析因设计解析祛斑中药复方体外干预黑色素生成的主效应中药

目的解析祛斑中药复方干预黑色素合成的主效应中药。方法采用3×2析因设计表,以山楂、当归、山茱萸为考察因素,各设2水平,分别测定自由基清除活性抑制率、SOD样活性抑制率、抗紫外线催化作用抑制率、促黑色素分解作用抑制率,并运用SPSS16.0软件辅助解析该复方对干预黑色素合成不同途径的主效应中药。结果各药对自由基清除活性抑制率依次为F_(C因素)F_(A因素)F_(B因素*C因素)F_(B因素),山茱萸对其具有显著抑制作用(P0.05);各药对抗紫外线催化作用的抑制率依次为F_(A因素)F_(B因素)F_(c因素),山楂对其具有显著抑制作用(P0.05)。组方对SOD样活性、促黑色素分解作用均呈现出一定的抑制作用。结论山茱萸、山楂分别为组方中抑制自由基清除活性、抗紫外线催化作用的主效应中药。     

中药对黑素生物合成影响研究I.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂69首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药82味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果显示11味中药乙醇提取物在3个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体化合物熊果苷无统计学差异(P＞0.05).进一步研究这些中药的皮肤脱色机制与评估其临床应用价值是必要的.     

中药对黑素生物合成影响研究Ⅰ.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂６９首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药８２味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响。结果显示１１味中药乙醇提取物在３个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体化合物熊果苷无统计学差异（Ｐ〉０．０５）。进一步研究这些中药的皮肤     

中药对黑素生物合成影响研究Ⅰ.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂６９首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药８２ 味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影 响。结果显示１１味中药乙醇提取物在３个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性 抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体 化合物熊果苷无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。进－步研究这些中药的皮肤脱色机制与评估其临床应用 价值是必要的。     

小柴胡汤对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 观察小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成过程的作用.方法 培养黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系,以熊果苷为对照组,利用MTT法、多巴氧化法、NaOH法测定细胞活力,酪氨酸酶活性及黑素的含量.结果 小柴胡汤40 ug/ml以上的小柴胡汤水煎液可明显抑制黑素瘤细胞和共培养细胞活力(P＜0.01);小柴胡汤水煎液对黑素瘤细胞及共培养细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度药品组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);小柴胡汤对于黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性、黑素生成的抑制作用与其对于共培养细胞中黑素生成及酪氨酸酶活性的抑制作用无差别(P＞0.05),其功效优于阳性对照熊果苷组.结论 小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成有较强的抑制作用.     

当归提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察当归水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞( A375)与角质形成细胞(HaCaT)共培养模型黑素合成的影响.方法:分别培养A375细胞与HaCaT细胞,A375细胞与HaCaT细胞以1∶2的比例接种于培养板后加入MEM培养基培养24 h.用MEM将当归提取物制备成0.1 ～2g·L-15个质量浓度,细胞给药作用48 h,采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给各组A375细胞与HaCaT细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与阴性对照组相比,2,1,0.5 g·L-1当归提取物对共培养细胞的增殖有显著促进作用(P＜0.01);2,1,0.5,0.25 g·L-1当归提取物对黑素合成有显著的抑制作用(P ＜0.05或P＜0.01),呈现浓度依赖性的抑制作用趋势;当归提取物各浓度组对酪氨酸酶活性均有显著抑制作用,2,1 g·L-1组的抑制作用弱于熊果苷组(P＜0.01),0.5,0.25,0.125 g·L-1组与熊果苷组作用相当.结论:当归水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和HaCaT细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用当归治疗黄褐斑提供了实验依据.     

生发片通过激活PKA信号通路促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成实验研究

目的:探讨生发片组方水提物对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响及作用机制。方法:采用MTT法筛选合适的药物浓度,L-多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素生成,Western blotting检测MITF、TYR及p-CREB蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,在0.25~1g·L-1浓度范围内,生发片组方水提物可明显促进酪氨酸酶活性和黑素合成,上调MITF、TYR及p-CREB蛋白的表达。结论:生发片水提物可能通过PKA信号通路促进黑素的合成。     

白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物(祛斑因子A、B)对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。     

中西药对白癜风发病机制中酪氨酸酶调控的研究现状

酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)是皮肤黑素生成途径中的主要限速酶,是黑素细胞分化成熟的一个特征性标志,其活性与黑素合成含量呈正相关.黑素在黑素细胞的黑素小体中合成,由酪氨酸酶催化酪氨酸生成多巴和多巴醌,再经过一系列反应而合成,并通过黑素细胞的树突而运输到附近的角质形成细胞中,从而形成表皮的色素.     

中西药对白癜风发病机制中酪氨酸酶调控的研究现状

酪氨酸酶（Tyrosinase，TYR）是皮肤黑素生成途径中的主要限速酶，是黑素细胞分化成熟的一个特征性标志，其活性与黑素合成含量呈正相关。黑素在黑素细胞的黑素小体中合成，由酪氨酸酶催化酪氨酸生成多巴和多巴醌，再经过一系列反应而合成，并通过黑素细胞的树突而运输到附近的角质形成细胞中，从而形成表皮的色素。     

中药调控酪氨酸酶活性的现状分析

酪氨酸酶是黑素生成途径中的主要限速酶[1],体现在酪氨酸生成多巴和多巴醌的过程均需酪氨酸酶的参与。近年来,色素性皮肤病防治的研究热点趋向于中药对酪氨酸酶的抑制或激活作用,并有望通过这一途径取得突破性的进展。现对目前国内外有关中药调控酪氨酸酶活性的实验报道分析如下。 1 酪氨酸酶与色素性皮肤病 色素性皮肤病可分为色素减退和色素增加两大类,分别表现为皮肤颜色变白和变黑。白癜风是最常见的色素减退性皮肤病[2],发病率为0.5%～2%[3],发病原因复杂。而其发病机制则是由于人体皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶的活性减低或消…     

20种中药对酪氨酸酶抑制作用的研究

 目的：评价某些中药对酪氨酸酶的抑制作用。方法：应用多巴色素法浏定对酪氨酸酶的抑制活性,底物为L-酪氨酸,在 490 nm处浏定吸光度。结果：检查了20种中药乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制活性,其中芦荟、熟地黄、当归等中药抑制作用 较强。结论：某些中药可用于药品或化妆品中治疗色素沉着过多症。     

色象中药对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响

目的:研究黑白两类中药水提取物对人A 375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性调节的影响。方法:采用多巴速率氧化法研究中药对酪氨酸酶活性调节的影响。结果:研究发现,与对照组相比,黑色组中药大部分对酪氨酸酶活性有明显促进作用(P<0.05或P<0.01),而白色组大部分则有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01)。另外,研究发现白蒺藜、白芷、白茯苓、白芍、当归具有双向调节作用,而桃仁虽为白色,但却起着促进作用。结论:黑色或深色类药物促进酪氨酸酶活性的作用更明显,而白色或浅色类药物的抑制作用更明显。说明药材颜色与色素代谢调节存在一定的相关性,在色素代谢障碍性皮肤病的临床治疗中值得借鉴应用。     

白桦脂醇对A375细胞黑素合成及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究植物雌激素成分白桦脂醇对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路调控作用。方法:使用NaOH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性,Western blot和PCR法测定MAPK通路中关键蛋白激酶和TYP、TRP-1、TRP-2、MITF、p38、p-p38蛋白含量及mRNA表达;加入p38信号通路阻断剂(SB203580)之后,测定上述蛋白和mRNA表达。结果:白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性有抑制作用(P0.05或P0.01),SB203580(10μmol/L)能阻断白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性抑制作用;白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白及mRNA表达有抑制作用(P0.05或P0.01),加入SB203580后,阻断p38-MAPK信号通路,白桦脂醇以上作用受到显著抑制(P0.05或P0.01)。结论:表明白桦脂醇通过MAPK信号通路中的p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素合成。     

驱白艾力勒思亚散对酪氨酸酶激活作用的实验研究

目的:观察驱白艾力勒思亚散提取物对酪氨酸酶活性的作用,并进行其动力学研究,探讨其治疗白癜风的作用机理。方法:分别测定驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶的激活率,Matsuda法测定多巴色素自动氧化生成的黑素量,计算黑素生成上调率,并对酪氨酸酶激活作用进行动力学观察。结果:驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶均有明显的激活作用,其激活作用随着药量的增加而增强,黑素生成的上调率也呈剂量依赖性;动力学研究证实此激活作用显著,且醇提液效果优于水提液。结论:驱白艾力勒思亚散是治疗白癜风的有效药物,激活酪氨酸酶是其作用机制之一。     

疮灵液对鼠永生化黑素细胞黑素生成的影响

目的:观察疮灵液对鼠永生化细胞(ATCC~?CRL-2770TM)黑素细胞黑素生成的作用。方法:应用MTT法测鼠永生化黑素细胞增殖、多巴氧化法测鼠永生化黑素细胞内酪氨酸酶活性、NaOH裂解法测鼠永生化黑素细胞黑素含量。结果:疮灵液在100～1 600μg/mL剂量,对小鼠永生化黑素细胞增殖具有增进作用,400μg/mL剂量促进作用最明显(P0.05)。疮灵液为800μg/mL～3 200μg/mL剂量,可显著激活鼠永生化黑素细胞酪氨酸酶活性(P0.01)。疮灵液于100μg/mL～3 200μg/mL剂量,对鼠永生化黑素细胞黑素合成均有增进作用(P0.05)。结论:疮灵液对鼠永生化黑素细胞黑素的合成具有显著增进作用,并且在治疗诸如白癜风的色素疾病中具有潜在的应用。     

补骨脂素对A375细胞黑素合成及ER/MAPK信号通路调控机制探讨

目的:探讨补骨脂素对A375细胞黑素含量、酪氨酸酶活性的影响及作用机制。方法:以密度2×105个/孔的细胞数接种于6孔板中,将细胞分为空白组、雌二醇组、补骨脂素组、补骨脂素+雌激素受体(ER)阻断剂组(ICI182780)(浓度分别为1×10-3,1,1μmol·L~(-1))。采用Na OH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定ER/丝裂原激活的蛋白激酶(ER/MAPK)通路中关键蛋白激酶p38,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外信号调节激酶2(ERK2)和小眼畸形相关转录因子(MITF),多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的蛋白含量及相应mRNA表达。结果:与空白组比较,补骨脂素组对A375细胞中的黑素合成及TYR活性具有显著抑制作用(P0.01),对A375细胞中雌激素受体β(ERβ)蛋白的表达具有明显的抑制作用(P0.05),对p38 MAPK,ERK2,JNK的蛋白表达极显著的抑制作用(P0.01),对MITF,TYR,TRP-1,TRP-2的蛋白表达极显著的抑制作用(P0.01),对ERK2,p38 MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达显著被抑制(P0.01);与补骨脂素组比较,ICI182780能够逆转ERβ,ERK,MITF,TYR,TRP-1的蛋白表达(P0.01)及p38MAPK,JNK,TRP-2的蛋白表达(P0.05),同时能显著阻断补骨脂素对ERK2,p38MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达作用(P0.01)。结论:补骨脂素通过ER/MAPK信号通路下调MITF和TYR,TRP-1,TRP-2的表达量,从而减少黑素合成。     

22味酸味药性中药提取物影响黑素合成的实验研究

目的证实酸味药性中药对黑素的合成具有抑制作用。方法以碱提酸沉、醇提、水提3种方法,提取22味酸味中药有效成分,分为25、12.5、6.25g/L3个浓度,用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测各提取物对酪氨酸酶活性的影响,比较3种不同提取物不同浓度酪氨酸酶活性抑制率分别与熊果苷水溶液1.0、0.5、0.1mmol/L的差异。结果22味酸味中药（山茱萸、山楂、乌梅、五味子、木瓜、虎杖、牛膝、地榆、酸枣仁、墨旱莲、覆盆子、枳实、枳壳、绿萼梅、枳椇子、桑椹、石榴皮、白芍、金樱子、马齿苋、诃子、五倍子）碱提物除墨旱莲外,余21味对酪氨酸酶均有不同程度的抑制作用,其中乌梅在25g/L时抑制率最高（88.49±9.98）%,枳实在6.25g/L时抑制率最低（11.22±3.36）%;醇提物除墨旱莲无抑制作用外,其余21味中药均可抑制酪氨酸酶活性,以枳椇子在25g/L时抑制率最高（75.92±5.57）%,枳壳在6.25g/L时抑制率最低（9.60±1.15）%;水提物均有抑制酪氨酸酶活性的作用。其中桑椹在25g/L时抑制率最高（54.23±3.56）%,酸枣仁在6.25g/L时抑制率最低（10.25±1.83）%。与1mmol/L熊果苷水溶液比较,乌梅、五味子、五倍子、金樱子、覆盆子、木瓜、马齿苋、桑椹、牛膝、石榴皮碱提物、乌梅、五倍子、石榴皮、枳椇子、山楂、牛膝醇提物及木瓜、覆盆子、桑葚水提物在25g/L浓度时酪氨酸酶抑制率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;与0.5mmol/L熊果苷水溶液比较,木瓜碱提物及乌梅醇提物在12.5g/L时酪氨酸酶抑制率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论具有酸味药性的一类中药均具有抑制黑素合成的作用,其机制与抑制酪氨酸酶活性有关。     

基于中药血清药物化学方法的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究

目的：利用中药血清药物化学的方法,初步确定逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及其作用机理。方法：通过建立逍遥散经口给药后大鼠血清色谱指纹图,确定大鼠血中移行成分的生药来源,并以血清色谱指纹图为指导,以血中移行成分来源生药为原料,定向富集制备逍遥散提取物;采用体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞株,以熊果苷为阳性对照药,用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法评价逍遥散提取物对细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及作用机理。结果：逍遥散经口给药后大鼠血中发现了14个入血成分,其中4个为血中原型成分,10个为原型入血或代谢产物,分别来自于柴胡、当归、白芍、甘草、茯苓。定向制备的逍遥散提取物对B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成有明显的抑制作用,作用强度呈浓度依赖性。结论：逍遥散的血中移行成分具有抑制B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的作用,是逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础。     

有效调节黑色素代谢中药品种述要

以往研究已经证明,决定肤色深浅的主要因素是皮肤黑色素含量。黑色素在黑素细胞内由酪氨酸经酪氨酸酶氧化合成,因此酪氨酸酶是皮肤黑色生物合成的关键酶,其不仅决定着黑色素合成的速率,而且还是黑素细胞分化成熟的特征性标志。现代医学研究证明,酪氨酸酶活性与多数色素障碍性皮