超高分子聚乙烯颗粒刺激单核细胞高表达CD147/EMMPRIN

目的探讨不同浓度磨损颗粒对单核细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导剂（CD147/EMMPRIN）的影响。方法根据颗粒/细胞比值实验分为0、1、10、100、500、1000共6组,将不同浓度的超高分子聚乙烯（UHMWPE）颗粒与人单核细胞株THP-1共培养24h,台盼蓝染色检测THP-1细胞存活率,利用流式细胞术、Real-time PCR和Western blot检测THP-1细胞CD147/EMMPRIN的表达。结果加入UHMWPE颗粒前及共培养24h后THP-1细胞存活率均大于90%。流式细胞术、Real-timePCR和Westernblot结果均显示加入UHMWPE颗粒后,CD147/EMMPRIN表达较对照组（即颗粒/细胞比值为0）增加,当颗粒/细胞比值在1-100范围时,CD147/EMMPRIN表达与颗粒浓度正相关,颗粒/细胞比值大于或等于100时,CD147/EMMPRIN稳定保持在高表达水平,不随颗粒浓度升高而变化。结论 UHMWPE颗粒刺激单核细胞高表达CD147/EMMPRIN,并呈浓度依赖性。     

二氢杨梅素对肝癌细胞黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制

目的：研究二氢杨梅素（DHM）对肝癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及其可能机制。 方法：用不同浓度DHM处理肝癌MHCC97L细胞后,分别检测细胞的黏附能力、迁移与侵袭能力,以及E-cadherin、MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白表达。 结果：与空白对照细胞比较,DHM处理后的MHCC97L细胞黏附力明显降低、侵袭与迁移力明显减弱（均P<0.05）;E-cadherin表达明显上调,而MMP-9、VEGF蛋白表达明显下调的水平（均P<0.05）,但MMP-2蛋白的表达无明显改变（均P>0.05）。 结论：DHM可能通过调控E-cadherin、MMP-9和VEGF蛋白的表达抑制肝癌细胞的黏附、迁移和侵袭。     

NORE1基因在肾透明细胞癌细胞迁移侵袭和血管生成中的作用及相关机制的研究

目的探讨NORE1基因过表达对肾透明细胞癌细胞迁移侵袭及血管生成的影响及其分子作用机制。方法利用NORE1过表达质粒和对照组质粒,分别转染人肾透明细胞癌786-O和ACHN细胞,Western blot检测细胞转染效率,Transwell细胞迁移实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭的能力,体外血管生成实验观察其血管生成能力,Western blot检测NORE1基因过表达后肾癌细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,肾透明细胞癌786-O、ACHN细胞中NORE1表达量增加。NORE1基因过表达后肾透明细胞癌细胞迁移及侵袭能力减弱,血管生成能力减弱,差异均具有统计学意义(P0.001)。NORE1过表达组肾透明细胞癌细胞中MMP-9表达较对照组显著下降,而两组间MMP-2表达水平无显著性差异。结论肾透明细胞癌细胞中NORE1基因可以通过调节MMP-9的表达影响细胞的迁移侵袭及血管生成。     

黏着斑激酶表达下调对肝癌细胞黏附迁移侵袭行为的影响

目的研究下调黏着斑激酶（FAK）表达对人肝癌细胞HCC-LM3黏附迁移侵袭行为的影响及可能涉及的机制。 方法根据处理方法不同,将人肝癌细胞HCC-LM3分为未处理组（肿瘤细胞未经处理）、对照组（肿瘤细胞转染空载体,FAK表达未改变）和FAK-shRNA组（肿瘤细胞稳定低表达FAK）。分别采用细胞黏附实验、划痕实验、Transwell实验检测3组肝癌细胞的黏附、迁移、侵袭能力,Western blotting检测细胞黏附侵袭相关蛋白paxillin、p130Cas以及基质金属蛋白酶MMP-2与MMP-9蛋白的表达及活化情况。 结果FAK表达下调后,细胞黏附能力显著受到抑制,细胞迁移能力和侵袭能力均明显下降;细胞黏附分子p130Cas、paxillin的蛋白总量表达无明显改变,而磷酸化水平明显降低,其活化形式p-paxillin和p-p130Cas表达则明显受到抑制;MMP-2、MMP-9蛋白表达水平则在下调FAK表达后明显降低（P<0.01）。 结论在人肝癌细胞HCC-LM3中,下调FAK表达可以影响肝癌细胞黏附迁移侵袭能力,其机制可能是通过调节相关细胞黏附分子的表达或活化来实现。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3促进肝细胞癌侵袭和转移的初步研究

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）是否能促进肝细胞癌（HCC）侵袭、转移。 方法通过siRNA靶向沉默GPC3在人肝癌细胞Hep3B、HepG2中的表达,慢病毒介导GPC3在人肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP-1中过表达,用于体外细胞功能试验和建立体内裸鼠原位种植瘤模型。Western blotting、qPCR检测GPC3、上皮间质转化（EMT）相关分子N-Cadherin、E-Cadherin、SNAIL、Vimentin和基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-3、MMP-7的表达。 结果过表达GPC3的Hep3B、HepG2细胞株的迁移和侵袭能力显著大于GPC3低表达的SMMC-7721、SK-HEP-1细胞株（P<0.05）;小鼠肝脏原位癌模型显示,过表达GPC3的HCC肝脏转移发生率明显高于GPC3低表达者（P<0.05）。过表达GPC3可以降低E-Cadherin,上调N-Cadherin的表达;干扰GPC3表达后,E-Cadherin表达上调,N-Cadherin表达下调。GPC3过表达可显著上调MMP-2、MMP-3、MMP-7的表达（P<0.05）。 结论GPC3可通过诱导HCC发生EMT和分泌MMPs,促进HCC细胞迁移和侵袭。     

谷氨酸促脑胶质瘤细胞侵袭的机制研究

目的探讨谷氨酸促胶质瘤细胞侵袭的机制,检测MMP-2,MMP-9和uPAR的表达和激活。方法体外培养胶质瘤细胞株U251—MG,分别用50μM和100μM谷氨酸作用24后,Matrigel方法检测细胞侵袭;用含有100μM谷氨酸或同时含有谷氨酸受体阻断剂2pMMK-801的培养基作用U251-MG24小时,收集细胞用相对定量PCR检测MMP-2及MMP-9mRNA表达水平,收集上清后进行凝胶酶谱分析（ZymographyAssay）检测MMP-2、MMP-9的活性变化;检测谷氨酸刺激后uPAR的mRNA表达水平。结果谷氨酸浓度依赖的促进胶质瘤细胞株U251-MG侵袭;谷氨酸刺激没有改变U251-MG细胞中MMP-2和MMP-9表达水平,但使MMP-2活性增强,MMP-9活性没有变化;谷氨酸上调uPAR的表达。结论谷氨酸可能通过上调uPAR促进胶质瘤细胞发生MMP-2活性依赖的侵袭。     

吗啡联合顺铂对人肺腺癌细胞A549侵袭和迁移的影响

目的评价吗啡对顺铂治疗人肺腺癌细胞A549侵袭和迁移的影响。方法人肺腺癌细胞A549接种于培养板培养24h,随机分为五组:对照组(CON组)、顺铂组(CIS组)、0.3μg/ml吗啡+顺铂组(MT1组)、3μg/ml吗啡+顺铂组(MT2组)、30μg/ml吗啡+顺铂组(MT3组),顺铂浓度均为4μg/ml。加入相应浓度的药物后,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Ezrin蛋白和Fascin蛋白的表达。结果与CON组比较,其余四组肿瘤细胞侵袭和迁移能力明显降低,MT3组和CIS组MMP-2、MMP-9、Ezrin和Fascin表达明显下调(P0.05)。与CIS组比较,MT1、MT2和MT3组肿瘤细胞侵袭和迁移能力增强,MT3组MMP-2、MMP-9、Ezrin和Fascin表达明显上调(P0.05)。结论吗啡可剂量依赖性减弱顺铂对人肺腺癌细胞A549侵袭和迁移能力,MMP-2、MMP-9、Ezrin和Fascin表达上调是其可能机制之一。     

表皮生长因子促进胰腺癌细胞侵袭和转移的实验研究

目的 探讨表皮生长因子（epidermal growthfactor，EGF）促进胰腺癌细胞侵袭和转移的分子机理。方法 EGF对胰腺癌细胞系NOR—P1的增殖、黏附及侵袭能力的影响分别用WST-1细胞增殖实验、细胞黏附实验和Transwell体外侵袭实验检测；MMP-9和MMP-2的活性及表达分别用明胶酶谱分析和Western印迹、RT—PCR检测；NF-κB活性用凝胶电泳迁移实验检测。结果 EGF能够明显促进胰腺癌细胞的侵袭能力，但对胰腺癌细胞的黏附力及增殖并无明显影响；EGF明显上调胰腺癌细胞的NF-κB和MMP-9的活性及表达，但对MMP-2活性及表达无影响；NF-κB抑制物四氢化吡咯二硫代氨基甲酸盐（PDTC）能够明显抑制EGF所诱导的NF-κB活性，同时也抑制EGF所诱导的MMP-9表达及胰腺癌细胞的侵袭力。结论 EGF通过活化NF-κB促进胰腺癌细胞的MMP-9的表达和侵袭力，采用NF-κB抑制剂PDTC阻断NF-κB通路能够降低胰腺癌细胞的侵袭力。     

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因（IκB-α）后核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞，应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达；电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB活性；免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察MMP-9细胞定位以及细胞形态；基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PCDNA3-IκB-α后，细胞内NF-κB和MMP-9 mRNA表达以及NF-κB活性下降；NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关；MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变；细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关；NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降，MMP-9表达下降可能起主要作用。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾组织中MMP-9和TIMP-1表达的影响

基质金属蛋白酶（MMPs）是一组Zn^2＋依赖性内肽酶，主要参与细胞外基质的降解、转运、组织重塑，MMP-9是MMPs家族中最大的成员，主要降解Ⅳ型胶原，在一定的病理条件下对细胞的迁移、侵袭、活化及动脉硬化的形成，血管重塑起重要作用。特别是MMPs与金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs）的平衡状态（MMPs／TIMPs）决定了人体的生理及某些疾病的发生和发展 .     

基质金属蛋白酶在腹主动脉瘤组织中的表达

目的探查基质金属蛋白酶类（MMPs）在腹主动脉瘤（AAA）组织中产生的源泉。方法采用间质胶原酶（MMP-1）和明胶酶以MMP-9）的mRNA探针在20例AAA组织及4例正常人腹主动脉组织的切片上行原位杂交实验结果MMP-1及MMP-9在巨噬细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞均有表达,其中巨噬细胞的MMPs表达强烈。结论MMPs在AAA的形成和扩张中发挥重要作用,炎性细胞是产生MMPS的主要源泉,并影响问质细胞的MMPS表达。     

Increased expression of EMMPRIN in the tissue around loosened hip prostheses

Matrix metalloproteinases (MMPs) have been shown to play a role in aseptic loosening of total hip replacement (THR). Extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) can upregulate expression of several MMPs but has little effect on their tissue inhibitor (TIMP). Using the avidin-biotin-peroxidase complex immunostaining method, we detected strong immunoreactivity of EMMPRIN in the lining-like layers, sublining area and vascular endothelium of synovial membrane-like interface tissue around loosened prostheses. In contrast, EMMPRIN staining was very weak in the synovial samples from patients with hip arthrosis. Double immunofluorescence labeling revealed EMMPRIN/MMP-1 double-positive cells in lining-like layers and the sublining area of interface tissue. Our findings indicate that EMMPRIN expression is upregulated in interface tissue, and that locally accumulated EMMPRIN may modulate MMP-1 expression. An imbalance in the activity of MMPs and TIMP may lead to tissue destruction and periprosthetic osteolysis. These biological responses, combined with mechanical stress caused by micromotion and oscillating fluid pressure, may eventually cause aseptic loosening of THR.     

MMP-2,-9及其抑制物TIMP-1在多囊卵巢综合征患者黄素化颗粒细胞上的表达

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者黄素化颗粒细胞上基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9)及其组织抑制物TIMP-1的蛋白及mRNA在不同培养时间的表达水平,了解与细胞外基质合成、降解相关的MMPs/TIMPs系统参与PCOS的病理生理机制。方法收集2011年9月到2012年1月行体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS患者30例,对照组为同期行IVF或ICSI治疗的不孕症患者30例。密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,细胞贴壁培养,分别在培养24、48和72h收集颗粒细胞。采用Western blotting方法检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-PCR检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果 (1)PCOS组黄素化颗粒细胞MMP-2,-9蛋白表达在各培养时间点(24、48、72h)均显著高于对照组(P均0.05);且MMP-2蛋白表达水平在48、72h相对于24h的比值,以及MMP-9蛋白表达水平在72h相对于24h的比值,PCOS组均显著高于对照组(P均0.01)。(2)PCOS组MMP-2mRNA在24、48、72h的表达,MMP-9mRNA在48、72h的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05);MMP-2,-9mRNA表达水平在48、72h相对于24h的比值,PCOS组高于对照组,差异均有统计学意义(P均0.05)。(3)PCOS组TIMP-1蛋白及mRNA表达在24、48、72h与对照组比较无统计学差异(P0.05)。结论 PCOS患者黄素化颗粒细胞中MMP-2和MMP-9的表达升高,其MMPs/TIMPs的平衡状态向蛋白酶的活性增强方向移动,可能与PCOS患者黄体功能不足有关。     

基质金属蛋白酶-9及金属蛋白酶组织抑制剂-1对甲状腺乳头状癌诊断的意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)在甲状腺肿瘤组织中的表达。方法:制备组织芯片,采用免疫组织化学和原位杂交技术检测56例甲状腺癌组织、56例癌旁组织和40例良性甲状腺病变组织中MMP-9和TIMP-1的表达情况。结果:MMP-9和TIMP-1蛋白在甲状腺癌组织的阳性表达率为71.4%和57.1%,MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA在甲状腺癌组织中阳性表达率为67.9%和62.5%,均明显高于癌旁和良性甲状腺病变组织(P<0.05)。在甲状腺癌组织中,MMP-9、TIMP-1蛋白和MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达,分别呈负相关性(RS=-0.309、-0.264,P<0.05)。结论:MMP-9和TIMP-1在组织中的检测有助于甲状腺癌的判断,并可作为预后评估的重要参考。     

基质金属蛋白酶血清含量与膀胱移行细胞癌浸润转移的关系

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的血清含量与膀胱移行细胞癌侵袭转移的关系。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对46例膀胱移行细胞癌患者血清中的MMP-2及MMP-9进行测定,并与18例正常血清进行对照分析。结果膀胱移行细胞癌患者同正常对照组比较,血清中MMP-2和MMP-9含量均显著增高（P〈0.000）,血清中MMP-2和MMP-9含量随着临床分期的升高均有显著性增高（P〈0.0000）,膀胱癌组织学Ⅱ、Ⅲ级患者血清中MMP-2和MMP-9含量明显高于I级（P〈0.0000）,但两者间比较无显著性差异（P〉0.05）。站论MMPs与膀胱移行细胞癌的发生、发展及侵袭转移密切相关,MMPs血清学测定可作为判断膀胱肿瘤预后的指标之一。     

Urine matrix metalloproteinases and their extracellular inducer EMMPRIN in children with chronic kidney disease

Abstract

Background: Transforming growth factor (TGF)beta1 and matrix metalloproteinases (MMPs) play an essential role in CKD-related tissue remodeling. However, there are no data on urine MMPs and their extracellular inducer EMMPRIN in CKD patients. The aim of study was to assess the concentrations of MMP-2, MMP-7, MMP-9, EMMPRIN and TGFbeta1 in serum and urine of CKD children and to analyze the potential relations between those parameters. Methods: Forty-one pre-dialysis CKD children and 23 age-matched controls were enrolled in the study. The concentrations of analyzed parameters were assessed by ELISA. Results: Serum and urine values of MMP-2, MMP-7, MMP-9, EMMPRIN and TGFbeta1 were significantly elevated in CKD patients versus controls. The MMP-2 and MMP-9 levels in urine correlated significantly with the corresponding values in serum, whereas MMP-7, EMMPRIN and TGFbeta1 urine concentrations did not. There were also significant correlations between urine values of all parameters. Conclusions: The increased urine levels of MMPs, EMMPRIN and TGFbeta1 indicate enhanced proteolysis and renal tissue remodeling. In the case of MMP-7, EMMPRIN and TGFbeta1 those disturbances seem independent of enhanced serum activity of the corresponding enzymes. The urine MMP-7 and EMMPRIN concentrations may serve as new independent indices of tissue remodeling and renal interstitial fibrosis in children with CKD.     

不同浓度七氟醚对人肺腺癌A549细胞侵袭能力及MMP-2、MMP-9表达的抑制作用

目的观察不同浓度七氟醚对人肺腺癌A549细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9表达的影响。方法人肺腺癌A549细胞接种于培养板,培养24 h后,随机分为对照组（C组）、1.7%七氟醚组（S₁组）、3.4%七氟醚组（S₂组）、5.1%七氟醚组（S₃组）。S₁、S₂、S₃组的A549细胞分别暴露于1.7%、3.4%、5.1%七氟醚2、4、6 h。C组不接受七氟醚处理。四组处理结束后,继续培养48 h。于48 h时,采用Transwell法检测各组A549细胞处理6 h的侵袭细胞数目,酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组A549细胞处理前、处理2、4、6 h的MMP-2和MMP-9的表达水平。结果与C组比较,S₁、S₂、S₃组的侵袭细胞数目降低[（62±7）vs.（46±4）,（35±5）,（27±6）]（P<0.05）;侵袭细胞数目S₁组>S₂组>S₃组（P<0.05）。与C组比较,S₁、S₂、S₃组的MMP-2、MMP-9水平降低,且S₁组>S₂组>S₃组（P<0.05）。结论 1.7%、3.4%、5.1%七氟醚均有抑制人肺腺癌A549细胞侵袭能力的效应。该效应随七氟醚浓度升高而增强,与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。