乌司他丁对烫伤大鼠高迁移率族蛋白B1表达及CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响

目的：研究乌司他丁对烫伤大鼠脾脏高迁移率族蛋白B1（HMGBl）的表达以及淋巴细胞免疫功能的影响。方法：96只Wistar大鼠随机分为假烫组、烫伤组和烫伤＋乌司他丁治疗组（n=32）。后两组大鼠制作30％TBSAⅢ度烫伤模型,伤后即刻腹腔注射林格液或乌司他丁＋林格液抗休克,创面涂碘伏抗炎。假烫组于37℃水浴中12S行假烫。各组分别于伤后1、3、5、7d腹主动脉无菌采血,并分离获取大鼠脾脏组织。Westernblot检测大鼠脾组织HMGBl的表达,流式细胞术检测血液中CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）的变化。结果：与假烫组比较,烫伤组大鼠脾组织HMGBl水平在伤后1～7d显著升高（P〈O．01）,伤后3d时表达量最高,分别为0．66±0．10、0．22±0．05（t=10．91,P〈0．01）;乌司他丁治疗后1～7dHMGB1水平有不同程度的降低,其中伤后5d表达量最低,分别为0．32±0．07、0．63±0．07（t=9．61,P〈0．01）。与假烫组比较,烫伤组CD4＋CD25＋Treg表达在伤后逐渐上升,伤后3d时达到峰值（5．42±0．56）％;乌司他丁治疗后,CD4＋CD25＋Treg于伤后3、5、7d显著低于烫伤组（P〈O．01）,伤后5d时最低（2．23±0．21）％。结论：严重烫伤后大鼠脾脏HMGB1水平的持续升高对其调节性T细胞的异常具有显著的影响;乌司他丁作为一种抗炎药物能够降低伤后HMGB1的表达,改善烫伤大鼠的免疫功能。     

大肠癌患者外周血调节性T细胞的检测及临床意义

目的观察大肠癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T（Treg）细胞数量的变化，探讨其与肿瘤临床病理特征的关系。方法应用流式细胞仪分析大肠癌患者和健康对照组外周血单个核细胞的Treg细胞数目，比较Treg细胞百分比变化与大肠癌临床病理特征的相关性。结果结直肠癌患者Treg细胞占CD4^＋T细胞百分比（15±8）％，与健康对照组（6．0±3．5）比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；CEA正常的结直肠癌患者Treg细胞占CD4^＋T细胞百分比（13±4）％，与CEA升高的结直肠癌患者Treg细胞（17±10）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；Duke＇s C和D期的结直肠癌患者Treg细胞占CD4^＋T细胞百分比（19±6）％，与A期和B期Treg细胞百分比（12±5）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结直肠癌患者外周血TGF-131含量（1．2±0．4）ng／L，与Treg细胞数目呈正相关（r=0．253，P〈0．05）。结论Treg细胞在大肠癌患者中比例升高，可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制，Treg细胞增加可作为大肠癌患者肿瘤进展的重要标志。     

miRNA-155／PU.1信号通路阻滞对大鼠骨髓来源树突状细胞成熟及移植免疫的影响

目的探讨miRNA-155／PU-1信号通路阻滞对骨髓来源树突状细胞（DCs）成熟及其对应用于大鼠小肠移植中的免疫功能的影响。方法利用贴壁法培养诱导DCs,针对miRNA-155／PU-1信号通路中关键转录因子PU．1基因设计并合成3对PU．1siRNA（Pu．1沉默组、阴性对照组及对照组）,用脂质体法转染细胞,并筛选一对高沉默效率PU．1siRNA。流式细胞术分析PU．1沉默组、阴性对照组及对照组细胞表面CD80、CD86及主要组织相容性复合体（MHC）-II的表达;ELISA法检测上清液中IL．10及IL．12p70的水平;混合淋巴细胞反应检测对同种异体T淋巴细胞的增殖作用;在大鼠小肠移植前7d经受体尾静脉等量注射3组细胞,移植后观察各组受体存活情况及移植物病理情况。结果①DCs表面分子CD80、CD86和MHC一1I表达率在PU．1沉默组分别为（27．0±5．6）％、（23．6＋4．8）％及（36．8±6．8）％,阴性对照组分别为（74．0±9．4）％、（76．5±8．7）％及（87．8±11．3）％,PU．1沉默组均分别明显低于阴性对照组（尸〈0．05）。②PU．1沉默组IL．10水平较阴性对照组明显升高（尸〈0．05）,IL-12p70则明显降低（尸〈0．05）。③PU．1沉默组DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖也较阴性对照组明显降低（尸〈0．05）。④将PU．1沉默组DCs术前注入受体行大鼠小肠移植后,受体平均存活时间为（14．3±3．3）d,明显长于阴性对照组的（7．8±1．5）d（尸〈0．05）和对照组的（8．0＋2．5）d（P〈0．05）,且术后5d时移植物病理显示移植肠组织轻度淋巴细胞浸润和绒毛水肿。结论体内外实验表明,miRNA-155／PU．1信号通路阻滞的DCs成熟度明显受到抑制,并能稳定发挥诱导受体特异性免疫耐受的作用。     

原发性肝癌患者外周血Th17与CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达的相关性研究

目的探讨原发性肝癌患者外周血Th17和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达水平及其相关性。方法选取2008年6月—2009年5月浙江大学医学院附属第一医院30例原发性肝癌患者和25名健康人群,采血并分离其外周血单个核细胞。利用流式细胞仪分别测定Th17和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞的表达,采用t检验分析两组的表达差异。同时,采用Spearman检验对原发性肝癌患者外周血中Th17和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达进行相关性分析。结果健康对照组外周血中Th17细胞为（2．10±0．87）％,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞为（7．10±2．32）％,原发性肝癌组外周血中Th17细胞为（3．38±1．68）％,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞为（11．78±5．62）％,两组差异具有统计学意义（t=3．640和4．162,P值均〈0．01）。原发性肝癌患者组外周血Th17细胞与CD4^＋CD25^＋Fosp3^＋调节性T细胞表达呈正相关（r=0．821,P〈0．01）。结论原发性肝癌患者外周血Th17和CD4^＋CD25^＋Fosp3^＋调节性T细胞表达水平较高,二者呈正相关。CD4^＋CD25^＋Fosp3^＋调节性T细胞可能通过促进Th17细胞分化导致肿瘤的发生与发展。     

骨髓单个核细胞移植对梗死后心脏形态、结构及功能的影响

目的研究骨髓单个核细胞移植梗死心肌后心脏形态、结构和功能的变化。方法将24条成年杂种犬随机分为4组：急性心肌梗死对照组、急性心肌梗死移植组、陈旧心肌梗死对照组和陈旧心肌梗死移植组，每组6条。急性、陈旧心肌梗死移植组用心肌直接注射法行白体骨髓单个核细胞移植，急性、陈旧心肌梗死对照组注射等体积无细胞的磷酸盐缓冲液。移植前和移植后6周分别用超声心动图观察心脏形态和功能的变化，处死动物后行心脏大体形态、结构和组织病理学观察。结果超声心动图观察结果显示，移植后急性心肌梗死移植组左心室舒张期末内径（LVEDD）、左心室舒张期末容积（LVEDV）、左心室后壁厚度（LVPW）均较其相应的对照组减小（32．5±5．1mmvs．36．6±3．4mm，46．7±12．1mlvs．57．5±10．1ml，6．2±0．6mmvs．6．9±0．9mm；P〈0．05）；陈旧心肌梗死移植组LVEDD、LVEDV和LVPW均较其相应的对照组减小（32．8±4．2mmvs．36．8±4．4mm，48．2±12．9mlvs．60．6±16．5ml，7．0±0．4mmvs．7．3±0．5mm；P〈0．05）。陈旧心肌梗死移植组在细胞移植后射血分数较其相应的对照组升高（53．3％±10．3％vs．44．7％±10．1%）。大体形态学观察细胞移植后急性、陈旧心肌梗死移植组梗死区厚度较相应的对照组增加（7．0±1．9mmvs．5．0±2．0mm，6．0±0．6mmvs．4．0±0．5mm；P〈0．05），而梗死区长径较对照组减小（25．5±5．2mmvs．32．1±6．2mm，33．6±5．5mmvs．39．0±3．2mm，P〈0．05）；急性心肌梗死移植组无室壁瘤发生。而陈旧心肌梗死移植组长轴／短轴周长较对照组增加（0．581±0．013vs．0．566±0．015；P〈0．05）。两移植组于细胞移植后在移植细胞区均观察到荧光表达，但多数核形态不规则，未观察到发荧光的成熟心肌细胞核。组织学观察见细胞移植后均有较多新生毛     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞亚群及NK细胞的特点及意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染者外周血T细胞亚群及NK细胞的特点及临床意义。方法采用流式细胞术检测各研究组,包括慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）组33例、乙型肝炎失代偿期肝硬化（1iver cirrhosis,LC）组20例、慢性乙型重型肝炎（chronic severe hepatitis B,CSH）组17例及健康对照组（Control）20例的外周血T细胞亚群及NK细胞相对计数,并检测肝功能、HBVDNA含量及HBV血清标志物。结果按Control、CHB、LC、CSH顺序,CD3^＋T细胞、CD8^＋T细胞百分比依次升高,而CIM^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值及NK细胞百分比依次降低,且CHB、LC、CSH组与Control组及CHB组与CSH组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．008）。CHB患者的CD3^＋T细胞与血清总胆红素（total bilirubin,TB）、HBVDNA含量（log_10）呈正相关（P〈0．001;P〈0．001）;CD8^＋T细胞与HBVDNA含量（log_10）呈正相关（P=0．007）,NK细胞与HBVDNA含量（log_10）（P=0．001）呈负相关。CHB组乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性者的CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值低于HBeAg阴性者（P=0．018;P〈0．001）,而HBVDNA含量（log_10）和CD8^＋T细胞高于HBeAg阴性者（P=0．012;P=0．019）。结论慢性HBV感染者外周血T细胞亚群及NK细胞相对值紊乱,且与临床类型、病情、血清HBVDNA水平及HBeAg相关。     

胸腺切除对重症肌无力病人外周血T细胞的远期影响及意义

目的 探讨胸腺切除对重症肌无力（MG）病人外周血T细胞的远期影响及意义。方法 应用流式细胞术检测25例胸腺切除（手术组）、21例胸腺未切除（非手术组）MG病人和25名健康人（对照组）的外周血T细胞亚群CD4^＋T、CD8^＋T、CD4^＋／CD8^＋、CD4^＋CD25^＋T细胞的变化，应用ELISA法检测外周血IFN-γ、IL-4水平。结果 MG病人胸腺切除后完全缓解9例（36％），部分缓解13例（52％）。手术组与对照组比较CD4^＋CD25^＋T％显著降低（t=2．917，P=0．005）。手术组与非手术组比较CD4^＋CD25^＋T％、CD8^＋T％显著增高（t=7．935，P=0．000；t=2．619，P=0．012），CD4^＋CD8^＋显著降低（t=3．060，P=0．004）。手术组外周血IFN-γ水平显著低于非手术组（t=5．060，P：0．000），但显著高于对照组（t=3．709，P=0．001）。胸腺切除后部分缓解者CD4^＋CD25^＋T％显著低于完全缓解者（t=2．292，P=0．033），但高于无效者（t=5．225，P=0．000）。结论 MG病人外周血T细胞紊乱在胸腺切除后远期有一定程度的改善，但未完全恢复正常。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能与MG发生、发展及预后有关。     

非小细胞肺癌患者围术期细胞免疫功能的变化及免疫治疗

目的观察围术期非小细胞肺癌患者细胞免疫功能的变化及应用胸腺肽α1后对机体免疫功能的影响,为临床应用免疫增强剂联合手术治疗非小细胞肺癌患者提供依据。方法将97例行肺叶或右全肺切除术的非小细胞肺癌患者分为两组,组1：围术期给予胸腺肽α1治疗;组2：围术期未给予胸腺肽α1治疗;对照组：另选择19例同期非肺癌而采取手术治疗的肺部疾病患者作为对照。采用间接免疫荧光法（IFCA）测定3组围术期T细胞亚群的百分率变化。结果术后第1d组1 CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 36．92％±2．10％ vs．31．18％±7．64％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．31±0．36 vs．1．09±0．32;P〈0．05）,术后第3d组1 CD4^＋T和CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 45．66％±3．77％ vs．34．70％±8．42％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．42±0．11 vs．1．14±0．20;P〈0．05）;术后第9d CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 47．28％±1．96％ vs．39．12％±3．10％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．46±0．14 vs．1．22±0．36;P〈0．05）;术后第16d组1 CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T与组2和对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论非小细胞肺癌患者的免疫功能低下,应用胸腺肽α1后细胞免疫功能较快恢复至正常状态,对非小细胞肺癌患者早期采用手术、化疗／放疗的综合治疗有助于提高治疗效果。     

初治骨关节结核患者外周血T细胞亚群特点及临床意义

目的 探讨初治骨关节结核患者外周血T细胞亚群特点、与临床观测指标的关系及抗结核治疗对患者细胞免疫状况的影响。方法 采用单平台流式细胞术检测骨关节结核患者治疗前和治疗后1-2个月T细胞亚群的绝对数及百分比，并与恶性骨肿瘤患者和健康人比较。结果 初治骨关节结核组CD4及CD8T细胞绝对数较健康对照组低（P〈0．01）。骨关节结核患者在治疗1-2个月后CD4T细胞百分比升高（P〈0．05）。青年组CD8T细胞绝对数和百分比显著高于中年组和老年组（P〈0．05，P〈0．01），CD4／CD8显著低于中年组及老年组（P〈0.01）。T细胞亚群各参数与PPD反应直径、红细胞沉降率和C反应蛋白之间无显著相关性（P〉0．05）。脊柱结核合并脓肿组CD4／CD8较低，CD8T细胞百分比较高（P〈0．01）。结论 初治骨关节结核患者存在细胞免疫缺陷，以中老年组更明显。脊柱结核是否形成脓肿与CD8T细胞有关。初治骨关节结核患者经1～2个月化疗后，细胞免疫状况改善，是病灶清除术的有利时机．     

RNA干扰树突细胞主要组织相容性复合物1表达后诱导抑制性T细胞对小肠移植耐受的影响

目的探讨RNA干扰树突细胞（Dc）组织相容性复合物1（MHC-1）表达后获得的CD8＋CD28-抑制性T细胞（Ts）对小肠移植免疫耐受的的影响。方法通过siRNA干扰DC MHC—I表达后,诱导获得CD8^＋CD28^-Ts。建立由Wistar大鼠移植到SD大鼠的小肠移植模型36例,随机分为A组（转染实验组）、B组（未转染组,注射普通T细胞）和C组（移植对照组,注射生理盐水）。术后14d,每组各随机挑选6例,取移植大鼠小肠和血液标本行移植小肠组织病理学检查．并检测移植大鼠血清TGF-β、IFN-γ水平及回肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性,观察移植大鼠的存活时间。结果术后第14天,A组移植大鼠血清中TGF—β和IFN-γ表达水平高于B、C组（P〈0．05）。A组大鼠肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性为（6．3±1．0）kU／g,明显高于B组的（3．6±0．9）kU／g和C组的（2．9±1．3）kU／g（P〈0．05）。A组移植小肠病理Parks评分分级明显低于B组和C组（P〈0．05）。A、B和C组移植后大鼠中位生存时间分别为32．0、17．5和21．0d,A组存活时间明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论将RNA干扰DCMHC—I表达所获得的CD8^＋CD28^-Ts过继小肠移植大鼠．可以减轻移植大鼠的损伤程度．抑制免疫排斥反应．     

PD-1和PD-L1表达与慢性HBV感染者肝脏病变程度的相关性

目的研究程序性死亡分子-1(programmed death-1,PD-1)及其主要配体(programmed death-1ligand,PD-L1)表达与肝脏病变程度的关系,并探讨其临床意义。方法不同临床类型慢性HBV感染者137例,含慢性乙型肝炎(CHB)患者102例,活动性肝硬化(LC)患者25例,慢加急性肝衰竭(ACLF)患者10例。其中,102例CHB患者中有22例行肝组织活检,炎症分级为G1～G4,纤维化程度分为S0～S4。健康对照10例。取新鲜血液分离外周血单个核细胞(PBMCs),流式细胞仪检测PBMCs表面PD-1和PD-L1阳性细胞比例以及人白细胞抗原(HLA)型别;对HLA-A2阳性者的PBMCs加入重组HBcAg体外培养7d,加入PE标记的HBV抗原表位肽-五聚体复合体(含HBV抗原表位肽为HB-cAg18-27),流式细胞仪计数CD8+T细胞数以及CD8和PD-1双阳性细胞。ELISA检测PBMCs培养上清液中IFN-γ。比较CHB、LC、ACLF三组间以及不同肝组织病变程度患者间PD-1、PD-L1、CD8+细胞数量和PD-1表达水平、IFN-γ水平的差异。结果在CHB、LC和ACLF组PD-1在PBMCs表面的表达阳性率分别为(55.4±16.5)%、(54.3±21.9)%、(45.5±26.5)%,与健康对照组比较,P值分别为0.000、0.001、0.071;三组PD-L1表达阳性率分别为(41.7±17.7)%、(33.4±17.9)%、(26.6±11.8)%,和对照组比较,P值分别为0.006、0.252、0.854。62例HLA-A2阳性患者的CD8+T细胞比例分别为(1.6±1.0)%、(3.1±1.6)%和(3.3±1.7)%,LC组和ACLF组明显高于CHB组(P0.05);PD-1阳性细胞占CD8+T细胞的比例各组间比较无统计学差异;三组PBMCs培养上清液中IFN-γ含量比较无统计学差异。不同肝组织炎症和纤维化程度的CHB患者间PD-1、PD-L1表达虽无明显统计学差异,但PD-L1在炎症G1和纤维化S0的患者中的表达较其他组患者高。结论慢性HBV感染者PD-1和PD-L1表达明显上调。肝脏病变程度与PD-1表达水平无关,但与HBV特异性CD8+T细胞数量及PD-L1表达相关。     

慢性HBV感染者HBV特异性CD8＋ T细胞Tim-3和PD-1的表达水平及其与IFN-γ产生的相关性研究

目的：研究免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）和程序性死亡受体-1分子（PD-1）在慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血HBV特异性CD8＋ T细胞表面的表达模式,了解其与γ-干扰素（IFN-γ）产生的关系,并探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测主要组织相容性复合体-2（HLA-A2）阳性的78例临床类型不同的慢性HBV感染患者HBV特异性CD8＋ T细胞表面分子Tim-3和PD-1的表达,ELISA方法检测外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中IFN-γ的水平。结果慢性HBV感染者Tim-3＋/PD-1＋HBV特异性CD8＋ T细胞比例占总的HBV特异性CD8＋ T细胞的58%,Tim-3-/PD-1＋细胞比例为24%,Tim-3-/PD-1-比例16%,Tim-3＋/PD-1-比例最低为2%。临床病情越严重的临床类型中,Tim-3＋/PD-1＋HBV特异性CD8＋ T细胞比例越高,慢性乙型肝炎轻中度组为（52.05±18.68）%,重度肝炎组为（59.66±19.25）%,重型肝炎组最高为（68.72±17.21）%;各组与非活动性携带者组比较,P值分别为0.007、0.009、0.000。重型组与轻中度组比较,P =0.018。Tim-3＋/PD-1＋在HBV特异性CD8＋ T细胞的表达与细胞培养上清液IFN-γ的水平呈负相关性（r =-0.466,P ＜0.001）。结论在HBV特异性CD8＋ T细胞中,Tim-3和PD-1共同表达是其主要表达模式,Tim-3和PD-1的高表达可能负性调控IFN-γ的产生,从而影响慢性HBV感染的疾病进展和结局。     

慢性HBV感染者不同免疫状态下及抗病毒治疗后外周血T细胞亚群比例和细胞因子水平特点

目的：观察不同免疫状态的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者及抗病毒治疗后外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞比例、CD4^＋/CD8^＋比值及血清中细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平的变化特点及与HBeAg血清学转换的相关性。方法纳入79例处于不同免疫状态的慢性HBV感染者（其中非活动性HBV携带期15例、免疫耐受期20例、免疫活化期44例）及21例健康对照者为研究对象,采用流式细胞术检测其外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞比例。对其中33例免疫活化期患者进行核苷（酸）类似物抗病毒治疗并随访至48周。分别于治疗前（T0期）及治疗后4周（T1期）、8周（T2期）、12周（T3期）、24周（T4期）和48周（T5期）采集外周血,流式细胞术检测各时间点患者外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞比例。同时对部分患者血清标本中的细胞因子水平进行检测。结果在慢性HBV感染者中,免疫活化组患者外周血CD4^＋T细胞比例及CD4^＋/CD8^＋比值显著低于健康对照组（P均＜0.05）,而CD8^＋T细胞比例显著高于健康对照组（F =3.610,P ＜0.05）。抗病毒治疗后,△T0～T1、△T0～T2期,HBeAg血清学转换组外周血CD8^＋T细胞比例升高率显著高于未转换组（P均＜0.05）;△T0～T5期,HBeAg血清学转换组外周血CD4^＋T细胞比例升高率显著高于未转换组（Z =-2.200,P ＜0.05）。免疫活化组患者血清IL-10、IFN-γ水平均显著高于对照组和免疫耐受组（P均＜0.05）。免疫活化组患者抗病毒治疗后12周及24周,血清IL-10水平显著下降（t=3.037、3.180,P均＜0.05）,与ALT水平、HBV DNA载量呈正相关关系（P均＜0.05）。结论慢性HBV感染者在不同免疫状态下外周血T细胞亚群比例及血清细胞因子水平表现不同,免疫活化期患者与健康对照者比CD4^＋T比例及CD4^＋/CD8^＋下降,CD8^＋T比例升高,血清IL-10水平显著升高。HBeAg阳性患者,核苷（酸）类似物抗病毒治疗过程中外周血CD8^＋T细胞和CD4^＋T细胞的比例升高可能有助于预测HBeAg的血清学转换。     

PD-1/B7-H1 Interaction Contribute to the Spontaneous Acceptance of Mouse Liver Allograft

The programmed death-1 (PD-1)/B7-H1 pathway acts as an important negative regulator of immune responses. We herein investigated the role of the PD-1/B7-H1 pathway in establishing an immunological spontaneous tolerance status in mouse liver allografting. B7-H1 is highly expressed on the donor-derived tissue cells and it is also associated with the apoptosis of infiltrating T cells in the allografts. Strikingly, a blockade of the PD-1/B7-H1 pathway via anti-B7-H1mAb or using B7-H1 knockout mice as a donor led to severe cell infiltration as well as hemorrhaging and necrosis, thus resulting in mortality within 12 days. Furthermore, the expression of the FasL, perforin, granzyme B, iNOS and OPN mRNA in the liver allografts increased in the antibody-treated group in comparison to the controls. Taken together, these data revealed that the B7-H1 upregulation on the tissue cells of liver allografts thus plays an important role in the apoptosis of infiltrating cells, which might play a critical role of the induction of the spontaneous tolerance after hepatic transplantation in mice.     

基于协同刺激分子表达量建立慢性HBV感染患者T淋巴细胞免疫功能评价新体系的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T淋巴细胞CD28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）、程序性死亡分子-1（PD-1）和T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）的表达及意义.方法 连续收集2012年10月至2013年6月在苏州大学附属第一医院住院的慢性HBV感染患者102例,其中慢性乙型肝炎（CHB） 42例,乙型肝炎肝硬化30例,肝癌30例.另选30名健康体检者作为对照组.采用流式细胞术和定量聚合酶链反应（PCR）技术测定所有研究对象外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量,并采用单因素方差分析和LSD-t检验比较各组间的差异.采用Spearman秩相关分析外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量与HBV DNA载量、乙型肝炎e抗原（HBeAg）和丙氨酸转氨酶（ALT）之间的相关性.结果 慢性HBV感染患者CD4＋ CD28＋、CD8＋ CD28＋和CD4＋ CTLA-4＋的表达均低于健康对照人群,其中肝癌组的CD4＋ CD28＋表达量低于CHB组（t=2.373,P＜0.05）,肝硬化和肝癌组的CD8＋CD28＋表达量低于CHB组（t=4.324和4.088,P＜0.01）.CHB组CD8＋ PD-1＋、CD4＋ Tim-3＋和CD8＋ Tim-3＋的表达量高于肝硬化、肝癌以及健康对照组（t=3.051,3.130,3.121,3.254和3.723,P＜0.01）.相关性分析显示,CD8＋T淋巴细胞PD-1表达量与ALT水平、HBV DNA载量呈正相关（r=0.516和0.582,P＜0.01）;CD8＋T淋巴细胞Tim-3的表达量与ALT水平、HBV DNA载量也呈正相关（r=0.578和0.556,P＜0.01）.此外,CD8＋T淋巴细胞PD-1与Tim-3的表达量也呈一定的正相关（r =0.506,P＜0.01）.结论 HBV感染患者外周血T淋巴细胞表面分子异常表达与其免疫功能紊乱和疾病慢性化的发生和发展相关.     

B7-H1及其受体PD-1在膀胱癌患者外周血免疫细胞中的表达及其临床意义

目的：研究膀胱癌患者外周血中树突状细胞（dendritic cells,DCs）表面B7-H1和CD8＋T淋巴细胞表面PD-1的表达情况及其临床意义。方法：分离30例膀胱癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,联合培养后采用流式细胞术检测DCs表面B7-HI及CD8＋,T细胞表面PD-1的表达情况。结果：膀胱癌患者外周血DCs表面B7-H1表达水平及CD8＋T细胞表面PD-1表达水平均明显高于正常人,差异具有显著统计学意义（P〈0．01）,并且二者的表达水平随着病理分级和临床分期的增加均升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：在膀胱癌发生发展过程中存在着DCs表面B7-H1和CD8＋T细胞表面PD-1分子表达的上调,B7-H1／PD-1信号通路可能在T细胞免疫应答的初始阶段亦参与了膀胱癌免疫逃逸的发生。     

肝移植患者外周血辅助性T 17细胞的变化及意义

目的探讨肝移植术后患者外周血辅助性T(Th)17细胞(CD4+IL-17+T淋巴细胞)与急性排斥反应的关系。方法本文研究对象为2008年6月至2012年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院肝胆胰脾外科因良性终末期肝病行原位肝移植术的76例患者。根据患者术后有否发生急性排斥反应,分为排斥组(17例)和非排斥组(59例)。所有患者均按常规定期随访。记录患者排斥反应发生情况及治疗经过。排斥组患者发生急性排斥反应时给予肝穿刺活组织检查确定排斥反应严重程度。所有患者分别于肝移植术前、出院后1年内定期(间隔3~6个月)、或急性排斥反应治疗前和缓解后(3~6个月),检测外周血CD4+IL-17+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分比(CD4+IL-17+T%)。比较两组患者各时间点的CD4+IL-17+T%。分析CD4+IL-17+T%与排斥活动指数(RAI)、免疫抑制剂血药浓度的相关性。结果急性排斥反应发生在术后0.7~12.0个月,中位数2.5个月。肝移植术后,与非排斥组比较,排斥组患者CD4+IL-17+T%明显升高[(1.79±0.44)%比(2.56±0.43)%,P0.001]。排斥组患者发生急性排斥反应时,CD4+IL-17+T%均较未发生急性排斥反应时明显升高[(2.56±0.43)%比(1.50±0.25)%,P0.001)]。非排斥组患者不同时间点的CD4+IL-17+T%变化不明显(P0.05)。排斥组患者发生急性排斥反应时的CD4+IL-17+T%与RAI呈正相关(r=0.72,P=0.001)。排斥组和非排斥组患者他克莫司、环孢素血药浓度与CD4+IL-17+T%无明显相关性(r=0.21,-0.13;均为P0.05)。结论外周血CD4+IL-17+T%可作为诊断和评估肝移植术后急性排斥反应严重程度的监测指标,外周血CD4+IL-17+T%升高提示急性排斥反应严重。     

术中应用右美托咪啶影响结直肠癌患者T淋巴细胞亚群和NK细胞活性的双盲随机临床试验

[摘要]目的观察术中应用右美托咪啶对结直肠癌患者围手术期外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的影响。方法选择40例择期结直肠癌手术患者,完全随机双盲分为两组：右美托咪啶组（D）组和对照组（C）组,每组20例。所有患者不用术前药,麻醉诱导前,采用正中人路穿刺法于L1／L2或T12／L1椎间隙置人硬膜外导管。D组：手术前15min静脉注射右美托咪啶1μg／kg,然后以0．5μg／（kg·h）速率持续输注至手术结束前30rain。C组：手术前15min以相同的速率静脉注射等容量的生理盐水。常规麻醉诱导,术后行硬膜外病人自控镇痛。分别于麻醉前（1D）、手术后24h（T1）、手术后48h（他）、手术后72h（T3）抽取静脉血应用流式细胞仪检测外周T淋巴细胞亚群（CD3、CIM、CD8、CD4／CD8）、NK细胞活性。结果①c组CD3、CD4、CIM／CD8在T1至仍点明显下降（P〈0．05）;D组CD3、CIM／CD8在T1点下降明显（P〈0．05）,CD4在T1、r12点下降明显（P〈0．05）;D组患者CD3、CD4、CD4／CD8在T1至T3点明显高于c组（P〈0．05）;CD8在Tl、亿点明显低于c组（P〈0．05）。②C组NK细胞在T1至r13点明显下降（P〈0．05）,D组NK细胞在T1、T2点明显下降（P〈0．05）;D组患者NK细胞在Tl至,13点下降程度不如C组明显（P〈0．05）（P〈0．05）。结论术中应用右美托咪啶,能够减轻围术期结直肠手术患者免疫功能抑制,对术后免疫功能有较好的保护作用。