小细胞淋巴瘤细胞周期蛋白D1的表达及意义

目的 探讨小细胞淋巴瘤中细胞周期蛋白D1的表达及意义。方法 用免疫组化方法对31例石蜡包埋的小细胞淋巴瘤组织进行CD20、CD45RO及细胞周期蛋白D1检测。结果 28例为B细胞性淋巴瘤,其中5例细胞周期蛋白D1呈阳性表达（17．86％）,且结内、结外型表达无显著差异（P＞0．05）,为套细胞淋巴瘤;3例为T小细胞性淋巴瘤,细胞周期蛋白D1表达呈阴性。结论 细胞周期蛋白D1是套细胞淋巴瘤最具特征性的表达蛋白,是与其他小细胞淋巴瘤鉴别和确诊的重要指标,对治疗和预后有重要的指导作用。     

三氧化二砷对K562细胞细胞周期的影响及其机制的研究

最近，有关三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）有效治疗急性早幼粒细胞白血病，且无严重毒副作用及骨髓抑制的报道［１，２］，再度引起人们对Ａｓ２Ｏ３治疗白血病甚至其他恶性肿瘤的浓厚兴趣。为阐明Ａｓ２Ｏ３治疗慢性髓细胞白血病的机制，并为其临床应用提供理论依据，我们以Ｋ...     

小细胞淋巴瘤细胞周期蛋白D1的表达及意义

目的探讨小细胞淋巴瘤中细胞周期蛋白D1的表达及意义。方法用免疫组化方法对31例石蜡包埋的小细胞淋巴瘤组织进行CD20、CD45RO及细胞周期蛋白D1检测。结果28例为B细胞性淋巴瘤,其中5例细胞周期蛋白D1呈阳性表达(17.86%),且结内、结外型表达无显著差异(P>0.05),为套细胞淋巴瘤;3例为T小细胞性淋巴瘤,细胞周期蛋白D1表达呈阴性。结论细胞周期蛋白D1是套细胞淋巴瘤最具特征性的表达蛋白,是与其他小细胞淋巴瘤鉴别和确诊的重要指标,对治疗和预后有重要的指导作用。     

细胞周期调控相关蛋白在子宫内膜癌的表达及意义

目的　探讨与细胞周期G1→S调控点相关的P185 ,rasP2 1,P5 3,P16 ,P2 1,Rb ,nm2 3H1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及意义。②方法　应用免疫组化 (LSAB)法检测上述蛋白在 2 1例正常子宫内膜、19例子宫内膜上皮内瘤样病变 (EIN)及 45例子宫内膜癌中的表达。③结果　P185 ,rasP2 1,P5 3蛋白表达率由正常内膜、EIN至内膜癌逐渐升高 ,P16 ,P2 1,Rb ,nm2 3H1结果相反。在子宫内膜癌中 ,P185与rasP2 1呈正相关 (r=0 .36 3,P <0 .0 5 ) ,与P5 3,P2 1呈负相关 (r=- 0 .44 8,- 0 .30 3,P <0 .0 5 ) ,rasP2 1,P5 3与P2 1均呈负相关 (r=- 0 .36 5 ,- 0 .32 2 ,P <0 .0 5 ) ,P16 ,P2 1与Rb呈正相关 (r=0 .36 1,0 .44 1,P <0 .0 5 )。P185单因素分析为一预后保护性因素 (χ2 =5 .86 ,P <0 .0 5 ) ;P5 3的表达与临床各参数均有关 ,与ER ,PR的表达呈负相关性 ,单因素及多因素分析表明 ,P5 3异常表达均提示预后差 (χ2 =2 1.39,P <0 .0 5 )。④结论　与细胞周期G1→S调控相关的P185 ,rasP2 1,P5 3,P16 ,P2 1,Rb ,nm2 3H1蛋白异常表达均参与子宫内膜癌发生、发展 ,且其中部分基因相互关联 ;P5 3可作为独立预后因素 ,其阳性表达提示预后差。     

细胞周期蛋白A在成人急性白血病中的表达及意义

目的　探讨细胞周期蛋白A(cyclinA)在成人急性白血病 (AL)患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法　采用RT PCR法对 10 0例初治及复发的AL患者进行cyclinAmRNA水平的检测 ,对其阳性表达的PCR扩增产物进行DNA测序分析。对其中 75例AL患者 ,用流式细胞术检测cyclinA蛋白表达水平 ,10例正常人作为对照。 结果　 (1)AL患者cyclinA蛋白表达在细胞周期中的分布无异常 ,cyclinA蛋白及mRNA的阳性率 (分别为 6 6 7% ,5 9 0 % )和中位表达水平 (分别为18 5 % ,0 5 39± 0 4 90 )明显高于正常人 ,同一实验条件下未发现在正常人中有cyclinA蛋白及mRNA阳性表达 (P <0 0 1) ;经测序分析发现cyclinA阳性扩增片段序列与基因库中的目标序列完全一致 ;(2 )cyclinA蛋白及mRNA水平与S期、G2 /M期细胞所占的比例呈正相关 (P <0 0 1)。 (3)复发组急性淋巴细胞性白血病 (ALL)患者的cyclinA蛋白表达水平 (15 4 % )明显低于初治组(2 9 5 % ) ,差异有统计学意义 (t=14 4 18,P =0 0 2 2 )。 (4 )cyclinA蛋白或mRNA高表达患者的完全缓解率 (分别为 87 9%、85 7% )明显高于低表达患者 (分别为 38 2 %、5 3 3% ) (P <0 0 5 )。结论　cyclinA在AL患者中是一种增殖标志 ,是影响AL患者完全缓解率的因素 ,其高表达可能是AL患者     

OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用

目的研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用。方法应用细胞计数的方法研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的生长曲线的影响;用MTT研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的细胞毒作用;用流式细胞仪技术研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞周期的影响。结果OD-PTD融合蛋白能显著抑制细胞的生长（P〈0.01）;并且对K562细胞具有明显的细胞毒作用（P〈0.01）。OD-PTD融合蛋白作用于K562细胞后,细胞周期变化明显,细胞从G0/G1期到S期发生明显阻滞（P〈0.05）。结论OD-PTD融合蛋白对K562细胞有明显的抑制作用,为进一步探讨慢性粒细胞白血病新的治疗手段提供了实验依据。     

细胞周期调控在干细胞治疗中的意义

造血干细胞（HSC）在医学中的治疗前景因其分化潜能得到实验的支持而变得日益广阔。但由于干细胞池的分子生物学特性所知有限，体外干细胞的调控与体内组织的新生仍存在一些难点，尤其是了解进入细胞周期的分子调控机制对于合理的干细胞扩增策略是必不可少的。弄清楚干／祖细胞群如何被进入细胞周期的阴性调控因子所调控，是操作干／祖细胞的依据之一。本主要综述干细胞生物学中周期依赖激酶抑制物（CKIs)作用靶的理论问题。已表明两个CKI成员，p21^cipl/wafl(p21)和p27^kipl(p27)分别控制干／祖细胞池的大小。引入注意的是，它们对原始造血细胞的抑制作用的区别在于对细胞因子TGF－β1的抑制作用。因此，p21、p27及TGF－β1在造血细胞中所起的不同作用，已成为以治疗策略为目的的研究干／祖细胞群特异调控的热点。HSC移植已用于治疗遗传性缺陷病和其他越来越多的恶性疾病，如果HSC在其他组织诱导分化的能力被认识，将使其有更广阔的治疗潜能。但某些障碍限制了干细胞的广泛应用，如数量的有限和对增殖刺激的耐受都将影响干细胞在体外的扩增。深入了解干细胞的生物学特性，特别是了解自身受到严密调节的、反过来又对干细胞池起调控作用的细胞周期，是研究以治疗为目的的干细胞继续发育问题的关键。     

人细胞周期蛋白C在儿童急性淋巴细胞性白血病中的表达及对白血病细胞增殖的影响

目的：探讨人细胞周期蛋白C(Human cyclin C,CCNC)在儿童急性淋巴细胞性白血病（Acute Lymphocyte Leukemia, ALL）中的表达,并初步研究CCNC在体外对白血病细胞增殖的影响。方法：实时荧光定量PCR法检测CCNC在初治ALL、白血病细胞系及正常对照组中的表达,利用基因重组技术构建含有CCNC的全长的真核表达载体PCMV-2B-CCNC,用脂质体Lifefectamine2000将真核表达载体转染至人急淋细胞系6T-CEM细胞株中,Western-blot检测转染后的细胞CCNC蛋白的表达量,流式细胞分析CCNC对白血病细胞增殖的作用。结果：CCNC在对照组小儿、初治小儿ALL骨髓及6T-CEM细胞系中均有表达,在初治ALL中表达强度降低（P<0.05）。基因测序及重组质粒酶切后鉴定成功构建了PCMV-2B-CCNC真核表达载体,将其转染至6T-CEM细胞中,Western-blot检测到转染后的白血病细胞CCNC蛋白表达量增高,流式细胞结果表明在转染了CCNC基因的白血病细胞中,在细胞的Go/G1峰前出现一个亚二倍体峰,细胞凋亡指数有所增高（P<0.05）。结论: CCNC在初治小儿ALL中出现较低的表达强度,在转染人白血病细胞后,具有诱导白血病细胞凋亡作用,有可能与儿童ALL的发病相关。 关键词：儿童急性淋巴细胞性白血病,细胞周期蛋白C     

鱼藤素对U937细胞细胞周期及核孔蛋白Nup98和Nup88的调控作用

为探讨鱼藤素对人类白血病细胞株U937细胞体外抗癌作用的分子机制，采用MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞周期分布，激光共聚焦显微镜检测Nup98和Nup88蛋白表达变化，免疫电镜和流式细胞术观测鱼藤素对Nup98和Nup88的调控，Western blot检测鱼藤素对U937细胞Nup98和Nup88蛋白表达的影响。     

柚皮素对人髓系白血病K562细胞增殖的作用

目的:探讨柚皮素(naringenin)对人慢性髓系白血病K562细胞株生长的影响及其作用机制。方法:MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同时间对K562细胞的影响;倒置显微镜下,Wight-Giemsa染色(W-G染色),免疫荧光染色和透射电镜下观察细胞形态变化、凋亡发生情况以及超微结构的变化;并用流式细胞仪分析细胞周期分布,用免疫组织化学的方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果:柚皮素对K562细胞增殖有明显抑制作用,作用24,48和72 h后的半数抑制浓度(IC50)分别为455,225和175μmol/L;柚皮素处理组细胞在普通光镜和电镜下均见观察到显著的增殖抑制和典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析证实柚皮素能使K562细胞聚积在G0/G1期,S期细胞减少;在处理组PCNA的表达显著低于对照组。结论:柚皮素对K562细胞具有明显的增殖抑制作用,这一作用可能是通过细胞周期阻滞和诱导凋亡两种机制实现的。     

PTK787对K562细胞增殖及细胞周期作用的影响*

目的:观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787对K562细胞增殖、细胞周期的作用,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制.方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察不同浓度PTK787在不同时间对K562细胞增殖作用的影响;用流式细胞仪检测浓度PTK787对K562细胞周期的抑制作用.结果:随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高.同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中PTK787作用48 h,以浓度320μmol/L对细胞抑制率最强.随着PTK787浓度增加,G1期细胞比例逐渐升高,S期细胞比例逐渐下降,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:PTK787可以抑制K562增殖,阻止K562细胞由G1期向S期转化,从而达到抗白血病的作用.     

体外转染SV40 T抗原对鼠内皮细胞周期素D1、P53和P21表达的影响

目的:探讨SV40 T抗原促进鼠内皮细胞增殖动力改变的机制,为基因治疗转化细胞提供理论依据。方法:用含有SV40 T抗原的表达质粒(pRNS-1)转染大鼠主动脉内皮细胞,经G418加压筛选,获得阳性克隆后扩增培养。在光镜下观察转染前后细胞的形态和生长特性;流式细胞仪检测细胞增殖周期;PCR检测外源基因的整合;免疫组化蛋白水平检测SV40 T抗原的表达;Western blot检测周期素(Cyclin)D1、P53和P21的表达。结果:转染后的鼠内皮细胞体外生存期延长,大量细胞由G1期进入S期,对血清和生长因子的依赖性降低。与转染前的细胞相比,转染后的鼠内皮细胞表达更多的P53和Cyclin D1,P21表达量降低。结论:SV40 T抗原可能通过调节Cyclin D1、P53和P21的表达来影响鼠内皮细胞的增殖。     

通脉宁胶囊对LPC诱导血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察通脉宁胶囊不同剂量药物血清对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管平滑肌细胞增殖活性及细胞周期的影响.方法组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学的方法,LPC10-8 mol/L作为刺激因子,将通脉宁胶囊分为大、中、小3个剂量组.MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果通脉宁大、中、小剂量组可明显降低细胞的OD值呈剂量依赖性地抑制LPC诱导的VSMC增殖. 明显降低细胞的S期数目百分比,增加G0/G1期数目百分比,使VSMC阻滞在G0/G1期,抑制细胞进入S期.结论从细胞分子水平说明通脉宁胶囊主要是通过影响细胞内DNA合成,减少有丝分裂,增加G0/G1期数目百分比,减少S期数目百分比而发挥抑制VSMC增殖作用.     

不同分子区域的Caveolin-1真核表达载体构建及其对Caveolin-1基因敲除小鼠系膜细胞周期的影响

目的:构建含不同分子区域的caveolin-1真核表达质粒,转染caveolin-1基因敲除小鼠(Cav-1-/-)的肾小球系膜细胞,观察能否逆转系膜细胞周期阻滞。方法:首先从pLHCX-N-FLAG2/caveolin-1全长质粒中扩增cave-olin-1 N末端(第1-82位氨基酸)、N末端+脚手架区(第1-101位氨基酸)的cDNA片段,同时在引物两端加上限制性酶切位点HindⅢ及XhoⅠ,再与复制缺陷型逆转录病毒表达载体pLHCX-N-FLAG3连接。完成酶切和测序鉴定后将pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLHCX-N-FLAG3/cav-1-101分别转染HEK293T细胞,包装产生有感染力的病毒颗粒,再分别感染Cav-1-/-系膜细胞,流式细胞分析观察能否逆转细胞周期阻滞。结果:成功构建含caveolin-1 N末端、N末端+脚手架区片段的重组真核表达载体,流式细胞分析发现pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLH-CX-N-FLAG3/cav-1-101基因导入Cav-1-/-系膜细胞,可逆转G0/G1细胞周期阻滞。Vcaveolin-1可能主要通过N末端第1-82位氨基酸区域参与细胞周期进程,具体机制还需进一步研究。     

Src蛋白在膀胱移行细胞癌上的表达及其意义

[目的]探讨Src蛋白在膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中的表达及其意义。[方法]采取 HE染色和半定量RT-PCR检测c-Src基因在BTCC、癌旁组织及正常膀胱组织中的表达。[结果]BTCC（分浅表性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌两组）组织中c-Src基因在mRNA表达水平上明显增高,而在癌旁组织及正常膀胱组织中表达较低。c-Src mRNA的表达水平与BTCC患者肿瘤临床分期、病理分级,以及肿瘤有无复发具有相关性;其表达的强度与膀胱肿瘤的分化和分期密切相关,分化越低、临床分期越晚以及复发患者,其过表达越明显。[结论]c-Src的过表达或高表达与BTCC的侵袭、复发和转移密切相关。     

特发性血小板减少性紫癜患者T细胞周期和促凋亡蛋白Caspase-3表达的变化

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血T细胞的细胞周期及其促凋亡蛋白Caspase-3的表达在发病机制中的作用。方法:用流式细胞仪检测38例ITP患者和20例正常人的T细胞的细胞周期的分布比例及30例ITP患者和20例正常人的T细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达水平。结果:ITP患者外周血S期和S+G2/M期的T淋巴细胞比例显著高于对照组(P<0.05);Go/G1的T淋巴细胞比例显著低于对照组(P<0.05);T淋巴细胞Caspase-3的表达率明显低于对照组(P<0.05)。结论:在ITP患者中存在T淋巴细胞过度增殖,细胞以S,G2期为主,同时T淋巴细胞存在凋亡减少,这可能与ITP的发病有关。     

凋亡调节蛋白的表达与K562／VCR多药耐药性的关系

目的探讨K562/VCR细胞中凋亡调节蛋白表达的变化与其多药耐药性(MDR)的关系。方法通过免疫细胞化学法和免疫印迹法(westernblot)对凋亡调节蛋白Bcl-2、Bcl-X     

槲皮素对K562细胞形态及VEGF表达的影响

目的探讨槲皮素对K562细胞的形态、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和VEGF mRNA表达的影响.方法以K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright's染色法;AnnecxinV标记检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测VEGF mRNA表达;ELISA法检测VEGF蛋白表达.结果1.经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;2.槲皮素处理后K562细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);3.槲皮素能下调K562细胞VEGF mRNA的表达(P＜0.05);4.槲皮素处理后K562细胞显著降低VEGF蛋白的分泌(P＜0.05).结论槲皮素在体外能抑制白血病细胞K562生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF.     

槲皮素对K562细胞形态及VEGF表达的影响

目的探讨槲皮素对K562细胞的形态、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和VEGF mRNA表达的影响.方法以K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright's染色法;AnnecxinV标记检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测VEGF mRNA表达;ELISA法检测VEGF蛋白表达.结果1.经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;2.槲皮素处理后K562细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);3.槲皮素能下调K562细胞VEGF mRNA的表达(P＜0.05);4.槲皮素处理后K562细胞显著降低VEGF蛋白的分泌(P＜0.05).结论槲皮素在体外能抑制白血病细胞K562生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF.