MicroRNA-3963促进小鼠间充质干细胞成脂分化

目的:探讨MicroRNA-3963调控小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)的成脂分化能力。方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,将miR-3963mimic或inhibitor及其阴性对照分别转染MSC细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-3963的表达量及转染效率,并于转染后进行成脂诱导分化培养14 d后应用油红染色检测脂滴形成情况,应用q-PCR和Western blot方法从转录水平和蛋白水平检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达。结果:q-PCR检测结果表明,转染miR-3963 mimic可显著上调miR-3963表达(P0.001),而转染miR-3963inhibitor可显著下调miR-3963表达(P0.001)。油红染色结果表明,过表达的或敲减miR-3963表达的M SC进行成脂诱导分化培养14 d后,转染miR-3963 mimic可明显促进MSC的脂滴形成。q-PCR和Western blot检测结果显示,转染miR-3963 mimic可显著促进成脂基因C/EBPα和PPARγ的表达;而转染miR-3963 inhibitor则其成脂分化能力较对照组显著降低。结论:miR-3963可调控小鼠骨实质来源的MSC的成脂分化能力,且可促进小鼠MSC的成脂分化。     

过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞成脂分化的影响与作用机制

目的:探讨基因修饰过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响与作用机制。方法:将稳定过表达VCAM-1的MSC细胞(MIGR1-VCAM-1)和转入空载体的MSC细胞(MIGR1)分别向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real-time PCR检测成脂分化能力与相关关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达;Western blot检测相关信号通路P38、ERK和JNK通路的活化。利用信号通路抑制剂处理MSC,观察其成脂分化能力的变化。结果:无论是自分化组还是诱导分化组,过表达VCAM-1的MIGR1-VCAM-1/MSC与对照组MIGR1/MSC相比,脂滴变大,脂肪细胞数量显著增加(P0.01);同时在mRNA水平调控成脂分化的关键转录因子C/EBPα和PPARγ表达显著上调;Western blot检测相关信号通路,结果表明JNK通路在VCAM-1调控成脂分化中明显下调,P38及ERK通路则显著上调;加入通路抑制剂后,JNK通路抑制可显著上调MIGR1-VCAM-1/MSC成脂分化能力,脂肪数量明显增加(P0.01),且相关转录因子C/EBPα和PPARγ的mRNA表达也显著上升;而抑制P38及ERK通路则使MIGR1-VCAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数则更小、更少。结论:过表达VCAM-1可促进小鼠MSC成脂分化,VCAM-1可能通过抑制JNK信号通路,活化P38及ERK通路促进小鼠MSC成脂分化能力。     

小鼠脂肪前体细胞成棕脂能力与增龄相关性及其机制的探究

目的：探讨小鼠脂肪前体细胞成棕色脂肪能力与增龄的相关性及其分子机制。方法：体外培养不同年龄段小鼠的脂肪前体细胞,采用油红O染色鉴定前体细胞成棕脂能力;采用实时定量PCR检测年轻组和年老组小鼠脂肪前体细胞中微小RNA（micro RNA,miR）-146b-3p表达情况;通过转染miR-146b-3p模拟物或抑制物,使其过表达或抑制其表达,实时定量PCR法检测相关的脂联素、脂滴包被蛋白、脂肪酸结合蛋白4、解偶联蛋白-1基因的表达情况。结果：年老组小鼠的脂肪前体细胞成棕脂分化能力较年轻组小鼠明显减弱,同时年老组小鼠的脂肪前体细胞miR-146b-3p表达也下降。过表达miR-146b-3p可改善年老组小鼠脂肪前体细胞的成棕脂能力,而年轻组小鼠脂肪前体细胞的成脂能力随miR-146b-3p表达下降而降低。结论：脂肪前体细胞向棕色脂肪细胞分化的能力随着年龄的增加而降低,miR-146b-3p可能是其中的一个作用靶点。     

miR-376b-3p可促进Runx2诱导C2C12细胞进行成骨细胞早期分化*

背景：转录因子 Runx2是调节成骨分化及骨发育的关键因子,过表达 Runx2可诱导间质细胞 C2C12分化为成骨细胞,但相关诱导分化分子机制并不清楚。目的：分析 miR-376家族成员在 Runx2诱导 C2C12细胞进行成骨分化过程中的作用。方法：利用可诱导表达Runx2的细胞系C2C12/Runx2Dox,在不同的时间点通过荧光定量PCR方法检测miR-376家族成员表达情况。C2C12/Runx2 Dox胞标记基因碱性磷酸酶及骨钙素表达情况,并利用碱性磷酸酶染色法分析碱性磷酸酶活性。利用在线工具miRanda, miRWalk与TargetScan共同预测miR-376b-3p潜在靶基因。利用DAVID Bioinformatics Resources数据库对得到的靶基因进行功能聚类分析。结果与结论：在 Runx2诱导 C2C12进行成骨分化过程中 miR-376b-3p 表达显著增加,其他成员表达无明显变化。转染 miR-376b-3p mimic 可上调碱性磷酸酶表达,但对骨钙素表达无影响;转染 miR-376b-3p mimic也可增加碱性磷酸酶活性。靶基因功能聚类分析结果表明 miR-376b-3p 可参与机体骨骼发育过程,表明其在成骨分化过程中的作用。研究结果表明,Runx2通过上调 miR-376b-3p 的方式对与成骨分化相关基因的表达进行调节,以促进 C2C12进行成骨细胞的早期分化。细胞转染miR-376b-3p mimic后利用荧光定量PCR检测成骨细     

细胞间黏附分子 1 通过活化 MAPK 通路调节小鼠间充质干细胞向脂肪细胞分化简

本研究旨在探讨细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1）调节小鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）向脂肪细胞分化的分子机制.分别将小鼠ICAM-1重组逆转录病毒MIGR1-ICAM-1和空载体逆转录病毒MIGR1感染小鼠间充质干细胞系C3H10T 1/2细胞,获得稳定高表达ICAM-1的C3H10T 1/2细胞（MIGR1-ICAM-1/MSC）和对照组细胞（MIGR1/MSC）.通过Western blot检测P38,ERK和JNK通路的活化情况,观察MIGR1-ICAM-1/MSC和MIGR1/MSC向脂肪细胞的诱导分化.实验组加入P38、ERK及JNK 3种信号通路抑制剂后进行培养并观察其成脂肪分化情况.以原位油红染色观察脂滴,应用real-time PCR检测成脂分化关键转录因子C/EBPα和PPARγmRNA的表达水平.结果显示,ICAM-1过表达可活化MSC的P38、ERK及JNK通路;原位油红染色及real-time PCR检测结果显示对ERK通路活化抑制可导致MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平上调,脂滴变大,脂肪数量增加（P＜0.01）;阻断P38通路后MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数量更小、更少（P＜0.01）.结论：ICAM-1可能通过活化ERK信号通路抑制MSC的成脂分化,通过活化P38通路维持小鼠MSC成脂分化能力.     

再生障碍性贫血骨髓微环境脂肪化相关lncRNA的筛选与鉴定

目的:系统筛选与鉴定再生障碍性贫血(再障,AA)骨髓微环境脂肪化相关的长非编码RNA(lncRNA)。方法:通过生物信息学分析ChIPBase中PPARγ和C/EBPα的ChIP-Seq数据,筛选PPARγ和C/EBPα共转录调控的候选lncRNA,并在骨髓间充质干细胞(BM-MSC)的体外成脂分化模型、敲低PPARγ和C/EBPα表达的BM-MSC以及临床再障BM-MSC样本中通过qRT-PCR验证候选lncRNA的表达。结果:qRT-PCR检测结果显示,成脂分化转录因子PPARγ和C/EBPα在再障来源BM-MSC中均显著高表达,敲低二者表达可以显著抑制再障BM-MSC的成脂分化能力;PPARγ和C/EBPα以结合位点依赖性的方式转录调控LINC01230启动子活性;与对照相比,LINC01230在再障BM-MSC中异常高表达。结论:PPARγ和C/EBPα在再障BM-MSC中异常表达,可能通过转录激活LINC01230促进再障BM-MSC成脂分化,并在一定程度上介导再障骨髓微环境脂肪化的发生。     

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的 探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法 获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果 miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p...     

3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞体外成脂及脂肪细胞功能的比较研究

目的:探讨3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外成脂及脂肪细胞功能的差异。方法:用密度梯度离心和贴壁培养的方法分离纯化人骨髓MSC,在倒置显微镜下观察细胞形态,体外向脂肪方向诱导分化,并通过油红O染色和吸光度值(OD值)检测其分化程度;qRT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)mRNA表达水平;通过诱导的脂肪细胞与THP-1细胞共培养,加入1μg/ml的阿糖胞苷,在48 h测定其对肿瘤细胞的化疗抵抗作用。结果:通过油红O染色和测定吸光度值发现,3T3-L1细胞组脂质聚集量多于MSC组,且OD值大于MSC组(P0.05);qRTPCR结果显示,3T3-L1来源的脂肪细胞的成脂基因PPARγ、FABP4和C/EBPαmRNA的相对表达量高于人骨髓MSC的脂肪细胞(P0.05);共培养实验结果表明,含脂肪细胞组THP-1细胞存活数较对照组多(P0.05),且3T3-L1细胞组与MSC组之间具有统计学差异(P0.05)。结论:3T3-L1细胞的体外成脂能力比人骨髓MSC强;脂肪细胞具有促使THP-1细胞耐受化疗的作用,且在3T3-L1细胞组的作用大于人骨髓MSC组。     

微小RNA146b通过靶向调节干扰素调节因子5控制M1型巨噬细胞极化

目的为了证实miR-146b在小鼠M1/M2型巨噬细胞分化平衡中的作用和机制,我们通过分离小鼠骨髓来源巨噬细胞,在LPS和IFN-γ联合刺激下促进M1型细胞分化;并结合李斯特菌感染和内毒性休克,共同证实miR-146b对M1型巨噬细胞分化的作用。方法分离野生型(WT)和IL-10-/-小鼠骨髓细胞,采用GM-CSF诱导成为巨噬细胞。并在IL-10-/-M1型巨噬细胞中转染miR-146bmimic;评价miR-146b对M1型巨噬细胞分化的影响,以及致炎因子TNF-γ、IL-6和IL-12等表达;采用miR-146bmimic处理李斯特菌感染和内毒性休克动物模型,评价miR-146b mimic对此模型的作用。结果相对于scramble组,miR-146bmimic能明显抑制IL-10缺失小鼠骨髓来源巨噬细胞向M1型分化,并降低了TNFα、IL-6和IL-12等表达。miR-146bmimic也明显减弱了机体对李斯特感染的敏感性,导致肝脏和脾脏菌斑增多;此外,在高剂量LPS刺激下,miR-146b mimic延长了小鼠生存率,并且降低了致炎因子TNFα、IL-6和IL-12等表达。而且,IRF5可以作为miR-146b直接靶向因子。结论 miR-146b在小鼠M1型巨噬细胞激活过程作为一个负调控因子,起到了抑制炎症的作用。     

MicroRNA-146a对人骨髓间充质干细胞分化能力的影响

目的:探讨MicroRNA-146a(miR-146a)对人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)分化能力的影响。方法:从健康志愿者骨髓中分离培养BM-MSC,用miR-146a抑制剂或类似物转染细胞,实时定量PCR检测转染后细胞miR-146a表达量。应用分化实验方法比较转染后各组细胞成脂及成骨分化能力的改变情况,了解miR-146a对BM-M SC分化能力的影响。结果:BM-M SC能够诱导分化成脂肪及成骨细胞。用miR-146a抑制剂或类似物转染细胞后,细胞miR-146a表达量出现相应的下调或上调,与对照组相比,转染miR-146a抑制剂后细胞miR-146a表达下调(P0.01),转染miR-146a类似物后细胞miR-146a表达显著上调(P0.01)。在成脂分化实验中,转染miR-146a抑制剂可抑制BM-M SC向脂肪细胞分化(P0.01),转染miR-146a类似物可促进BM-M SC向脂肪细胞分化(P0.01);在成骨分化实验中,转染miR-146a抑制剂或类似物对BM-MSC成骨分化均无明显影响(P0.05)。结论:BM-MSC具有成脂及成骨分化潜能,miR-146a可促进BM-MSC向脂肪细胞分化。     

抑制miRNA-291b-3p表达对H9C2细胞胰岛素信号通路活性的影响

目的本文探讨抑制miRNA-291b-3p表达在大鼠心肌细胞胰岛素抵抗中的作用,并分析其可能的作用机制。方法 1构建miR-291b-3p mimics和inhibitor腺病毒载体,感染H9C2细胞48h,分析miR-291b-3p水平、AKT/GSK信号通路活性和糖原水平的变化。2TNF-α刺激心肌细胞24h后,再用miR-291b-3p inhibitor腺病毒载体感染H9C2细胞24h,检测AKT/GSK信号通路活性和细胞糖原水平,验证TNF-α通过影响miR-291b-3p表达水平导致心肌细胞胰岛素抵抗。结果 1miR-291b-3p inhibitor腺病毒感染H9C2细胞48h,miR-291表达水平降低,AKT/GSK信号通路活性升高,心肌细胞糖原水平降低;2低表达miR-291b-3p能够逆转TNF-α引起的AKT/GSK通路活性和糖原水平降低。结论低表达miR-291b-3p可促进AKT/GSK信号通路活性,并改善TNF-α引起的胰岛素抵抗。     

miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖抑制及克隆形成的机制研究

目的　检测骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达，探究其对骨肉瘤（ osteosarcoma，OS）细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法　选取 2018年 1月～ 2020年 12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科 30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本，采用实时荧光定量 PCR实验（ qRT-PCR）法检测组织中 miR-146b-5p表达水平；通过介导转染 miR-146b-5p mimics和 miR-146b-5p ASO分别过表达和敲低 miR-146b-5p表达，探究其对骨肉瘤细胞增殖及克隆形成的影响。通过生物学信息数据库预测 miR-146b-5p的潜在靶基因，荧光素酶实验验证两者结合关系，分析 miR-146b5p对靶基因的调控作用。分析靶基因在骨肉瘤中的表达特征及与 miR-146b-5p的相关性，通过细胞增殖实验验证两者的调控作用，以其探究在骨肉瘤中发挥功能的潜在分子机制。结果　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达（ 4.096±1.237）显著低于邻近正常组织（ 5.895±0.834），差异有统计学意义（ t=6.605，P＜ 0.001）。miR-146b-5p过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力（ t=13.233～ 34.599，均 P＜ 0.01）。miR-146b-5p过表达组克隆形成数目（ 48.912±2.032）较对照组（160.834±9.031）明显降低，差异有统计学意义（ t=20.942，P＜ 0.001）。DUSP16是 miR-146b-5p的潜在靶基因， miR-146b-5p负向调控双特异性磷酸酶（ dual speci.city phosphatase 16, DUSP16）表达。骨肉瘤组织中 DUSP16表达（5.683±0.457）较邻近正常组织（ 4.665±0.531）显著升高，差异有统计学意义（ t=7.959，P＜ 0.001），与 miR-146b5p表达呈负相关（ r=-0.667，P<0.05）。共转染过表达 DUSP16逆转了 miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。 miR-146b-5p过表达组 P21水平（ 4.995±0.214）较对照组（ 1.001±0.002）显著升高，差异有统计学意义（ t=32.325，P＜ 0.001）；当共转染 DUSP16过表达后， P21表达（ 0.986±0.012）较单独过表达 miR-146b-5p组（4.995±0.214）显著降低，差异有统计学意义（ t=32.398，P＜ 0.001）。结论　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p显著低表达，其过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖及克隆形成； miR-146b-5p通过靶向负调控 DUSP16表达参与 P53信号通路从而在骨肉瘤发生发展起重要作用。     

慢性腱病模型大鼠肌腱干细胞体外成脂和成肌腱的分化能力

背景：慢性腱病是一种常见的肌腱退行性病变,好发于运动员以及肌腱过度劳损的人群。由于慢性腱病的发病机制尚未阐明,临床上还缺乏有效的治疗手段。 目的：体外研究比较慢性腱病大鼠和正常大鼠来源肌腱干细胞成脂、成肌腱分化能力。 方法：从慢性腱病大鼠以及正常大鼠髌腱中分离培养原代肌腱干细胞,传代培养至第3代,体外观察细胞形态学变化。将两种来源肌腱干细胞（P3）单层培养至细胞融合,分为2组,成脂诱导组用成脂诱导培养基培养,对照组用基础培养基培养。成脂诱导分化21 d后,将两种来源肌腱干细胞的成脂诱导组和对照组分别行油红O染色定量分析。实时荧光定量PCR检测各组细胞成脂性基因C/EBPα和PPARγ2的mRNA的表达。将两种来源的肌腱干细胞体外单层培养至70%-80%融合时,行实时荧光定量PCR检测慢性腱病来源肌腱干细胞以及正常肌腱干细胞成肌腱相关基因Col1a1,Scx,Tnmd和Dcn的mRNA的表达。 结果与结论：肌腱干细胞体外培养至第3代时,正常肌腱来源的肌腱干细胞保持细长纺锤形的典型的干细胞形态,而慢性腱病来源的肌腱干细胞虽然形态发生改变,但仍保持纺锤形形态。肌腱干细胞（P3）体外成脂诱导分化21 d后,慢性腱病来源的肌腱干细胞胞体变大、变圆,可见大量油红O染色阳性的细胞,油红O染色阳性率显著高于正常大鼠（P=0.004）。实时荧光定量PCR结果显示,慢性腱病大鼠来源肌腱干细胞的成脂性基因（C/EBPα和PPARγ2）mRNA的表达均显著高于正常大鼠（P=0.004）,肌腱特异性基因Col1a1,Scx, Tnmd以及Dcn mRNA表达量均明显低于正常大鼠（P =0.009）。说明与正常大鼠来源的肌腱干细胞相比,慢性腱病来源的肌腱干细胞体外成肌腱分化的能力减弱,而成脂分化的能力增强,此结果为进一步揭示慢性腱病发病机?     

shRNA沉默IRS-1基因对鼠前脂肪细胞分化和PPARγ表达的影响

目的观察胰岛素受体底物-1（IRS-1）基因表达受阻对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化和脂质过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响。方法针对小鼠IRS-1基因开放阅读框上的2个区域合成短发夹核糖核酸[shRNA（M和MH）],以pGenesil-1vector为载体构建带绿色荧光蛋白（GFP）靶标的shRNA质粒。以脂质体LipofectaminTM2000介导转染3T3-L1前脂肪细胞,并设阴性对照（HK）载体转染组。细胞转染后,G418筛选稳定表达的阳性克隆并通过免疫印迹法鉴定。应用0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）、10-6mol/L地塞米松（DEX）和5μg/mL胰岛素（Ins）分别诱导小鼠3T3-L1前脂肪细胞空白对照组、HK载体转染组、M和MH转染组分化,在诱导分化的不同时间点收集细胞。用免疫印迹法检测PPARγ的表达。脂肪细胞内脂滴用油红O染色观察。结果与空白对照组、HK组和转染M组IRS-1shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞相比,转染MH组IRS-1shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞IRS-1蛋白表达水平降低70%以上;而MH转染组细胞PPARγ蛋白的表达与前3组3T3-L1前脂肪细胞比较无改变。前3组3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞成功,PPARγ蛋白的表达在脂肪细胞分化成熟过程中逐渐增高。油红O染色显示,随着脂肪细胞的分化成熟,桔红色脂滴逐渐增多;而转染MH组IRS-1shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞经诱导,油红O染色桔红色脂滴显着减少,直到分化的第8天,才见少许桔红色脂滴,且PPARγ蛋白的表达无变化。结论 IRS-1基因沉默后可抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,并在分化过程中抑制PPARγ的表达,说明IRS-1通过调节PPARγ的表达或与PPARγ共同作用在3T3-L1前脂肪细胞的分化中发挥决定性作用。     

血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p在良恶性肺结节鉴别诊断、预后评估中的价值

目的探究微小RNA（miR）-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p在良恶性肺结节鉴别诊断以及预后评估中价值。 方法前瞻性选择2018年6月至2020年6月期间安徽医科大学第二附属医院收治139例肺结节患者作为研究对象,行病理检查或者穿刺活检后确定患者病灶良恶性,其中良性组75例,恶性组64例。2组患者均测定血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p。分析上述指标在患者良恶性结节诊断上价值,恶性组患者血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p与患者病理特征之间关系。随访评估恶性组患者预后,分析血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p对预后预测价值。 结果良性组患者血清miR-146b-3p、miR-15b-5p显著低于恶性组（P＜0.05）,miR-16-5p显著高于恶性组（P＜0.05）。受试者工作特征（ROC）曲线显示,血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p及各种指标联合对于结节良恶性诊断曲线下面积（AUC）分别为0.803、0.786、0.889、0.962。血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p与分化程度、淋巴结转移、临床分期类型有关（P＜0.05）;Spearman相关性分析显示,血清miR-146b-3p、miR-15b-5p均与分化程度呈显著的负相关,且均有统计学意义（r=-0.534,-0.468;P＜0.05）,均与淋巴结转移呈显著的正相关,且均有统计学意义（r=0.582,0.608;P＜0.05）,均与临床分期类型呈显著的正相关（r=0.486,0.519;P＜0.05）;miR-16-5p与分化程度、淋巴结转移、临床分期分别呈显著的正相关、负相关、负相关（r=0.412,-0.563,-0.657;P＜0.05）,且均有统计学意义。预后不良恶性组患者血清miR-146b-3p、miR-15b-5p显著高于恶性组,miR-16-5p显著高于预后良好患者,且上述差异均有统计学意义（P＜0.05）。ROC曲线显示,血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p及各指标联合对于恶性结节患者预后预测AUC分别为0.799、0.772、0.554、0.837。 结论血清miR-146b-3p、miR-15b-5p、miR-16-5p与肺结节良恶性、恶性结节临床特征以及恶性结节患者预后关系密切,三种血清指标联合用于肺结节良恶性鉴别诊断以及预后预测价值优异。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-153-3p调控神经突的生长

目的探讨miR-153-3p在大、小鼠神经突生长中的作用。方法对数生长期C57BL/6小鼠N2A细胞和Rattus norvegicus大鼠PC12细胞,随机分为miR-153-3p过表达组(转染miR-153-3p过表达试剂miR-153-3p mimic)、miR-153-3p抑制组(转染miR-153-3p表达抑制剂miR-153-3p inhibitor)、过表达对照组(转染miR-153-3p mimic空白对照试剂miR-153-3p mimic NC)、抑制剂对照组(转染miR-153-3p inhibitor空白对照试剂miR-153-3p inhibitor NC)。转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞miR-153-3p mRNA相对表达量,免疫荧光法检测神经突生长情况。结果 miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞miR-153-3p mRNA相对表达量(28.98±1.63、19.67±0.88)均高于miR-153-3p抑制组(0.94±0.19、0.89±0.05)、过表达对照组(0.99±0.08、1.00±0.09)、抑制剂对照组(1.00±0.04、1.00±0.14)(P0.05),miR-153-3p抑制组、过表达对照组、抑制剂对照组比较差异均无统计学意义(P0.05);miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞神经突总长度[(31.13±3.85)、(38.08±2.12)μm]和最长神经轴突长度[(18.04±2.58)、17.48±1.75)μm]均较miR-153-3p抑制组[N2A细胞:(54.53±1.83)、(31.74±2.36)μm;PC12细胞:(64.46±12.85)、(29.46±7.36)μm]、过表达对照组[N2A细胞:(42.53±6.29)、(24.99±3.47)μm;PC12细胞:(53.58±4.88)、(25.31±3.66)μm]、抑制剂对照组[N2A细胞:(41.33±2.77)、(24.57±3.86)μm;PC12细胞:(44.44±7.59)、(23.04±4.31)μm]短(P0.05),且过表达对照组、抑制剂对照组PC12细胞、N2A细胞神经突总长度和最长神经轴突长度较miR-153-3p抑制组短(P0.05),过表达对照组、抑制剂对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论miR-153-3p可抑制小鼠N2A细胞、大鼠PC12细胞神经突生长。     

mTOR信号调控PPARγ对再生障碍性贫血BM-MSC成脂分化的作用

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达对再生障碍性贫血(AA)患者骨髓间充质干细胞(BM-MSC)成脂分化的影响。方法:采用激光共聚焦、Western blot和油红O染色等,观察AA组和对照组BM-M SC中m TOR信号、PPARγ蛋白表达和体外诱导成脂分化能力;通过雷帕霉素体外干预,分析m TOR信号和PPARγ在AA患者BM-MSC体外诱导成脂分化中的作用。结果:随着成脂诱导时间的延长,2组脂肪细胞转化率和FABP4表达均增高,在同一时间点,在AA组均高于对照组(P0.01)。2组BM-M SC的胞质及胞核均有p-m TOR和PPARγ的分布,而且AA组p-m TOR和PPARγ蛋白的荧光强度均显著高于对照组(P0.01)。随诱导时间的延长,2组PPARγ表达均呈逐渐增高的趋势;在同一时间点,AA组PPARγ表达明显高于对照组(P0.01)。雷帕霉素早、中和晚期干预组脂肪转化率和FABP4表达均较未干预组明显下降(P0.001)。雷帕霉素早、中和晚期干预组的PPARγ蛋白和m RNA表达均较未干预组均明显下降(P0.001)。结论:m TOR信号可能通过调控PPARγ表达在AA患者BM-MSC体外成脂分化中发挥重要的作用。     

二甲双胍通过调节成脂影响脂肪细胞对白血病细胞作用

目的:探讨二甲双胍对3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化作用,并研究处理后脂肪细胞对白血病细胞的影响。方法:在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟过程中分别给予不同浓度二甲双胍处理,诱导后通过油红O染色和吸光度值(OD值)检测其分化程度;应用real-time PCR检测成脂后关键基因PPARγ、C/EBPα、FABP4(ap2)mRNA的表达水平。诱导后的脂肪细胞分别与GFP+-THP-1细胞共培养,加入1μg/ml的阿糖胞苷,48 h后采用流式细胞仪检测GFP+-THP-1细胞的凋亡。收集诱导后脂肪细胞的上清,与肿瘤细胞基础培养液(RPMI1640)以1∶1混合后培养肿瘤细胞,应用CCK8检测脂肪细胞对白血病细胞增殖,加入1μg/ml的阿糖胞苷,48 h后应用细胞计数仪检测其化疗保护作用。结果:二甲双胍处理组OD值及成脂基因C/EBPα、FABP4表达较对照组低,而PPARγmRNA表达无明显改变;二甲双胍处理后的脂肪细胞共培养组白血病细胞凋亡率高于对照组。脂肪细胞促进白血病细胞增殖并对其有化疗保护作用,这些作用被二甲双胍降低。结论:二甲双胍能抑制3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化,并调节脂肪细胞对白血病细胞凋亡、增殖及化疗的保护作用。