土法制备干燥培养基

结合战备及农村基层检验室的需要,我们试用两种简易方法制备干燥培养基: 一、琼脂吸收法(适用于制备固体培养基),先将琼脂切成细片,置80℃烘箱中干燥2小时后研成粉末。取1:2牛肉浸液3,000毫升,蛋白胨30克,氯化钠15克,琼脂粉末45克。按常法制备普通肉汤培养基,调整至PH7.6,滤纸滤清后,先用直火浓缩至原体积五分之     

问题解答

问:什么是三维试验?答:三维试验是一种检测β内酰胺酶(ＥＳＢＬ)的方法,在传统的纸片扩散法基础上发展而来。纸片扩散法药敏试验,将细菌接种在琼脂平板表面,贴上药物纸片。纸片上的药物向周围的培养基中扩散,构成一维。琼脂平板表面的细菌生长,产生了抗药性酶,向培养基中扩散,构成另一维。所以,纸片扩散法是二维试验。三维试验,在纸片旁边的琼脂刻一深纹,其中加入受试菌液。细菌生长后,产生的抗药性酶向四周的琼脂中扩散,构成第三维。检测ＥＳＢＬ,接种细菌后,贴上第三代头孢菌素纸片,在纸片边上的深纹中加被测菌液。纹中的细菌生长时产生Ｅ…     

732株嗜血杆菌对阿奇霉素敏感性分析

1999年 3月至 2 0 0 0年 12月 ,对南京军区南京总医院住院病人 ,门诊病人送检的痰液及咽拭标本中分离的 732株嗜血杆菌 ,采用Ｋ Ｂ纸片扩散法 ,对阿奇霉素做了药敏试验 ,并与其他 5种抗菌药物作了比较 ,报告如下。1　材料与方法1 1　菌种嗜血杆菌 732株 ,其中流感嗜血杆菌 30 2株 ,占41 3% ;副流感嗜血杆菌 430株 ,占 5 8 7%。1 2　培养基　巧克力培养基按《全国临床检验操作规程》(1997年第 2版 )由本室自制 ;血琼脂和Ｍ Ｈ琼脂 (Ｏｘｏｉｄ)作鉴定用 ;ＨＴＭ培养基 (Ｏｘｏｉｄ)作药敏用。1 3　药敏纸片　阿奇霉素、头孢噻肟、头孢呋辛、…     

鼠伤寒沙门氏菌对丁胺卡那霉素的敏感性研究

对抗菌药物的监测发现,不少抗菌制剂对鼠伤寒沙门氏菌(STM)感染治疗时,一个显著的特点是极易发生耐药性、多重耐药性和交叉耐药性。因而大大限制了这些药物的广泛应用。丁胺卡那霉素是治疗 STM 感染时比较常用的抗生素之一,但是 STM 对它有无耐药性及它在体外抗菌作用的研究都比较少。为此,本实验测定了丁胺卡那霉素对48株 STM 和10株其它沙门氏菌的最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)。材料和方法1、菌种:均系近两年内由腹泻小儿粪便中分离经血清学鉴定后保存于半固体琼脂。2、培养基及药敏用纸片:用 Muller-Hi-nton 肉汤及琼脂培养基,药敏纸片为直径6mm,含丁胺卡那霉素30微克。     

金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性试验方法评价

目的比较不同方法检测金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性试验结果。方法将1株从临床标本中分离的异质性耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(h-VRSA)在含有不同浓度的万古霉素培养基上连续转种诱导,得到一系列对万古霉素不同程度耐药的菌株,分别用琼脂筛选法、微量肉汤稀释法、E-test法、纸片扩散法和仪器法对万古霉素的敏感性进行检测。结果琼脂筛选法、微量肉汤稀释法和E-test法可以检测出金黄色葡萄球菌对万古霉素中介耐药(VISA),而纸片扩散法和仪器法则不能检出VISA。结论微量肉汤稀释法和E-test法是检测金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性可接受的方法。若以纸片扩散法和仪器法为常规药敏试验的实验室,应增加含6μg／ml的万古霉素脑心浸液琼脂进行筛查,以加强对VRSA和VISA的监测。     

用纸片扩散和琼脂筛选法检测苯唑西林耐药金葡菌的评价

在美国和欧洲,由苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）引起的院内感染仍是一个突出问题。目前在细菌学实验室可使用的检测MRSA方法很多,包括琼脂稀释法（每毫升MHA（Mueller－Hin－tonagar）中合6μg苯唑西林）、纸片扩散法（4μg或1μg苯唑西林纸片,MHA或Iso－Sensitest琼脂）、由汤稀释法测MIC、苯唑西林由汤筛选试验、自动化系统（如Vitek）和流式细胞仪测定法等。作者对甘露醇盐琼脂（MSA）用于纸片扩散和琼脂筛选法中检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌的能力进行了评价。试验金葡菌共136株,其中54株mecA基因阳性,82株mecA…     

两种酵母样真菌药敏培养基检测氟康唑药敏试验的比较

目的比较丹麦ROSCO公司改良的Shadomy琼脂与M-H琼脂两种酵母真菌药敏培养基对氟康唑药敏试验结果的一致性。方法以美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)M44-P推荐的酵母样真菌药敏培养基为参照,采用改良的Shadomy琼脂真菌药敏培养基检测氟康唑对常见临床分离的86株酵母样真菌的药敏试验。并以标准菌株作质量控制。结果两种培养基对氟康唑的药敏结果一致率为95.3%。经配对χ2检验,没有显著性差异(P>0.05)。结论选用配方不同的酵母样真菌药敏培养基适用于氟康唑药物纸片扩散法的测试,可以代替NCCLS M44-P酵母菌纸片扩散法在临床实验室使用。     

两种分离痢疾杆菌培养基的效果比较

自1979年以来我所一直采用SS和EMB琼脂作为痢疾杆菌的常规培养基.该培养基均系上海第六人民医院生产的干燥成品琼脂.     

从急性腹泻患者粪便中分离到～株策维埃沙门氏菌

一、分离鉴定过程粪便标本置Cary-Blair 液体培养基送检。将运送培养基混匀后直接划线于SS 琼脂和EMB 琼脂平板,37℃、24小时后,挑取可疑菌落转种克氏双糖     

含氯霉素SS琼脂分离痢疾杆菌效果的评价

培养基内加入氯霉素,可以抑制杂菌繁殖,有利于痢疾杆菌特别是赖氯霉素菌株的生长,因而可提高检出率。本文就应用含氯霉素SS 琼脂分离痢疾杆菌的效果等问题进行探讨。一、材料与方法1.标本来源:可疑痢疾病人的粘液脓血便.2.含氯霉素SS 琼脂制备方法:将干燥SS 琼脂     

卡他莫拉菌快速鉴定的方法学及耐药性研究

目的　建立快速鉴定卡他莫拉菌 (MC)的方法 ,对不同血源、营养配方的琼脂培养基进行了MC的生长指数 (GI)的测定 ,了解MC的耐药状况。方法　使用含 5 0 μg/ml万古霉素的兔血巧克力琼脂培养基分离MC ,以 3 乙酰吲哚纸片法检测MC产生的乙酰酯酶 ,与DNA酶试验为对照 ;将MC接种于 9种培养基上 ,计算和比较MC在 9种培养基上的平均GI;同时用Nitrocefin纸片检测MC的 β内酰胺酶发生率 ,以琼脂平皿二倍稀释法测定最低抑菌浓度 (MIC)。结果　检测 2 2 8株MC的乙酰酯酶结果 ,其敏感性为 10 0 % ,与 2 0 3株近缘菌比较特异性为 10 0 % ,与DNA酶试验有很高的相关性 ;MC在巧克力琼脂培养基上生长较血琼脂培养基好 ,但与GI值比较 ,差异无明显意义 (P >0 0 5 ) ;MC产 β内酰胺酶的阳性率为 93 0 % ;哌拉西林 /舒巴坦和哌拉西林 /他唑巴坦的MIC50 和MIC90 分别较单哌拉西林 ,降低了 8倍 ;氨苄西林 /舒巴坦的MIC50 和MIC90 较单氨苄西林降低了 32倍和 4倍。结论　用 3 乙酰吲哚纸片法检测MC产生的乙酰酯酶 ,是临床实验室快速鉴定MC的良好方法。MC产 β内酰胺酶阳性率之高 ,应引起临床医生的重视。哌拉西林 /舒巴坦、氨苄西林 /舒巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦、哌拉西林 /他唑巴坦及亚胺培南 /西司他丁对 β内酰胺酶阳性MC有很     

真菌药敏纸片扩散法实验与应用研究

目的评价氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑4种抗真菌药物在萄萄糖美蓝M-H琼脂培养基上进行K-B纸片扩散法药敏试验的可行性。方法应用NCCLS认可的氟康唑纸片扩散法和NCCLS M27-A肉汤稀释法检测氟康唑(FLC)、两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ITC)、酮康唑(KTC)对131株假丝酵母菌的敏感性;用纸片扩散法同时检测2种氟康唑(FLC1:25μg/片;FLC2:15μg/片)纸片的敏感性,对其结果进行比较。结果纸片扩散法中:FLC1与肉汤稀释法符合率为97.71%(128/131);FLC2与肉汤稀释法符合率为96.95%(127/131);AMB、ITC、KTC分别与肉汤稀释法符合率为98.47%(129/131)、98.47%(129/131)、97.71%(128/131)。经Kappa检验,K值分别为:0.8952、0.8681、0.8118、0.8509、0.7190;FLC1、FLC2、AMB、ITC 2种方法一致性优,KTC 2种方法一致性良好。结论葡萄糖美蓝M-H琼脂可代替Shadomy琼脂,适用于常规纸片扩散法真菌药敏试验。     

冰冻保存M-H琼脂的质量评价

目的 评价冰冻(-20℃)保存对M-H琼脂培养基的质量效果及有效期.方法 1将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,在1月、3月、6月、1年、2年后取出,隔水加热浇制成平板,用标准质控菌株做质量监测;2将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,1个月后取出,加热融解浇制一部分平板后再冰冻1天,如此反复6次,每次均用标准质控菌株来鉴定其质量.结果 1用标准质控菌株鉴定各期限冰冻保存的M-H琼脂培养基的质量,均与新鲜时一样,用丁胺卡那霉素或庆大霉素药敏试纸监测的抑菌圈直径均符合质量控制鉴定标准.2用标准质控菌株鉴定反复冻融6次以内的M-H琼脂培养基的质量均与新鲜时一样,均符合质量控制鉴定标准.结论 冰冻保存不影响M-H琼脂培养基的质量,其有效期长达2年,且可反复冻融6次,该保存法适用于基层医院,也为商品化批量生产提供了长期保存方式,值得推广应用.     

都柏林念珠菌感染的实验室诊断进展

都柏林念珠菌是一种新近鉴定的条件致病念珠菌 ,与白色念珠菌很相似。其鉴别主要靠一些选择性培养基 ,如CHROMagarCandida琼脂培养基、甲基蓝 沙保弱氏琼脂培养基等培养及生化鉴定、分子生物技术鉴定。     

冰冻保存M-H琼脂的质量评价

目的 评价冰冻(-20℃)保存对M-H琼脂培养基的质量效果及有效期.方法 1将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,在1月、3月、6月、1年、2年后取出,隔水加热浇制成平板,用标准质控菌株做质量监测;2将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,1个月后取出,加热融解浇制一部分平板后再冰冻2天,如此反复6次,每次均用标准质控菌株来鉴定其质量.结果 1用标准质控菌株鉴定各期限冰冻保存的M-H琼脂培养基的质量,均与新鲜时一样,用丁胺卡那霉素或庆大霉素药敏试纸监测的抑菌圈直径均符合质量控制鉴定标准.2用标准质控菌株鉴定反复冻融6次以内的M-H琼脂培养基的质量均与新鲜时一样,均符合质量控制鉴定标准.结论 冰冻保存不影响M-H琼脂培养基的质量,其有效期长达2年,且可反复冻融6次,该保存法适用于基层医院,也为商品化批量生产提供了长期保存方式,值得推广应用.     

冰冻保存麦康凯琼脂的质量研究

目的评价冰冻（-20℃）保存对麦康凯琼脂培养基的质量效果及有效期。方法（1）将预先制好并经灭菌后的麦康凯琼脂培养基置于-20℃保存,在1、3、6个月和1、2年后取出,隔水加热浇制成平板,用标准质控菌株做质量控制;（2）将预先制好并经灭菌后的麦康凯琼脂培养基置于-20℃保存,1个月后取出,加热融解浇制一部分平板后再冰冻2d,如此反复6次,用标准质控菌株来鉴定其质量。结果（1）用标准质控菌株鉴定各期限冰冻保存的麦康凯琼脂培养基的质量,均与新鲜时一样,其中金黄色葡萄球菌不生长,大肠埃希菌生长,菌落呈红色与新鲜时一致,变形杆菌生长,菌落呈无色也与新鲜时一致,均符合质量控制鉴定标准。（2）用标准质控菌株鉴定反复冻融6次以内的麦康凯琼脂培养基的质量均与新鲜时一样,均符合质量控制鉴定标准。结论冰冻保存不影响麦康凯琼脂培养基的质量,其有效期长达2年,且可反复冻融6次,该保存法适用于基层医院,也为商品化批量生产提供了长期保存方式,值得推广应用。     

两种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的K-B法应用评价

目的评价两种分别使用MH琼脂(头孢西丁)和高盐琼脂(苯唑西林)纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床应用价值。方法用头孢西丁纸片在MH琼脂平板上进行纸片扩散法(K-B法)检测临床分离的89株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并与苯唑西林纸片扩散法(K-B法)、mecA基因检测进行比较。结果在MH琼脂使用头孢西丁纸片检测MRSA优于高盐琼脂苯唑西林纸片扩散法,并与PCR检测mecA基因的方法高度一致。结论头孢西丁纸片扩散法是筛选和确认耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)一种简单、可靠的实验方法。     

肠道门诊中病原性弧菌的鉴定及药物敏感试验

病原性弧菌引起腹泻的临床报道日渐增多。我们对本院肠道门诊６００例急性腹泻患者的粪便标本进行了弧菌的分离、鉴定及药物敏感试验，报道如下。１　材料与方法１１　标本来源　本院肠道门诊１９９８年５～１０月份急性腹泻粪便标本６００份。１２　培养基　碱性蛋白胨水、庆大霉素琼脂等均自制，ＭＨ琼脂购于浙江省军区后勤部卫生防疫检验所。培养基中均含１ｇ／ｄｌＮａＣｌ。１３　诊断血清　霍乱弧菌Ｏ１群多价血清、两种单价血清及Ｏ１３９型血清，购自卫生部兰州生物制品研究所。１４　药敏纸片　阿米卡星等１６种药敏纸片，…     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌五种表型检测法的评价

目的比较并评价检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的五种表型法(头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁琼脂筛选法、苯唑西林琼脂筛选法、自动细菌分析仪法),寻求适合临床微生物实验室应用的检测方法。方法收集109株金黄色葡萄球菌分别用头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁琼脂筛选法、苯唑西林琼脂筛选法、自动细菌分析仪法五种表型法和荧光实时PCR法进行检测;以PCR法为“金标准”,分别计算其他方法的敏感性、特异性、ROC曲线下面积并进行比较。结果五种表型法的敏感性以头孢西丁琼脂筛选法为最高(97.3%),随后依次为头孢西丁纸片扩散法(91.9%)、VITEK仪器法(91.9%)、苯唑西林琼脂筛选法(73.0%)、苯唑西林纸片扩散法(73.0%);特异性以头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林琼脂筛选法为最高(均为100%),随后依次为VITEK仪器法(93.4%)、头孢西丁琼脂筛选法(93.1%);五种表型法ROC曲线下面积按大小依次为:头孢西丁纸片扩散法0.959、头孢西丁琼脂筛选法0.952、VITEK仪器法0.925、苯唑西林琼脂筛选法0.865、苯唑西林纸片扩散法0.865。结论纸片扩散法中头孢西丁法比苯唑西林法与mecA基因的表达具有更好的相关性;头孢西丁琼脂筛选法可替代苯唑西林琼脂筛选法检测MRSA,是成批量筛选MRSA的理想方法;纸片扩散法和琼脂筛选法由于不需要特殊设备,可在基层实验室普遍开展;VITEK仪器法自动化程度高、简便快速,可在有条件的实验室应用。     

都柏林念珠菌感染的实验室诊断进展

都柏林含珠菌是一种新近鉴定的条件致病念珠菌，与白色念珠菌很相拟。其鉴别主要靠一选择性培养基，如CHROM agar Candida琼脂培养基、甲基蓝－沙保弱氏琼脂培养基等培养及生化鉴定、分子生物技术鉴定。