,Western blot检测肺组织中RORγt、FoxP3、HO-1及胞核Nrf2蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠肺组织炎症评分、支气管细胞增生及BALF中炎性细胞计数显著增加;与模型组比较,加味小青龙汤可以改善上述变化,且优于小青龙汤组。与对照组比较,模型组血清IgE、BALF中IL-6...     

补肾温阳法诱导Foxp3+调节性T细胞在哮喘免疫治疗中的作用

目的探讨补肾温阳中药通过诱导转录因子Foxp3活化、调控调节性T细胞,而发挥对变应性哮喘的免疫治疗作用。方法80只BALB/c(白变种实验室老鼠)小鼠随机分成4组:对照组、哮喘组、中药干预组及中药+抗体干预组,用屋尘螨(HDM)变应原经腹腔注射致敏、滴鼻激发复制变应性哮喘样肺部炎症模型。中药干预组、中药+抗体干预组每只小鼠给予补肾温阳中药(用淫羊藿、巴戟天免煎颗粒配制500 ul灌胃qod,对照组给予500 ul NS。观察各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数结果;检测各组BALF上清细胞因子IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度及血清Ig E水平;分离小鼠脾脏细胞,以流式细胞仪方法检测CD4+CD25+Treg细胞;用实时荧光定量PCR检测Foxp3-m RNA。结果正常对照组、中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度分别高于哮喘模型组(P0.01)和中药+抗体干预组(P0.05);中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度低于正常对照组(P0.05);哮喘模型组BALF上清细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)浓度高于中药+抗体干预组(P0.05)。血清Ig E水平正常对照组、中药干预组均分别低于哮喘模型组(均为P0.01)及中药+抗体干预组(均为P0.05);中药干预组血清Ig E水平低于正常对照组(P0.05)。哮喘模型组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平较正常对照组、中药干预组均明显减低,差异有统计学意义(分别为P0.01,P0.05)。与哮喘模型组、中药+抗体干预组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平显著增高,差异有统计学意义(均为P0.05)。与正常对照组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平较低,差异有统计学意义(P0.01)。与哮喘模型组比较,中药+抗体干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平降低,差异有统计学意义(均为P0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3-m RNA、细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)均参与了支气管哮喘的发病过程,补肾温阳中药可通过上调CD4+CD25+调节性T细胞数量、诱导Foxp3-m RNA的表达与活化、降低血清Ig E水平及增加IL-10、IFN-γ、TGF-β1含量等机制来达到减轻哮喘炎症的作用。     

基于PI3K信号通路探讨肺“俞募配穴”艾炷灸对哮喘小鼠RORγt/Foxp3表达的影响

目的:观察肺"俞募配穴"艾炷灸对哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中相关炎性因子含量及对肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响,并探讨其机制。方法:将60只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、LY剂组、电针组、艾炷灸组,每组12只。采用卵蛋白(OVA)致敏法复制哮喘小鼠模型。LY剂组予尾静脉注射PI3K抑制剂LY294002;电针组、艾炷灸组分别予电针、艾炷灸"肺俞""中府",1次/d,连续2周。ELISA法检测小鼠血清和BALF中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)含量,荧光定量PCR法及免疫组织化学法检测肺组织中PI3K、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清和BALF中IgE及IL-4含量、肺组织中PI3K及RORγt mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01),血清和BALF中IFN-γ含量、肺组织中Foxp3 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,LY剂组、电针组及艾...     

穴位注射对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg相关转录因子及细胞因子表达的影响

目的:观察穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜叉头状转录因子p3(Foxp3)和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、血清白细胞介素-17(IL-17)表达的影响,从Th17/Treg平衡角度探讨穴位注射治疗AR的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、穴位注射组、非经非穴组,每组8只。采用卵清蛋白致敏法复制AR模型。穴位注射组每隔3d于"印堂"和双侧"迎香"注射地塞米松、转移因子和利多卡因混合液各0.1mL,共4次。非经非穴组同样方法于大鼠左右臀部"后海"与"环跳"连线中点和左(或右)前肢腋窝直下5cm处注射。采用叠加量化记分法进行行为学评分,采用免疫组织化学法检测鼻黏膜中Foxp3和RORγt的表达,酶联免疫吸附法检测血清中IL-17的表达。结果:模型组症状评分高于正常组(P0.05),穴位注射组症状评分低于模型组和非经非穴组(P0.05),非经非穴组症状评分略低于模型组,但差异无具统计学意义(P0.05)。模型组较正常组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率降低(P0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率增高、血清IL-17表达升高(P0.05),Foxp3/RORγt比值下降(P0.05)。与模型组和非经非穴组比较,穴位注射组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率增高(P0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率、血清IL-17表达降低(P0.05),Foxp3/RORγt比值升高(P0.05)。大鼠鼻黏膜Foxp3表达与症状评分呈负相关(P0.05),鼻黏膜RORγt表达和血清IL-17表达与症状评分呈正相关(P0.05),鼻黏膜Foxp3/RORγt与症状评分呈负相关(P0.05)。结论:穴位注射可通过上调鼻黏膜Foxp3表达水平,下调鼻黏膜RORγt表达水平,纠正其失衡,并抑制IL-17产生,从而缓解鼻部炎性反应。     

玉屏风颗粒对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg平衡及相关细胞因子的影响

目的研究玉屏风颗粒对变应性大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法采用OVA制备AR大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)。各组干预后评估大鼠AR行为学总分,HE和AB-PAS染色观察鼻黏膜组织病变情况,ELISA检测AR大鼠血清中的IL-17、TGF-β1水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,Western blot检测鼻黏膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果与模型组比较,玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等行为学总分降低(P0.05);上皮细胞结构完整、少量炎症细胞浸润、杯状细胞化生明显减少;血清中的IL-17水平降低、TGF-β1水平升高(P0.05);鼻黏膜RORγt mRNA表达降低、Foxp3 mRNA表达升高(P0.05);鼻黏膜组织RORγt/Foxp3蛋白表达比例升高(P0.05)。结论玉屏风颗粒能明显改善变应性大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡及相关细胞因子有关。     

玉屏风散对支气管哮喘小鼠白细胞介素-10和血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的:建立气道变态反应性小鼠模型,观察玉屏风散对支气管哮喘小鼠白细胞介素-10(IL-10)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,探讨玉屏风散对哮喘的治疗机制。方法:40只Balb/c小鼠随机分成对照组、模型组、布地奈德组和玉屏风散组。应用OVA(卵蛋白)诱导炎症模型。RT-PCR法测定肺组织VCAM-1和IL-10的mRNA水平,ELISA法测定肺泡灌洗液(BALF)的IL-10水平。结果:模型组、布地奈德组和玉屏风散组的IL-10 mRNA表达与对照组相比均明显增加,有显著性差异(P0.05)。玉屏风组,布地奈德组VCAM-1 mRNA的表达与模型组相比明显降低,有显著性差异(P0.05)。玉屏风散组BALF的IL-10水平与对照组、模型组相比显著升高(P0.05)。结论:玉屏风干预后,支气管哮喘模型小鼠IL-10水平升高,并显著降低VCAM-1等黏附分子含量,达到治疗哮喘的目的。     

千金苇茎汤对香烟烟雾暴露模型大鼠肺组织Th17/Treg分化及其相关细胞因子表达的影响

目的:观察千金苇茎汤对香烟烟雾暴露模型大鼠肺组织辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化及其相关细胞因子表达的影响。方法:雄性大鼠60只,随机分为正常组,烟雾模型组,乙酰半胱氨酸组、千金苇茎汤高、中、低剂量组,共6组,每组10只。香烟烟雾造模30 d后,药物分别干预30 d,后处死各组大鼠并取组织;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt),叉头状/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织白细胞介素-17(IL~(-1)7),IL-6,IL~(-1)0,转化生长因子-β_1(TGF-β_1)含量,苏木素-伊红(HE)染色切片观察肺组织病理,流式细胞术检测Treg(Foxp3~+CD25~+)比例,Th17(CD4~+IL~(-1)7~+)比例,Treg/Th17。结果:与正常组比较,模型组ROR-γt mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,千金苇茎汤高、中、低剂量组干预后都能够降低其表达(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组Foxp3 mRNA表达明显降低(P0.05),与模型组比较,千金苇茎汤中低剂量组干预后表达明显升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL~(-1)7,IL-6含量明显升高,IL~(-1)0,TGF-β1含量明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,千金苇茎汤高、中、低剂量组干预后能够降低肺组织IL~(-1)7,IL-6含量,同时升高IL~(-1)0的含量(P0.05),与Real-time PCR检测的结果趋势一致。流式细胞术检测显示,千金苇茎汤中、低剂量组干预后Th17(CD4~+IL~(-1)7~+)比例降低,Treg/Th17增加(P0.05,P0.01)。结论:千金苇茎汤能调节Treg/Th17,使Th17/Treg达到平衡状态。     

定心方通过上调CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达对PM2.5所致动脉粥样硬化的影响

目的:观察定心方(DXR)在小鼠吸入PM2.5所致动脉粥样硬化(AS)过程中对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs)表达调控的影响。方法:50只载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠喂食高脂饲料并吸入严重污染的自然空气,随机分为5组,DXR低、中、高剂量组分别灌胃DXR 9.29,18.59,37.18 g·kg~(-1)·d~(-1);辛伐他汀组灌胃辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1);模型组灌胃等剂量生理盐水;10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料吸入过滤空气设为正常组。16周后检测小鼠血清脂质、酶联免疫吸附测定测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素~(-1)0(IL~(-1)0)及转化生长因子-β(TGF-β)水平;流式细胞法检测脾脏CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量;苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉AS斑块形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉AS斑块Foxp3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠主动脉AS斑块形成,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显升高,IL~(-1)0及TGF-β水平明显降低,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显减少,Foxp3蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,辛伐他汀组,DXR中、高剂量组小鼠AS斑块面积明显减小,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显降低,IL~(-1)0及TGF-β水平明显升高,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显增加,Foxp3蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:DXR可通过上调CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs表达发挥抗PM2.5所致AS功效。     

益气解毒颗粒协同顺铂对鼻咽癌移植瘤干预及调节Foxp3/ROR-γt平衡的作用

目的探讨益气解毒颗粒对鼻咽癌移植瘤微环境中调节性T细胞(Treg)主导的免疫耐受的影响,及其与顺铂联合应用的体内抗肿瘤效应。方法采用肿瘤细胞CNE2制备鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,观察益气解毒颗粒单用或与顺铂联合使用在体内的抑瘤效应,检测转录因子叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和维甲酸依赖性孤核受体γ(ROR-γt)蛋白表达水平和荷瘤裸鼠血清中IFN-γ、TGF-β、IL-17等的水平。结果益气解毒颗粒组和联合治疗组的荷瘤裸鼠血清中TGF-β和IL-17水平明显低于模型组,IFN-γ水平明显高于模型组和顺铂组,凋亡率明显高于模型组,Foxp3蛋白表达明显升高,ROR-γt蛋白表达明显下降,其中联合治疗组明显优于各药单用组(P0.01)。结论益气解毒颗粒能有效调节小鼠Treg/Th17的平衡,恢复Treg的功能,增强小鼠化疗期间T细胞的免疫功能,产生抑癌效应,联合顺铂可减轻化疗毒性。     

龙胆泻肝汤对变应性接触性皮炎模型小鼠Treg/Th17细胞平衡调节作用的实验研究

目的:观察变应性接触性皮炎Treg/Th17细胞平衡的变化,探讨龙胆泻肝汤治疗变应性接触性皮炎的部分干预机制。方法:将40只小白鼠随机分为4组:空白组、模型组、龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组,每组10只。采用DNCB皮肤涂抹方法制备小鼠背部ACD模型。模型复制成功后,龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组小鼠均按照成人2倍等效剂量灌胃,连续给药21 d,空白组、模型组给予等量蒸馏水灌胃。实验结束后,取小鼠致敏部位皮肤,对皮肤组织中Foxp3、RORγt、IL-17 mRNA及蛋白的表达水平进行检测。结果:与空白对照组比较,模型对照组、西药组、龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型对照组比较,西药组和龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:Treg/Th17细胞失衡可能是变应性接触性皮炎的发病机制之一,而龙胆泻肝汤可能就是通过作用于该靶点,调节Treg/Th17细胞平衡,而实现其对变应性接触性皮炎的治疗作用。