人类不成熟卵体外培养的应用

1935年Pincus和Enzmann在家兔的实验中发现,若将不成熟卵母细胞从卵泡中释放出来,它在体外适当培养基中可发育成熟.这一现象使人们开始联想到从体内抽取的不成熟卵母细胞可在体外培养成熟,并可用来挽救发育中即将退化的卵母细胞,同时可能应用于临床提供卵子用于体外受精.人不成熟卵细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM),由Cha[1]首先报道成功从手术穿刺卵巢获得不同成熟阶段的未成熟卵母细胞,在体外培养到成熟卵母细胞而进行体外受精和胚胎移植.随后Trounson等[2]报道在阴道B超引导下穿刺2～10 mm直径的卵泡,未接受促激素刺激的多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢获得不成熟卵进行体外培养并获得成功妊娠.     

颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响

未成熟卵体外培养成熟(IVM)是近十几年在辅助生殖领域新兴起来的一种助孕技术.其主要原理是模拟体内卵母细胞的发育成熟环境,使从卵巢采集的未成熟卵母细胞在体外培养成熟.然后予以受精,胚胎培养和移植,获得妊娠[1].     

颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响

未成熟卵体外培养成熟(IVM)是近十几年在辅助生殖领域新兴起来的一种助孕技术。其主要原理是模拟体内卵母细胞的发育成熟环境,使从卵巢采集的未成熟卵母细胞在体外培养成熟,然后予以受精,胚胎培养和移植,获得妊娠[1]。目前体外培养的卵母细胞的成熟率低及受精率低,形成的胚胎发     

LH对未成熟卵子体外培养成熟及发育潜能的影响

目的 探讨在体外培养液中添加LH(促黄体生成激素)对人未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)及继续发育潜能的影响.方法 56例多囊卵巢综合征(PCOS)患者进行64个IVM周期治疗,其中36例共36周期在体外培养液中添加LH;另20例共28周期培养液中未添加LH.结果 LH组和对照组的卵母细胞体外培养成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、平均胚胎移植数分别为:65.47％vs 73.02％、70.91％ vs 78.26％、92.31％ vs 86.11％、48.15％vs45.98％、2.07vs2.00,差异均无统计学意义(P＞0.05);胚胎种植率、临床妊娠率分别为:20％vs8.33％、41.67％ vs 28.57％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LH可能改善了未成熟卵母细胞体外成熟后胚胎的继续发育潜能.     

不同成熟阶段、不同来源的人类卵子冷冻后发育潜能的比较

目的:探索卵子冷冻的成熟阶段及来源。方法:将153个不同来源的生发卵泡期(GV期)人类卵子分为3组,未冷冻组,体外培养至成熟阶段(MⅡ期),行单精子胞浆内注射(intracytoplasmicsperminjection,ICSI);MⅡ期冷冻组,体外成熟至MⅡ期,然后将MⅡ期卵子进行冷冻,解冻后将存活的卵子行ICSI;GV期冷冻组,将GV期卵子进行冷冻,解冻后体外培养至MⅡ期,然后再行ICSI。观察解冻后卵子存活情况、体外成熟情况、受精情况及胚胎发育情况。结果:(1)冷冻对卵子具有一定程度的损伤,但GV期冷冻组的存活率、受精率显著高于MⅡ期冷冻组。(2)促排周期来源的卵子的体外成熟率高于孕期及自然周期来源的卵子,孕期来源的未成熟卵子冷冻后具有一定的发育潜能。结论:在GV期进行冷冻可降低冷冻对卵子的伤害;孕期来源的未成熟卵子冷冻后具有一定的发育潜能。     

卵子冷冻在体外受精-胚胎移植中的实验研究

目的研究人类不同成熟期卵子冷冻与复苏的实验条件,观察慢冻速融后卵子形态、存活状况,探讨卵子冷冻的方法。方法收集自愿捐赠获得的辅助生殖周期中的卵母细胞进行慢冻速融,观察成熟卵子(MII)和未成熟卵子(MI GV)的形态学变化以及未成熟卵冻融后体外成熟情况。结果本实验冻存卵子47例,存活18例,含13例成熟卵子(MII)和5例未成熟卵子(MI GV),存活率38.30%。结论本法冻融卵子有部分卵子获得短期存活,为今后卵子冷冻研究提供了一定的实验依据。     

颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响

未成熟卵体外培养成熟（IVM）是近十几年在辅助生殖领域新兴起来的一种助孕技术。其主要原理是模拟体内卵母细胞的发育成熟环境，使从卵巢采集的未成熟卵母细胞在体外培养成熟，然后予以受精，胚胎培养和移植，获得妊娠 。目前体外培养的卵母细胞的成熟率低及受精率低，形成的胚胎发育潜能差，常不能继续发育到囊胚阶段而导致着床失败。     

铅对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的：探讨铅对小鼠生殖作用的影响。方法：采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了铅对小鼠卵母细胞的成熟和体外受精的影响。结果：铅对小鼠卵母细胞生发泡破裂没有影响,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放,影响卵母细胞的存活率并可降低体外受精率和超排卵的卵母细胞数量,随着培养时间的延续,卵母细胞的第一极体的释放率和体外受精率都有显著提高,结论：铅可以破坏卵母细胞减数分裂进行,降低卵母细胞的受精能力,影     

BDE-209对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:研究BDE-209(brominated diphenyl ethers-209)对小鼠卵母细胞体外成熟过程中第一极体释放率和卵母细胞存活率的影响.方法:通过对性成熟未孕健康母鼠进行超排卵处理,取得成熟卵母细胞,将0 μg/mL作为对照组(A组),将10、20、40μg/mL作为实验组(B组、C组、D组),用不同浓度的BDE-209进行体外培养,观察各组在8 h和16h的第一极体释放率和卵母细胞存活率,并比较其差异.结果:分别比较A、B、C、D各组8 h和16h第一极体释放率,各组差异无统计学意义(P>0.05);4组间于8 h和16 h两时段分别比较其第一极体释放率差异均无统计学意义(P>0.05);分别比较A、B、C、D各组8 h和16 h的卵母细胞存活率,A组差异无统计学意义(P>0.05),B、C、D各组16 h组比8 h组卵母细胞存活率均有所降低(P<0.05),于8、16 h时段分别比较4组间卵母细胞存活率,差异无统计学意义(P>0.05).结论:BDE-209不抑制小鼠卵母细胞第一极体释放率,但降低卵母细胞的存活率.     

人类未成熟卵母细胞的体外成熟培养研究进展

随着人类生育年龄的推迟及二胎政策的全面放开,不孕症、卵巢早衰、卵巢储备功能不足等女性生殖疾病罹患率也呈逐年上升趋势。人类未成熟卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation,IVM)培养一直是国内外生殖医学领域研究者关注的热点。体外培养卵泡生长状态受获取卵泡途径、培养环境、培养方案等多种因素影响。文章就人类未成熟卵母细胞IVM培养的临床适应证、培养方案及影响因素作一综述,为相关研究人员和临床工作者提供参考。更多还原     

铅对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的 :探讨铅对小鼠生殖作用的影响。方法 :采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了铅对小鼠卵母细胞的成熟和体外受精的影响。结果 :铅对小鼠卵母细胞生发泡破裂没有影响 ,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放 ,影响卵母细胞的存活率并可降低体外受精率和超排卵的卵母细胞数量。随着培养时间的延续 ,卵母细胞的第一极体的释放率和体外受精率都有显著提高。结论 :铅可以破坏卵母细胞减数分裂进行 ,降低卵母细胞的受精能力 ,影响小鼠的正常生殖功能     

干细胞向卵母细胞样细胞分化研究进展

胚胎干细胞和成体干细胞如骨髓间充质干细胞等在特定的培养条件下可向卵母细胞样细胞分化,但形成的卵母细胞样细胞能否进行减数分裂并进一步生成有受精能力和发育潜能的配子尚不清楚。若能在体外将成体干细胞向有功能的卵母细胞样细胞诱导分化,并通过体外受精的方式生成健康的子代,将为卵子缺乏所致不育女性提供一条新的治疗途径。本文对近年发表的有关干细胞体外向卵母细胞样细胞分化的文献进行综述,以探讨其临床应用的可行性。     

普通培养法联合革兰染色Nugent评分在BV相关GV鉴别诊断中的临床应用

目的 探索一种能正确识别细菌性阴道病(BV)相关阴道加德纳菌(GV)的检测方法,并分析与其他病原菌混合感染的情况,为BV患者针对性、综合性治疗提供一定的科学依据.方法 将普通培养法筛查到的GV可疑菌落进行基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪鉴定,并对其拭子标本进行革兰染色Nugent评分.通过Nugent评分将GV鉴定...     

印迹基因Snrpn在人类卵母细胞及植入前胚胎mRNA表达

目的了解印迹基因Snrpn在人类卵母细胞和植入前胚胎的表达,以分析Snrpn基因表达对人类卵母细胞和早期胚胎发育的影响。方法采用单细胞巢式逆转录多聚酶链式反应(Single Cell Nested RT-PCR)方法,检测人类卵子和植入前各个阶段胚胎的印迹基因Snrpn mRNA表达情况。结果Snrpn在人类卵母细胞GV、MI、MII和植入前胚胎2、4、6、8细胞期都有表达,单卵母细胞扩增成功率为87.5%,单个胚胎为75.8%,平均扩增成功率为79.1%。单个卵母细胞和单个卵裂球扩增成功率无显著性差异(P>0.05),但单卵母细胞较单个卵裂球高。结论建立了比较稳定、可靠的单细胞巢式RT-PCR技术检测基因表达。印迹基因Snrpn在人类卵细胞和植入前胚胎的表达对卵子生长和胚胎发育有着重要意义,为早期胚胎阶段该基因表达正常图谱提供实验依据     

联合使用1-磷酸鞘氨醇和溶血磷脂酸对小鼠卵母细胞体外成熟和受精后胚胎发育的影响

目的通过在成熟培养液中联合添加或单独添加1-磷酸鞘氨醇(S1P)和溶血磷脂酸(LPA)研究对小鼠卵母细胞体外成熟和受精后胚胎发育的影响,以期为优化人卵母细胞的体外成熟系统和提高体外胚胎发育率奠定实验基础。方法 (1)成熟培养液中单独添加50~2 000 nmol/L S1P或1~100μmol/L LPA,体外成熟后的卵母细胞体外受精,得到的胚胎观察并统计卵裂率、8-细胞率、囊胚率。(2)成熟培养液中联合添加不同浓度组合S1P和LPA,体外成熟后的卵母细胞体外受精,得到的胚胎观察并统计卵裂率、8-细胞率、囊胚率。(3)对各组体外成熟得到的卵母细胞进行免疫荧光法染色,以评估MⅡ期卵母细胞纺锤体的完整性。(4)对各组得到的数据应用卡方检验进行分析。结果添加100 nmol/L S1P组的成熟率(81.0%)和8-细胞率(81.9%)显著高于0 nmol/L和2 000 nmol/L组;添加30μmol/L LPA的成熟率(81.8%)和8-细胞率(81.5%)显著高于0μmol/L和100μmol/L组;500 nmol/L S1P+30μmol/L LPA组的成熟率(90.7%)显著高于100 nmol/L S1P组、30μmol/L LPA组合和不添加组;500 nmol/L S1P+30μmol/L LPA组的囊胚率(77.6%)显著高于100 nmol/L S1P组和不添加组。结论联合添加S1P和LPA可能要比单独添加更能促进小鼠卵母细胞成熟,虽然在正常纺锤体百分率方面没有显示出优势,但通过体外受精得到的胚胎得到了较高的囊胚发育率。     

解偶联蛋白2表达对颗粒细胞抗氧化应激的影响

目的：通过观察体外培养颗粒细胞解偶联蛋白2（UCP2）表达变化对细胞抗氧化能力的影响，探讨颗粒细胞参与卵泡抗氧化应激的机制.方法：体外培养人颗粒细胞，分别加入过氧化氢（0.25 mmol/L），ATP（1 mmol/L），ATP＋过氧化氢，继续培养24 h，检测颗粒细胞凋亡发生率.结果：过氧化氢可以诱导颗粒细胞UCP2表达，应用ATP抑制UCP2表达后，细胞凋亡发生率增加，细胞抗氧化能力下降.结论：UCP2通过负反馈机制控制细胞内活性氧水平，参与颗粒细胞抗凋亡和对卵母细胞氧化应激保护作用.     

卵泡刺激素和卵丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的：研究卵泡刺激素和卵丘颗粒细胞对体外培养的卵母细胞核成熟的影响。方法：未成熟卵母细胞来自人绝经期促性腺激素刺激后的小鼠卵巢。所得生殖泡期卵母细胞分成裸卵组和卵丘-卵母细胞复合物组，在分别添加0．1，0．5和1u／mL卵泡刺激素的合成人输卵管液培养液和不添加卵泡刺激素的合成人输卵管液培养液（对照组）中培养36h。培养过程中在倒置显微镜下观察各组卵母细胞生殖泡破裂和第一极体出现。出现第一极体的卵母细胞判为核成熟。结果：裸卵各卵泡刺激素组与对照组的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率差别无显著性意义（P〉0．05）；卵丘-卵母细胞复合物各卵泡刺激素浓度组比对照组卵丘-卵母细胞复合物有更高的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率（P〈0．05）；但各卵泡刺激素浓度组间卵丘-卵母细胞复合物的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率差别无显著性意义（P〉0．05）。卵丘-卵母细胞复合物各组的卵母细胞生殖泡破裂发生率和第一极体排除率明显高于裸卵各组（P〈0．05）。结论：（1）卵丘细胞对卵母细胞的核成熟有重要作用。（2）卵泡刺激素对卵丘-卵母细胞复合物中卵母细胞核成熟有促进作用，其作用可能是通过颗粒细胞介导的。（3）卵泡刺激素对卵母细胞核成熟的促进作用可能主要是促进减数分裂的恢复。     

胃静脉曲张出血及内镜治疗

胃静脉曲张出血是门脉高压症的常见并发症.一般来讲,门脉高压患者约1/5发生GV;另外,5%～10%的GV患者无食管静脉曲张(EV),值得注意的是,GV较常见在出血患者中.     

抑制阴道加特纳菌的乳酸杆菌的分离和筛选

阴道加特纳菌(gardnrella vaginallis GV)曾被认为是引起细菌性阴道炎(bacterial vagionosis BV)的唯一病原体,直至上世纪八十年代,人们才逐渐明白BV并非由某一种细菌,而是由多种目前仍未完全确定的细菌(包括GV)所致的感染性疾病.在健康女性阴道中存在至少上百种微生物,在绝经前这些微生物的优势菌是乳酸杆菌.乳酸杆菌可在阴道表面形成厚的细菌膜,抑制一些腐败菌和病原菌,从而维持阴道环境的微生态平衡.当这种平衡被打破,阴道中"良性"的乳酸杆菌被GV和一些厌氧菌所取代,就会导致BV.研究表明,在这场较量中,GV起着一种协同作用,与一些厌氧菌一起引发BV[1].目前,对于乳酸杆菌与病原菌间相互抑制的机理还不甚清楚.本试验以GV作为拮抗目的菌,从阴道中分离筛选对其具有抑制作用的乳酸杆菌,并对乳酸抑制GV的特性作初步探讨.     

冷冻保存对人卵母细胞纺锤体及发育潜能的影响

背景:卵子冷冻技术的发展为人类辅助生殖技术带来重大的突破,但卵子冷冻的效果并不理想.目的:研究冷冻保存对不同成熟时期人卵母细胞纺锤体及发育潜能的影响.设计、时间及地点:随机对照细胞学体外实验,于2005-04/2006-05在重庆市妇幼保健院完成.材料:体外受精-胚胎移植和卵胞浆内单精子显微注射治疗周期中剩余的未成熟卵子(GⅤ期和MⅠ期).方法:将未成熟卵子随机分为对照组、MⅠ/GⅤ卵冷冻组和体外成熟后MⅡ卵冷冻组,用慢冻速融的方法对MⅠ/GⅤ卵和体外成熟的MⅡ卵进行冷冻和解冻,应用Polscope对卵子的纺锤体进行观察,并观察卵子的发育潜能.主要观察指标:不同组卵子的纺锤体可见率,体外成熟情况,冷冻不同时期卵子的复苏情况,及后期的受精、卵裂、可用胚胎情况.结果:对照组纺锤体可见率77.3%,明显高于MⅡ卵冻融组、MⅠ/GV卵冻融组(56.3%,53.8%,P<0.05),冷冻造成了纺锤体的损伤;冷冻后未成熟卵的体外成熟率下降,但无统计学差异;MⅡ期卵、MⅠ期卵和GⅤ期卵复苏率相似;对照组的受精率(81.8%)明显高于MⅡ卵冻融组、MⅠ/GⅤ卵冻融组(62.5%,59.0%,P<0.05),冷冻后的卵子受精能力受到损害;对照组的卵裂率与MⅡ卵冻融组差异无显著性意义(84.4%,72.7%,P>0.05),MⅡ卵冷冻组的卵裂没有受到明显影响;对照组的卵裂率与MⅠ/GⅤ卵冻融组差异有显著性意义(84.4%,52.9%,P<0.05),MⅠ/GⅤ卵冻融后卵裂率明显下降;冷冻组的胚胎质量下降,可用胚胎率明显降低.结论:控制性超排卵周期中剩余的未成熟卵子无论是直接冷冻还是先体外培养成熟后再冷冻,卵子的纺锤体都受到了一定的损伤,对卵子的发育潜能造成了影响.