检测艾滋病患者外周血HIV-1 DNA水平的竞争性PCR方法的建立

定量检测艾滋病患者体内荷毒水平对于评价治疗效果和研究发病机理至关重要 ,我们建立了一种检测 HIV- 1DNA水平的竞争性 PCR方法 ( QC- PCR)。选择 HIV- 1的高度保守区域 gag基因作为靶序列 ,以重组 PCR方法和基因克隆技术构建两种重组质粒 ,分别插入有 gag和 Δ gag片段 ,其中后者比前者内部缺失 50 bp,用作定量检测中的竞争模板。将梯度稀释的竞争模板加入到反应体系中与待测的野生型模板共同扩增 ,PCR产物经 8%聚丙烯凝胶电泳后进行密度扫描测定 ,结果表明该方法稳定可靠 ;8份艾滋病患者的 PBMC DNA标本经该方法的检测也得到较好的结果。我们认为 QC- PCR是一种较为理想的 HIV- 1DNA水平的定量方法 ,非常适合于临床标本的检测和治疗研究的应用。     

长春地区性病门诊患者沙眼衣原体感染状况的检测报告

材料与方法一、临床资料　1994年11月～1995年11月在我科性病门诊就诊的具有尿道炎或宫颈炎症状的患者870例,其中男576例,女294例,年龄11～67岁。上述患者每例均常规进行淋菌培养、解脲支原体培养和沙眼衣原体(CT)PCR检测。二、标本的采集和处理　用藻酸钙拭子插入男性尿道2～4cm、女性宫颈管内1～2cm处取材。将分泌物涮洗至200μl灭菌水中,1000r/min离心5min,沉淀加20μl细胞溶解液、5μl蛋白酶K置55℃1h,95℃5min。并设阳性对照。三、引物的设计及合成　CT引物设计于CT隐匿型质粒PLGV440上,引物序列:5′-AGGCCTCGCT-GAATGCTT…     

实时荧光定量PCR技术在婴儿HIV感染早期诊断中的应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术作为婴儿HIV感染早期诊断方法的可行性。方法 2019年4月至2020年8月对大理州和德宏州出生的HIV暴露婴儿51例在五个阶段采集干血斑,用实时荧光定量PCR检测HIV-1DNA。对6周龄干血斑同时进行罗氏HIV-1DNA定性检测。同期对21例已知HIV感染婴儿的干血斑进行了检测。结果 共对送检的51例婴儿的235份干血斑进行了检测,结果全部是HIV-1DNA阴性,与罗氏HIV-1核酸定性结果一致。21例已知感染婴儿的干血斑实时荧光定量PCR检测结果全部是HIV-1DNA阳性（病毒载量均值为4428 copies/1x106cells）。结论 实时荧光定量PCR技术可以准确诊断暴露婴儿的HIV感染情况,为及时实施抗病毒治疗提供科学依据。     

重组聚合酶扩增法在HIV-1 DNA检测中的初步应用

目的：明确重组聚合酶扩增法(RPA)对HIV-1 DNA检测的敏感性和特异性。方法：合成HIV-1 pol基因并克隆至pUC57载体,命名为pHIV-1-pol,作为RPA实验的阳性对照;以无RNA酶水作为阴性对照。对13例临床初诊患者进行 RPR检测,并与HIV-1抗体检测结果进行验证比较。结果：RPA方法等温扩增20 min即可有效扩增目的片段,检测浓度最低可为101 copies/μL。三份HIV Ab(-)样本及阴性对照均未产生特异性扩增,阳性对照出现了特异性扩增。RPR检测阳性结果与HIV-1抗体检测结果完全一致,患者1、2、7、10、12检测为阳性。结论：RPA方法快速简单,特异性和敏感性高。     

免疫缺陷性皮肤病

20110092体外无药物选择压力条件下HIV-1耐药基因突变的演变/焦丽燕(军事医科院微生物流行病研究所),鲍作义,李韩平…∥中华微生物学和免疫学杂志.-2010,30(5).-431~437.采集15例服用拉米夫定、司他夫定、奈韦拉平(3TC+D4T+NVP)的HIV-1感染者的外周血单一核细胞(PBMC),体外共培养法从中分离原代HIV-1毒株;RT-PCR扩增耐药毒株历代培养上清的     

免疫缺陷性皮肤病

981387 检测艾滋病患者外周血HIV-1 DNA水平的竞争性PCR方法的建立/范雪莉（四军大西京医院）…//中国皮肤性病学杂志.-1997,11（6）.-325 建立竞争性定量PCR（QC-PCR）方法检测外周血单个核细胞（PBMC）中的前病毒含量。结果表明,这种QC-PCR反应敏感性及重复性均极好,同样适合于高浓度的靶序列的检测,8份艾滋病患者的PBMC DNA标本经该方法检测也得到较好结果。作者认为,QC-PCR是一种较为理想的HIV-1 DNA水平的定量方     

简并PCR结合RACE法克隆希木龙念珠菌CDR1基因

目的克隆希木龙念珠菌中药外排泵基因(CDR1),为探讨希木龙念珠菌的耐药机制奠定基础。方法首先从NCBI基因数据库中找到已知的白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌Cdr1蛋白的氨基酸保守序列,并设计简并引物,PCR扩增获得希木龙念珠菌CDR1c DNA部分片段,接着使用RACE方法分别扩增其5'和3'端序列得到完整的CDR1编码序列(CDS)。结果简并PCR扩增得到预期2 210bp大小的片段;5'RACE和3'RACE分别得到CDR1c DNA 5'和3'端片段,经纯化、克隆、测序、比对和拼接分别得到两株菌完整的CDR1c DNA序列;其编码的蛋白序列经比对发现与其它念珠菌的Cdr1蛋白高度同源。结论利用简并PCR联合RACE方法能够有效、准确地克隆出希木龙念珠菌CDR1基因。     

麻风杆菌PCR检测方法的优化及应用

目的:研建一种适用于临床中检测麻风杆菌(ML)的分子生物学方法,并优化检测条件以提高检测方法的灵敏度。方法:用麻风杆菌纯DNA作模板,对PCR反应体系中模板浓度、引物浓度等反应条件进行优化,以建立高敏感性的PCR反应体系,并与实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法比较,对麻风病人标本进行检测,确定优化后两法的反应体系及两法的临床检测意义。结果:经过大量的实验比对表明,反应体系引物含量为0.2μL×100μmol时,模板浓度10-1条ML/m L可以作为稳定的可检测到条带的模板浓度的下限。对52例各型麻风患者标本的检测结果显示常规PCR检测阳性数(49/52)略高于Real-time PCR(47/52),但Real-time PCR操作程序简单和需时短,且成本低。结论:通过对PCR反应条件中DNA模板浓度和引物浓度的优选,提高了PCR检测麻风杆菌DNA的灵敏度;对于不同PCR方法的选择方面,Real-time PCR比常规PCR简捷快速,而常规PCR灵敏度略高于Realtime PCR。     

免疫缺陷性皮肤病

20100076中国HIV-1B′/C亚型感染者对异体病毒中和作用与疾病进展关系研究/包名家(中国医科大附一院卫生部艾滋病免疫学重点实验室),耿文清,崔华露…∥中华微生物学和免疫学杂志.-2009,9(2).-165～169根据CD4T淋巴细胞数量和有无临床症状将HIV-1B′/C亚型感染者分为HIV慢性感染和AIDS组,将HIV-1感染者血清稀释后,与同源性很低的3株HIV-1作用,以检测其中和作用。将正常人血清加病毒悬液为对照孔,能够抑制对照孔50%病毒复制的血清为中和作用阳性。将某HIV-1感染者血浆能中和异体病毒个数占3个异位病毒的百分率为HIV-1感染者中和异位病毒宽度;将某HIV-     

临床常见皮肤癣菌的分子生物学鉴定

目的应用任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)鉴定临床常见皮肤癣菌。方法用引物AP3(5-′TCAC-GATGCA-3′)、任意引物ATG(5-′ATGGATCGGC-3′)、任意引物TCA(5-′TCACCACGGT-3′)和任意引物TCT(5-′TCTGTGCT-GG-3′)对常见皮肤癣菌进行任意引物聚合酶链反应。46株须癣毛癣菌采用引物ATG和引物AP3进行AP-PCR,并对扩增产物进行电泳分析。结果扩增产物电泳分析发现不同菌种间产生的DNA带型存在明显差异,尤其用引物AP3和引物ATG扩增产生的DNA带型的种间差异最明显。46株须癣毛癣菌的表型,全部为粉型,且均产生具有明显的电泳带型,可分为2型。结论AP-PCR可作为常见皮肤癣菌的种间及种内鉴定的简单、快速、可靠的方法。     

简并PCR结合RACE技术克隆马尔尼菲青霉未知基因

目的寻找高效克隆马尔尼菲青霉新基因的方法。方法从生物信息库中找出已知的酿酒酵母、白念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、构巢曲霉SKN7氨基酸保守序列,设计简并引物,PCR扩增获得部分马尔尼菲青霉SKN7 cDNA片段,随后应用RACE技术分别扩增其5′端和3′端未知序列。结果简并PCR扩增可产生多个条带,以预期大小1100bp处条带最清晰。5-′RACE得一约900bp大小产物,无非特异性扩增。3-′RACE扩增产物为多条片段,其中以700bp,400bp和200bp条带相对较清晰,纯化、克隆、测序、比对分析后证实700bp大小产物为目的片段。将上述产物序列进行对位拼接,获得一全长约为2.5kb的序列,它编码的蛋白与其他物种Skn7蛋白高度同源,为马尔尼菲青霉SKN7 cDNA。结论简并PCR结合RACE技术是一种高效、简单、有效的克隆马尔尼菲青霉新基因的方法。     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 4 3474　重组人 β-趋化因子 RANTES抗 T嗜性HIV- 1作用的研究 /杨瑞仪 (广州中医药大学热医学研究所 )… / /中国艾滋病性病 .- 2 0 0 4 ,10 (3) .- 16 3～ 16 5将不同浓度的重组人 β-趋化因子 RANTES与对数生长期的 MT- 4细胞共育 1h后 ,再接种 HIV- 1病毒株 ,培养 6天后收集上清液 ,分别采用 EL ISA检测 P2 4抗原 ,用 MTT比色法检测细胞存活率。结果显示 ,不同浓度的天然或人工重组的 RANTES对 HIV- 1病毒在MT- 4细胞内的复制及感染细胞的保护率在 0以下。图2参 12　 (杨亚琴 )2 0 0 4 3475　中国 HIV- 1感染人群和普通人群四种基因多态分布的差异分析 /王晓辉 (深圳市疾控中心 )… / /中国艾滋病性病 .- 2 0 0 4 ,10 (3) .- 16 6～ 16 8研究了 189例 HIV- 1的四种基因型分布特点 ,对比分析了中国正常人群基因型分布的差异。在 HIV- 1感染者中未发现 CCR5△ 32和 CCR5 - m30 3突变基因型 ;SDF1- 3′A等位基因突...     

以一组寡核苷酸为引物的简化PCR技术应用于人类乳头瘤病毒的检测与分型

多聚酶链式反应(PCR)是一种体外试验,利用耐热的DNA多聚酶,对靶DNA序列具有扩增效应。近来已用于人类乳头瘤病毒(HPV)相关疾病的研究。PCR可显著提高HPV检测的敏感性,但由于需要多组引物,技术复杂,因而不能作为常规方法,用于大规模的筛查。本文介绍一种简化PCR技术,只使用一组寡核苷酸为引物。作者所设计的一对引物可使HPV-6、11,16和18的E_1开放读码框架(ORF)中571至594bp区扩增。模板DNA来自pBR322质粒克隆的HPV-6,11,16和18。将引物、模板DNA及Taq DNA多聚酶等进     

聚合酶链反应和涂片、培养法检测奈瑟氏淋球菌感染的比较和随访研究

采用淋球菌隐蔽质粒cppB基因引物建立聚合酶链反应技术（PCR）检测了116例泌尿生殖道拭子，并与淋球菌涂片，培养法进行比较，PCR最低探测值约相当于1个淋球菌细胞，PCR阳性33例，涂片或培养阳性的28例PCR全部阳性。PCR敏感性为100％，特异性为94．3％，治疗前PCR阳性 治疗结束1－2周后复诊21例，仍有33．3％（7／21）PCR阳性，结果显示：PCR可快速、敏感、特异地检测泌尿生殖道标本中的淋球菌DNA，然而对治疗后短期内复诊患，似乎不宜仅以PCR阳性结果作为重复治疗的依据。     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 0 30 2 0　我国人群中人类免疫缺陷病毒 感染的协同受体 CCR5η32基因突变的初步检测 /王福生 (北京解放军 30 2医院传染病研究所 )…∥中华医学杂志 .-2 0 0 0 ,80 ( 4 ) .- 2 90～ 2 91取中国人外周血单个核细胞来源的基因组 DNA,应用 PCR扩增和 DNA序列分析等技术 ,分析CCR5Δ32基因纯合子和杂合子在中国人群中的分布 ,初步评估我国人群 HIV- 1感染的遗传易感性。本组受测试的 915例中仅 2例发生 CCR5Δ32 /wt杂合子突变 ,他们均为本土中国人 ,其祖辈没有和外国人通婚的历史 ,提示突变的 CCR5Δ32 /wt基因乃随机发生 ,并…     

巢式PCR方法检测非生殖器部位Bowen病HPV DNA

目的 建立一种巢式ＰＣＲ方法,探讨HPV DNA在非生殖器部位Bowen病中的检出率。方法 巢式PCR方法,用5对不同引物包括CN1FR、CN2FR、CN3FR、CN4FR以及CN5FR进行扩增。结果 通过ClustalX软件,将所设计的每对引物与已知HPV亚型的碱基序列逐一相比较,得知改良设计的引物可以使69种HPV亚型得到扩增,包括黏膜型HPV、皮肤型 HPV以及疣状表皮发育不良相关性 HPV;PCR反应体系的敏感度在10-2～10-3拷贝之间。41例非生殖器部位Bowen病的组织标本中,5例HPV DNA阳性,其中高危黏膜型3例（2例HPV16,1例HPV33）,皮肤型2例（HPV27和HPV76各1例）。结论 改良的巢式PCR方法具有较高的敏感性、特异性,部分非生殖器部位Ｂowen病发病与黏膜高危型ＨＰＶ感染相关。     

免疫缺陷性皮肤病

20121534 HIV-1RNA有效抑制下T淋巴细胞与HAART持续治疗时间的相关性/温敏(云南省中研院),李艳萍,江涛…∥中国皮肤性病学杂志.-2012,26(2).-95～98对102例HAART持续治疗时间超过6个月,血浆HIV-1RNA<50个拷贝/mL的AIDS患者进行回顾性分析。根据HAART持续治疗时间将102例AIDS患者分为A(6～12个月),B(13～24个月),C(25～36个月),D(37～52个月)四个组,分析四组间T细胞亚群的差异。结果:HIV-1RNA有效抑制下HAART持续治     

免疫缺陷性皮肤病

20101827隆阳区303例HIV-1抗体蛋白印迹试验带型分析/朱荣华(云南保山隆阳区疾控中心),李凤德∥皮肤病与性病.-2010,32(1).-44~46将HIV-1抗体阳性患者的WB带型数据录入Excel表后,应用简明10.30统计软件进行统计分析。结果303例HIV-1抗体阳性患者的WB带型中,gp41,p66,gp120,gp160单条带型的出现率均在97.00%以上,p31,p51单条带型的出现率分别为93.40%和92.11%;全带型组合的出现率为21.45%(65/303),HIV感染者和AIDS病人间的全带型组合(P<0.01)、单条带p39(P<0.05)出现率均有统计学意     

实时荧光定量PCR检测石蜡标本中麻风菌DNA

目的：评价实时定量荧光PCR(Real-time PCR)法检测石蜡标本中麻风菌DNA的应用价值。方法：根据基因库(GenBank)发表的M. leprae的全基因组序列,以一段重复序列(repetitive ele￣ment,RLEP)为扩增靶序列,合成引物和探针,构建质粒pGEMT-101作为标准品,用Real-time PCR对石蜡标本进行麻风菌DNA检测,并评价其敏感性。结果：对52例麻风患者的石蜡包埋组织标本麻风菌进行了检测,不同型别麻风(LL：8;BL：10;BT：28;TT：6)的石蜡标本检测阳性率分别为100％(8/8)、80％(8/10)、78.57％(22/28)、50％(3/6)。结论： Real-time PCR方法可在石蜡标本中快速灵敏的检测到麻风菌DNA。     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 0 3718　重庆市 HIV- 1样本的亚型分析及 G亚型HIV- 1毒株在我国的发现 /韩梅 (重庆市卫防站 )…∥中国性病艾滋病防治 .- 2 0 0 0 ,6( 2 ) .- 89～ 91对重庆市境内确诊的 3例 HIV抗体阳性者静脉血 ,采用提纯扩增法 ,检测核酸片段 env基因 C2 ～ V3区 ,并进行核苷酸序列分析 ,与各亚型国际共享序列比较。结果 :2例为 E亚型和 C亚型 ,1例为 G亚型毒株。G亚型 HIV- 1毒株是首次在中国发现。表明重庆市存在着 C、E、G3种 HIV亚型病毒。图 1表 2参 9　 (杨亚琴 )2 0 0 0 3719　云南省 2 39例艾滋病病例分析 /张小波 (云南省卫防…